CC BY
20
БИОМЕДИЦИНА I T.18«N54«2020 / BIOMEDICINE I voU8«N54«2020
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ I ORIGINAL ARTICLES
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11818
Влияние водного стресса на физиологические и биохимические свойства НАД-малик энзима в листьях пшеницы
Г.Г.Бабаев1, Г.А.Абыев2, Н.М. Гулиев1
ЩАНА, Институт молекулярной биологии и биотехнологии, г.Баку, Азербайджан; 2Азербайджанский медицинский университет, г.Баку, Азербайджан
Резюме: В статье представлены данные исследования влияния водного стресса на субклеточную локализациюактивнос-ти НАД-малик энзима (НАД-МЭ), изоферментный спектр и кинетические свойства катализируемой им реакции в листьях генотипов твердой пшеницы Баракатлы-95 и Гарагылчыг-2. Было обнаружено, что 70% общей активности фермента сосредоточено в локализованных в митохондриях листьев 3 изоформах с молекулярной массой 66, 74 и 86 кДа, а 20-25% - в локализованных в цитозоле 3 изоформах с молекулярной массой 42, 66 и 74 кДа. Установлено, что в период цветения индивидуального развития генотипов под влиянием водного стресса во фракции хлоропластов образовалась новая изофор-ма фермента с молекулярной массой 90 кДа.
Ключевые слова: пшеница, засуха, активность НАД-МЭ, изоформа, адаптация.
Для цитирования: Бабаев Г.Г., Абыев Г.А., Гулиев Н.М. Влияние водного стресса на физиологические и биохимические свойства НАД-малик энзима в листьях пшеницы. Биомедицина (Баку). 2020;18(4): 11-16. DOI: 10.24411/1815-3917-202011818
Поступила в редакцию: 19.10.2020. Принята в печать: 27.11.2020.
Effects of water stress on physiological and biochemical properties of NAD-malic enzyme in the leaves of wheat
Babayev H.G.1, Abiyev H.A.2, Guliyev N.M.1
!NASA Institute of Molecular Biology and Biotechnology, Baku, Azerbaijan; 2Azerbaijan Medical University, Baku, Azerbaijan
Abstract: In this article studed the effects of drought on the subcellular distribution of NAD-malic enzyme (NAD-ME), izoenzyme spectrum and kinetic properties of the reaction catalyzed by this enzyme have been studied comparatively in leaves of autumn genotypes of durum wheat Barakatli-95 and Garagylchyg-2. Most (70%) of the total MAD-ME activity was found to be localized in mitochondria of the wheat flag leaves, whereas 20-25% was observed in the cytosol. NAD-ME isoforms of 66, 74 and 86 kDa were detected in the mitochondrial and 42, 66 and 74 kDa isoforms in the cytosolic fraction. During the flowering phase of the plant, a novel isoform of 90 kDa emerged in the chloroplast fraction contrary to the cytosolic fraction under drought. Key words: wheat, drought, NAD-ME aktivity, isoform, adaptation.
For citation: Babayev H.G., Abiyev H.A., Guliyev N.M. Effects of water stress on physiological and biochemical properties of NAD-malic enzyme in the leaves of wheat. Biomedicine (Baku). 2020;18(4):11-16. DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11818
Received: 19.10.2020. Accepted: 27.11.2020.
Corresponding author: Babayev H.G.
Doctor of Biol. Sciences, Docent, Institute of Molecular Biology and Biotechnology of the National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan.
E-mail: babayev_hg@yahoo.co.uk
Для корреспонденции: Г.Г.Бабаев
Доктор биол. наук, доцент, Институт молекулярной биологии и биотехнологии Национальной академии наук, г.Баку, Азербайджан
E-mail: babayev_hg@yahoo.co.uk
БИОМЕДИЦИНА | т.18«№4«2020 / BIOMEDICINE | VOM8«№4«2020_
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11818
НАД-МЭ (МЭ, КФ 1.1.1.39) - это группа ферментов, участвующих в метаболизме растений, и катализирующихреакцию окисления-декарбокси-лирования L-малата с использованием НАД + в качестве кофактора [1, 2]. В связи с этим они участвуют в обеспечении фотосинтеза высокими уровнями CO2 во время стресса, а также участвуют в биосинтезе жирных кислот и регулировании pH цитозоля [3, 4].
