CC BY
17ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧШ ПИТАННЯ БЮЛОГП ТА МЕДИЦИНИ
УДК 577.15(088.8)
М. А. Остафийчук1, А. И. Фурдычко2, Г. З. Борис2, О. Е. Успенский3
ВЛИЯНИЕ В/ЖЕЛУДОЧНОГО ВВЕДЕНИЯ ЛИЗОЦИМА-ФОРТЕ НА СОСТОЯНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА КРЫС
1Буковинский государственный медицинский университет (г. Черновцы) ^Л^вський нацюнальний медичний ушверситет iM. Данила Галицького 3Харьковский национальный медицинский университет
Summary. Ostafiichuk M. A., Furdychko A. I., Boris G. Z., Uspenskii O. E. INFLUENCE INTRAGASTRUM INTRODUCTION OF LYSOZYME-FORTE ON THE STATE OF RAT ORAL MUCOSA. - D. Galitsky Lvov National Medical University, e-mail: flavan. [email protected]. Aim: To determine of influence intragastrum introduction of lysozyme-forte on the state of rat oral mucosa. Materials and methods: Lysozyme-forte (lysozyme + gelatin + quercetin) introduced intragastrum of rats in dose 4 mg/kg (on pure lysozyme) during 10 days. The activity of urease, lysozyme, elastase, catalase and content of MDA were determined in oral tissues (cheek, tongue, gum). Results: The activity of urease and elastase and the degree of dysbiosis into oral tissues were reduced by lysozyme-forte. The activity of elastase and the content of bilirubin were reduced into serum by lysozyme-forte. Conclusion: Lysozyme-forte after intragastric introduction possesses the antidysbiotic and antiinflammation actions on oral tissues.
Key words: lysozyme-forte, cheek, tongue, gum, dysbiosis, inflammation.
Реферат. Остафийчук М. А., Фурдычко А. И., Борис Г. З., Успенский О. Е. ВЛИЯНИЕ В/ЖЕЛУДОЧНОГО ВВЕДЕНИЯ ЛИЗОЦИМА-ФОРТЕ НА СОСТОЯНИЕ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА КРЫС. Лизоцим-форте (яичный лизоцим + желатин + кверцетин) снижает микробную обсемененность тканей полости рта (щека, язык, десна) и оказывает антивоспалительное действие.
Ключевые слова: лизоцим-форте, щека, язык, десна, дисбиоз, воспаление.
Реферат. Остафшчук М. А., Фуздичко А. I., Борис Г. З., Успенський О. £. ВПЛИВ В/ШЛУНКОВОГО ВВЕДЕННЯ Л1ЗОЦИМА-ФОРТЕ НА СТАН СЛИЗОВО1 ОБОЛОНКИ ПОРОЖНИНИ РОТА ЩУР1В. Лiзоцим-форте (яечний лiзоцим + желатин + кверцетин) знижуе мжробне обаменшня тканин ротово! порожнини (щока, язик, ясна) та здшснюе антизапальну дю.
Ключовi слова: лiзоцим-форте, щока, язик, ясна, дисбюз, запалення..
Введение. Лизоцим является одним из факторов неспецифического иммунитета [1, 2] и относится к гидролитическим ферментам (КФ 3.2.1.17), расщепляющим 1,4-0-связи между остатками n-ацетилмурамовой кислоты и 2-ацетамидо-2-дезокси-Э-глюкозы в мукополисахаридах и мукопептидах клеточных стенок ряда бактерий [3, 4]. Установлено, что лизоцим обладает также и цитопротекторными свойствами [5, 6], что послужило основанием для его клинического применения в качестве лечебно-профилактического средства [7-9].
Несмотря на широкое применение лизоцима в медицине, многие его биологические эффекты остаются неизученными, что не позволяет в полной мере определить его лечебно-профилактические возможности.
© М. А. Остафийчук, А. И. Фурдычко, Г. З. Борис, О. Е. Успенский
Так, до сих пор не изучена его фармакокинетика при разных путях введения в организм, не исследованы пути его метаболизма в организме и возможные иные, неантимикробные, механизмы влияния на органы и ткани.
