CC BY
28
контроле составляет 13,8, а при стимуляции такое соотношение равно 23 (23,14). Таким образом данный суммарный показатель свидетельствует о меньших дегенеративных изменениях аксона, и некоторой стабилизации его структур после перерезки в условиях действия НИЛИ.
В результате анализа воздействия НИЛИ на ультраструктуру центрального отрезка седалищного нерва крысы в условиях ретроградной дегенерации, можно сделать вывод о том, что НИЛИ оказывает стабилизирующее влияние на дегене-
рирующий участок нерва расположенный выше места перерезки. Это сопровождается поддержанием нативной структуры миелиновой оболочки и сохранением объема аксоплазмы нервных волокон. Целостность этих двух основных морфофункциональных отделов нервной клетки несомненно определит высокую скорость репаратив-ной регенерации аксонов, что и лежит в основе значительного сокращения времени реиннервации органа.
© ВОРОПАЕВ A.B., ШУРЫГИНА И.А., КЛИМОВ В.Т., ЧЕСНОКОВА М.В., МАРАМОВИЧ A.C., МАЛОВ И.В., КИРДЕЙ Е.Г. -УДК 576.8.097.29:616-002.71
ВЛИЯНИЕ Yersinia pseudotuberculosis НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ
A.B. Воропаев, И. А. Шурыгина, В.Т. Климов, М.В. Чеснокова,
A.C. Марамович, И.В. Малое, Е.Г. Кирдей.
(Иркутский государственный медицинский университет, Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока)
Y.pseudotuberculosis обладает большим набором факторов патогенности, кодируемых как хро-мосомальными генами возбудителя, так и плазмидами. У Y.pseudotuberculosis обнаружено 11 типов плазмид, однако достаточно хорошо к настоящему времени изучена лишь плазмида вирулентности с молекулярной массой 47 MD, функция же остальных плазмид до сих пор остается недостаточно ясной.
Цель исследования заключалась в определении влияния Y.pseudotuberculosis на выработку цитокинов клетками крови in vivo и in vitro.
Материалы и методы
Определяли уровни интерлейкина-1 (ИЛ-1), интерлейкина-2 (ИЛ-2), интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерферона-а (ИФН-а) и фактора некроза опу-холей-а (ФНО-а) в сыворотке крови больных при вспышечной заболеваемости псевдотуберкулезом, вызванной Y. pseudotuberculosis с плазмидами 47 и 82 MD. Обследовано 19 больных, все мужчины, средний возраст 18,8 лет и Y.pseudotuberculosis с плазмидой 47 MD (обследовано 22 человека, из них мужчин 12 (55%), средний возраст 12,7 лет). У всех больных кровь была взята на первой неделе заболевания, а у первой группы в динамике (1 и 3 неделя). В качестве группы сравнения об-
следована группа из 20 доноров в возрасте 19-22 лет, в среднем 18,4 года.
Культуру клеток цельной крови доноров in vitro инкубировали с одно- (47 MD) и двухплаз-мидными (47 и 82 MD) штаммами Y.pseudotuberculosis (106 живых микробных клеток в 1 мл крови), определяли уровень продукции цитокинов при 24 часовой инкубации. Контролем служила оценка уровня цитокинов при инкубации клеток крови с липополисахаридом (ЛПС) Y.pseudotuberculosis в концентрации 5мкг /мл. Уровень имму-ноцитокинов определяли иммуноферментным методом с использованием коммерческих тест систем. Статистический анализ полученных данных проводили при помощи парного критерия Т (больные и сравнение с донорами) и методом множественных сравнений (критерий Стьюдента с поправкой Бонферони в эксперименте). Вычисления производили, используя компьютерную программу Biostat.
Результаты и обсуждение
Y.pseudotuberculosis значимо снижает выработку иммуноцитокинов у больных псевдотуберкулезом (табл.1). Причем низким уровень продукции цитокинов остается и на третьей неделе заболевания, немного повышаясь у ИЛ-1, ИЛ-2, ИФН-а
Таблица I.
Продукция цитозинов у больных
Сроки исследований Изменение показателей цитокинов
ИЛ-1 ИЛ-2 ИЛ-6 ИФН-а ФНО-а
Доноры (контроль), М±т 56,0±6,7 37,4±4,6 58,3±6,2 14,1 ± 1,6 43,7±4,9
Y. pst (47 MD), М±т 14,2 а Ь ±2,0 28,9 п Ь ±3,7 29,1 п,ь ±3,4 2,7 "ь ±0,3 27,0 п ь ±3,1
(82:47)1 неделя, М+т 12,6 п Ь ±1,4 28,1 п,ь ±3,2 31,7 П-Ь ±4,0 2,3 п Ь ±0,3 26,6 п-ь±3,1
(82:47) 3 неделя, Д±т 3,5 с ±0,4 4,5 с ±0,5 -6,4 с ±0,8 2,с 2±0,2 0,4±0,0
Примечание: указана средняя и ее ошибка, буквами обозначена значимость различий по сравнению с группой доноров (а - Р<0,05), штаммов между собой (Ь - Р<0,05) и в динамике для второй группы больных среднее разницы и ее ошибка (с - Р<0,05).