НАД-МЭ - один из трех основных ферментов, реализующих механизм концентрирования углекислоты (МКУ) в группах высших растений с механизмами фотосинтеза С4 и САМ. Преобразуя малат в пируват, он предотвращает ингибирование цикла Кребса за счет увеличения концентрации ацетил-КоА и снижения количества оксалоацетата (ОА) в митохондриях, [5].
Во время определения Km и Vmax реакции, катализируемой НАД-МЭ, было установлено, что взаимодействие фермент-субстрат подчиняется закону Михаэлиса-Ментена и происходит с сигмои-дальной кинетикой. Активность фермента регулируется активаторами и ингибиторами [6].
Flexas показал, что актуальность НАД-МЭ обусловлена тем, что обладая высокой лабильностью во время стресса и меняясвою активность, количество изоформ и внутриклеточное распределение взависимости от условий [7], он играет роль в повышении устойчивости растений к абиотическим факторам стрессав период ухудшений экологических условий [8, 9].
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. В качестве объекта исследования были изучены генотипы, изолированные из листьев 2 сортов твердой пшеницы (Triticum durum Desf.): высокоурожайной изасухоустойчивой (75-85 ц/га) - Баракатлы-95 и высокоурожайной и чувствительной к засухе (70-80 ц/га) - Гарагылчыг-2.
Для выделения фотосинтетических тканей и их субклеточных фракций из листьев пшеницы к 20 г измельченного исходного материала, добавляли буфер А (80 мл, 30 мМ буфер МОПС, pH 7,4, 0,2 М сахарозы, 4 мМ цистеина, 1 тМ ДТТ, 5 мМ ЭДТА, 0,2% БСА, 1% ПВП и 10 мМ KCl) и гомогенизировали. После фильтрации через 2 слоя марли, осадок отбрасывали и фильтрат центрифугировали в течение 2 минутпри 5000 g. Полученный супернатант состоял из цитозоля, а осадок - из фракции хлоропластов. Хлоропласты хранили в буфере А в течение 1 ч с добавлением 1 мл 1% Тритона Х-100. Осадок промывали буфером B (20 мМ буфера MOPS, pH 7,4, 0,3 Мманнитола, 0,2% БСА) и повторно осаждали в течение 5 минут при 20000 g. Полученный осадок состоял из фракций пероксисом имитохонд-рий. Фракции пероксисом и митохондрий хранили в буфере B, содержащем 1% Тритон X-100, в течение 1 часа и путем добавления к полученным экстрактам 10 мМ буфера МОПС с 0,2 М сахарозы и 0,2% БСА с pH
7,4, быт создан 18, 23, 35% (10 мл) перкольный градиент. 100 мМ 1,2-пропандиол добавляли к 23 и 35% пер-кольнымградиентам и центрифугировалив течение 30 мин при 40 000 g. Один из градиентов, собранных пипеткой после центрифугирования состоял из интакт-ных митохондрий. Ферменты изучали через 1 ч после добавления к митохондриальной фракции 1,5-2 мл буфера А и 1% Тритона Х-100.
Активность НАД-МЭ быта определена в среде реакции, состоящей из 100 мМ Трис-НС1 буфера (рН 7,5), содержащего 0,2 мМ ЭДТА • 4Иа, 5 мМ ДТТ, 5 тМХ-ма-лата • Иа, 2,5 мМ ИАЛ+, 8 мМ МпСЬ, 8,0 мМ (МЩ 2804, 0,04% Тритона Х-100Е и экстракта фермента. В заключении, реакцию начинали добавлением МпСЬ к реакционной среде [10].
Изучение электрофоретического разделения белков и спектра изоферментов было проведено с помощью нативного гель-электрофореза [11], специфическое определение изоферментов НАД-МЭ в электро-форетических гелях тетразолом в специфической среде среде [12], определение молекулярной массы фермента методом гель-электрофореза [13].
Vmax (максимальная скорость реакции) и кинетические параметры Кт (константа Михаэлиса-Менте-на) реакциикатализируемой ферментом, были опреде-леныс относительно очищенным ферментным препаратом. В данном случае концентрациясубстрата была взята в пределах 0-20 мМ.