Целью настоящей работы стало определение влияния в/желудочного введения лизоцима-форте на состояние слизистой оболочки полости рта [10].
Материалы и методы исследования
В работе был использован яичный лизоцим «Afilact» производства фирмы «Chr. Hansen» (Дания) с активностью 35 тыс. ед/мг белка. Лизоцим использовали в комплексе с желатином и кверцетином, которые защищали его от протеолиза (лизоцим-форте) [11].
Эксперименты были проведены на 10 белых крысах линии Вистар (самцы, 4 месяца, средняя живая масса 240±12 г), распределенных в 2 равных группы: 1-ая - интактная; 2-ая получала в/желудочно лизоцим-форте (в пересчете на лизоцим 4 мг/кг) в течение 10 дней.
Эвтаназию животных осуществляли на 11 -й день под тиопенталовым наркозом (20 мг/кг) путем тотального кровопускания из сердца. Иссекали слизистую щеки, языка, десну и получали сыворотку крови. В сыворотке крови определяли активность уреазы (маркер микробного обсеменения) [12], лизоцима (показатель неспецифического иммунитета) [4], эластазы (биохимический маркер воспаления) [13], а также печеночные маркеры: билирубин [14] и аланинаминотрансферазу (АлАТ) [14]. В гомогенатах слизистой щеки, языка и десны определяли активность уреазы, лизоцима, эластазы, антиоксидантного фермента каталазы [13] и содержание малонового диальдегида (МДА), который является маркером перекисного окисления липидов и еще одним маркером воспаления [13]. По соотношению активности каталазы и содержания МДА рассчитывали антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ [13], а по соотношению относительных активностей уреазы и лизоцима - степень дисбиоза по Левицкому [15].
Результаты исследований подвергали стандартной статобработке [16].
Результаты и их обсуждение
В таблице 1 представлены результаты определения ряда биохимических показателей сыворотки крови крыс, получавших лизоцим-форте. Как видно из этих данных, введение лизоцима-форте слабо повышает уровень лизоцима в сыворотке (всего на 4,4 %), однако достоверно (на 13 %) снижает активность эластазы, т. е. снижает уровень маркера системного воспаления [13], и достоверно снижает уровень билирубина, свидетельствующее о снижении печеночного холестаза. Лизоцим-форте показывает тенденцию к снижению степени дисбиоза в сыворотке крови.
Таблица 1
Влияние в/желудочного введения лизоцима-форте на биохимические показатели сыворотки крови крыс (M±m, n=5) Показатели Интактные Лизоцим-форте
Уреаза, мк-кат/л 0,16±0,01 0,18±0,01
р>0,05
Лизоцим, ед/л 68±4 71±2
р>0,3
Эластаза, мк-кат/л 271±11 236±9
р<0,05
Билирубин, ммоль/л 5,12±0,37 4,03±0,38
р<0,05
АлАТ, мк-кат/л 0,18±0,03 0,18±0,02
р=1
Степень дисбиоза 1,00±0,15 0,77±0,18
р>0,3
В таблице 2 представлены результаты определения ряда биохимических показателей в слизистой щеки. Из этих данных следует, что введение лизоцима-форте почти в 3 раза снижает активность уреазы, что свидетельствует о существенном снижении микробной обсемененности этой ткани и, как следствие, снижении степени дисбиоза. Снижается также и активность эластазы, что указывает на снижение уровня провоспалительного состояния слизистой щеки. Показатели прооксидантной (МДА) и антиоксидантной (каталаза) систем существенно не изменяются в слизистой щеки крыс, получавших лизоцим-форте.
