CC BY
2
РОССИЙСКИЙ Willi НШОШЕСКШ 11 Vil ШГРЕСС 2DZ3 АЛ I II
Экспериментальная онкология
Цель: Проанализировать цитотоксичность катионных пептидов (КП) и оценить ее возможные механизмы на моделях восприимчивой и резистентной к иматинибу клеточных сублиний гастроинтестинальной стромальной опухоли желудка (ГИСО).
Материалы и методы: Клеточная сублиния ГИСО GIST/T1 -naive и производная резистентная к иматинибу (Гливеку) сублиниия GIST/T1-ImR c приобретенной в процессе культивирования в присутствии иматиниба (Гли-века, Im/IC50) лекарственной устойчивостью. В геноме обеих линий — делеция в 11 экзоне гена С-KIT 11ex del. V560-Y578. Контроль — иммортализованные фибробласты кожи человека линий HFb и Н1036. Дендритные КП с молекулярной массой около 2 кДа и зарядом от 4 д 16 синтезированы путем твердофазного синтеза по технологии Fmoc. Выживаемость клеток в присутствии дендритных КП NC-783, NC-811 и АМ-2 (0,5-4 цг/мл) оценивали с помощью МТТ-теста; с помощью флуоресцентно меченного аннексина V; проточной цитометрии с оценкой активации каспаз 3, 8, 9 до 0,5 мкг/мл и с помощью узкоспециализированных наборов (Muse Millipore). Механизмы избирательной цитотоксичности КП также анализировали с помощью попарного молекулярного докинга Maestro 11 (Schrodinger Inc).
Результаты: Обнаружено, что все 3 тестированные КП — NC783, NC-811 и АМ-2 подавляют рост опухолевых клеток (ОКл) снижая их выживаемость до 19, 25 и 28% соответственно, относительно контроля — нормальных клеток. IC50 КП для Кл GIST/T1-naive составила >1 цг/мл, для Кл GIST/T1-ImR > 2 цг/мл. Важно, что индукция апоптоза наблюдалась как у восприимчивых, так и у резистентных к иматинибу сублиний. Основной механизм индукции гибели ОКл — апоптоз по типу ядрышкового стресса с участием шаперонных белков NCL(нуклеолина) и NPM (нуклеофозмина), которые гиперэкспрессированы в ОКл. Молекулярный докинг показал, что КП взаимодействуют с киназой KIT и это приводит к ингибированию гиперактивированного вследствие мутации Р1К3К-сигналинга. Оценочные функции связывания всех 3 КП с клеточными мишенями (KIT-wt, KIT-mut, NCL, NPM, FGFR2, VEGFR2, ERK1,2) для большинства взаимодействий лучше эталонного значения (-7 kcal/mol), что доказывает способность КП избирательно связываться с белками-мишенями и ин-активировать клеточный сигналинг, индуцируя апоптоз восприимчивых и резистентных Кл. Заключение: Изученные КП — потенциальные противоопухолевые агенты. Они оказывают селективное цито-токсическое действие как на восприимчивые к иматинибу, так и на резистентные клетки ГИСО, в основном, за счет апоптоза по типу ядрышкового стресса и вследствие инактивации сигналинга.
ВЛИЯНИЕ ОЗОНИРОВАННОГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА НА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ КЛЕТОК ЭПИДЕРМОИДНОЙ КАРЦИНОМЫ ЧЕЛОВЕКА
П.Ю. Андреев1, Л.Н. Антакова1, В.В. Шишкина1, И.П. Мошуров12
Место работы: 1. ФГБОУ ВО «ВГМУ им. Н.Н. Бурденко» Минздрава России, Воронеж, Россия; 2. БУЗ ВО «Воронежский областной клинический онкологический диспансер», Воронеж, Россия Эл. почта: [email protected]
Использование влияния озонированных растворов на клеточные культуры имеет клиническое применение. Целью исследования является оценка влияния озонированного физиологического раствора на жизнеспособность клеток эпидермоидной карциномы человека А431. Материалы и методы: Исследования проводили на базе НИИ экспериментальной биологии и медицины федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Воронежский государственный медицинский университет имени Н.Н. Бурденко» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Клеточная линия эпидермоидной карциномы человека А431 получена в Центре коллективного пользования «Коллекция культур клеток позвоночных» федерального государственного бюджетного учреждения науки Института цитологии Российской академии наук (ЦКП КККП ИНЦ РАН), г. Санкт-Петербург, Россия. Клетки культивировались вувлаж-ненной атмосфере с 5% CO2 инкубатор Midi 40 (Thermo Scientific, США) при 37 °С. Все манипуляции проводились в боксе БМБ-11-«Ламинар-С»-1,2 (Lamsistems, Россия). Для культивирования использовали питательную среду DMEM (ООО «БиолоТ», Россия) содержащую L-глута-мин, 1 г/л глюкозы, и перед пассажем добавляли 10% сыворотку крови плодов коровы (ООО «БиолоТ», Россия). Приготовление физиологического раствора (ООО «Био-лоТ», Россия), обогащенного озоном осуществляли на аппарате озонотерапии «МЕДОЗОНС-БЬЮТИ» (ООО «НПП ЭлектроГидроСистемы», Россия) с применением устройства для озонирования воды, растворов, масел (OOO «ОТРИ», Россия), деструктора отработанной озонокислородной смесью (OOO «ОТРИ», Россия) и концентратора кислорода "Oxygen concentrator Longfian JAY-5A" (Longfian scitech Co., ltd. согласно руководству по эксплуатации. Определение жизнеспособности клеток при воздействии физиологического раствора, обогащенного озоном проводили с помощью теста с трипановым синим. Для снятия клеток использовали раствор трипсина-версена (ООО «Био-лоТ», Россия) в количестве 1:3 соответственно паспорту клеток и рекомендациям. Клетки отмывали питательной средой DMEM (ООО «БиолоТ», Россия) и центрифугировали в течение 10 минут при 1000 об/мин на центрифуге LMC-3000 (BioSan, Латвия). Осадок ресуспендировали в питательной среде до достижения в количестве 3 х 106 кл/см3.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том/vol. 13 #3s1 • 2023
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Для определения цитотоксичности исследуемых растворов ксуспензии клеток добавляли в равном объеме физиологический раствор; физиологический раствор, обогащенный озоном (50 и 80 мг/мл) и инкубировали 10 минут при температуре 37 °С. К 10 мкл клеточной суспензии добавляли равный объем 0,4% раствора трипанового синего (ООО «БиолоТ», Россия) из расчета и осуществляли подсчет количества клеток на автоматическом счетчике клеток ТС 20 (Bio-Rad, Сингапур). Для статистической обработки данных использовалась программа Statistica 12.0. Для оценки достоверности различий использован параметрический t-критерий Стьюдента.