Относительное количество воды (RWC) быто определено методом ТатЬшчч [14], а общее количество белков быто определено методом Sedmak, Grossberg
[15].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Были получены субклеточные фракции мезофильных клеток (МК) из листьев пшеницы - цитозоль, хлоропласт, митохондрии, а с помощью гель-электрофореза было определено, что фермент НАД-МЭ локализован в цитозоле и митохондриях листьев пшеницы. Несмотря на то что, в онтогенезе пшеницы, в фазу выхода в трубку, в митохондриях и цитозоле, в контроле, имеется 1 конститутивная форма НАД-МЭ с молекулярной массой 76 кДа, во время стадии цветения под влиянием почвенной засухив митохондриях образуется 1 индуктивная изоформа с молекулярной массой 116 кДа (таблица 1).
В настоящее время проводятся обширные исследования для изучения физиологической роли ферментов метаболизма С4-кислот в С3-растени-ях. Одной из наиболее важных функций ферментов является сохранение и защита СО2, образующегося при дыхании, и его карбоксилирование в качестве субстрата первого фермента цикла Каль-вина-Бенса РБФК (рибулозобисфосфат-карбокси-лазы) для превращения РБФ (рибулозобисфосфа-та) в 2 моля 3-ФГК (фосфоглицериновой кислоты).
Установлено, что в фазу выхода в трубку онтогенеза растений 66,7% активности фермента гено-
БИОМЕДИЦИНА | т.18^№4^2020 / BIOMEDICINE | vol.18^№4^2020
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES
выход в трубку
колошение налив зерна
-Баракатлы-95 цитозоль контроль, -Баракатлы-95 цитозоль засуха, -Гарагылчыг-2 цитозоль контроль, ■-Гарагылчыг -2 цитозоль засуха, -Баракатлы-95 митохондрии контроль, -Баракатлы-95 митохондрии засуха, -Гарагылчыг-2 митохондрии контроль, -Гарагылчыг-2 митохондрии засуха
Рисунок 1. Динамика изменения активности НАД-МЭ в листьях в онтогенезе
генотипов пшеницы
типа Баракатлы-95, 59,3% - генотипа Гарагылчыг-2 локализуется в митохондриях, а 33,3 и 40,7%, соответственно - локализуется во фракциях цитозоля (рис. 1). Повышение активности фермента в митохондриях во время цветения, колошения, созревания (спелости) происходило за счет снижения активности изоформы цитозоля. Хотя в обеих фракциях во время фазы колошения имела место некоторая стабилизация, во время фазы созревания (спелости) активность НАД-МЭ в цитозольной фракции Гарагылчыг-2 приближалась к самой нижней границе. Напротив, вследствие уменьшения активности фермента в митохондриальной фракции во время фазы цветения и созревания (спелости) у Баракатлы-95, увеличилась активность фермента в цитозоле с 29,1% до 86,0%, а в засуху с 36,3 до 43,3%.
Полученные результаты показывают, что НАД-МЭ, будучи митохонд-риальным ферментом, участвует в поддержании энергетического статуса растения.
Изучение некоторых физико-химических свойств изоформ НАД-МЭ важно для понимания физиологических и биохимических функций фермента и объяснения его функциональной активности на основе субклеточной локализации. С этой точки зрения, мы изучили физико-химические свойства НАД-МЭ и кинетические
параметры катализируемойим реакции. Результаты представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, хотя генотипы пшеницы различаются по устойчивости к засухе, наблюдались вариации некоторых физико-химических параметров и изоферментных спектров НАД-МЭ в субклеточных фракциях клеток листа. Существует всего две изоформы фермента, различающиеся субклеточной локализацией, молекулярная масса одной из которых составляет 76 кДа. Вторая изоформа под влиянием засухи образуется в митохондриях мезофильных клеток (МК), и имеет молекулярную массу 116 кДа.