Продукция цитокинов in vitro
Таблица Z.
Концентрация, пкг/мл Показатели интерлейкинов
ИЛ-1 ИЛ-2 ИЛ-6 ИФН-а ФНО
pVM+pYV+, M+m 91,6+10,1 3 1,7±2,1 326,7±39,3 15,7± 1,7 88,4± 10,6
контроль (доноры), А±1П -43,3 11 ±0,4 -1,7+0,1 -321,0 " ±34,7 -3,1 “±0,4 -50,1 а ±5,7
pVM-pYV+, A±in 29,1 а ±0,3 2,4±0,2 36,9 " ±5,9 1,9 " ±0,2 8,4 а +8,6
ЛПС, (5мкг /мл), А±т 69,7 " ±0,7 1,9±0,1 78,7 а ±9,4 4,5 " ±0,5 46,9 а ±5,2
Примечание: указана среднее разницы (относительно уровня, индуцированного У.р5еис1ои1Ьегси1о515 (82:47)) и ее ошибка, а - Р<0.()5.
к третьей неделе, у ТНФ-а не меняется, а продукция ИЛ-6 еще больше снижается. Достоверных отличий в уровне выработки цитокинов у больных, заболевание которых вызвано разными штаммамивозбудителя, выявить не удалось. Экспериментальные же данные указывают на более низкую стимуляцию продукции ИЛ-1, ИЛ-6,
ФНО-а и ИФН-а двухплазмидным штаммом У. р5еис1о1иЬегси1о5|5 (табл.2). Под действием культур У. р5еис1о1иЬегси1о5|5 продукция ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-а и ИФН-а была больше, чем в контроле и меньше, чем стимулированная ЛПС возбудителя.
Таким образом, Y.pseudotuberculosis обладает выраженными иммуносупрессорными свойствами и снижает продукцию цитокинов клетками крови in vitro и in vivo. В первую неделю заболевания псевдотуберкулезом наблюдается выраженное снижение продукции иммуноцитокинов, а к третьей неделе происходит повышение продукции ИЛ-1, ИЛ-2 и ИФН-а, уровень выработки ФНО-а остается таким же низким, а уровень ИЛ-6 еще больше снижается.
О БОЛОРМА В., ЛЕБЕДЕВ Ю.Б., КЖИШКОВСКА Ю.Г., ОСТАШКИН A.C., ИЛЬИН К.В., ИМАМОВА Л.Р., МЯНДИНА Г.И., ИТКЕС A.B., СВЕРДЛОВ Е.Д. -УДК 576.858
ИНТЕГРАЦИЯ ГЕНОМА РЕТРОВИРУСА ТИПА D МЕЙЗОНА-ПФАЙЗЕРА В ХРОМОСОМЫ ЧЕЛОВЕКА
В. Болорма, Ю.Б. Лебедев, Ю.Г. Кжишковска, A.C. Осташкин, К.В. Ильин,
Л.Р. Имамова, Г.И Мяндина, A.B. Иткес, Е.Д. Свердлов.
(Монгольский государственный медицинский университет, Российский университет дружбы народов, институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Институт канцерогенеза РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН)
Экзогенные ретровирусы типа Э - не содержащие онкогенов лимфотропные вирусы, выделенные от нескольких видов обезьян. Антитела к этим вирусам обнаружены у здорового населения Западной Африки, у больных лимфоаденопатия-ми, включая СПИД; также известен случай выделения ретровируса типа Э от больного В-клеточ-ной лимфомой и СПИД.
Ранее авторы настоящего исследования обнаружили нуклеотидные последовательности ретровируса типа Э в лимфоцитах детей, больных В-клеточной Беркитт-подобной лимфомой. ДНК лимфоцитов периферической крови нескольких таких больных была использована как исходный материал для этой работы. Данная ДНК, как ранее было показано при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР), содержит элементы генома вируса Мейзона-Пфайзера (МРМУ), относящиеся к области рг1-ро1. Целью данного исследования было, во-первых, выяснение вопроса о том, содержат ли анализируемые человеческие ДНК полную копию генома МРМУ, или его фрагменты. Во-вторых, целью работы было определение и анализ участ-
ков генома человека, в которых произошла интеграция ДНК данного вируса.
Первый этап работы заключался в амплификации областей ДНК человека, фланкирующих концевые участки интегрированного вирусного генома, методом селективной ПЦР-супрессии.
Эффект ПЦР-супрессии состоит в ингибировании амплификации молекул ДНК, фланкированных инвертированными концевыми повторами, в реакции ПЦР с праймером, соответсвующим внешней части инвертированных концевых повторов. Исходную ДНК подвергают исчерпывающему гидролизу рестриктазой (обычно - ЕсоЯI или одной из мелкощепящих рестриктаз) и присоединяют к полученным фрагментам специальный олигонуклеотидный адаптер, содержащий участок самокомплементарности; это подавляет амплификацию ДНК, не содержащей геном вируса (детально этот метод описан ранее).
В данной работе использовали праймеры, комплементарные длинным концевым повторам вируса (ЬТЯ):
А115-443, САССАААСАСАССССААСАС;
