CC BY
31
5. Dobrotina M.A., Kopytova T.V. Endointok-sikatsiya organizma cheloveka: metodologicheskie i metodicheskie aspekty: Uchebnoe posobie. [Endoin-toxication of human organismus: methodological and methodical aspects]. Nizhniy Novgorod, 2004. 70 p.
6. Togaybaev A.A., Kurguzkin A.V., Rikun I.V. [e.a.] Sposob diagnostiki endogennoy intoksikatsii. [Method for diagnosing of endogenous intoxication]. Laboratornoe delo. 1988. no. 9. pp. 22-24.
7. Metodicheskie ukazaniya po diagnostike, terapii i profilaktike bolezney organov razmnozheniya u korov i telok. [Methodical recommendations on diagnosis, therapy and prophylaxis of diseases of reproductive organs in cows and heifers]. Moscow, 2000. 39 p.
8. Glants S. Mediko-biologicheskaya statistika. [Medicine-and-biological statistics]. Moscow: Praktika, 1999. 459 p.
9. Metody veterinarnoy klinicheskoy laborato-rnoy diagnostiki: Spravochnik. [Methods of veterinary clinical laboratory diagnostics: Handbook]. Otv. red. I.P. Kondrakhin. Moscow: «KolosS», 2004. 520 p.
10. Yatusevich D.S., Akulinich O.L. K voprosu etiologii akusherskoy patologii u korov v usloviyakh promyshlennykh kompleksov. [On etiology of obstetric pathology in cows in the conditions of the industrial production technology]. Uchenye zapiski UO VGAVM. 2014. Vol.50. Iss.1. P.1. pp. 166-171.
УДК [619:612.017]:[636.2.053:615]
Влияние пробиотика Пролам на показатели естественной резистентности и метаболический статус новорожденных телят
Кораблева Татьяна Рафаиловна, доктор вет. наук, профессор, зав. кафедрой, Сенчук Иван Викторович, кандидат вет. наук, доцент кафедры ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И.Вернадского», г. Симферополь, Россия
E-mail: tatyana.korablyeva2016@yandex.ru; E-mail: ivansenchuk_1981@mail.ru
В статье приведены результаты изучения влияния пробиотика Пролам на сохранность новорожденных телят, показатели неспецифической резистентности, параметры азотистого обмена и уровень активности трансаминаз. Установлено, что выпойка 20 мл препарата в течение 10 дней надежно профилактирует развитие тяжелой формы диарейного синдрома, обеспечивая 100-ную степень сохранности. Применение уменьшенной дозы пробиотика Пролам (по 5 мл в течение 10 дней) не обеспечивало должной степени профилактики и привело к вынужденному убою 20% телят подопытной группы. В группах контроля сохранность телят составила 60% По окончании опыта уровень содержания мочевины у телят, получавших по 20 мл пробиотика, имел достоверно более низкие значения относительно группы контроля (Р<0,05) - 4,82±0,202 и 5,40±0,159 ммоль/л соответственно. В группе телят, которым выпаивали меньший объем пробиотика, достоверные межгрупповые различия по данному показателю отсутствовали. У телят контрольных групп из-за развития интоксикации вследствие дисбак-териоза, показатели активности трансаминаз (АсАТ и АлАТ) имели достоверно более высокие значения, чем у животных подопытных групп. Наиболее отчетливо это установлено при использовании схемы выпойки с 20 мл препарата. Кроме того, данная схема применения Пролама проявила выраженное воздействие на показатели функциональной активности нейтрофилов. Так, показатель резерва нейтрофилов на десятые сутки эксперимента превышал аналогичный показатель группы контроля в 1,55 раза (Р<0,05), а фагоцитарное число - в 2,25 раза (Р<0,05). Следовательно, применение пробиотического препарата Пролам новорожденным телятам по 20 мл на протяжении 10 дней профилактирует развитие диарейного синдрома и повышает неспецифическую резистентность организма.
Ключевые слова: пробиотики, новорожденные телята, НСТ-тест, мочевина, АсАТ, АлАТ, сохранность диарейный синдром
Современные реалии геополитической обстановки выявили существенную зависимость Российской Федерации от многих статей ввозимых товаров, в том числе и продовольственных. В свете проводимой государственной политики импортозамещения особую актуальность приобрела необходимость повышения внутреннего производства критических позиций продуктов питания, среди которых особую роль играет коровье молоко и мясо говядины. Для обеспечения устойчивого роста поголовья и продуктивности крупного рогатого скота необходимо наличие здорового чистопородного молодняка. Однако именно данная возрастная группа
телят, особенно в период новорожденности, наиболее подвержена заболеванию диарей-ным синдромом. По статистическим данным, он регистрируется у 45% заболевших телят Прикаспийского региона, доходя до показателя 65-70% по усредненному уровню по Российской Федерации [1].