Результаты, связанные с влиянием рН реакционной среды на активность НАД-МЭ в клетках листьев генотипов Баракатлы-95 и Гарагылчыг-2, показаны на рисунке 2. Было обнаружено, что
Таблица 1. Некоторые физико-химические свойства изоформ НАД-МЭ в митохондриях листьев пшеницы
Генотип Вариант Фракция НАД-МЭ
Rf M, кДа
Баракатлы-95 К Цит 0,23 76,0
Мит 0,23 76,0
3 Цит 0,23 76,0
Мит 0,23, +0,18 76,0,+116,0
Гарагылчыг-2 К Цит 0,23 76,0
Мит 0,23 76,0
3 Цит 0,23 76,0
Мит 0,23, +0,18 76,0,+116,0
БИОМЕДИЦИНА I т.18*№4*2020 / BIOMEDICINE I voU8*№4*2020
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES
Баракатли-95
Л 2
1—1
$
3 « КО
л U 1
с л
о UJ
X м Ф м
а
5 0
Цитозоль
■k
2 » â»
SI'
О W
S ГУ
a V H
в
6,5 6.7 6,9 7,1 7Д 7.S 7,7 7.9 S.1
pH
Митохондрии
0.5
6J 6.1 7.1 7.3 7.J 7.7 1$ 1.1
pH
Каракылчыг-2
Рисунок 2. Влияние pH среды реакции на активность НАД-МЭ в митохондриях листа на стадии цветения онтогенеза пшеницы. 1 - контроль, 2 - засуха.
вследствие засухи, рН по-разному влияет на активность НАД-МЭ во фракциях цитозоля клеток листа генотипов Баракатли-95 и Гарагылчыг-2.
В зависимости от источника фермента, pH и концентрации L-малата растительные НАД-МЭ могут быть гетеродимером, гетеротетрамером или гетерооктамером. Long и др. отметили, что у вида A. hypocondriacus L. очищенный НАД-МЭ является гетеродимером. Так, он состоит из двух а-еди-ниц с молекулярной массой 65 кДа и двух Р-субъе-диниц с молекулярной массой 60 кДа. Иммунобло-тинговый анализ показал, что а-субъединицы локализованы в матриксе митохондрийобкладочных клеток (ОК).
Так, в обоих вариантах скорость реакции постепенно увеличивалась при низких значениях pH, достигая пика при рН 7,1-7,5, апри дальнейшем увеличении pH скорость реакции постепенно снижалась. Отличие заключалось в том, что у засухоустойчивого генотипа Баракатлы-95 активность НАД-МЭ под влиянием засухи всегда была выше-по сравнению с контролем при всех значениях pH реакционной среды. Результаты, полученные при изучении генотипа Гарагылчыг-2, были полностью противоположными, а pH реакционной среды под влиянием засухи всегда при всех значениях был ниже контрольных образцов. Этот результат показывает, что ионизация аминокислот, образующих активный центр фермента, у засухоустойчивых генотипов происходит легче, чем у чувствительных к
засухе генотипов, что можно объяснить степенью ионизации функциональных групп аминокислот, образующих активный центр. Как видно из рисунка 2, влияние рН реакционной среды на активность НАД-МЭ в митохондриальных фракциях генотипов Баракатлы-95 и Гарагылчыг-2 было выше, чем во фракциях цитозоля и контроля.
В наших экспериментах мы изучали влияние температуры в диапазоне 0-70°С на активность НАД-МЭ в листьях пшеницы. Было обнаружено, что активация фермента максимальна при температуре реакционной средыв диапазоне 40-50°С, а при дальнейшем повышении температуры активность фермента снижается. Например, в наших экспериментах, при температуре инкубационной среды 60°С активность фермента снижалась на ~ 40%, при 70°С - на 92-95%, а при 80°С - фермент полностью терял активность.
