CC BY
99
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА
УДК 616.12-008.64-07:577.212.3
ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ ИНТЕРЛЕЙКИНА -1р И РЕЦЕПТОРНОГО АНТАГОНИСТА ИНТЕРЛЕЙКИНА -1 НА РАЗВИТИЕ И ПРОГРЕССИРОВАНИЕ ХРОНИЧЕСКОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ
Наиля Назибовна Маянская1, Светлана Дмитриевна Маянская1, Наталия Фаритовна
Яковлева', Алексей Владимирович Яковлев2, Максим Леонидович Филипенко3, Елена Николаевна Воронина3, Екатерина Николаевна Березикова1, Сергей Николаевич Шилов1, Татьяна Ивановна Захарова1, Светлана Владимировна Майер1
'Новосибирский государственный медицинский университет, 2НУЗ Дорожная клиническая больница, 3Новосибирский институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск,
e-mail: nmayansk@54.ru, yakovleva_nf9@mail.ru
Реферат
Выявлены корреляции между полиморфизмом гена ИЛ-1Р и риском развития, тяжестью и характером течения ХСН, а также с вазомоторной дисфункцией эндотелия и систолической дисфункцией левого желудочка.
Ключевые слова: левый желудочек, дисфункция, эндотелий сосудов, полиморфизм гена ИЛ-[р, риск развития ХСН.
Несмотря на значительные достижения в лечении пациентов с сердечнососудистыми заболеваниями, распространенность хронической сердечной недостаточности (ХСН) не только не снижается, но, наоборот, возрастает. Наиболее частыми причинами возникновения ХСН в развитых странах мира являются ишемическая болезнь сердца (ИБС) и артериальная гипертензия (АГ). По данным эпидемиологических исследований, проведенных в России, оказалось, что у 4/5 всех больных ХСН последняя ассоциируется с АГ и у 2/3 больных — с ИБС [1]. Прогноз при ХСН остается крайне серьезным, поэтому своевременная профилактика и ранняя диагностика данных патологий являются наиболее актуальными проблемами современной кардиологии.
Исследования генома человека сделали реальной раннюю, досимптоматичес-кую диагностику не только генных, но и многих мультифакториальных заболеваний [2]. На практике такая цель может быть достигнута путем молекулярного тестирования генов, получивших название генов предрасположенности или генов-кандидатов [3, 11].
Уже давно доказано, что в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний вообще и ХСН в частности особое место занимает эндотелиальная дисфункция. Также известно, что активация системы провос-палительных цитокинов играет существенную роль в развитии и прогрессиро-вании дисфункции эндотелия и ХСН. Достаточно изученными цитокинами, вовлеченными в патогенез ХСН, считаются фактор некроза опухоли, интерлейки-ны (ИЛ) ИЛ-1 и ИЛ-6. Хотя причинная связь их влияния детально не установлена, доказано, что состояние хронического воспаления имеет прогностическое значение для судьбы больных с ХСН [12].
Существует семейство цитокинов ИЛ-1, включающее три цитокина с высокой степенью гомологии: ИЛ-1а, ИЛ-ф и рецепторный антагонист ИЛ-1 (ИЛ-1Ра). ИЛ-1а и ИЛ-ф обладают практически идентичной активностью. Если ИЛ-1а является в основном медиатором местных защитных реакций, то ИЛ-ф представляет собой секреторный цитокин, реализующий свое действие как местно, так и на системном уровне. ИЛ-1Ра характеризуется тем, что он блокирует биологическую активность ИЛ-1 [7].
Таким образом, исходя из современных достижений в изучении патогенеза ХСН можно предположить влияние полиморфизмов генов, кодирующих провос-палительные цитокины, в частности семейство цитокинов ИЛ-1 (ИЛ-ф, ИЛ-1Ра), на развитие и прогрессирование ХСН.
