CC BY
54
ПТИЦА
Влияние пробиотиков на морфологию органов цыплят
А.Г. Деблик, А.Р. Маликова, Д.А. Ижбулатова, E.H. Сковородин,
Башкирский ГАУ (г. Уфа)
Ключевые слова: пробиотики, птица
Сокращения: КОЕ — колониеобразующие единицы; МТ — масса тела; ЦКГ — цыплята контрольной группы; ЦОГ1 — цыплята 1-й опытной группы; ЦОГ2 — цыплята 2-й опытной группы
Введение
Применение пробиотиков в птицеводстве открывает возможность коррекции кишечного биоценоза, гормональной и ферментативной систем, стимулирования иммунитета, профилактики и лечения дисбактериозов [1....9]. Однако очень мало известно о том, какие изменения происходят в организме птицы при воздействии бифидо- и лактобактерий.
Материалы и методы
60 цыплят в суточном возрасте разделили на 3 равные группы — контрольную и две опытные. В течение 1 мес ЦОГ1 и ЦОГ2 выпаивали пробиотики Алифт-П и Бифинорм, содержавшие 1 х 10!) КОЕ лактобактерий L. acidophilus и 5 х 10' КОЕ бифидобактерий В. adolescentes соответственно. ЦКГ пробиотики не получали.
Птицу ежедневно взвешивали, а в конце опыта половину каждой группы подвергли эвтаназии.
Органометрическое исследование включало определение длины толстого и тонкого отделов кишечника, массы мышечного и железистого желудков, а также центральных органов иммунитета — тимуса и фабрициевой бурсы. Для гистологического и гистохимического исследований брали пробы печени, почек, поджелудочной железы, тимуса, фабрициевой бурсы, селезенки, Гардеровой железы, дивертикул Меккеля, толстый отдел и слепые отростки кишечника. Их фиксировали жидкостью Карнуа, после проводки через спирты заливали парафином и готовили тонкие срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином, по Романовскому — Гимзе и по Эй-нарсону. При гистологическом исследовании паренхиматозных органов учитывали: в печени — ширину балок и желчных протоков, размер сосудов и лимфоцитарных скоплений; в почках — диаметр сосудистого клубочка, расстояние между капсулой нефрона и клубочком, высоту эпителия извитых и прямых канальцев, а также их просвет; в поджелудочной железе — размеры панкреацитов и островков Лангерганса.
Полученные данные обработали с помощью прикладных программ Microsoft Excel.
Результаты
За время опыта МТ птицы увеличилась в среднем в 8,5...10 раз. Цыплята, получавшие пробиотики, опережали птицу ЦКГ по привесам на 9...10%. Относительный прирост МТ выше уровня 50 % отметили у ЦОГ2 в первые 3 нед (максимальным этот показатель был на 2-й неделе — 62 %). Рост цыплят, получавших Алифт-П, имел сходную динамику, относительный прирост их МТ достиг пика (69 %) также на 2-й неделе. В конце эксперимента разница МТ у птицы опытных групп была незначительной (всего 4 %). У ЦКГ относительный прирост МТ превысил 50%-й уровень только к 3-й неделе, достигнув 65 %,
вследствие чего к концу опыта их МТ оказалась ниже, чем у опытных цыплят, на 40...70 г. Эти данные свидетельствуют о том, что птица, получавшая пробиотики, успешнее преодолела первые критические этапы развития.
Масса центральных органов иммунитета изменялась следующим образом. К концу эксперимента масса тимуса у цыплят опытных групп была выше, чем у птицы контрольной группы, на 0,50...0,57 г, а между опытными группами ее разница составила 0,07 г (различия статиспяески незначимые, р > 0,05). Масса бурсы у ЦКГ к месячному возрасту уменьшилась в 1,67 раза, у ЦОГ1 — в 1,04 раза, а у ЦОГ2 — в 1,4 раза по сравнению с двухнедельным возрастом, что свидетельствует о начавшейся инволюции органа, которая была наиболее выражена у ЦКГ.
