CC BY
67
© Д. И. Маракушин, О. А. Наконечная, И. Г. Максимова УДК 612. 017. 1:616-099-036. 11-092. 9:547. 395 Д. И. Маракушин, О. А. Наконечная, И. Г. Максимова
ВЛИЯНИЕ ОКСИЭТИЛИРОВАННЫХ АЛКИЛФЕНОЛОВ НА СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ПОДОСТРОМ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ОПЫТЕ
Харьковский национальный медицинский университет (г. Харьков)
Работа выполнена в Харьковском национальном медицинском университете в рамках научной проблемы «Изучение механизмов биологического действия простых полиэфиров в связи с проблемой охраны окружающей среды», № государственной регистрации 011011001812.
Вступление. Проблема химического загрязнения производственной и окружающей среды в настоящее время является актуальной и ее решение имеет глобальное значение для сохранения и укрепления здоровья населения [2,3,7]. Увеличение масштабов химической промышленности приводит к загрязнению среды обитания человека, повышению контакта населения с вредными токсическими соединениями, которые во многих случаях обладают отдаленными последствиями влияния и способны ингибировать иммунную систему (ИС) [3-6,8,9]. К веществам, с которыми широко контактирует население в производственных условиях и быту, относятся оксиэтилированные алкилфенолы (ОА) на основе тримеров пропилена, имеющие товарное название «неонолы». Объемы выпуска и ассортимент этих соединений ежегодно увеличиваются. Это в полной мере относится и к высокоперспективным в народнохозяйственном отношении химическим веществам из группы «неонолов» - ОА марок АФ9-6, АФ9-10, АФ9-12. В условиях возросшей химической нагрузки на биосферу, в том числе и на человека, одной из важнейших задач является оценка состояния иммунологической реактивности организма и определение наиболее информативных показателей диагностики иммунной недостаточности.
Целью работы являлось изучение влияния ОА на иммунологическую реактивность экспериментальных животных в условиях подострого токсикологического опыта и обоснование мониторинговых показателей диагностики ранней иммунной дисфункции.
Объект и методы исследования. В качестве материалов исследования была выбрана группа химических веществ, имеющая товарное название «неонолы», относящаяся к ОА марок АФ9-6, АФ9-10 и АФ9-12, имеющих регламентированные физикохимические свойства. На основании параметров острой токсичности «неонолы» относятся к умерено токсичным соединениям (3 класс опасности), обладающим выраженными кумулятивными свойствами [7]. Среднесмертельные дозы (ДЛ50)
для белых крыс были установлены на уровнях 4,2±0,5; 4,3±0,4; 3,4±0,62 г/кг массы животного и коэффициенты кумуляции на уровнях 2,26; 3,0; 2,2 соответственно для «неонолов» АФ9-6, АФ9-10 и АФ9-12. В экспериментальной части роботы использовались половозрелые мыши популяции СВА/1_ас, массой 23-25 г, которым ежедневно перорально утром до приёма пищи с помощью металлического зонда вводились водные растворы ксенобиотиков из расчета 1/10, 1/100, 1/1000 ДЛ50 Среднесмертельные дозы для мышей находились на уровнях 4,3±0,4; 4,5±0,3 и 3,6±0,5, соответственно при воздействии «неонолов» АФ9-6, АФ9-10 и АФ9-12. Продолжительность подострого опыта составляла 45 суток. Результаты сравнивались с контрольной группой животных, которые получали аналогичные объемы воды. В опытных и контрольных группах насчитывалось по 15-20 животных. Всего использовано в подостром опыте 190 мышей с соблюдением закона Украины «О защите животных от жестокого обращения» от 21. 02. 06 №3488- IV
Программа исследований предусматривала изучение состояния показателей клеточного и гуморального иммунитета. Для оценки состояния клеточного звена ИС определяли с помощью метода иммунофлуоресцентного анализа общую популяцию Т-лимфоцитов (CD3+), субпопуляции Т-лимфоцитов: Т-хелперы (CD4+), Т-супрессоры (CD8) и В-лимфоциты (СД19) в сыворотке крови, используя моноклональные антитела [1,10]. Медиаторы ИС - интерлейкины (ИЛ): ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-6 и фактор некроза опухолей -альфа (ФНО-а) определяли в сыворотке крови с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием диагностической тест-системы фирмы «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург, Россия). Исследование ИЛ-8 осуществлялось с применением тест-системы «Dia-clone» (Франция). Иммуноглобулины (Ig) классов A, M, G, D, E в сыворотке крови исследовались методом иммуноферментного анализа по прилагаемым инструкциям к наборам реагентов на иммуноферментном анализаторе STAT - FAX 300 (США). Статистическая обработка полученных результатов проводились на персональном компьютере по программе «Биостатистика» с использованием критерия Стьюдента-Фишера.