Полиморфизм в гене ИЛ-1Ра представлен в интроне 2 из-за присутствия различного количества тандемных повторов с длиной 86 п.н. В настоящий момент описано 5 аллелей ИЛ-1Ра - 2R, 3R, 4R, 5R и 6R, соответствующих числу тандемных повторов. Наиболее часто в популяции встречаются аллели с 2R и 4R, тогда как остальные аллели — достаточно редкие. Аллель 2R предрасполагает к появлению и усилению тяжести различных заболеваний человека, связанных в основном с эпителиальными клетками в органах. С этим аллелем связаны снижение продукции ИЛ-1Ра и чрезмерная продукция ИЛ-1Р [13]. Однако в другой работе аллель 2R (в гомозиготном состоянии) гена ИЛ-1Ра (VNTR intron 2) был ассоциирован с повышенной продукцией ИЛ-1Ра in vitro [16].
Известно два полиморфизма гена ИЛ-ф: в позиции +3953 в 5 экзоне гена и в позиции -511 полиморфизм по точечной нуклеотидной замене С->Т. Аллель С (+3953) — более распространенный вариант в большинстве популяций. Функциональный эффект полиморфизма С+3953Т гена ИЛ-ip до конца ещё не изучен.
Для понимания механизмов развития и прогрессирования ХСН научные исследования в последние годы направлены на оценку генетических факторов развития этого синдрома, что является перспективным подходом, поскольку он позволяет установить генетический риск и прогнозировать осложнения заболевания до появления клинических признаков. Поэтому целью нашей работы было изучение влияния полиморфных вариантов гена ИЛ-ф и гена ИЛ-1Ра на состояние функции эндотелия, а также на развитие и характер течения ХСН у больных с ИБС и АГ.
На стационарном лечении в отделениях неотложной кардиологии и неотложной терапии по поводу декомпенсации ХСН различной этиологии находились 165 пациентов (121 мужчина и 44 женщины) в возрасте от 45 до 65 лет (средний возраст — 56,7±5,3 года). У 24 из них была ИБС, у 12 — АГ, у 129 — сочетание ИБС и АГ. По классификации NYHA: ХСН ФК I 396
в 37 (22,4%) случаях, ФК II в 69 (41,8%), ФК III в 54 (33°%), ФК IV в 5 (3%). Кроме того, у 92 (56%) пациентов был выявлен постинфарктный кардиосклероз. Для удобства анализа больных с ХСН ФК Ш и ФК IV объединили в одну группу. Клиническое обследование больных ХСН, толерантность к физической нагрузке (тест с 6-минутной ходьбой) и эхокардиографическое исследование (ЭхоКГ) проводили при поступлении в стационар и через 12 месяцев.
Функция эндотелия оценивалась по методике Се1егшаЗег (1992) на ультразвуковом аппарате линейным датчиком 7 Мг [6]. Плечевую артерию визуализировали в продольном сечении на 2-3 см дис-тальнее локтевого сгиба, диаметр артерии измеряли в диастоле после 10-15 минут отдыха. Стимулом, вызывающим зависимую от эндотелия дилатацию периферических артерий, была реактивная гиперемия, создаваемая манжетой, наложенной прокси-мальнее места измерения. На 3 минуты создавалось давление, которое на 40-50 мм Щ было выше систолического АД. Сразу после выпуска воздуха из манжеты в течение 15 секунд (фаза реактивной гиперемии) измеряли диаметр и скорость кровотока в артерии. Через 15 минут отдыха после восстановления исходного диаметра артерии проводили пробу с экзогенным донатором азота — сублингвальным нитроглицерином в дозе 0,5 мг. Измерение повторяли через одну минуту. Реакцию на усиление кровотока рассчитывали как разницу диаметров на фоне реактивной гиперемии и исходного, реакцию на нитроглицерин — как разницу диаметра на 1-й минуте после приема нитроглицерина и исходного.
У всех пациентов брали генетический материал (буккальный эпителий) с последующим типированием аллелей гена ИЛ-1Р (С+3953Т) и гена ИЛ-1Ра Шгоп 2). Для выделения ДНК использовали метод фенол-хлороформной экстракции [4].
Для проведения ПЦР использовали праймеры, синтезированные в Институте химической биологии и фундаменталь-
ной медицины (ИХБФМ СО РАН). Структуры праймеров гена ИЛ-ф (С+3953Т):
прямой-тссстлстсотаттатслтсла; обратный- сттовотоолслтоотссгс.