Данная патология протекает с явлениями выраженной дегидратации и интоксикации, появлением дисбактериоза, сопровождается нарушением работы всех органов и систем организма [2, 3]. В случае развития тяжелой (токсической) формы диспепсии телят среди заболевших животных отмечается высокий процент летального исхода [4].
Для профилактики развития диарейного синдрома все большее распространение приобретает использование пробиотиков, которые не только устраняют явления дисбактериоза, но и оказывают определенное стимулирующее воздействие на состояние иммунной системы. Так, использование бактосубтила привело к повышению фагоцитарной активности ней-трофилов на 19,4% и существенно уменьшило сроки лечения [5]. Сходный эффект установлен при использовании пробиотиков ветспо-рин и олин [6, 7].
Цель исследования - изучение возможности применения пробиотика Пролам для новорожденных телят с целью профилактики диарейного синдрома и коррекции факторов неспецифической резистентности организма.
Материал и методы. Научно-исследовательскую работу выполняли в течение апреля-мая 2015 г. в лаборатории ветеринарной микроэкологии инфекционных и инвазионных болезней факультета ветеринарной медицины Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего образования «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского» Академии биоресурсов и природопользования и на базе Учебного научно-технологического животноводческого центра.
Объектом исследования являлись новорожденные телята суточного возраста. Из них были сформированы по две опытные и соответствующие им контрольные группы, в каждую из которых входило по 5 голов.
Животные первой опытной группы получали по 5 мл пробиотического препарата Пролам раз в сутки с 20-30 мл теплой кипяченой воды после выпойки молозива на протяжении 10 дней. Телятам второй опытной группы Пролам задавали по вышеописанной схеме, однако суточная доза препарата при этом составляла 20 мл. Животные контрольных групп пробиотического препарата не получали.
Режим кормления и содержания во всех группах был идентичным.
Отбор образцов крови для биохимических исследований производили на 1-, 5- и 10- сутки, для иммунологических - в начале и конце эксперимента. В качестве антикоагулянта использовали гепарин. В сыворотке крови определяли концентрацию общего белка -биуретовым методом, уровень мочевины -уреазным методом, активность аспартатами-нотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотранс-феразы (АлАТ) - по Райтману-Френкелю.
Биохимические исследования проводили с помощью фотометра КФК-3 «ЗОМЗ», прошедшем метрологическую поверку, с использованием наборов реагентов производства ООО «Витал Девелопмент Корпорейшн», Санкт-Петербург.
Для определения функциональной активности нейтрофилов определяли фагоцитарное число (ФЧ) в ходе постановки фагоцитарной реакции и показатель резерва (ПР) при постановке реакции восстановления нитроси-него тетразолия (НСТ-тест) с использованием в качестве тест-системы лабораторного штамма Staphylococcus aureus P-209 [8]. Оценку показателя резерва (ПР) микробицидной активности нейтрофилов крови животных проводили по отношению процента формазанпо-зитивных нейтрофилов в стимулированном НСТ-тесте (НСТ с.) к проценту формазанпози-тивных нейтрофилов в нестимулированном НСТ-тесте (НСТ н.).
Статистическая обработка цифровых данных включала определение средней арифметической (M) и ошибки средней арифметической (m). Для оценки существенности различий между двумя средними величинами использовали t-критерий по Стьюденту. Различия считались статистически достоверными при Р<0,05; Р<0,01; Р<0,001.
Пробиотический препарат Пролам разработан и производится ООО «Биотехагро» (г. Краснодар РФ). Он содержит 5 штаммов микроорганизмов: Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus (ВКПМ В-5788), Lactobacillus asidophilus 43c (ВКПМ В-3235), молочнокислые стрептококки Lactococcuss lactis subsp.lactis 574 (ВКПМ В-3145) Lactococcuss lactis subsp.lactis 1704-5 (ВКПМ В-3139), а также бифидобактерии Bifidobacterium animalis 83 (ВКПМ АС-1248).
