CC BY
10"BicHUK стоматологИ", № 4, 2015
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗД1Л
УДК 616.33+342.092
А. С. Куваев1, врач, И. В. Гинжул2
1 Киевский национальный медицинский университет им. А. А. Богомольца 2 Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной академии медицинских наук Украины»
ВЛИЯНИЕ ОРАЛЬНОГО ГЕЛЯ, СОДЕРЖАЩЕГО АРГИНИН, НА БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ И АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ КРЫС, ПОЛУЧАВШИХ ВЫСОКОЖИРОВОЙ РАЦИОН НА ФОНЕ ДИСБИОЗА
Высокожировой рацион на фоне дисбиоза увеличивает в крови содержание лейкоцитов, снижает долю моноцитов, увеличивает в сыворотке крови уровень маркеров воспаления и снижает уровень антиоксидантной системы. Оральные аппликации геля, содержащего l-аргинин, нормализуют почти все исследуемые показатели.
Ключевые слова: жировое питание, дисбиоз, лейкоциты, воспаление, антиоксиданты, аргинин, оральный гель.
О. С. Куваев1, I. В. Гшжул2
1 Кшвський нацюнальний медичний утверситет
iм. О. О. Богомольця 2 Державна установа «1нститут стоматологи Нацюнальил академн медичних наук Украши»
ВПЛИВ ОРАЛЬНОГО ГЕЛЮ, ЯКИЙ М1СТИТЬ АРГ1Н1Н, НА Б1ОХ1М1ЧН1 МАРКЕРИ ЗАПАЛЕННЯ I АНТИОКСИДАНТНОГО ЗАХИСТУ В СИРОВАТЦ1 КРОВ1 ЩУР1В, ЯК1 ОТРИМУВАЛИ ВИСОКОЖИРОВИЙ РАЦ1ОН НА ТЛ1 ДИСБ1ОЗУ
Високожировий рацюн на тлi дисбюзу збтьшуе в кровi вмкт лейкоцитiв, знижуе долю моноцитiв, збыьшуе в сиро-ватц кровi рiвень маркерiв запалення та знижуе рiвень ан-тиоксидантног системи. Оральт аплжацп гелю, який мiс-тить l-аргтт, нормалiзуе майже уЫ до^джуваш показ-ники.
Ключовi слова: жирове харчування, дисбюз, лейкоцити, запалення, антиоксиданти, аргтт, оральний гель.
A. S. Kuvaev1, I. V. Ginzhul2
1National Medical University named after O.O. Bogomolets
2 State Establishment "The Institute of Stomatology of the National academy of medical science of Ukraine
THE INFLUENCE OF ORAL GEL, CONTAINING ARGININE, UPON THE BIOCHEMICAL MARKERS OF INFLAMMATION AND ANTIOXIDANT PROTECTION IN BLOOD SERUM OF RATS, KEPT TO FATTY DIET SIMULTANEOUS TO DYSBIOSIS
ABSTRACT
The aim of the work. To reveal the influence of oral gel with arginine upon the indices of inflammation and antioxidant protection in blood serum of rats, kept to fatty diet (FD) simultane-
ous to dysbiosis.
The materials and the methods. The rats got FD (+25% of fat) simultaneous to dysbiosis (the introduction of lincomycin with table water dosed at 60 mg/kg during the first 5 days) for 21 days. Some rats underwent oral applications of gel with argi-nine at the same time. The markers of inflammation (MDA and elastase), activity of catalase and antioxidant-prooxidant index were determined in blood serum.
The findings. In rats, kept to FD simultaneous to dysbiosis, the level of markers of inflammation grows and the level of antioxi-dant system decreases in blood serum. The oral applications of gel with arginine almost normalize these indices. The conclusion. The oral gel, containing arginine, has therapeutic and preventive effect at dysbiosis.
Key words: fatty diet, dysbiosis, leucocytes, inflammation, anti-oxidants, arginine, oral gel.
В нашей предыдущей работе [1] было показано лечебно-профилактическое действие орального фито-геля «Аргинин» у крыс, получавших высокожировой рацион (ВЖР) на фоне кишечного дисбиоза.. Оральные аппликации геля крысам, получавшим ВЖР на фоне дисбиоза, позволил снизить в 3,5 раза степень дисбиоза в десне, достоверно снизить уровень маркеров воспаления и почти в 1,6 раза снизить степень атрофии альвеолярного отростка.