ПЦР проводили в конечном объеме 12 мкл, содержащем 650 мМ трис-Нс1 (рН 8,9), 160 мМ сульфат аммония, 20 мМ Мя02, 0,05% т%ееп 20, 2 тМ d№T, 0,5 мкМ растворы олигонуклеотидных праймеров, 20-100 нг ДНК и 1 ед. Taq-полимеразы. Для этого использовали амплификатор «ЕрреМогГГ» с начальной денатурацией при 95°С в течение 3 минут, далее на протяжении 35 циклов с денатурацией 10 с при 95°С, отжигом 10 с при 62°С и синтезом 15 с при 72°С. Финальную элонгацию осуществляли при 72° С 5 минут.
Для выполнения ПДРФ-анализа полученных фрагментов ДНК рестрикцию осуществляли следующим образом. К ам-плификационной смеси добавляли 1/10 V 10х буфера для рестрикции и эндонукле-азу рестрикции (1-3 ед. акт. фермента) и инкубировали 2 часа при 65о С. Буфер для рестрикции использовали с учетом рекомендаций производителя эндонуклеазы рестрикции. Фермент инактивировали путем добавления 1 мкл 0,5 М ЭДТА.
При гидролизе амплификационного фрагмента гена ИЛ-ф эндонуклеазой рестрикции TaqI выявлялись три фрагмента размером 550 п.н., 440 п.н. и 110 п.н. Фрагмент 550 п.н. соответствовал амп-лификационному фрагменту, не подвергнувшемуся гидролизу, что указывало на присутствие аллеля Т (+3953Т) гена ИЛ-ф. При наличии аллеля с (с+3953) происходит разрезание амплификационного фрагмента ДНК на две части размером 440 п.н и 110 п.н.
Полиморфизм ИЛ-1Ра исследовали с помощью ПЦР с праймерами, фланкирующими полиморфный регион в пределах второго интрона, в котором находится вариабельное количество тандемных повторов — 86 п.н. (VNГR). В результате амплификации детектировали фрагменты ДНК размером 438, 610 и 696 п.н. с 2, 4 или 5 тандемными повторами соответственно. Эти аллели были обозначены как
2R, 4R и 5R в данном исследовании и соответствовали аллелям ИЛ-1Ра 2, 1, 4 [15] и IL1RN* 2, 1, 3 [5].
Структуры праймеров, синтезированных в ИХБФМ СО РАН: ИЛ-1Ра-Ц-CCCACTCATGGCCTTGTTC; ИЛ-Ша-R -GGCTCAATGGTACCACATC.
Амплификацию осуществляли в буфере, содержащем 10 мМ Трис-НС1 (рН 8,9), 50 мМ KCl, 1,7 мМ MgCl, 0,05% Tween 20, с добавлением 0,2 мМ-ого раствора dNTP; 0,5 мкМ-ого раствора праймеров, 20 нг ДНК и 1,0 ед. акт. Taq-полимеразы. Реакционную смесь в объеме 20 мкл покрывали 40 мкл минерального масла. ПЦР проводили на амплификаторе "Терцик" («ДНК-Технология», Москва) с начальной денатурацией при 95оС 2 минуты, далее в течение 35 циклов при следующих режимах: денатурация - 7 с при 95оС, отжиг праймеров — 10 с при 64оС, элонгация - 20 с при 72оС.
Группу контроля составляли 114 человек (мужчин — 54, женщин — 60) в возрасте от 45 до 65 лет (средний возраст — 53,2±4,9 года), не имевших по данным клинического обследования и электрокардиографии признаков сердечно-сосудистых нарушений.
Статистическую обработку результатов производили с помощью стандартного статистического пакета программ SPSS 13,0. Частоту встречаемости генотипов полиморфных локусов в различных популяциях сравнивали методом %2. Тесты на соблюдение равновесия Харди—Вейнберга и выявление ассоциаций методом %2 проводили с помощью программы DeFinetti на сайте Института генетики человека (Мюнхен, Германия; http://ihg.gsf.de/ihg/ index_eng1.html) [14, 18]. Средние значения анализируемых показателей оценивали с помощью t-критерия Стьюдента или U-критерия Манна-Уитни.
Распределение частот встречаемости генотипов гена ИЛ-lß в группе больных соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вейнберга, а в контрольной группе в целом и у мужчин в том числе наблюдалось значимое отклонение от
397
*Достоверность различий по сравнению с группой контроля (р<0,05).