Результаты и их обсуждение. В начале эксперимента телята всех групп характеризовались как клинически здоровые: они активно реагировали на внешние раздражители, активно поедали молозиво, фекалии имели кашицеобразную консистенцию, частота сердечных сокращений, дыхательных движений и температура находились в пределах нормы. На протяжении опыта у телят отмечали клинические признаки развития тяжелой формы диарейного синдрома, повлекшего за собой вынужденный убой одного животного подопытной группы (получавшей по 5 мл препарата) и двух телят из соответствующей ей группы контроля. В подопытной группе телят, которым выпаивали по
20 мл препарата «Пролам», случаев развития тяжелой формы заболевания не отмечали, в то время как в контрольной группе было зарегистрировано два случая вынужденного убоя.
*Р<0,05 относительно контроля
Из данных таблицы 1 следует, что в начале опыта все изучаемые показатели находились в пределах физиологической нормы. На протяжении опыта установлена тенденция к повышению концентрации мочевины и общего белка у телят обеих групп. В то же время у животных контрольной группы в течение эксперимента наблюдали увеличение активности трансаминаз, что может быть следствием развития клинически регистрируемой диареи и интоксикации из-за развития дисбактериоза в кишечнике. Активность АсАТ в конце опыта в подопытной группе имела достоверно более низкое значение по сравнению с группой контроля (Р<0,05).
Из приведенных в таблице 2 данных видно, что на протяжении опыта у телят контрольной группы происходило нарастание концентрации мочевины в сыворотке крови, что является прямым следствием выраженного обезвоживания и нарушения выделительной функции почек. Данный показатель у телят, получавших Пролам в дозе 20 мл, имел достоверно более низкое значение (Р<0,05). Также отмечали нарастание активности АлАТ и АсАТ у животных обеих групп. Но у подопытных телят интоксикация организма вследствие дисбиотических процессов была менее выражена: это доказывается меньшим значением активности АлАТ по окончании опыта и достоверно более низкой активностью АсАТ в середине и конце эксперимента отно-
Сохранность телят при выпойке 5 мл пробиотика составила 80%, в то время как увеличенная доза препарата позволила достичь 100-ной сохранности. В обеих контрольных группах этот показатель составил 60%.
АсАТ, ммолъ/(ч*л)
1,06±0,04 1,09±0,03
1,19±0,12 1,15±0,07
1,09±0,03* 1,26±0,05
сительно группы контроля (Р<0,05). Незначительную гиперпротеинемию у телят контрольной группы мы связываем с дегидратацион-ными явлениями.
Из таблицы 3 следует, что после применения пробиотического препарата во второй подопытной группе отмечена выраженная тенденция к снижению относительного количества нейтрофилов крови, проявляющих оксидазную активность (НСТ н). В то же время установлено увеличение показателя НСТ н. у телят контрольной группы с одновременным значительным повышением суммы нейтрофи-лов, что свидетельствует по нашему мнению о выраженном воспалительном процессе. По окончании опыта ФЧ у телят обеих подопытных групп было достоверно выше (Р<0,05), чем в группе контроля. ПР у телят второй подопытной группы имела достоверно более высокое значение, чем в контрольной. НСТ н. отображает метаболический потенциал покоящихся нейтрофилов крови, НСТ с. - потенциал при стимуляции (аналог антигенного раздражения в организме). Соотношение НСТ с./НСТ н. указывает на резервный потенциал нейтрофилов крови и фактически характеризует их переваривающую способность. Соответственно снижение величины ПР расценивается как снижение метаболического резерва ней-трофилов крови, недостаточности их переваривающей функции.