Цель настоящей работы. Определение общесоматического влияния оральных аппликаций геля «Аргинин» путем исследования биохимических маркеров воспаления и антиоксидантной защиты в сыворотке крови крыс, получавших ВЖР на фоне кишечного дисбиоза.
Материалы и методы исследования. В работе был использован мукозо-адгезивный фитогель «Аргинин» на основе КМЦ, содержащий сироп «Кардио-аргинин», анестетик «Холисан» и мятное эфирное масло [2].
Эксперименты были проведены на 24 белых крысах линии Вистар (самцы, 8 мес.), распределенных в три равные группы: 1-ая - контроль (норма), 2-ая и 3-я группы получали ВЖР, содержащий 25 % жира (в т. ч. 15 % пальмового масла), и в течение первых 5 дней - антибиотик линкомицин с питьевой водой из расчета 60 мг/кг в день. Крысам 3-й группы делали оральные аппликации геля «Аргинин» в дозе 0,3 мл на крысу (около 200 мг/кг в пересчете на «Кардиоаргинин»). Эвтаназию осуществляли на 22-й день опыта под тио-пенталовым наркозом (20 мг/кг) путем тотального кровопускания из сердца.
В крови определяли содержание лейкоцитов и лейкоцитарную формулу [3], в сыворотке крови определяли биохимические маркеры воспаления [4]: содержание МДА тиобарбитуровым методом [5] и активность эластазы с использованием синтетического субстрата [6]. Кроме того, определяли активность ан-тиоксидантного фермента каталазы [7] и по соотношению активности каталазы и содержания МДА рассчитывали антиоксидантно-прооксидантный индекс АПИ [4].
© Куваев А. С., Гинжул И. В., 2015.
"Вiсник стоматологИ", № 4, 2015
Статобработку результатов исследований проводили в соответствии с рекомендациями [8].
Результаты и их обсуждение. В табл. 1 показано, что у крыс, получавших ВЖР на фоне дисбиоза, достоверно увеличивается в крови содержание лейкоцитов, однако почти в 2 раза снижается доля моноцитов. Содержание нейтрофилов и лимфоцитов сущест-
венно не изменяется.
В табл. 2 показано достоверное увеличение уровня биохимических маркеров воспаления: на 15 % МДА и на 53 % активность эластазы. Аппликации геля «Аргинин» практически нормализуют уровень маркеров воспаления.
Таблица 1
Влияние геля «Аргинин» на содержание лейкоцитов и лейкоцитарную формулу в крови крыс, получавших ВЖР на фоне дисбиоза (М±т, п=8)
№№ пп Группы Лейкоциты, х109/л Нейтрофилы, % Лимфоциты, % Моноциты, %
1 Контроль 12,1±0,3 28,0±0,7 65,0±1,5 4,6±0,2
2 ВЖР + дисбиоз «пустой» гель 14,4±1,4 р<0,05 27,2±2,0 р>0,3 68,6±3,7 р>0,2 2,6±0,6 р<0,01
3 ВЖР + дисбиоз гель «Аргинин» 12,3±0,7 р>0,5 р1>0,05 27,6±2,0 р>0,5 р1>0,5 67,6±4,6 р>0,3 р1>0,5 3,0±0,7 р<0,05 р1>0,3
Примечание : р - в сравнении с гр. 1; р1 - в сравнении с гр. 2.
Таблица 2
Влияние геля «Аргинин» на уровень биохимических маркеров воспаления в сыворотке крови крыс,
получавших ВЖР на фоне дисбиоза (М±т, п=8)
№№ пп Группы МДА, ммоль/л Эластаза, мк-кат/л
1 Контроль 0,46±0,01 125,6±3,0
2 ВЖР + дисбиоз «пустой» гель 0,53±0,01 р<0,05 192,3±14,6 р<0,01
3 ВЖР + дисбиоз гель «Аргинин» 0,49±0,01 р>0,05 р1<0,05 156,3±10,3 р<0,05 р1<0,05
Примечание : р - в сравнении с гр. 1; р1 - в сравнении с гр. 2.