Таблищ 1
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-1Р у больных ХСН
и в группе контроля
Выборка Аллели, п/% Генотипы, п/%
С Т С/С С/Т Т/Т
Группа контроля (п=114) 154/67,5 74/32,5 47/41,2 60/52,6 7/6,2
Группа больных (п=165) 263/79,7* 67/20,3* 102/61,8* 59/35,8* 4/2,4*
Мужчины (группа контроля), п=54 76/70,4 32/29,6 23/42,6 30/55,6 1/1,8
Мужчины (группа больных), п=121 198/81,8* 44/18,2* 78/64,5* 42/34,7* 1/0,8
Женщины (группа контроля), п=60 78/65 42/35 24/40 30/50 6/10
Женщины (группа больных), п=44 65/73,9 23/26,1 24/54,5 17/38,6 3/6,9
ожидаемого распределения генотипов (р=0,032 и р=0,015 соответственно), что, вероятнее всего, может быть обусловлено тем, что группа контроля не являлась случайной выборкой. Результаты исследования полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-ф в целом в группе контроля и в группе больных, а также в зависимости от пола представлены в табл. 1.
Оказалось, что в целом в группе больных частота аллеля С и генотипа С/С была достоверно выше, а частота аллеля Т и генотипов С/Т и Т/Т достоверно ниже, чем в группе контроля. Таким образом,
аллель С [0К=1,886, С.1.=(1,283-2,774); х2 =10,55; р=0,00116] и генотип С/С [0К=3,798, С.1.=(1,060-13,607); х2 =4,72; р=0,02984] являются факторами риска развития ХСН, а аллель Т [0К=0,530, С.1.=(0,360-0,780); х2 =10,55; р=0,00116], генотипы С/Т [0К=0,453, С.1.=(0,275-0,746); х2 =9,83, р=0,00172] и Т/Т [0К=0,263, С.1.=(0,073-0,943); х2 =4,72; р=0,02984] проявили себя как протектив-ный фактор. Однако при исследовании полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-ф в зависимости от пола оказалось, что аллель С был ассоциирован с риском развития ХСН (0К=1,895, С.1. =(1,119-3,208);
Таблищ 2
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса УШК ш1гои 2 гена ИЛ-1Ра в группе больных ХСН и в группе контроля
Выборка Аллели, п/% Генотипы, п/%
2К 4К 2К/2К 2К/4К 4К/4К 2К/5К+ 4К/5К
Группа контроля (п=114) 67/29,4 160/70,2 14/12,3 39/34,2 60/52,6 1/0,9
Группа больных (п=165) 108/32,7 208/63 25/15,2 55/33,3 71/43 14/8,5
Мужчины (группа контроля), п=54 29/26,9 79/73,1 5/9,2 19/35,2 30/55,6 0
Мужчины (группа больных), п=121 81/33,5 151/62,4 19/15,7 40/33,1 53/43,8 8/6,6
Женщины (группа контроля), п=60 38/31,7 81/67,5 9/ 15 20/33,3 30/50 1/1,7
Женщины (группа больных), п=44 27/30,7 57/64,8 6/13,7 15/34,1 18/40,9 6/13,6
Таблищ 3
Распределение частот встречаемости генотипов и аллелей гена ИЛ-1Р (С+3953Т) и гена ИЛ-1Ра (УОТВ Ыгои 2) в зависимости от ФК ХСН (КША)
Генетические маркеры Группа 1, абс./% (ФК I), п=37 Группа 2, абс./% (ФК II), п=69 Группа 3, абс./% (ФК Ш + ФК 4), п=59
Генотип С/С 12/32,4 41/59,4*# 49/83,1**
Генотип С/Т 23/62,2 27/39,1*# 9/15,2**
Генотип Т/Т 2/5,4 1/1,5 1/1,7
Аллель С 47/63,5 109/79* 107/90,7*
Аллель Т 27/36,5 29/21*# 11/9,3**
Генотип 2К/2К 7/18,9 10/14,5 8/13,6
Генотип 2К/4К 11/29,7 26/37,7 18/30,5
Генотип 4К/4К 18/48,6 23/33,3 30/50,8
Генотип 2К/5К+4К/5К 1/2,7 10/14,5 3/5,1
Аллель 2К 25/33,8 48/39,3 35/29,7
Аллель 4К 48/64,7 80/58 80/67,8
*Достоверность различий по сравнению с ФК I (р<0,05), ** по сравнению с ФК II (р<0,001), # по сравнению с ФК Ш (р<0,05).