Таблица 1
Влияние оксиэтилированных алкилфенолов на показатели клеточного и гуморального
иммунитета (в пкг/мл)
Пока- затели Группа наблюдения, М±т
Контроль АФ9-6 АФ9-10 АФ9-12
1/10 ДЛ„ 1/100 ДЛ„ 1/10 ДЛ„ 1/100 ДЛ„ 1/10 ДЛ„ 1/100 ДЛ„
СОЭ+ 850,4+27,5 580,6+20,8* 720,6+32,4* 590,4+17,3* 760,5+22,4* 530,7+24,2* 690,4+30,5*
Сй4+ 370,6+10,3 180,7+16,5* 240,5+18,6* 190,6+21,3* 275,3 + 18,6* 165,3+12,7* 220,6+14,7*
Сй8 245,7+8,6 190,5+9,4* 220,8+11,7* 205,4+7,6* 222,6 + 14,8* 175,2+15,3* 205,3+10,4*
Сй19 280,5+6,2 205,3 + 10,6* 230,4+9,8* 220,8+14,3* 237,4+12,6* 186,4+13,8* 210,8+8,7*
!д А 53,4+3,8 30,6+2,3* 40,8+3,6* 36,4+3,3* 42,6+2,9* 25,2+1,72* 35,2+3,1*
!д й 14,2+1,5 7,6+0,94* 8,5+1,06* 8,5+0,86* 8,7+1,12* 7,3+0,83* 8,2+0,9*
!д М 46,8+3,7 25,4+1,8* 31,4+2,7* 29,2+1,74* 33,5+3,4* 21,4+1,86* 29,6+2,1*
!д о 75,3+5,6 44,6+3,2* 49,8+3,6* 46,7+3,42* 52,4+4,8* 32,6+2,53* 43,7+4,3*
!д е 15,8+1,2 9,5+0,8* 12,3+1,15* 10,2+1,10* 13,7+1,0 8,4+0,95* 11,8+1,16*
Примечание: *- различия достоверны, Р<0,05.
Результаты исследований и их обсуждение.
Изучение влияния АФ9-6, АФ9-10 и АФ9-12 на клеточный и гуморальный иммунитет выявило, что ксенобиотики в 1/10 и 1/100 ДЛ50 на 45 сутки эксперимента приводили к снижению содержания в сыворотке крови опытных животных Т- и В-лимфоцитов. В дозе 1/1000 ДЛ50 не оказывали нарушений со стороны показателей клеточного и гуморального иммунитета. Недействующими дозами во всех случаях были: 4,3; 4,5; и 3,6 мг/кг массы животного, соответственно при воздействии АФ9-6, АФ9-10, АФ9-12. Исследования выявили, что ксенобиотики в 1/10 ДЛ50 снижали в сыворотке крови содержание общей популяции Т-лимфоцитов (Сй3+) -на 31,8 %, 31,6 % и 37,6%, Т-хелперов (Сй4+) - на 51,3%, 48,6% и 55,4%, Т-супрессоров (Сй8) - на 22,5%, 16,5%, 28,7% , В-лимфоцитов (Сй19) - на 26,8%, 21,3% и 33,5% соответственно при воздействии в подостром опыте АФ9-6, АФ9-10, АФ9-12. Наиболее значимое ингибирование показателей клеточного иммунитета выявлено у групп животных, которые подвергались воздействию исследуемым «неонолом» АФ-9-12 (табл. 1).