Таблица 3
Влияние геля «Аргинин» на активность каталазы и индекс АПИ сыворотки крови крыс, получавших ВЖР на фоне дисбиоза (М±т, п=8)
№№ пп Группы Каталаза, мкат/л АПИ
1 Контроль 0,19±0,01 4,13±0,26
2 ВЖР + дисбиоз «пустой» гель 0,16±0,01 р<0,05 3,02±0,24 р<0,05
3 ВЖР + дисбиоз гель «Аргинин» 0,18±0,02 р>0,3 р1>0,2 3,67±0,27 р>0,1 р1>0,05
Примечание : р - в сравнении с гр. 1; р1 - в сравнении с гр. 2.
В табл. 3 представлены результаты определения в сыворотке крови активности каталазы и индекса АПИ. Из этих данных видно, что у крыс, получавших ВЖР на фоне дисбиоза, достоверно снижается и уровень каталазы, и индекс АПИ. Аппликации геля почти нормализуют эти показатели.
Таким образом, проведенные исследования показали, что оральные аппликации геля «Аргинин» способны оказывать общесоматическое действие, о чем свидетельствует снижение в сыворотке крови маркеров воспаления и повышение уровня антиоксидант-
ной системы.
Выводы. 1. Высокожировой рацион (ВЖР) на фоне дисбиоза увеличивает содержание лейкоцитов в крови и снижает долю моноцитов.
2. ВЖР на фоне дисбиоза увеличивает в сыворотке крови активность маркеров воспаления (МДА, эла-стаза) и снижает активность каталазы и индекс АПИ.
3. Оральные аппликации геля «Аргинин» нормализуют почти все исследованные показатели.
"BicHUK стоматологи", № 4, 2015
Список литературы
1. Borisenko A. V. Parodont-protective action of oral gel "Argi-nine" applications in rats with intestinal dysbiosis which received a high-fat diet / A. V. Borisenko, A. P. Levitsky, A. S. Kuvaev // Journal of Education, Health and Sport. - 2015. - № 5(3). - Р. 294-302.
2. Рецептура РЦ У 20.4-13903778-032/9:2015 «Фитогель «Аргинин». Висновок державно! саштарно-ешдемюлопчно! експертизи № 05.03.02-07/15523 вщ 10.04.2015.
3. Базарнова М. А. (ред.). Руководство по клинической лабораторной диагностике. Ч. 2 / М. А. Базарнова. - К. : Вища школа, 1982. - С. 18.
4. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: методические рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.]. - Одесса : КП ОГТ, 2010. - 16 с.
5. Стальная И. Д. Метод определения малонового диальде-гида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М. : Медицина, 1977. - С. 66-68.
6. Левицкий А. П. Методы определения активности эластазы и ее ингибиторов / А. П. Левицкий, А. В. Стефанов. - К. : ГФЦ, 2002. - 15 с.
7. Гирин С. В. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах / С. В. Гирин // Лабораторная диагностика. - 1999. - № 4. - С. 45-46.
8. Лапач С. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / С. Н. Ла-пач, А. В. Чубенко, П. Н. Бабич. - К. : Морион, 2000. - 320 с.
REFERENCES
1. Borisenko A. V., Levitsky A. P., Kuvaev A. S. Parodont-protective action of oral gel "Arginine" applications in rats with intestinal dysbiosis which received a high-fat diet. Journal of Education, Health and Sport. 2015; 5(3): 294-302.
2. The formulation RC U 20.4-13903778-032/9:2015 "Phytogel "Arginine". The resolution of the State Sanitary-and-Epidemiologic Expert Examination № 05.03.02-07/15523 dated on 10.04.2015..
3. Bazarnova M. A. Rukovodstvo po klinicheskoy laboratornoy diagnostike [Manual of Clinical Laboratory Diagnostics]. Ch. 2. Kiyev, Vyshcha shkola,1981: 18.
4. Levitsky A. P., Denga O. V., Makarenko O. A. [i dr.]. Biokhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodicheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Оdеssа, KP OGT, 2010:16.