Х2=5,76; р=0,01642], а аллель Т проявил себя как протективный фактор [0К=0,528, С.1.=(0,312-0,894); X2 - 5,76; р=0,01642] только у лиц мужского пола, тогда как среди женщин статистически значимых различий между группами контроля и больных мы не обнаружили.
Результаты исследования полиморфного локуса УЫТК (ш1гоп 2) гена ИЛ-1Ра в целом в группе контроля и в группе больных, а также в зависимости от пола представлены в табл. 2.
Распределение частот встречаемости генотипов гена ИЛ-1Ра во всех группах соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вейнберга, кроме группы больных в целом (р=0,015). Для удобства анализа в одну группу были объединены генотипы 2К/Ж и 4К/5К полиморфного локуса УШК (Ыгоп 2) ген ИЛ-1Ра.
Достоверно значимых различий в распределении частот встречаемости генотипов и аллелей гена ИЛ-1Ра (полиморфизм УЫТК ш^гоп 2) в целом у больных с ХСН и в группе контроля, а также в зависимости от пола получено не было.
Результаты исследования влияния генетических маркеров гена ИЛ-ф и гена ИЛ-1Ра на тяжесть функционального класса (ФК) ХСН (по ОТНА) представлены в табл. 3.
Получены достоверные различия в частоте встречаемости генетических маркеров гена ИЛ-ф в зависимости от тяжести ФК ХСН. Частота генотипа С/С в 3-й группе была выше, чем во 2 и в 1-й группах (83,1%, 59,4% и 32,4%; р< 0,05 и р<0,001 соответственно), а во 2-й группе выше, чем в 1-й (р<0,05), тогда как генотипы, содержащие аллель Т, во 2-й группе встречались чаще, чем в 3-й (40,6% и 16,9%; р<0,001), но реже, чем в 1-й группе (40,6% против 67,6%; р<0,05). Различия в частоте аллеля С (ФК1— 63,5%, ФК2—79% и ФК3+ФК4—90,7%) и аллеля Т (ФК 1—36,5%, ФК2—21% и ФК3+ФК4—9,3%) также оказались достоверными.
По данным распределения частот встречаемости генотипов и аллелей гена ИЛ-1Ра (УЫТК ш^оп 2) в зависимости от ФК ХСН (ОТНА) достоверных различий получено не было.
С целью выявления возможности ассоциации полиморфизмов гена ИЛ-ф и гена ИЛ-1Ра с характером течения ХСН больные были подразделены по итогам годичного наблюдения на две группы: А — пациенты с благоприятным течением заболевания и Б — с неблагоприятным. В ходе наблюдения оценивались состояние гемодинамических показателей, частота нарастания симптомов и признаков ХСН, частота госпитализаций по поводу
399
Таблица 4
Распределение частот встречаемости генотипов и аллелей гена ИЛ-1Р и гена ИЛ-1Ра в зависимости от характера течения ХСН
Генетические маркеры Группа А (п=95), абс./% Группа Б (п=70) , абс./%
Генотип С/С 44/46,3 58/82,9*
Генотип С/Т 47/49,5 12/17,1**
Генотип Т/Т 4/4,2 0/0%
Аллель С 135/71,1 128/91,4*
Аллель Т 55/28,9 12/8,6**
Генотип 2К/2К 15/15,8 10/14,3
Генотип 2К/4К 39/41,1 32/45,7
Генотип 4К/4К 33/34,7 22/31,4
Генотип 2К/5К+4К/5К 8/8,4 6/8,6
Аллель 2К 71/37,4 53/37,9
Аллель 4К 111/58,4 12/57,9
*р<0,05. ** р<0,01.
СН, состояние ФВ левого желудочка. В результате в группу А вошли 95 человек, в группу Б — 70 (табл. 4).
