CC BY
10
УДК 616-091.0 DOI: 10.18699/SSMJ20210503
Влияние окисленного декстрана на гепатоциты крыс при токсическом гепатозе смешанной этиологии
В.А. Шкурупий1' 2, М.А. Карпов1' 2, В.Д. Клочин1
1 ФИЦ фундаментальной и трансляционной медицины 630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2
2 Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России 630091, г. Новосибирск, Красный просп., 52
Резюме
Цель исследования - изучить эффективность окисленного декстрана (ОД) в защите от повреждения паренхимы печени при сочетанном остром и хроническом токсическом воздействии растворов этилового спирта и тетра-хлорметана. Материал и методы. 150 крысам-самцам породы Вистар интраперитонеально вводили токсиканты - 50%-й раствор CCl4 на оливковом масле и 5%-й водный раствор окисленного декстрана (ОД) с молекулярной массой 40 кДа, перорально - 6,5%-й водный раствор этилового спирта. Тетрахлорметан вводили один раз в день, затем три дня по одному разу - только водный раствор этилового спирта, последний не вводили в дни назначения тетрахлометана и ОД. Животные получали ОД с 1-го дня введения токсикантов в течение 60 суток. В следующие 30 дней не назначали токсиканты, но вводили ОД. Результаты и их обсуждение. У животных, которым вводили только токсиканты, наблюдали гепатоциты в состоянии вакуольной дистрофии, занимавшие несколько больше 40 % паренхимы органа, и гепатоциты в состоянии некроза, занимавшие от 37 до 28 % паренхимы в разные периоды наблюдений. Включение ОД в схему профилактики некротических осложнений уменьшало их в 3-4 раза по сравнению с животными, не получавшими ОД. Эти данные свидетельствуют о высокой гепатопротекторной эффективности ОД.
Ключевые слова: печень, токсический гепатоз, окисленный декстран, гепатопротекторы.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Автор для переписки: Шкурупий В.А., e-mail: [email protected]
Для цитирования: Шкурупий В.А., Карпов М.А., Клочин В.Д. Влияние окисленного декстрана на гепатоциты крыс при токсическом гепатозе смешанной этиологии. Сибирский научный медицинский журнал. 2021; 41 (5): 25-30. doi: 10.18699/SSMJ20210503
Effect of oxidized dextran on rat hepatocytes in toxic hepatosis of mixed etiology
V.A. Shkurupiy1' 2, M.A. Karpov1' 2, V.D. Klochin1
1 Federal Research Center of Fundamental and Translational Medicine 630117, Novosibirsk, Timakov str., 2
2 Novosibirsk State Medical University of Minzdrav of Russia 630091, Novosibirsk, Krasny av., 52
Abstract
The aim of research was to study the oxidized dextran protection effect against hepatic parenchyma defect at combinated acute and chronic toxicity of ethyl alcohol and tetrachloromethane solutions. Materials and methods. 150 male Wistar rats were injected by toxicants with intraperitoneal administration: 50 % CCl4 in olive oil solution and 5 % oxidized dextran (OD) aqueous solution with molecular weight 40 kDa and peroral 6.5 % ethyl alcohol aqueous solution. Tetrachloromethane was injected once a day, and then only ethyl alcohol aqueous solution was administrated 1 time per day during 3 days. The ethyl alcohol aqueous solution was not administered on the days of the of tetrachlomethane and OD injections. OD has been administered from the 1st day of the toxicants injection till 60 days. OD without toxicants has been injected for the next 30 days. Results and discussion. In animals that were injected only with toxicants, hepatocytes were in a state of vacuolar dystrophy, which occupied slightly more than 40 % of the organ parenchyma, and
hepatocytes in a state of necrosis, which occupied from 37 to 28 % of the parenchyma at different periods of observation. The OD inclusion in the scheme for the prevention of necrotic complications reduced them from 3 to 4 times more than in animals that did not receive OD. The data obtained indicate the OD high hepatoprotective effectiveness.