На фоне подавления клеточного иммунитета отмечалось снижение всех классов иммуноглобулинов. Ксенобиотики АФ9-6, АФ9-10, АФ9-12 в 1/10 ДЛ50 соответственно снижали
в сыворотке крови содержание 1дА - на 42,7%, 31,8% и 52,8%; 1дМ - на 52,7%, 37,6%, и 54,3%, 1дО - на 40,7%, 38% и 56,7%, 1дЕ - на 40%, 35,5% и 46,8%, !дй - на 46,5%, 41,1% и 48,6%. Анализ показывает, что исследуемые детергенты в дозах 1/10 и 1/100 ДЛ50 способны ингибировать как клеточный, так и гуморальный иммунитет. При этом отмечается высокий уровень зависимости между дозой воздействия и степенью угнетения ИС. Существенное снижение общего количества Т-лимфоцитов, их субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров в сыворотке крови дает основание ожидать снижение продукции им-мунокомпетентными клетками большого спектра регуляторных медиаторов иммунной системы
- ФНО-а, интерлейкинов, которые являются активаторами В-лимфоцитов, тучных и гемопо-этических клеток, тимоцитов, нейтрофилов, моноцитов, фибробластов, спленоцитов и др. Наблюдаемое угнетение секреции цитокинов было наиболее выражено в группах животных, которые получали исследуемые ксенобиотики в дозе 1/10 ДЛ50 (табл. 2).
«Неонолы» АФ9-6, АФ9-10, АФ9-12 снижали соответственно содержание в сыворотке крови ФНО-а под влиянием 1/10 ДЛ50 на 38,3%, 33,6% и 48,4%, ИЛ -1р - на 68,4%, 61,12% и 74,6 % , ИЛ-2
Таблица 2
Влияние оксиэтилированных алкилфенолов на состояние медиаторов иммунной системы
Пока- затели Группа наблюдения, М±т
Контроль АФ9-6 АФ9-10 АФ9-12
1/10 ДЛ50 1/100 ДЛ50 1/10 ДЛ50 1/100 ДЛ50 1/10 ДЛ50 1/100 ДЛ50
ФНО-а 130,5+8,2 80,6+5,4* 91,3+6,7* 86,7+6,9* 98,5+5,7* 67,4+5,5* 88,3+5,4*
ИЛ-1р 57,8+4,6 18,3+1,4* 35,9+4,2* 22,4+1,7* 37,4+4,5* 14,7+1,8* 29,6+3,1*
ИЛ-2 65,3+5,5 32,7+2,1* 43,6+3,8* 35,8+2,4* 46,8+3,6* 28,2+1,6* 38,6+2,9*
ИЛ-4 48,9+4,3 22,6+1,3* 33,4+2,5* 25,3+1,8* 35,7+3,2* 17,5+1,6* 27,9+2,5*
ИЛ-6 39,4+2,7 20,8+1,6* 29,7+1,8* 22,5+1,6* 33,5+2,8* 16,3+1,4* 25,3+2,2*
ИЛ-8 50,7+5,4 20,4+2,3* 31,5+2,6* 26,7+2,1* 37,2+3,4* 15,7+1,3* 26,8+2,0*
ИЛ-10 45,4+4,2 18,6+1,5* 27,4+1,9* 21,3+1,8* 31,5+2,6* 13,8+1,2* 22,6 + 1,4*
Примечание: *- различия достоверны, Р<0,05.
- на 50%, 45,2% и 56,8%, ИЛ-4 - на 53,8%, 48,3% и 64,2%, ИЛ-6 - на 41,2%, 43% и 58,7%, ИЛ-8 - на 59,8%, 47,4% и 69,1%, ИЛ-10 - на 59,1%, 53,1% и 69,6%. Наибольшее ингибирование секреции ци-токинов под действием «неонолов» было присуще для ИЛ-1Р, ИЛ-4, ИЛ-8 и ИЛ-10. Так, наблюдаемое в эксперименте под влиянием 1/10 ДЛ50 АФ9-12 снижение ИЛ-1Р на 74,6% может привести к замедлению процессов дифференцировки и регенерации тканей, продукции простагландинов, ФНО-а макрофагами, моноцитами, гистиоцитами; ингибированию синтеза иммуноглобулинов В-лимфоцитами. Ингибирование клеточного звена ИС было сопряжено со снижением содержания в сыворотке крови ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, которые выполняют важную роль в обеспечении пролиферации и дифференцировки Т- и В- лимфоцитов, переключении синтеза антител с одного класса иммуноглобулинов на другой. Угнетение цитокинопродуцирующей способности мононуклеаров подтверждалось изменением концентрации ИЛ-1Р, ФНО-а, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, что свидетельствует также об ингибировании клеточного звена иммунитета и процессов, связанных с межклеточными медиаторными взаимодействиями, которые направлены на обеспечение гомеостатической функции ИС. Наблюдаемое снижение уровня ИЛ-4 в сыворотке крови может сопровождаться угнетением процесса антигенной стимуляции Т-лимфоцитов, макрофагов, тучных клеток, базофилов, В-лимфоцитов, стромаль-ных клеток, гемопоэтических предшественников и др. Интерлейкин-4 индуцирует дифференциров-ку (Сй4) Т-лимфоцитов в Т-хелперы второго типа (ТН2) и подавляет развитие Т-хелперов первого типа (ТН1), стимулирует пролиферацию и диффе-ренцировку В-лимфоцитов, способствует продукции !