Средняя масса железистого и мышечного желудков у ЦОГ1 соответственно составила 2,6 ± 0,3 и 11,5 ± 1,3 г, у ЦОГ2 - 2,1 ± 0,3 и 11,6 ± 1,5 г, у ЦКГ - 2,27 ± 0,4 и 10,8 ± 1,6 г. Это свидетельствует о том, ч то пробиотики не оказали статистически значимого влияния (р > 0,05) на массу желудка.
К концу опыта общая длина кишечника у ЦОГ1 составила 117 см, в т.ч. длина двенадцатиперстной кишки была равна 17,67 см (15,1 %), тонкого кишечника — 85 см (72,65 %), прямой кишки 4,67 см (3,99 %), слепой кишки — 9,67 см (8,26 %). У ЦОГ2 в этот период длина кишечника равнялась 121 см, длина двенадцатиперстной кишки —17,3 см (14,3 %), тонкого кишечника — 85,67 см (70,8%), прямой кишки — 5,77 см (4,7%); слепой кишки -12,3 см (10,2%), а у ЦКГ -114,47 см, 17,3 см (15,12 %), 84 см (73,38 %), 4,17 см (3,64 %) и 9 см (7,86 %) соответственно. Таким образом, дача пробиотиков повлияла на линейные размеры кишечника.
У ЦОГ1 эпителий стромы печени был вытянут, пластинка соединительной ткани неравномерной толщины, в ней обнаружили скопления лимфоцитарной ткани в виде фолликулов диаметром 10...12мкм. Гепатоциты имели призматическую форму, были хорошо различимы, равномерно окрашены, образовывали балки шириной 1,56 ± 0,09 мкм. Их ядра содержали большое количество хроматина, а рибонуклеопро-теин располагался в цитоплазме равномерно в виде крупных глыбок. Сосуды имели диаметр 2,8...9,1 мкм и были окружены муфтами, образованными скоплениями лимфоцитов. У ЦОГ2 отметили увеличение ширины печеночной плаепшки (1,99 ± 0,23 мкм) и диаметра желчного протока (3...6 мкм). У КГЦ строма печени образовывала большое количество складок, а ширина пластинок составляла 1,69 ± 0,21 мкм. Лимфо-цитарные скопления локализовались в основном вокруг крупных сосудов. Они были образованы, как и у цыплят опытных групп, мелкими лимфоцитами с крупными густо заполненными хроматином ядрами, что свидетельствует об их функциональной незрелости.
Средний диаметр нефронов почек был наибольшим у ЦОГ1 (4,27 ± 0,05 мкм), а у ЦОГ2 и ЦКГ его величина составила 3,49 ± 0,07 и 3,57 ± 0,18 мкм, соответственно. Расстояние между капсулой нефрона и клубочком у птицы опытных групп равнялась 0,27...0,29 мкм, а у ЦКГ — 0,42 ± 0,06 мкм. Различия высоты эпителия извитых и прямых канальцев почек цыплят разных групп не были статистически значимыми, но просвет канальцев у ЦОГ1 оказался в 2...3 раза больше (0,7 ± 0,13 мкм), чем у птицы других групп.
РВЖ СХЖ №4-2006
39
ПТИЦА
У цыплят опытных групп серозная оболочка поджелудочной железы образовывала складки, а у контрольной птицы строма органа была сильно вытянутой. У птицы опытных и контрольной групп отметили незначительные различия величины, формы и окраски панкреоцитов, а также количества в них хроматина и рибонуьслеопротеина. Различия величины островков Лангерганса у находившихся в опыте цыплят были значительно больше: у ЦОГ1 этот показатель составил 12,9 ± 0,3 мкм, у ЦОГ2 - 6,5 ± 0,8 мкм, а у ЦКГ - 3,4 ± 0,8 мкм.