Оказалось, что среди пациентов с неблагоприятным характером течения ХСН (группа Б) достоверно чаще встречались аллель С и носители генотипа С/С и достоверно реже — аллель Т и носители генотипов, содержащих аллель Т в гомо- и гетерозиготном состоянии.
Т/Т [0К=0,085, С.1.=(0,004-1,611); х2 =5,02; р=0,025] проявили себя как протектив-ный фактор.
По данным распределения частот встречаемости генетических маркеров гена ИЛ-1Ра (УЫТК ш^оп 2) в зависимости от характера течения ХСН достоверных различий получено не было.
У больных ХСН изучали состояние сосудодвигательной функции эндотелия по описанной выше методике. В связи с небольшим числом пациентов с генотипами С/Т и Т/Т полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-ф эти больные были объединены в одну группу, а больные с генотипами 2К/5К и 4К/5К полиморфного локуса УОТК ш^оп 2 гена ИЛ-1Ра не учитывались при данном анализе. Показатели, характеризующие состояние сосудодвигательной функции эндотелия, приведены в табл. 5.
Оказалось, что среди пациентов с генотипом С/С полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-ф реакция на гиперемию (ЭЗД) и на нитроглицерин (ЭНЗД) была существенно ниже, чем у пациентов с аллелем Т, — 4,7±1,2 против 8,9±1,6 (р<0,05) и 11,7+0,31 против 16,3+0,27 (р<0,05) соответственно. При этом исходный диаметр артерии
Таблица 5
Показатели сосудодвигательной функции эндотелия у больных ХСН в зависимости от генотипов гена ИЛ-1Р и ИЛ-1Ра
Показатели Генотипы гена ИЛ-ф Генотипы гена ИЛ-1Ра
С/С (п=102) С/Т + Т/Т (п=63) 2К/2К (п=25) 2К/4К (п=55) 4К/4К (п=71)
Исходный диаметр артерии, мм 3,58+0,08 3,75+0,15 3,32+0,012 3,45+0,10 3,52+0,10
ЭЗД, % 4,7+1,2* 8,9+1,6 5,9 +1,6 7,3+1,7 7,5 +1,4
ЭНЗД, % 11,7+0,31* 16,3+0,27 12,5 + 0,9 14,4 +1,3 15,7 + 0,8
' р<0,05 в сравнении с генотипами С/Т+Т/Т.
Таким образом, аллель С [0К=4,346, С.1.=(2,224-8,490); х2 =20,68; р=5,421*10-6] и генотип С/С [0К=11,831, С.1.=(1,621-25,518); Х2=5,02; р=0,025] являются факторами неблагоприятного течения ХСН, а аллель Т [0К=0,230, С.1.=(0,118-0,450); х2=20,68; р=5,421*10-6] и генотипы С/Т [0К=0,194, С.1.=(0,092-0,408); х2=20,29; р=6,654*10-6] и
400
у пациентов с разными генотипами достоверно не различался. Статистически значимых различий между группами с разными генотипами гена ИЛ-1Ра (УЫТК ш^оп 2) не обнаружилось.
При исследовании структурно-функционального состояния ЛЖ у больных с разными генотипами генов ИЛ-ф и
Таблииа 6
Данные Эхо-КГ у больных с ХСН в зависимости от полиморфизмов гена ИЛ-lß (С+3953Т) и гена ИЛ-1Ра (VNTR intron 2)
Эхо-КГ показатели Генотипы гена ИЛ-ф Генотипы гена ИЛ-1Ра
С/С (n=102) С/Т + Т/Т (n=63) 2R/2R (n=25) 2R/4R (n=55) 4R/4R (n=71)
КДР, см 57,3±5,8 51,5±5,3 58,7±4,6 57,5±5,3 55,7±3,6
КСР, см 39,9±2,6 35,7±2,8 39,1±2,2 37,7±2,2 35,1±2,9
ФУ, % 28,8±3,5 33,1±2,7 27,8±3,3 31,1±2,9 32,8±1,5
ФВ, % 47,2±5,1* 59,6±7,6 49,2±7,5 53,6±8,6 56,2±7,3
МЖП, см 11,7±0,43 11,1±0,78 12,9±1,2 11,8±0,9 11,2±0,7
ЗСЛЖ, см 11,6±1,29 10,9±0,5 12,2±1,3 11,9±0,7 10,2±0,9
Е/А 0,79±0,14 0,96±0,21 0,73±0,18 0,76±0,22 0,89±0,18
р<0,05.