Как видно из Таблицы 2, начальная скорость реакции, катализируемой тНАД-МЭ в листьях пшеницы, сильно зависит от концентрации субстрата Р], и ее график имеет форму гиперболы. Основываясь на графике скорости реакции, катализируемой ферментом, в зависимости от концентрации субстрата, можно сделать вывод, что взаимодействие фермент-субстрат происходит по механизму Михаэлиса-Ментен. Как видно из таблицы, когда количество [&пам] составляло 10 мМ, Утах в контрольном и стрессовом вариантах составляла 2,4 и 3,9 Еи/мг, соответственно. В этом случае пос-
БИОМЕДИЦИНА | Т.18«№4«2020 / BIOMEDICINE | VOl.18*№4*2020
DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11818 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES
Таблица 2. Некоторые кинетические параметры реакции, катализируемой НАД-МЭ в листьях в фазе цветения онтогенеза пшеницы
Вариант Фракция НАД (1-50 мМ) L-малат, (1-50 мМ) МпС12, (1-50 мМ) АТФ, (0,1-3 мМ)
К 1 V m 1 т шах К. 1 V 1 * max к. 1 Vmax К. 1 Vmax
Баракатлы-95
К Цит 0,4 55,5 0,31 2,0 0,31 0,9 5,0 1,54
Мит 0,29 27,1 0,23 1,43 0,25 10,0 2,86 1,25
3 Цит 0,48 100,0 0,31 2,5 0,33 20,0 4,0 2,04
Мит 0,29 50,0 0,25 3,33 0,22 15,4 2,78 0.9
Гарагылчыг-2
К Цит 0,36 5,0 0,25 10,0 0,26 0,9 3,33 3,85
Мит 0,25 25,0 0,31 20,0 0,25 6,25 3,33 10,0
3 Цит 035 2,0 0,33 20,0 0,24 133 2,5 6,67
Мит 0,22 13,3 0,27 14?3 0,26 11,8 5,0 6,67
Примечания: Кт-мМ, Утах-Еи/мг белка, К-контроль, 3-засуха
тоянная скорости (Кт) реакции составляла 1,15 и 1,9 мМ, соответственно. Кт определяли по методу Laynшver-Berk (табл. 2).
Как видно из таблицы 2, при концентрациях активатора (МпСЬ) 1-50 мМ, активирующее действиена фермент НАД-МЭ в контрольных и засушливых образцах было различным. Так, Утах в стрессовом варианте при концентрации МпСЬ 3 мМ была примерно вдвое выше по сравнению с контролем. Утах также увеличивался соответственно с увеличением значения Кт (табл. 2).
Как видно из таблицы, анализ кинетических параметров реакции при концентрациях МпС12 050 мМ показывает, что активатор оказывает большее стимулирующее действие на активность тНАД-МЭ. В этой фракции Утах ферментасос-тавляет 4 Еи/мг белка, что примерно в 4,5 раза выше, чем в контроле (Утах (МпСЬ) 18.9 Еи / мг белка). По-видимому, тканевая специфичность влияния активатора на активность НАД-МЭ и отличающаяся картина, которая вызывается им под влиянием засухи, связана с метаболическими свойствами растения и формирования механизмов устойчивости биологических систем. Линейное поле, которое характеризуется максимальной скоростью на графике скорости реакции, соответствует концентрации МпСЬ 5 мМ.
Как видно из таблицы 2, активность фермента в цитозоле и митохондриях генотипов I и II увеличилась в ~ 2 раза за счет действия МпСЬ. Уровень активации был выше у I, чем у 11-2 (табл. 2).
Согласно данным, показанным в таблице 2, ингибирующее действие АТФ на активность НАД-
МЭ в листьях пшеницы проявляется аналогично действию фермента, локализованному в листьях амаранта в контрольном варианте и при засухе.
Таким образом, декарбоксилирование НАД-МЭ изучали в условиях долговременной почвенной засухи у генотипов пшеницы на различных этапах онтогенеза: стадиях колошения, цветения и созревания (спелости) семян. Установлено, что на активных этапах онтогенеза существует несколько молекулярных форм НАД-МЭ, различающихся субклеточной локализацией.
У генотипов пшеницы в контрольных и опытных образцах суммарная активность фермента локализовалась следующим образом: в митохондриях ~70% и в цитозоле ~ 30% .
Близость оптимального рН НАД-МЭ в листьях пшеницы к слабощелочной среде (рН 7,3-7,5), а также то, что оптимальная температура для обоих генотипов находилась в диапазоне 40-50°С, оказали значительное влияние на скорость и кинетические параметры реакции, которую данный энзим катализирует. Поскольку на графике зависимости скорости реакции от концентрации субстрата для обоих генотипов не наблюдалось сигмоидальной кривой, фермент не проявлял аллостеричности по отношению к субстрату в нашем эксперименте, и взаимодействие фермент-субстрат в целом происходило по механизму Михаэлиса-Ментена.
Результаты экспериментальных работ показывают, что изученные ферменты в листьях пшеницы обладают адаптивными свойствами и высоким межвидовым разнообразием.