Мозговое вещество долек тимуса у ЦОГ1 занимало большую площадь дольки, окрашивалось неравномерно и содержало хорошо заметные ретикулоэпителиоциты Гассаля. Толщина коркового слоя равнялась 1,34...3,36 мкм, а мозгового -1,68...7,2 мкм. У ЦОГ2 корковое вещество было интенсивно окрашено, границы между ним и мозговым веществом четко обозначены, в последнем находилось множество телец Гассаля. Толщина коркового слоя составила 0,84...2,69 мкм, а мозгового — 2,35...5,71 мкм. У ЦКГ мозговое вещество большинства долек было слито, лимфоциты лежали в нем рыхло и в некоторых участках отсутствовали. Толщина коркового слоя колебалась от 0,84 до 0,86 мкм, а мозгового — от 1,68 до 5,54 мкм.
У ЦОГ1 дольки фабрициевой бурсы лежали компактно и имели четкие контуры. Их ширина равнялась 1,67 ± 0,19 мкм, а длина — 2,01 ± 0,34 мкм. Несмотря на темный цвет коркового вещества, граница между ним и центральной зоной была почти не выражена. Стромальные прослойки между фолликулами были представлены хорошо заметными топкими прослойками коллагеновых волокон. Эпителий был ровным, высотой 0,32 ± 0,04 мкм, ядра клеток прилегали к базальной мембране. У ЦОГ2 дольки бурсы хорошо окрашивались и имели округлую форму; их ширина равнялась 1,37 ± 0,18 мкм, а длина - 1,75 ± 0,33 мкм. Центральная зона долек окрашивалась светлее вследствие менее плотного расположения клеток, а эпителий был ровным (высотой 0,41 ± 0,08 мкм) и содержал округлые, вытянутые, прилегающие к базальной мембране ядра клеток. У ЦКГ дольки бурсы окрашивались менее интенсивно, чем у птицы опытных групп. Их мозговая зона отличалась от корковой интенсивным окрашиванием и рыхлым расположением эпителиальных клеток. В мозговой зоне, эпителии и особенно корковом веществе бурсы встречались вакуоли — округлые участки без клеток, заполненные прозрачным содержимым. Соединительнотканные прослойки между фолликулами имели рыхлую морфологию. Высота эпителиальных клеток равнялась 0,28 ± 0,03 мкм, а длина оказалась вариабельной. Средние ширина и длина долек у ЦКГ были меньше, чем у птицы опытных групп, и составляли 1,21 ± 0,14 и 1,36 ± 1,19 мкм соответственно. Таким образом, изменения органа указывали на начавшийся интенсивный процесс атрофии.
В селезенке ЦКГ отметили ряд морфологических изменений, в т.ч. складчатость и утолщение капсулы, многочисленные участки с расширенными нодкапсулярными синусами, а также разрастание соединительной ткани в паренхиме органа.
У ЦКГ серозная оболочка Гардеровой железы имела меньшую толщину, чем у птицы опытных групп. У всех находившихся в опыте цыплят отметили образование мелких складок, почти одинаковые толщину трабекул и величину долек железы. У ЦОГ1 лимфоцитарная ткань занимала большую часть дольки, а количество фолликулов и узелков в последней составляло 11...14. У ЦОГ2 соотношение железистой и лимфоидной частей железы было почти одинаковым, количество фолликулов и узелков в дольке колебалось от 9 до 12. У ЦКГ большую часть Гардеровой железы занимал железистый эпителий, а лимфоцитарная ткань узкой полоской располагалась вокруг центрального протока. Количество фолликулов в дольках варьировало от 1 до 5, а в некоторых дольках они отсутствовали. Лимфоциты во всех группах были мелкими с крупными ядрами и большим ко-
личеством хроматина, что свидетельствует об их функциональной незрелости.