ИЛ-1Ра достоверные различия обнаружились только в отношении ФВ (табл. 6). У пациентов с генотипом С/С гена ИЛ-1ß (С+3953Т) ФВ ЛЖ ниже по сравнению с ФВ у носителей аллеля Т (47,2% против 59,6%; р<0,05).
В литературе данных об исследованиях ассоциаций полиморфизмов генов ци-токинов ИЛ-ф (+3953) и ИЛ-1Ра (VNTR intron 2) с сердечно-сосудистой патологией относительно немного, а исследований о связи этих полиморфизмов с риском развития и характером прогрессирования ХСН у больных с ИБС и АГ мы вообще не нашли. S.E. Francis et al. в 1999 г. обнаружили ассоциацию аллеля 2R с атероскле-ротическим поражением коронарных артерий, установленным на основании ангиографии (р=0,005) [8]. Однако в ряде других исследований не установлено ассоциаций между данным полиморфизмом и атеросклерозом коронарных артерий и таким осложнением ИБС, как инфаркт миокарда. А. Kastrati et al. при исследовании 1850 пациентов выявили достоверно меньший риск возникновения рестенозов у носителей аллеля 2R (+2018 in exon 2) после стентирования [9].
При исследовании взаимодействия между уровнем С-реактивного белка и полиморфизмами генов, кодирующих ИЛ-ф (-511),ИЛ-ф (+3953),ИЛ-1Ра (VNTR intron 2), ИЛ-6 (-174) и ИЛ-6 (-572) у 160 пациентов с атеросклеротическим повреждением коронарных артерий G. Latkovskis et al. обнаружили высокие уровни С-РБ у носителей Т-аллеля гена ИЛ-ф (+3953; р<0,05)
и низкие у носителей аллеля 2R гена ИЛ-1Ра (р<0,01) [10]. В другом исследовании у 674 пациентов с такой же патологией авторами не найдено ассоциаций между полиморфизмами генов, кодирующих ИЛ-1а (-889), ИЛ-ф (-511 и +3953) с риском возникновения коронарной патологии [8]. Подобный результат был получен в отношении полиморфизма гена ИЛ-ф (-511) у 335 пациентов с атеросклерозом коронарных артерий, подтвержденным ангиографически [17]. В целом все эти данные показывают неоднозначность результатов по ассоциации полиморфных вариантов вышеперечисленных генов, поэтому данная проблема требует дальнейшего изучения.
Таким образом, в ходе исследования нами было выявлено, что аллель С полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-ф ассоциирован с риском развития, тяжестью клинических проявлений и неблагоприятным характером течения ХСН у больных с ИБС и АГ, тогда как аллель Т полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-ф свидетельствует об ослаблении риска развития данной патологии и ассоциирован с благоприятным характером течения ХСН. Однако подобные ассоциации не были обнаружены у лиц женского пола. Кроме того, у гомозигот по аллелю С полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-ф имели место значимо более выраженные нарушения сосудодвигательной функции эндотелия и систолической функции ЛЖ по сранению с носителями аллеля 3953Т. В ходе исследования не установле-
401
но ассоциаций между полиморфными вариантами гена ИЛ-1Ра (VNTR intron 2) и риском развития, тяжестью и характером течения ХСН. Данный полиморфизм не влиял на степень нарушений сосудодви-гательной функции эндотелия и ЭхоКГ показатели структурно-функционального состояния ЛЖ у больных с ХСН на фоне ИБС и АГ.
Полученные данные в дальнейшем могут быть использованы для раннего выявления групп повышенного риска развития и неблагоприятного течения ХСН.
ЛИТЕРАТУРА
1. Агеев Ф.Т., Даниелян М.О., Мареев В.Ю. и др. Больные с хронической сердечной недостаточностью в российской амбулаторной практике: особенности контингента, диагностики и лечения (по материалам исследования ЭПОХА-О-ХСН)//Журн. серд. недостат. — 2004. — Т. 5(1). — С. 4-7.