Результаты и обсуждение: Определение жизнеспособности клеток с трипановым синим показало снижение % живых клеток. После инкубации с физиологическим раствором, физиологическим раствором, обогащенным озоном 50 мг/мл и 80 мг/мл количество клеток составило 97,37 ± 4,6; 71,48 ± 4,6 и 60,55 ± 4,5% соответственно (Р < 0,05).
Заключение: Физиологический раствор, обогащенный озоном (50 и 80 мг/мл) снижает жизнеспособность клеток эпидермоидной карциномы человека А431 и может быть рассмотрен в исследовании цитотоксических свойств при терапии эпидермоидной карциномы на анималь-ных моделях.
■ МОРФОЛОГИЯ ОПУХОЛЕЙ
HRD-ТЕСТИРОВАНИЕ ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ЯИЧНИКА. РОЛЬ МОРФОЛОГА
А.Ю. Шаманова12, В.В. Саевец12
Место работы: 1. ГАУЗ «Челябинский областной клинический центр онкологии и ядерной медицины», Челябинск, Россия; 2. ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, Челябинск, Россия Эл. почта: [email protected]
Цель: Провести сопоставление HRD-статуса, пригодности тканевого материала для HRD-тестирования в зависимости от структурных изменений в опухоли и её микроокружении при распространенных формах рака яичников. Материалы и методы: Проведено ретроспективное гистологическое исследование тканевых фрагментов в окраске гематоксилин и эозин 100 случаев РЯ от пациенток, проходивших HRD-тестирование в рамках исследования на базе ГАУЗ ЧОКЦОиЯМ, составившими 3 группы исследования (ГИ): 1 ГИ — случаи с положительным HRD-cта-тусом (п = 45), 2 ГИ — с отрицательным HRD-cтатусом
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
Морфология опухолей
(n = 40), 3 ГИ — случаи с неустановленным HRD-стату-сом (n = 15).
Результаты: Все случаи были представлены серозной карциномой яичника высокой степени злокачественности (G3) стадии III-IV по FIGO. Ранее фиксация, проводка тканевого материала, приготовление микропрепаратов было проведено в соответствии со стандартами, требованиями. В 1 ГИ тканевой материал был представлен жизнеспособными опухолевыми клетками с долей более 50% площади тканевого фрагмента, с соотношением опухолевых клеток к соединительной ткани — 4:1; с отсутствием тканевого детрита, с единичными мелкими кальцинатами в опухоли; с диффузно рассеянным лимфогистиоцитарным сопутствующим инфильтратом.
В 2 ГИ — процент жизнеспособных опухолевых клеток 3050%, соотношение опухолевых клеток к строме — 2:1; наличие очагов некроза; мелкие рассеянные кальцинаты; вариабельный воспалительный клеточный инфильтрат. В 3 ГИ доля опухолевых клеток в тканевом фрагменте составила 35-65%, при этом, были обнаружены десмопластические изменения в ткани с выраженным гистиоцитарным компонентом, очагами некроза, более очаговым ростом рассеянных в ткани опухолевых клеток, паттерны роста атипичных клеток были представлены преимущественно микропапиллярными структурами.
Заключение: Для планирования HRD-тестирования целесообразно определение в тканевом фрагменте опухоли доли опухолевых клеток более 40% площади среза, а также объемной плотности некроза, выраженность десмопласти-ческих изменений и паттернов роста опухоли. Актуальным для корректного HRD-тестирования является не только достаточный объем опухоли и качественная в соответствии с требованиями подготовка тканевого материала, но и оценка сопутствующих тканевых изменений в опухоли, которые даже при достаточном объеме тканевого материала могут косвенно снижать качество исследуемого объема материала.
ОЦЕНКА ВНУТРИЛАБОРАТОРНОЙ ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ ПОДСЧЕТА МИТОЗОВ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ НА ПЛАТФОРМЕ ONECELL
И.М. Тележникова, Е.И. Шурыгина, Я.А. Кадырова, Н.С. Карнаухов, Г.Р. Сетдикова
Место работы: ГБУЗ «Московский клинический научный центр им. А. С. Логинова ДЗМ», Москва, Россия Эл. почта: [email protected]
Цель: Оценить внутрилабораторную воспроизводимость подсчета митозов (МП) при раке молочной железы (РМЖ). Материалы и методы: Проведено экспериментальное исследование, выполненное на материале от 10 пациентов, проходивших лечение в МКНЦ им. А.С. Логинова
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
том/vol. 13 #3s1 • 2023