Таблица 2
Влияние в/желудочного введения лизоцима-фотре на показатели слизистой щеки крыс (M±m, п=5)
Показатели Уреаза, мк-кат/кг
Лизоцим, ед/кг
Эластаза, мк-кат/кг
МДА, ммоль/кг
Каталаза, мкат/кг
АПИ
Степень дисбиоза
Интактные 1,80±0,28
295±13
35,2±0,3
26,2±1,1
5,2±0,4
1,98±0,22
1,00±0,15
Лизоцим-форте 0,65±0,11 р<0,01 264±29 р>0,1 33,6±0,9 р<0,05 26,6±1,1 р>0,3 5,9±0,4 р>0,3 2,07±0,21
р>0,3 0,40±0,15 р<0,05
Аналогичные изменения наблюдаются и в слизистой языка: почти 3-кратное снижение активности уреазы и степени дисбиоза, достоверное снижение активности эластазы и практически неизменные уровни показателей антиоксидантной и прооксидантной систем (табл. 3).
Таблица 3
Влияние в/желудочного введения лизоцима-форте на показатели слизистой языка крыс (M±m, n=5)
Показатели Уреаза, мк-кат/кг
Лизоцим, ед/кг
Эластаза, мк-кат/кг
МДА, ммоль/кг
Каталаза, мкат/кг
АПИ
Степень дисбиоза
Интактные 0,98±0,09
97±15
53±2
6,3±0,3
2,9±0,1
4,60±0,3
1,00±0,14
Лизоцим-форте 0,35±0,02 р<0,01 97±17 р=1 47±2 р<0,05 5,9±0,2 р>0,1 3,0±0,1 р>0,5 5,08±0,41
р>0,05 0,36±0,17 р<0,05
В таблице 4 представлены результаты определения ряда биохимических показателей в десне крыс, получавших в/желудочно лизоцим-форте. Видно, что введение лизоцима в 2,5 раза снижает активность уреазы и в 2 раза степень дисбиоза, на 20 % снижается активность лизоцима и на 14 % активность эластазы (р<0,05). В то же время, повышается уровень МДА (на 11 %).
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что введение в/желудочно лизоцима, защищенного от протеолиза желатином и кверцетином (лизоцим -форте), оказывает антидисбиотическое и противовоспалительное действие на ткани полости рта. Удивительно, что при этом активность лизоцима в этих тканях мало отличается от контроля (за исключение десны, в которой активность лизоцима даже снижается). Учитывая, что уреаза имеет исключительно микробное происхождение [17], можно полагать, что в/желудочное введение лизоцима-форте снижает каким-то образом транслокацию бактерий из кишечника [18]. Следствием снижения микробной обсемененности тканей полости рта является и снижение уровня ее провоспалительного состояния, о чем свидетельствует достоверное снижение активности эластазы, наблюдаемое
во всех исследованных биообъектах.
Таблица 4
Влияние в/желудочного введения лизоцима-форте на показатели десны крыс (M±m, п=5)
Показатели Интактные Лизоцим-форте
Уреаза, мк-кат/кг 3,73±0,37 1,52±0,25
р<0,01
Лизоцим, ед/кг 350±22 280±14
р<0,05
Эластаза, мк-кат/кг 43±2 37±2
р<0,05
МДА, ммоль/кг 15,0±0,4 16,7±0,7
р<0,05
Каталаза, мкат/кг 7,5±0,5 6,8±0,4
р>0,1
АПИ 5,00±0,31 4,07±0,40
р>0,05
Степень дисбиоза 1,00±0,15 0,51±0,13
р<0,05
Выводы
1. В/желудочное введение лизоцима-форте снижает уровень микробного обсеменения и степень дисбиоза в тканях полости рта.
2. Возможно, экзогенный лизоцим каким-то образом подавляет транслокацию бактерий из кишечника.
3. Лизоцим-форте оказывает антивоспалительное действие на ткани полости рта, что дает основания рекомендовать его применение с лечебной целью при стоматитах и пародонтитах.
Литература:
1. Добротина Н. А. Лизоцим как модулятор иммунологических реакций / Н. А. Добротина, Ж. А. Казацкая, Т. Ю. Емельянова // Вопросы медицинской химии. - 1987. - т. 33. - С. 66-69.
2. Бровкина И. Л. Иммунометаболические эффекты, вызываемые лизоцимом при острой кровопотере / И. Л. Бровкина, В. Н. Рыбников // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2004. - № 2. - С. 14-16.