дЕ В-лимфоцитами и различные медиаторные эффекты на другие типы клеток, включая макрофаги и гранулоциты. Исследования показывают, что под влиянием 1/10 ДЛ50более интенсивно ингибируется как гуморальное, так и клеточное звено ИС, чем под воздействием «неонолов» в 1/100 ДЛ50. Это позволяет судить о том, что изучаемые ксенобиотики способны в этих дозах подавлять процессы пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов [9]. Это подтверждалось снижением содержания в сыворотке крови Сй19. Анализ полученных результатов свидетельствует, что кроме макрофагов, базофилов, Т- и В- лимфоцитов, тучных клеток, антигенному ингибированию могут подвергаться моноциты, фибробласты, клетки эндотелия, гепа-тоциты, нейроциты, астроциты, которые являются продуцентами ИЛ-6. Снижение содержания ИЛ-6 в сыворотке крови опытных животных может быть сопряжено с нарушением дифференцировки гемопоэтических клеток-предшественников. В связи с тем, что данный цитокин является индуктором этих процессов, он стимулирует созревание тимо-цитов, спленоцитов, мегакариоцитов и продукцию тромбоцитов, способствует росту и созреванию Т- и В- лимфоцитов, превращению Т-лимфоцитов в цитотоксические клетки, усиливает продукцию
острофазовых белков гепатоцитами и является эндогенным пирогенном [1, 10].
Выявлено также ингибирование продукции ИЛ-8 под воздействие ксенобиотиков в дозах 1/10 и 1/100 ДЛ50. Следует отметить, что продуцируемые мононуклеарными фагоцитами ИЛ-6 и ИЛ-8 способны оказывать активирующее действие на Т-хелперы (Сй4), Т-цитотоксические клетки (Сй8), В-лимфоциты. Наблюдаемое ингибирование продукции данных цитокинов, возможно, является одним из механизмов подавления клеточного и гуморального иммунитета [9]. Выполняя эффектор-ную функцию иммунных реакций, активированные цитокинами (ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-4, ИЛ-2) нейтрофи-лы и макрофаги обладают высокой фагоцитарной способностью и бактерицидностью, участвуют в индукции гуморального и клеточного звеньев ИС, стимулируют продукцию цитотоксических форм кислорода, что приводит к уничтожению и разрушению чужеродных и опухолевых клеток в реакции антителозависимой клеточной цитотоксичности [9]. Межклеточные медиаторные взаимодействия позволяют судить о том, что у опытных животных под влиянием «неонолов» наблюдается снижение содержания Т-цитотоксических лимфоцитов (Сй8), из которых в ходе развития клеточной иммунной реакции дифференцируются ІЧК- клетки (большие гранулярные лимфоциты). А также и Т- киллеры, способные оказывать прямое цитотоксическое действие на чужеродные клетки-мишени, свои измененные клетки, в том числе и опухолевые, а также клетки, инфицированные вирусами [9, 10]. На больших гранулярных лимфоцитах экспрессированы рецепторы к ИЛ-2, через которые возможна их стимуляция. Снижение содержания ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а, ИЛ-2 в сыворотке крови экспериментальных животных может быть одним из патогенетических звеньев в нарушении механизмов ингибирования функциональной активности ІЧК- клеток, Т-киллеров, которые оказывают цитотоксическое действие на клетки-мишени как путем контактного лизиса, так и через факторы, секретируемые в виде гранул, либо субстраты, находящиеся в этих клетках в свободном состоянии [1,10]. Данные цитотоксические клетки являются активными продуцентами особого белка -перфорина, который полимеризуется на клетках-мишенях, формируя при этом трансмембранную пору, через которую происходит гипергидратация клетки и разрушение ДНК-клеток-мишеней и самой