CC BY
19
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
19
зависит от пола пациента, что должно учитываться для разработки алгоритмов диагностики и создания панелей диагностических систем для раннего выявления рака ПЖ при ХП.
А.А. Вартанян, О.С. Бурова, М.А. Барышникова ВОВЛЕЧЕНИЕ АУТОФАГИИ В ВАСКУЛОГЕННУЮ МИМИКРИЮ ПРИ МЕЛАНОМЕ
ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. Аутофагия рассматривается как катаболиче-ский процесс удаления отработанных органелл, долгоживу-щих белков, патогенов и продуктов распада с помощью двухмембранных аутофагосом, в результате которого клетка самообновляется и поддерживает жизнеспособность. Аутофагия сопровождает жизнедеятельность нормальной клетки на протяжении всего времени ее существования и, по всей видимости, является элементом клеточной защиты. В последние годы получены доказательства существования альтернативной системы кровоснабжения опухоли — васкуло-генной мимикрии (ВМ): формирование опухолевыми клетками в отсутствие эндотелиальных клеток васкулярных каналов, ограниченных базальной мембраной.
Цель исследования — выявить взаимосвязь между ау-тофагией и ВМ.
Материалы и методы. В работе были использованы 2D-и 3D-культивирование клеток меланомы, выведенных в клеточную линию из операционного материала пациентов с диссеминированной меланомой, электрофорез и Вестерн блот, нокдаун гена с помощью малых интерферирующих РНК, проточная цитофлуориметрия.
Результаты. Об уровне активации аутофагии в клетках меланомы судили по экспрессии LC-3B — маркера необратимой стадии аутофагии. В клеточной линии меланомы с мутацией в BRAFV600E LC-3B экспрессировали 22 ± 2 % клеток, а в клеточной линии меланомы дикого типа этот белок экспрессировали 94 ± 5 % клеток. Блокирование аутофагии 3-Ма, ингибитором инициации аутофагии, приводило к заметному снижению способности клеток меланомы формировать в 3D-культуре сосудисто-подобные структуры (СПС). Блокирование поздней стадии аутофа-гии (слияния фагофор с лизосомами) хлорокином также ингибировало формирование СПС. Полученные результаты были подтверждены нокдауном гена BECN1, участвующего в инициации аутофагии, и гена ATG5 — маркера функционально активной аутофагосомы. Нокдаун гена BECN1 в клетках меланомы, формирующих СПС, малыми интерферирующими РНК снижал уровень белка beclinl на 70—75 % и блокировал формирование СПС на Матри-геле. Клетки меланомы с нокдауном гена ATG5 на Матри-геле «ошаривались», но сохраняли способность мигрировать и узнавать друг друга, формирование СПС не наблюдалось.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о том, что аутофагия активно участвует в формировании СПС. Мы предполагаем, что аутофагия в прогрессии опухоли выполняет двойную функцию — снижает эффективность химиотерапии и способствует формированию дополнительной васкулярной сети, ВМ, которая может частично
компенсировать недостаточно быстрое развитие в опухоли кровеносной сети.
П.И. Васильчиков, А.Д. Перенков, Д.В. Новиков, С.В. Шумилова, Н.А. Новикова, В.В. Новиков РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИММУНОТОКСИН ПРОТИВ МУЦИНА 1 НА ОСНОВЕ SCFV МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ИКО25 И РОТАВИРУСНОГО ЭНТЕРОТОКСИНА NSP4
ННГУ им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия
Введение. Одним из перспективных направлений в терапии онкологических заболеваний является использование антител против опухолеассоциированных антигенов. Ранее в РОНЦ им. Н.Н. Блохина были получены монокло-нальные антитела (МКА) мыши ИКО25, специфичные к Муцину l (MUCl) человека, для которых показана возможность использования в иммунотерапии опухолей. В клетках E. coli нами был получен рекомбинантный аналог антител против MUCl, представляющий собой объединенные в одну молекулу вариабельные фрагменты легкой и тяжелой цепей (scFv) МКА ИКО25. Для усиления противоопухолевого действия scFv был слит с фрагментом молекулы ротавирусного энтеротоксина NSP4, что привело к получению иммунотоксина scFv-NSP4. Согласно литературным данным, NSP4 обладает мембранодестабили-зирующим действием и способностью индуцировать апоптоз в клетках линий колоректального рака (HT — 29) и рака тела матки (HeLa).
Цель исследования — изучить характер взаимодействия иммунотоксина scFv-NSP4 с клеточными линиями, экс-прессирующими и не экспрессирующими MUCl.
Материалы и методы. Культуры клеток MCF-7, Colo-205, Caco-2, предоставленные РОНЦ им. Н.Н. Бло-хина, выращивали по стандартному протоколу. Иммуно-токсин scFv-NSP4 экспрессировали в E. mli и очищали хроматографически. Полученный препарат scFv-NSP4 и МКА ИКО25 (РОНЦ им. Н.Н. Блохина) метили активированным эфиром флуоресцентного красителя Cy-5 и методом проточной цитометрии, оценивали взаимодействие с клетками линий MCF-7, Colo-205 и Caco-2.
Результаты. Показано, что иммунотоксин scFv-NSP4 взаимодействовал с 99,2 и 98 % клеток линий Colo-205 и MCF-7, экспрессирующих MUCl, соответственно. Флуоресценция клеток линии Caco-2, не экспрессирующих MUCl, регистрировалась лишь в 0,33 % случаев, что, вероятно, связано с неспецифическим взаимодействием. При этом уровень флуоресценции рекомбинантного им-мунотоксина scFv-NSP4 на поверхности клеток линии Colo-205 был в l,8 раз выше, чем на поверхности клеток линии MCF-7. Полученные данные совпадали с результатами окрашивания клеток с использованием МКА ИКО25. Следует отметить, что уровень флуоресценции клеток, окрашенных рекомбинантным иммунотоксином, в среднем в 2,5 раза превышал уровень флуоресценции клеток, окрашенных МКА ИКО25.
Заключение. Таким образом, рекомбинантный иммунотоксин scFv-NSP4 проявлял сходную с МКА ИКО25 специфичность связывания с MUCl антигеном на поверхности опухолевых клеток. Повышенный уровень флуорес-
Спецвыпуск/ том 16 / 2017
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