Исследуя дивертикул Меккеля, определяли его диаметр, а также наличие лимфоидной ткани и лимфофолликулов. Его максимальный диаметр у ЦОГ1 и ЦОГ2 составлял 170,0 ± 6,9 и 180,0 ± 7,3 мкм соответственно (различия статистически незначимые). Однако у птиц опытных групп этот показатель был значительно большим, чем у ЦКГ (152,0 ± 0,17 мкм). У ЦОГ1 лимфоцитарная ткань диффузно скапливалась в верхушке дивертикула, у ЦКГ — в виде мелких узелков, а у ЦОГ2 такие образования вообще отсутствовали. Структура лимфоцитов свидетельствовала об их незрелости.
Слепая кишка у ЦОГ1 имела больший просвет (18 мкм), чем у ЦОГ2 (17,7 мкм) и ЦКГ (16,7 мкм). Листовидные, плотно прилегающие друг к другу ворсинки ее слизистой оболочки имели максимальную высоту (6,2 мкм) у ЦОГ2, а наименьшую — у ЦКГ (5,2 мкм). У ЦОГ1 в слепой кишке встречались участки с ^сформировавшимися ворсинками. В подслизистом слое у цыплят опытных групп были четко выражены лимфоцНтарные скопления, отсутствовавшие у ЦКГ. Средний диаметр тонкого отдела кишечника ЦОГ1, 11.0Г2 и ЦКГ составил 24,1 , 29,98 и 18,77 мкм, а средний диаметр прямой кишки у цыплят этих групп — 23,26 , 30,08 и 27,3 мкм, соответственно.
Заключение
На основании результатов органометрического, гистологического и гистохимического исследований можно сделать вывод о том, что пробиотики на основе лакто- и бифидобак-терий оказывают неодинаковое влияние на развитие органов у цыплят в 1-й месяц жизни. В частности эти изменения проявляются различием МТ и интенсивности ее увеличения, линейных параметров органов пищеварения и массы центральных органов иммунитета. Основные морфологические изменения проявляются неодинаковым гистологическим строением паренхиматозных, центральных и периферических органов иммунитета и стенки кишечника.
Результаты дальнейших исследований позволят определить оптимальные схемы применения пробиотиков в зависимости от возраста, физиологического статуса, клинических показателей и видовых особенностей развития птицы.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Бовкун Г.Ф., Нигманов А.Н., Семенихина В.Ф. и соавт. Профилактическое действие бифинорма при желудочно-кишечных болезнях цыплят//Вете-ринария, 1998, 12, с. 44^7.
2. Малик Е.В. Пробиотики в птицеводстве//Животновод для всех, 2004, 7— 8, с. 6—7.
3. Манналова Р.Т., Шилов С.О. Прирост живой массы, сохранности индексов тимуса и сумки Фабрициуса при введении в рацион пробиотиков и биологически-активных продуктов пчеловодства//Сб.науч.трудов «Сохранение и улучшение генофонда по племенным и продуктивным качествам с/х животных».-С.-Петербург — Уфа: СП и БГАУ, 2001, с. 181—183.
4. Панин А.Н., Малик Н.И., Малик Е.В. Пробиотические препараты в вете-ринарии//Ветинформ, 1993, 2, с. 9—10.
5. Субботин В.В., Данилевская Н.В. Новые пробиотики//Животноводство, 1998, 4, с. 20.
6. Fuller R. Problotics: the scientific basis. London, Chapman S Hall, 1992.
7. Fuller R., Gibson G.P. Probiotics and preblotics: microflora management for improved gut healt. Clin Microb Inf, 1998, 4. 477—^80.
8. Glick B. The avian immune system. Avian Disease, 1979, 23, 2, 282—289.
9. Olah I., Glick B. Meckel's diverticulum. Extramedullary myelopoiesis in the yolk sac of hatcked chickens. Anat Rec, 1984, 208, 2, 240—253.
SUMMARY
A.G. Deblik, A.R. Malikova, D.A. Izbulatova, E.N. Sko-vorodin. Influence of probiotics on chickens organs morphology. The authors investigated an effect of probiotics on the morphological changes in chickens from 1 to 30th day of life. The results show the dependence of organs development from the type of probiotics.