Таблица 1
Параметры азотистого обмена и активности ферментов у телят при использовании препарата Пролам в дозе 5 мл (М±т)
Группа животных
Мочевина, ммолъ/л
Общий белок, г/л
АлАТ, ммолъ/(ч*л)
В начале эксперимента
Опытная
4,77±0,01
54,64±0,84
0,80±0,04
Контрольная
4,73±0,08
54,92±0,79
0,73±0,04
Через 5 суток
Опытная
5,03±0,31
57,02±2,43
0,87±0,08
Контрольная
5,00±0,07
56,23±1,58
0,87±0,07
Через 10 суток
Опытная
4,86±0,22
56,27±0,70
0,94±0,04
Контрольная
4,92±0,18
57,87±1,07
1,00±0,05
Таблица 2
Параметры азотистого обмена и активности ферментов у телят при использовании препарата Пролам в дозе 20 мл (М±т)
Группа животных Мочевина, Общий белок, АлАТ, АсАТ,
ммоль/л г/л ммоль/(ч*л) ммоль/(ч*л)
В начале эксперимента
Опытная 4,70±0,098 56,43±1,451 0,70±0,027 1,01±0,039
Контрольная 4,69±0,088 54,16±1,105 0,76±0,029 1,02±0,016
Через 5 суток
Опытная 4,82±0,142 56,42±0,646 0,84±0,046 0,97±0,037*
Контрольная 5,37±0,384 56,25±1,267 0,97±0,065 1,12±0,050
Через 10 суток
Опытная 4,82±0,202* 56,06±0,926 0,86±0,067 0,99±0,045*
Контрольная 5,40±0,159 57,60±1,722 0,98±0,100 1,12±0,033
*Р<0,05 относительно контроля
Таблица 3
Показатели функциональной активности нейтрофилов крови телят (М±т)
Группы животных ФЧ Сумма нейтрофилов, % НСТ н., % НСТ с., % ПР
В начале эксперимента
1 опытная группа (Пролам - 5 мл) 1,89±0,13 29,9±6,74 11,5±2,80 24,7±3,21 2,2±0,71
2 опытная группа (Пролам - 20 мл) 1,92±0,10 39,0±1,14 14,1±3,25 26,7±4,20 1,9±0,41
Контроль 1,99±0,200 31,2±4,12 13,6±3,92 29,4±2,06 2,2±0,33
Через 10 суток
1 опытная группа 2,01±0,10* 29,5±1,28 13,3±1,87 26,6±2,41 2,0±0,32
2 опытная группа 2,43±0,10* 24,4±5,09 9,8±1,52 27,0±4,11 2,8±0,23*
Контроль 1,08±0,12 50,50±10,16 22,8±1,74 41,9±5,81 1,8±0,32
*Р<0,05 относительно контроля
На основании проведенных исследований можно сделать заключение, что применение пробиотика Пролам телятам в дозе 20 мл в сутки оказало выраженный профилактический и иммуностимулирующий эффект, что позволяет рекомендовать данную схему применения препарата в производственных условиях. Выявленное воздействие мы объясняем наличием конкурентного взаимодействия между поступающей нормальной микрофлорой пробиоти-ческого препарата с условно патогенными микроорганизмами.
Выводы
1. Применение пробиотика Пролам в дозе 20 мл в сутки позволило обеспечить достаточный профилактический эффект при диа-рейном синдроме и достичь 100-ной сохранности телят.
2. Под воздействием препарата Пролам в дозе 20 мл параметры функциональной активности нейтрофилов у телят подопытной группы (ФЧ, ПР) имели достоверно более вы-
сокие показатели, чем в группе контроля - на 55,5 и 35,7 % соответственно, что свидетельствует о формировании более напряженного иммунитета.
Список литературы
1. Ананьев М.С., Оздемиров А.А., Рамазано-ва Д.М., Айгубова С.А. и др. Этиология заболеваний телят, сопровождающихся диареей в Прикаспийском регионе России //Ветеринария. 2015. №11. С. 49-52.
2. Олейник А. Неонатальная диарея телят // Молочное и мясное скотоводство. 2009. № 2. С. 26-28.
3. Микитюк Л.В. Шлунково-кишковi хворо-би новонароджених телят // Ветеринарна медицина Украни. 2009. № 12. С. 18-19.
4. Кондрахин И.П. Диспепсия новорожденных телят - успехи, проблемы // Ветеринария. 2003. № 1. С. 39-43.
5. Леонтьева И. Опыт применения бактосуб-тила при лечении диарейных болезней новорожденных телят // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2015. № 10. С. 32-39.
6. Гриманов В.В., Фисенко Н.В., Вахитов Р.Р. Влияние пробиотика «Ветспорин» на иммунобиологические показатели у бычков: Материалы Междун. научно-практ. конф. Уфа: Башкирский ГАУ, 2013. Ч. 1. С. 164-166.
7. Топурия Л.Ю., Порваткин И.В. Состояние факторов естественной резистентности телят при
использовании пробиотика олина // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2012. № 37-1. Т. 5. С. 88-91.