клетки. Исследования показывают, что «неонолы» могут подавлять цитотокическую активность им-мунокомпетентных клеток [9]. Ингибирование продукции медиаторов ИС, в том числе и ИЛ-6, представляющего собой митоген для Т-лимфоцитов и снижение синтеза ИЛ-8, выполняющего функцию индуктора острой воспалительной реакции, стимулятора адгезивных свойств нейтрофилов и хемотаксиса Т-лимфоцитов, свидетельствует также о нарушении кооперативного взаимодействия клеточного и гуморального иммунитета на фоне формирования иммунной недостаточности. Принимая во внимание, что ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6 обеспечивают
клеточную составляющую адаптивного иммунитета, нами проанализирована функциональная активность В-лимфоцитов и содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови. Результаты исследований обнаружили существенное снижение содержания В-лимфоцитов и всех классов иммуноглобулинов, что может быть связано с ингибированием функциональной активности В-лимфоцитов, плазмобла-стов, которые являются основными продуцентами антител [1,10]. Определение антителообразующей функции иммунокомпетентных клеток, в первую очередь, В-лимфоцитов обнаружил значительное снижение ідО, ІдМ, ідй и в меньшей степени ІдЕ, 1дА. Динамика ингибирования антителообразования позволяет исключить наличия у данной группы соединений сенсибилизирующих и аллергенных свойств.
Выводы.
1. «Неонолы» на основе ОА в условиях подостро-го токсиколо-гического опыта под воздействием 1/10 и 1/100 ДЛ50 ингибируют функциональ-ную активность клеточного звена ИС, что проявлялось снижением содержания в сыворотке крови общей популяции Т-лимфоцитов (Сй3+), субпопуляции Т-лимфоцитов - Т-хелперов (Сй4), Т-супрессоров (СР8) и В-лимфоцитов (СР19).
2. «Неонолы» марок АФ9-6, АФ9-10, АФ9-12 в дозах 1/10 и 1/100 ДЛ50 на фоне ингибирования клеточного звена ИС, способны ингибировать синтез регуляторных цитокинов и медиаторов индукции острофазовых белков, что сопряжено с угнетением антителообразующей функции иммунокомпетентных клеток и нарушения кооперативного взаимодействия клеточного и гуморального иммунитета. Во всех случаях ксенобиотики в 1/1000 ДЛ50 не влияли на иммунобиологическую реактивность опытных животных.
3. Наиболее чувствительными критериальнозначимыми диагностическими показателями при оценке влияния ОА на иммунобиологическую реактивность организма являлись регуляторные медиаторы ИС - ИЛ-1Р, ИЛ-4, ИЛ-8 и ИЛ-10, которые могут быть мониторинговыми показателями в доно-зологической диагностике иммунной дисфункции.
Перспективы дальнейших исследований. В дальнейшем планируется изучить влияние исследуемой группы ксенобиотиков в подостром токсикологическом эксперименте на структурно -метаболическое состояние печени, систему детоксикации и обосновать информативные показатели ее дисфункции.
Литература
1. Ващук Н. А. Влияние полиолов марок Л-803 и Л-655-2-100 на состояние иммунной системы в подостром опыте / Н. А. Ващук, О. В. Зайцева, Д. И. Маракушин [и др.] //Медицина сегодня и завтра. -Харьков, 2007. - № 2. - С. 56-58.
2. Жуков В. И. Медико-биологические аспекты проблемы охраны водных объектов от загрязнения поверхностноактивными веществами / В. И. Жуков, Р И. Кратенко, Ю. К. Резуненко [и др.]. - Харьков : Торнадо, 2000. - 394 с.
3. Жуков В. И. Биологическая активность детергентов - производных нонилбензолов в связи с проблемой охраны водных объектов / В. И. Жуков, С. А. Стеценко, В. И. Пивень [и др.]. - Белгород : «Белвитамины», 2000. - 237 с.
4. Жуков В. И. Эколого-гигиеническая характеристика азотсодержащих поверхностно-активных веществ как загрязнителей водоемов / В. И. Жуков, В. В. Мясоедов, С. А. Стеценко [и др.]. - Харьков : «Торнадо», 2000. - 180 с.