2. Баранов В.С. Программа "Геном человека как научная основа профилактической медицины"// Вестн. РАМН.- 2000. № 10. — С. 27-37.
3. Баранов И.С., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э. и др. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в предиктивную медицину). — СПб: Интермедика, 2000. — 271 с.
4. Маниатис Т., Фрич Э, Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. — М., Мир, 1984: 480с.
5. Смольникова М.В., Коненков В.И. Клиническая иммуногенетика заболеваний человека// Мед. имму-нол. — 2001. — № 3. — С. 379-389.
6. Celermajer DS, Sorensen KE, Gooch VM et al. Noninvasive detection of endothelial dysfunctionin children and adults at risk of atherosclerosis// Lancet. — 1992. — Vol. 340. — P. 1111-1115.
7. Dinarello C.A. Interleukin-1. //Cytokine and Growth Factor Reviews. — 1997. — Vol. 8 (4). — P. 253-265.
8. Francis S.E., Camp N.J., Dewberry R.D. et al. Interleukin-1 receptor antagonist gene polymorphism and coronary artery disease// Circulation. — 1999. — Vol. 99. — P. 861-866.
9. Kastrati A, Koch W, Berger P. et al. Protective role against restenosis from an interleukin-1 receptor antagonist gene polymorphism in patients treated with coronary stenting.// J. Am. Coll. Cardiol. — 2000. — Vol. 36. — P. 2168-2173.
10. Latkovskis G, Licis N, Kalnins U. C-reactive protein levels and common polymorphisms of the interleukin-1 gene cluster and interleukin-6 gene in patients with coronary heart disease.// Eur. J. Immunogen. — 2004. — Vol. 31 (5). — P. 207-213.
11. Le Convoisier P., Park H.Y., Carlson K.M., et al. Impact of genetic poltmorphisms on heart failure prognosis.// Arch. Mal. Coeur Vaiss. — 2003. — Vol. 96(3). — 197-206.
12. Rauchhaus M., Dohner W, Francis D.P. et al. Plasma cytokine parameters and mortality in patients with chronic heart failure.//Circulation. — 2000. — Vol. 102. — P. 3060-3067.
13. Santtila S, Savinainen K, Hurme M. Presence of the IL-1RA allele 2 (IL1RN*2) is associated with enhanced IL-1 beta production in vitro. //Scand. J. Immunol. — 1998. — Vol. 47. — 195-198.
14. Sasieni P.D. From Genotypes to Genes: Doubling the Sample Size.// Biometrics. — 1997. — Vol. 53. — P. 1253-1261.
15. Semana G., Yaouanq J., Alisadeh M, et al. Interleukine-1 receptor antagonist gene in multiple sclerosis (research letters). // Lancet. — 1997. — Vol. 349(9050). — P. 476-479.
16. Shcrijver H.M., van As J., Crusius I.B. et al. Interleukin (IL)-1 gene polymorphismsArelevance of disease severity associated alleles with IL-1 beta and IL-1ra production in multiple sclerosis. //Mediators Inflamm. — 2003. — Vol. 12 (2). — P. 89-94.
17. Vohnout B., Di Castelnuovo A., Trotta R. et al. Interleukin-1 gene cluster polymorphisms and risk of coronary artery disease.// Haematologica. — 2003. — Vol. 88 (1). — 54-60.
18. Weir BS. Statitical Data Analysis II. Methods for Discrete Population Genetic Data, Chpt. 3 Disequilibrium. USA, Sinauer Associates. — 1996. — P. 91-140.
Поступила 27.03.08.
THE INFLUENCE OF POLYMORPHISMS OF GENES OF INTERLEUKIN-IB AND RECEPTOR ANTAGONIST OF INTERLEUKIN-I ON THE DEVELOPMENT AND PROGRESSION OF CHRONIC HEART FAILURE
N.N. Mayanskaya, S.D. Mayanskaya, N.F. Yakovlev,
A.V. Yakovlev, M.L. Filipenko, E.N. Voronina, E.N. Bereznikova, S.N. Shilov, T.I. Zakharova, S.V. Mayer
Summary
Revealed are the correlations between polymorphisms of gene IL-1P and the risk of development, severity and course of chronic heart failure, as well as with vasomotor disfunction of endothelium and systolic disfunction of left ventricle.