5. Stalnaya I. D., Garishvili T. G. Metod opredeleniya malonovogo dialdegida s pomoshchyu tiobarbiturovoy kisloty [The method of revelation of malonic dialdehyde with thiobarbituric acid]. Moskva, Meditsina, 1977: 66-68.
6. Levitsky A. P., Stefanov A. V. Metody opredeleniya aktivnosti elastazy i eye ingibitorov: metodicheskie rekomendatsii [The methods of the determination of the activity of elastase and its inhibitors: method guidelines]. Kiev, GFK, 2002: 15.
7. Girin S. V. The modification of the method of the determination of catalase activity in biological substrates. Laboratornaya diagnostika. 1999; 4: 45-46.
8. Lapach S. N., Chubenko A. V., Babich P. N. Statisticheskiye metody v medico-biologicheskikh issledovaniyakh s ispolzovaniem Excel [Statistical methods in medical and biological research by using Excel]. Kiev, Morion, 2000: 320.
Поступила 29.09.15
УДК 616.31.092:612.017.11
М. А. Остафийчук1, Т. В. Томилина2, к. мед. н., Е. П. Ступак3, к. мед. н.
'Буковинский государственный медицинский университет
2Харьковский национальный медицинский университет 3Украинская государственная стоматологическая академия
АКТИВНОСТЬ ЛИЗОЦИМА И СТЕПЕНЬ ДИСБИОЗА В ТКАНЯХ ПОЛОСТИ РТА КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИММУНОДЕФИЦИТЕ
Многократное введение преднизолона (5 мг/кг) или воспроизведение метаболического синдрома у крыс приводит к развитию иммунодефицита в мягких тканях полости рта, следствием чего является оральный дисбиоз. Ключевые слова: иммунодефицит, преднизолон, метаболический синдром, дисбиоз, лизоцим, полость рта.
М. А. Остафшчук1, Т. В. Томтта2, О. П. Ступак3
1Буковинський державний медичний уншерситет 2Харювський нацюнальний медичний ушверситет 3Укра1нська державна стоматолопчна академ1я
АКТИВН1СТЬ Л1ЗОЦИМА I СТУП1НЬ ДИСБ1ОЗУ В ТКАНИНАХ ПОРОЖНИНИ РОТА ЗА УМОВИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО 1МУНОДЕФЩИТА
Багатократне введення предтзолону (5 мг/кг) або вiдтво-рення метаболiчного синдрому у щурiв приводить до роз-витку iмунодефiциту в м'яких тканинах порожнини рота, на^дком чого е оральний дiсбiоз.
Ключовi слова: iмунодефiцит, предтзолон, метаболiчний синдром, дисбюз, лiзоцим, порожнина рота.
M. A. Ostafiychuk, T. V. Tomilina2, E. P. Stupak3
1Bukovinian State University 2Kharkov National Medical University 3Ukrainian medical Stomatological Academy
THE ACTIVITY OF LYSOZYME AND THE DEGREE OF DYSBIOSIS IN ORAL TISSUES OF RATS AT THE EXPERIMENTAL IMMUNODEFICIENCY
ABSTRACT
The aim of the work. To reveal dysbiosis in oral tissues at the experimental immunodeficiency (ID).
The materials and the methods. In two series of the experiments with rats the immunodeficiency was restored with the introduction ofprednisolone (5mg/kg, 14 days) or with causing of metabolic syndrome (MS) by keeping the animals to fatty diet, introduction of lincomycin and cytostatic agent. The ID was determined according to lymphocytic index (LI): interrelation of the level of lymphocytes and neutrophils in blood, and the activity of lysozyme in blood serum, mucous membrane of cheek and gum. The degree of oral dysbiosis was calculated with Levitskij method (the correlation of the relative activities of urease and lyso-zyme).
The findings. At the experimental ID LI reduces in blood almost by 10 times and the activity of lysozyme in oral tissues thrice as decreased. The degree of dysbiosis grows by 3-6 times. The conclusionPrednisolone and MS cause the development of ID in blood (lymphocytic) and in oral cavity (lysozymic), which result in development of oral dysbiosis.
© ОстафийчукМ. А., Томилина Т. В., Ступак Е. П., 2015.