3. Бухарин О. В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О. В. Бухарин, Н. В. Васильев. - Томск, 1974. - 120 с.
4. Левицкий А. П. Лизоцим вместо антибиотиков / А. П. Левицкий. - Одесса: КП ОГТ, 2005. - 74 с.
5. Маянский Д. Н. Влияние лизоцима на резистентность гепатоцитов / Д. Н. Маянский, С. Н. Кутина, Э. Г. Щербакова // Антибиотики и химиотерапия. - 1988. - т. 33, №
2. - С. 128-131.
6. Уровень лизоцима в слюне и крови как фактор устойчивости больных нейроциркулярной дистонией к развитию воспалительных процессов в ротовой полости и ротоглотке / Л. Ю. Орехова, И. Н. Антонова, М. Я. Левин [и др.] // Georg. Med. News. -2004. - № 78. - С. 43-45.
7. Левицкий А. П. (ред.). Лечебно-профилактические зубные эликсиры (учебное пособие) / А. П. Левицкий. - Одесса: КП ОГТ, 2010. - 246 с.
8. Эффективность применения таблеток «Тексализ» для снижения воспалительных явлений в тканях пародонта / И. И. Лысенкова, Б. Ф. Абдусаламова, Т. Ш. Саикян [и др.] // Dental Forum. - 2008. - № 1. - С. 63-66.
9. Применение иммунобиологических препаратов в комплексном лечении и профилактике кандидозных стоматитов / А. К. Николишин, А. П. Левицкий, Е. П. Ступак [и др.] // Клиническая стоматология в Украине. - 2010. - № 4(6). - С. 12-15.
10. Барабаш А. Д. Ферментативные механизмы антимикробной защиты ротовой полости / А. Д. Барабаш, А. П. Левицкий // Вопросы медицинской химии. - 1978. - т. 24, №
3. - С. 291-310.
11. Добавка дieтична <^зоцим-форте». ТУ У 10.8-37420386-004:2016. Ппеничний висновок № 602-123-20-2/5734 вад 22.12.2016.
12. Ферментативный метод определения дисбиоза полости рта для скрининга про- и пребиотиков: методические рекомендации / А. П. Левицкий, О. А. Макаренко, И. А. Селиванская [и др.]. - К.: ГФЦ МЗУ, 2007. - 22 с.
13. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: методические рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.].- Одесса, 2010. - 16 с.
14. Горячковский А. М. Клиническая биохимия в лабораторной диагностике / А. М. Горячковский. - 3-е изд. - Одесса: Экология, 2005. - 616 с.
15. Патент на корисну модель № 43140. МПК 2009 G01N 33/48. Споаб ощнки ступеня дисбюзу (дисбактерюзу) оргашв i тканин. Левицький А. П., Деньга О. В., Сел1ванська I. О. [та ш.]. № u 2008 15092 вад 26.12.2008. Опубл. 10.08.2009. Бюл. № 15.
16. Лапач С. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / С. Н. Лапач, А. В. Чубенко, П. Н. Бабич. - К.: Морион, 2000. - 320 с.
17. Нижевич А. А. Уреаза Helicobacter pylori: введение в патогенез и патобиохимию гастритов / А. А. Нижевич, Р. Ю. Хасанов // Материалы VIII тематической сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori, 18 мая 1999 г. - Уфа. - С. 1-9.
18. Бондаренко В. М. Роль транслокации кишечной бактериальной аутофлоры и ее токсических биомолекул в патологии человека / В. М. Бондаренко, Е. В. Рябиченко // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2007. - № 5. - С. 86-93.
References
1. Dobrotina N. A., Kazatskaia Zh. A., Emelianova T. Iu. Lysozyme as immunological modulator. Voprosy meditsinskoi khimii. 1988; 33: 66-69.
2. Brovkina I. L., Rybnikov V. N. Immunometabolic effects, caused by lysozyme at acute hemorrhage. Patologicheskaya fiziologiya i eksperimentalnaya terapiya. 2004; 2: 14-16.
3. Bukharin O. V., Vasilyev N. V. Lizotsim I ego rol v biologii I meditsine [Lysozyme and his role in biology and medicine]. Tomsk, 1974:120.