5. Жуков В. И. Простые и макроциклические эфиры: научные основы охраны водных объектов / В. И. Жуков, Л. Д. Попова, О. В. Зайцева [и др.]. - Харьков : «Торнадо», 2000. - 438 с.
Рымарчук Г. В. Оздоровление детей в районах экологического неблагополучия / Г. В. Рымарчук // РМЖ. - 1999. -№7. - С. 89-84.
Цыганенко А. Я. Научные основы обоснования прогноза потенциальной опасности детергентов в связи с регламентацией в воде водоемов / А. Я. Цыганенко, В. И. Жуков, Н. Г. Щербань [и др.]. - Белгород, 2001. - 422 с. Цыганенко А. Я. Эколого-гигиеническая характеристика детергентов на основе алкилфенолов, изононилфенолов и вторичных спиртовых фракций С10-20 как загрязнителей водоемов / А. Я. Цыганенко, Л. Г. Шаповал, В. Н. Зовский [и др.]. - Белгород: «Белвитамины», 2000. - 170 с.
Цыганенко А. Я. Структурно-метаболические механизмы формирования нарушений клеточного и гуморального иммунитета под воздействием детергентов в связи с проблемой охраны водных экосистем / А. Я. Цыганенко, В. И. Жуков, Н. Г. Щербань [и др.]. - Харьков, 2001. - 413 с.
10. Чернушенко Е. Д. Иммунология и иммунопатология заболеваний легких / Е. Д. Чернушенко, Л. С. Когосова. - Киев: Здоров ‘я. - 1981. - 208 с.
6.
7.
9.
УДК 612. 017. 1:616-099-036. 11-092. 9:547. 395
ВЛИЯНИЕ ОКСИЭТИЛИРОВАННЫХ АЛКИЛФЕНОЛОВ НА СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ПОДОСТРОМ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ОПЫТЕ
Маракушин Д. И., Наконечная О. А., Максимова И. Г.
Резюме. Изучено влияние «неонолов» на иммунологическую реактивность экспериментальных животных в условиях подострого токсикологического опыта. Ксенобиотики в дозах 1/10 и 1/100 ДЛ50 ингибируют клеточное звено иммунной системы. Это проявлялось снижением содержания в сыворотке крови общей популяции Т-лимфоцитов, субпопуляции Т-лимфоцитов - Т-хелперов, Т-супрессоров и В-лимфоцитов. «Неонолы» марок АФ9-6, АФ9-10, АФ9-12 в дозах 1/10 и 1/100 ДЛ50 способны ингибировать синтез регуляторных цитокинов и медиаторов индукции остро-фазовых белков, что сопряжено с угнетением антителообразующей функции иммунокомпетентных клеток и нарушения кооперативного взаимодействия клеточного и гуморального иммунитета. Критериально-значимыми диагностическими показателями иммунной дисфункции являлись регуляторные медиаторы ИС - ИЛ-1Р, ИЛ-4, ИЛ-8 и ИЛ-10.
Ключевые слова: иммунологическая реактивность, неонолы, цитокины, интерлейкины.
УДКВ12. Q17. 1:616-099-036. 11-Q92. 9:547. 395
ВПЛИВ ОКСИЕТИЛЬОВАНИХ АЛКІЛФЕНОЛІВ НА СТАН КЛІТИННОГО І ГУМОРАЛЬНОГО ІМУНІТЕТУ В ПІДГОСТРОМУ ТОКСИКОЛОГІЧНОМУ ДОСЛІДІ
Маракушин Д. І., Наконечна О. А., Максимова І. Г.
Резюме. Вивчено вплив «неонолів» на імунологічну реактивність тварин в умовах підгострого токсикологічного досліду. Ксенобіотики у дозах 1/1Q и 1/1QQ ДЛ5() інгібують клітинний ланцюг імунної системи. Це проявляється зниженням вмісту у сироватці крові загальної популяції T-лімфоцитів, субпопуляції T-лімфоцитів - T-хелперів, T-супресорів та В-лімфоцитів. «Неоноли» марок AФ9-6, AФ9-10, AФ9-12 у дозах 1/10 и 1/100 ДЛ50 інгібують синтез регуляторных цитокінів і медіаторів індукції гострофазо-вих білків, що спряжено з пригніченням антитілоутворюючої функції імунокомпетентних клітин і порушенням кооперативної взаємодії клітинного і гуморального імунітету. Критеріально-значущими діагностичними показниками імунної дисфункції є регуляторні медіатори імунної системи - ІЛ-1Р, ІЛ-4, ІЛ-8 та ІЛ-10.