БИОМЕДИЦИНА | т.18«№4«2020 / BIOMEDICINE | УОМ8«№4«2020_
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ / ORIGINAL ARTICLES DOI: 10.24411/1815-3917-2020-11818
Литература / References
1. Chang G.G., Tong L. Structure and function of malic enzymes, a new class of oxidative decarboxylases. Biochemistry. 2003;42:12721-12733. DOI: https://doi.oig/10.1016/0003-2697(77)90428-6
2. Drincovich M.F., Casati P., Andreo C.S. NADP-malic enzyme from plants: a ubiquitous enzyme involved in different metabolic pathways. FEBS Letters. 2001;490:1-6. DOI: doi.org/10.1016/S0014-5793(00)02331-0
3. Shearer H.L., Turpin D.H., Dennis D.T. Characterization of NADP-dependent malic enzyme from developing castor oil seed endosperm. Arch. Biochem. Biophys. 2004;429:134-144. DOI: 10.1016/j.abb.2004.07.001.
4. Sakano K. Revision of biochemical pH-stat: involvement of alternative pathway metabolism. Plant and Cell Physiology. 1998;39:467-473. Режим доступа [Available at]: http://pcp.oxfordjournals.org/content/39/5/ 467.full.pdf
5. Rustin P., Lance С. Malate metabolism in leaf mitochondria from the CAM plant Kalanchoe blossfeldiana. Pelln. Plant Physiology. 1986;81(4);854-858. DOI: 10.1104/pp.81.4.1039
6. Tronconi M.A., Wheeler M.C.G., Maurino V.G. et al. NAD-malic ewnzymes of Arabidopsis thaliana display distinct kinetic mexanisms that support differences in physiological control. Biochemical Journal. 2010;430: 295-303. DOI: 10.1104/pp.107.114975
7. Flexas J., Ribas-Carbo M., Diaz-spejo A. et al. Mesophyll conductance to CO2: current knowledge and future prospects. Plant, Cell and Environ. 2008;31:602-612. DOI: 10.1111/j.1365-3040.2007.01757.x
8. Liu H, Sultan MA, Liu XL, Zhang J, Yu F, Zhao HX. Physiological and comparative proteomic analysis reveals different drought responses in roots and leaves of drought-tolerant wild wheat (Triticum boeoticum). PLoS One. 2015 Apr 10;10(4):e0121852. DOI: 10.1371/journal.pone.0121852.
9. Covshoff S., Hibberd J. Integrating C4 photosynthesis into C3 crops to increase yield potential. Current Opinions in Biotechnology. 2012;23:209-214. DOI: 10.1016/j.copbio.2011.12.011.
10. Hatch M.D., Tsuzuki M., Edwards G.E. Determination of NAD malik enzyme in leaves of C4 plants. Effect of malate dehydrogenase and ather cofactors. Pant Physiology. 1982;69:483-491. DOI: 10.1104/pp.69.2.483
11. Davis B.J. Disk electrophoresis. II. Method and application to human serum proteins. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1964;121:404-427. DOI: 10.1111/j.1749-6632.1964.tb14213.x.
12. Fieldes M.A. An explanation of the achromatic bands produced by peroxydase isozymes in polyacril-amide electrophoresis gels stained for malate dehydrogenase. Electrophoresis. 1992;13:p. 82-86. DOI: doi.org/ 10.1002/elps. 1150130116
13. Laemmly U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;77(4):680-683. DOI: 10.1038/227680a0.
14. Tambussi E.A., Nogues S., Araus J.L. Ear of durum wheat under water stress: water relations and photo-synthetic metabolism. Planta. 2005;19:1-25. DOI: 10.1007/s00425-004-1455-7
15. Sedmak J.J. Grossberg S.E. A rapid, sensitive, and versatile assay for protein using coomassie Brilliant Blue G-250. Annals of Biochemistry. 1977;79:544-552. DOI: 10.1016/0003-2697(77)90428
Информация о соавторах: Г.А.Абыев
Доктор философии, доцент, кафедра биохимии, Азербайджанский медицинский университет, г.Баку, Азербайджан. Н.М.Гулиев
Член-корреспондент НАНА, Институт молекулярной биологии и биотехнологии, Национальная академия наук Азербайджана, г.Баку, Азербайджа.
Information about co-authors: Abiyev H.A.
PhD, Docent, Department of Biochemistry, Azerbaijan Medical University, Baku, Azerbaijan. Guliyev N.M.
NASA Corresponding Member, Institute of Molecular Biology and Biotechnology, National Academy of Sciences, Baku, Azerbaijan.