8. Park B.H., Fikrig S.M., Smithwich E.M. Infection and nitrobluetetrazolium reduction by neutrophils a diagnostic aid // Lancet. 1968. V.11. no. 2. pp. 532-534.
Научно-исследовательская работа финансировалась за счет средств государственного заказа Министерства образования и науки Российской Федерации.
Influence of Prolam probiotic on parameters of natural resistance and metabolic status of newborn calves
Korableva T.P., DSc in veterinary, professor, head of cathedra, Senchuk I.V., PhD in veterinary, associated professor
Crimean Federal University named after V.I. Vernadsky, Simferopol', Russia
Results of test of probiotic preparation Prolam's influence on safety of newborn calves, parameters of non-specifity resistance, and parameters of nitrogen metabolism and activity of transaminases are presented in the article. It is established that input of 20 ml of preparation during 10 days strongly prevented development of hard form of diarrhea syndrome obtaining 100% safety. Using of low doses of preparation (5 ml during 10 days) doae not supply sufficient degree of profilaxy and leads to forced slaughter of 20% of calves in experimental group. In control group safety of calves was 60%. At the end of experiment level of urea content in calves supplying with 20 ml of probiotic had significantly lower values in compare with control group (P < 0.05) - 4.82±0.20 and 5.40±0.16 mmol/l accordingly. In group supplying with 5 ml of probiotic there were not significant intergroup differences on this parameter. Control calves had significantly higher values of transaminases (AsAT and AlAT) activity than in experimental groups because of intoxication with disbacteriosis. It is expecially manifested at use of 20 ml of preparation. Beside that the given scheme of Prolame using had pronounced influence on parameters of functional activity of neutrofiles. Thus reservoirces of neutrofiles at 10 day of experiment exceed the control parameter by 1.55 times (P < 0.05) and phagocytic number - by 2.25 times (P < 0.05). So, using of prebiotic preparation Prolam for newborn calves at 20 ml during 10 days prevents development of diarrhea syndrome and increases non-specific resistance of organism.
Key words: probiotic, newborn calves, NST-test, urea, AsAT, AlAT, safety diarrhea syndrome
References
1. Anan'ev M.S., Ozdemirov A.A., Ramaza-nova D.M., Aygubova S.A. e. a. Etiologiya zabole-vaniy telyat, soprovozhdayushchikhsya diareey v Prikaspiyskom regione Rossii. [Ethiology of calves' diseases following with diarrhea in Pricaspian region of Russia]. Veterinariya. 2015. no.11. pp. 49-52.
2. Oleynik A. Neonatal'naya diareya telyat. [Neonatal diarrhea in calves]. Molochnoe i myasnoe skotovodstvo. 2009. no. 2. pp. 26-28.
3. Mikityuk L.V. Shlunkovo-kishkovi khvorobi novonarodzhenikh telyat. [Gastrointestinal diseases in newborn calves]. Veterinarna meditsina Ukraini. 2009. no. 12. pp. 18-19.
4. Kondrakhin I.P. Dispepsiya novorozhdennykh telyat - uspekhi, problemy. [Dispepsia of newborn calves - successes and problems]. Veterinariya. 2003. no. 1. pp. 39-43.
5. Leont'eva I. Opyt primeneniya baktosubtila pri lechenii diareynykh bolezney novorozhdennykh telyat. [Experience of bactosubtile use at cure of diarrhea diseases in newborn calves]. Veterinariya sel'sko-khozyaystvennykh zhivotnykh. 2015. no. 10. pp. 32-39.
6. Grimanov V.V., Fisenko N.V., Vakhitov R.R. Vliyanie probiotika «Vetsporin» na immuno-biologicheskie pokazateli u bychkov. [Influence of Vetsporine probiotic on immune-biological parameters in calves]. Materialy Mezhdun. nauchno-prakt. konf Ufa: Bashkirskiy GAU, 2013. Part. 1. pp. 164-166.
7. Topuriya L.Yu., Porvatkin I.V. Sostoyanie faktorov estestvennoy rezistentnosti telyat pri ispol'zovanii probiotika olina. [State of natural resistance factors in calves at use of Oline probiotic]. Izvestiya Orenburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta. 2012. no. 37-1. V. 5. pp. 88-91.
8. Park B.H., Fikrig S.M., Smithwich E.M. Infection and nitrobluetetrazolium reduction by neutrophils a diagnostic aid. Lancet. 1968. Vol.11. no. 2. pp. 532-534.