Ключові слова: імунологічна реактивність, неоноли, цитокіни, інтерлейкіни.
UDC В12. 017. 1:616-099-036. 11-092. 9:547. 395
The infiuence of Oxyethyiized Aikyiphenois on the State of Ceiiuiar and Humorai immunity during Subacute Toxicoiogicai Experiment
Marakushin D. I., Nakonechnaya O. A., Maksimova I. G.
Summary. The influence of «neonols» on immunological reactivity of experimental animals has been studied in the conditions of subacute toxicological experiment. As object of research the group of chemical compounds, which are called «neonols», was chosen, related to oxyethylized alkylphenols (OA) AF 9-В, AF9-1Q and AF9-12 with the regulated physico-chemical properties.
Studied xenobiotics are belong to moderately toxic compounds (3 class of danger) possessing the expressed cumulative properties. The median lethal doses (DL5Q) for white rats are defined at the level of 4,2±0,5; 4,3±0,4; 3,4±0,62 g/kg mass of animal and coefficients of cumulation at the level 2,2В; 3,0; 2,2 accordingly for “neonols” AF9-6, AF9-1Q and AF9-12.
In experimental part of work the eugamic mouses of CBA/Laс population were used, weight 23-25g, which were daily entered water solutions of xenobiotics in doses 1/10, 1/100, 1/1000 DL50 in the morning before eating. The median lethal doses for mouses were established at the level 4,3±0,4; 4,5±0,3 and 3,6±0,5, accordingly at the influence of “neonols” AF9-6, AF9-1Q and AF9-12. Duration of subacute experiment was 45 days. The program of research has comprised the study of the state of cellular and humoral immunity. For estimation of the state of the cellular link of immunological system general population of T-lymphocytes (CD3+) was determined, subpopulation of T-lymphocytes: T-helpers (CD4+), T-supressors (CD8) and B-lymphocytes (CD19) in the blood plasma, using monoclonal antibodies.
Mediators of the immune system - interleukins: IL-1 p, IL-2, IL-4, IL-10, IL-6 and tumor necrosis factor -alfa (TNF-a) were determined in the blood by hardphase of enzyme immunodetection with help of diagnostic test-system «Protein contour» (St. Petersburg, Russia). Research of IL-8 has been realized by test-system-«Diaclone» (France). The immunoglobulins (Ig): A, M, G, D, E in blood plasma were studied by the method of enzyme immunodetection on the enclosed instructions to the sets of reagents on the immune-enzyme analyzer STAT - FAX 300 (USA).
«Neonols» on the basis of OA in the conditions of subacute toxicological experiment under actcion of 1/10 and 1/100 DL5Q inhibit functional activity of cellular link of the immune system, that manifested by decline of contents in blood plasma of general population of T-lymphocytes (CD3+), subpopulation of T-lymphocytes - T-helpers (CD4), T-supressors (CD8), and B-lymphocytes (CD19). «Neonols» AF9-6, AF9-1Q, AF9-12 in doses 1/10 and 1/100 DL5Q are able to inhibit synthesis of regulatory cytokines and mediators of induction of acute-phase proteins, that interfaces with depression of antibody-forming function of immunocompetent cells and disturbances of cooperative interaction of cellular and humoral immunity. «Neonols» AF9-6, AF9-1Q, AF9-2 in doses 1/10 and 1/100 DL5Q on a background of inhibition of the cellular link of immune system are able to inhibit the synthesis of regulatory cytokines and mediators of induction of acute-phase proteins, that interfaces with depression of antibody-forming function of immunocompetent cells and disturbances of cooperative interaction of cellular and humoral immunity.
In all cases xenobiotics in doses 1/1000 DL5Q did not affect on immunobiological reactivity of experimental animals.
Regulatory mediators IS were most sensible criterially-significant diagnostic indexes at the estimation of the OA influence on immunobiological reactivity of an organism - IL-1 p, IL-4, IL-8 and IL-10 which can be monitoring indexes in prenosological diagnostics of immune disfunction.
Key words: immunological reactivity, neonols, cytokines, interleukines.
Рецензент - проф. Костенко В. О.
Стаття надійшла 22. 05. 2013 р.