4. Levitsky A. P. Lizotsym vmesto antibiotikov [Lysozyme instead of antibiotics]. Оdеssа, KP OGT, 2005:74.
5. Maianskii D. N., Kutina S. N., Shcherbakova E. G. Influence of lysozyme on hepatocytes resistence. Antibiotiki i khimioterapiia. 1988; 33(2): 128-131.
6. Orekhova L. Yu., Antonova I. N., Levin M. Ya. [i dr.]. The level of lysozyme in saliva and blood as the factor of the resistance of patients with neurocirculatory dystonia to the development of the inflammatory processes in oral cavity and oropharynx. Georg. Med. News. 2004; 78: 43-45.
7. Levitsky A. P. Lechebno-profilakticheskie zubnye eliksiry [The therapeutic and preventive dental waters: the manual / ed. by Levitskiy A.P.]. Оdеssа, KP OGT, 2010: 246.
8. Lysenkova I. I., Abdusalamova B. F., Saakyan T. Sh. [et al.]. The effectiveness of the use of "Hexalys" pills for the reduction of inflammatory phenomena in periodontal tissues. Dental Forum. 2008; 1: 63-66.
9. Nikolishin A. K., Levitsky A. P., Stupak E. P. [et al.]. The application of immunobiological preparations in the complex treatment and prevention of oral moniliasis. Klinicheskaya stomatologiya v Ukraine. 2010; 4(6): 12-15.
10. Barabash A. D., Levitsky A. P. Enzymatic mechanisms of antimicrobe defence of at oral cavity. Voprosy meditsinskoi khimii. 1978; 24(3): 291-310.
11. TU U 10.8-37420386-004:2016 «The diet supplementary «Liposan» (vitamin F)». The diet supplementary «Lizotsim-forte». TU U 10.8-37420386-004:2016. Conclusion of the Ministry of Healthcare of the Ukraine from 22.12.2016.
12. Levitsky A. P., Makarenko O. A., Selivanskaya I. A. [et al.]. Fermentativnyy metod opredeleniya disbioza polosti rta dlya skrininga pro- i prebiotikov: metodicheskie rekomendatsii [Enzymatic methods for determination of oral dysbiosis for screening pro- and prebiotics: method guidelines]. Kiev, GFC, 2007: 22.
13. Levitsky A. P., Denga O. V., Makarenko O. A. [et al.]. Biokhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodicheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Оdеssа, KP OGT, 2010: 16.
14. Goryachkovskiy A. M. Klinicheskaya biokhimiya v laboratornoy diagnostike [The clinical biochemistry in laboratorial diagnostics] [3rd ed.]. Odessa, Ekologiya, 2005: 616.
15. Levitsky A. P., Denga O. V., Selivanskaya I. A. [et al.]. The method of estimation of the degree of dysbiosis (dysbacteriosis) of organs and tissues. Patent of Ukraine 43140. IPC (2009) G01N 33/48. Application number u 200815092. Date of filling: 26.12.2008. Publ.: 10.08.2009. Bul. № 15.
16. Lapach S.N., Chubenko A.V., Babich P.N. Statisticheskiye metody v medico-biologicheskikh issledovaniyakh s ispolzovaniem Excel [Statistical methods in medical and biological research by using Excel]. Kiyev, Morion, 2000: 320.
17. Nizhevich A. A., Khasanov R. Iu. Urease Helicobacter pylori: introduce in pathogenesis and pathbiochemistry of gastritis. Materialy VIII tematicheskoi sessii Rossiiskoi gruppy po izucheniiu Helicobacter pylori, 18.5.1999. - Ufa: 1-9.
18. Bondarenko V. M., Ryabichenko E. V. The role of translocation of intestinal bacterial autoflora and its toxic biomolecules in human pathology. Eksperimentalnaya i klinicheskaya gastroenterologiya. 2007; 5: 86-93.
Работа поступила в редакцию 27.08.2017 года.
Рекомендована к печати на заседании редакционной коллегии после рецензирования