Key words: liver, toxic hepatosis, oxidized dextran, hepatoprotectors.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Correspondence author: Shkurupiy V.A., e-mail: [email protected]
Citation: Shkurupiy V. A., Karpov M.A., Klochin V.D. Effect of oxidized dextran on rat hepatocytes in toxic hepatosis of mixed etiology. Sibirskiy nauchnyy meditsinskiy zhurnal = Siberian Scientific Medical Journal. 2021; 41 (5): 25-30. [In Russian]. doi: 10.18699/SSMJ20210503
Введение
Печень - основной орган гомеостазирования у млекопитающих, одна из важнейших выполняемых им функций - детоксикационная. Ее неэффективность сопряжена с развитием дистрофических и некротических процессов в гепатоцитах и, как следствие, постнекротического фибрози-рования органа. Постоянное увеличение количества промышленных токсикантов в сочетании с высоким уровнем потребления алкогольной продукции приводит к возрастанию частоты острых и хронических токсических поражений печени
[1]. Около 2 млрд людей в мире кроме промышленных токсикантов потребляют различного рода спиртные напитки и около 76 млн страдают заболеваниями, связанными с их потреблением
[2]. Длительное, повторяющееся повреждение печени токсическими веществами в 20 % случаев приводит к хронизации патологического процесса, фиброзу и циррозу [3]. Смертность от токсических поражений печени достигла 59 % и ежегодно растет [4]. В настоящие время эффективные методы профилактики и лечения цирроза отсутствуют, а процесс фиброза печени считается необратимым [5]. Гипотетически одним из вероятных способов профилактики фиброза и цирроза (кроме санитарно-гигиенических мероприятий) является профилактика деструктивных (некроз) изменений клеток в паренхиме печени. Решение этой проблемы представляется проблематичным, поскольку согласно канонам общей патологии клетки в состоянии дистрофии «обречены» на гибель механизмом некроза. Однако академик Д.С. Саркисов [6] не исключал возможность профилактики гибели клеток путем развития внутриклеточной регенерации. Очевидно одно: регенерировать могут живые клетки с поврежденными структурами цитоплазмы, т.е. в состоянии дистрофии. Но доказательная база этого представляется сложной.
В настоящее время существует широкий перечень гепатопротективных препаратов, обладающих защитными свойствами, механизм влияния которых недостаточно изучен [7]. Ранее
нами показано уменьшение некротических и дистрофических изменений гепатоцитов до 80 % и отсутствие токсичности окисленного декстрана (ОД) при его использовании в эксперименте [8, 9]. Цель настоящего исследования заключалась в изучении эффективности ОД в защите от повреждения паренхимы печени при сочетанном остром и хроническом токсическом воздействии растворов этилового спирта и тетрахлорметана.
Материал и методы
Исследование проводили на 150 крысах-самцах породы Wistar с массой тела 280-320 г, полученных из вивария ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, в соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики и принципами гуманного обращения с лабораторными животными. Крыс содержали при оптимальном температурном режиме, они имели свободный доступ к воде и пище.
Токсический гепатоз моделировали путем ин-траперитонеального введения 50%-го раствора четыреххлористого углерода в оливковом масле и перорального введения 6,5%-го водного раствора этилового спирта [10]. Модель была нами модифицирована с целью снижения числа летальных исходов: CCl4 вводили 1 раз в 4 суток, на следующие сутки после введения тетрахлорметана крысы в течение трех дней получали per os этиловый спирт.
Растворы этилового спирта и CCl4 в соотношении 1:1 вводили до 60-х суток поочередно: 1 день - CCl4, 3 дня - этилового спирта. Кроме того, интраперитонеально вводили 5%-й водный раствор ОД (молекулярная масса 40 кДа). Раствор этилового спирта не назначали в дни введения растворов CCl4 и ОД. Животные были разделены на пять групп, по 10 особей на каждый срок.
В 1-ю группу вошли интактные крысы. Во второй группе (нелеченные) животным в первые сутки вводили раствор CCl4 из расчета 1 мл/кг массы тела, на 2-е, 3-и и 4-е сутки - водно-спир-товый раствор из расчета 2 мл на особь из поилки.
Цикл и последовательность введения повторяли до 60-х суток, материал для исследования получали на 31-е, 61-е и 91-е сутки. Крысы третьей группы (леченые с первых суток) получали растворы СС14 и этилового спирта по аналогичным циклам до 60-го дня, дополнительно в те же дни, что и водно-спиртовой раствор - внутрибрюшин-но 5%-й водный раствор ОД из расчета 2 мл на особь, материал для исследования забирали на 31-е и 61-е сутки. Животным 4-й группы (леченые с 30 суток) токсиканты вводили в том же режиме, что и крысам 3-й группы, раствор ОД назначали с 30-х суток по 60-е сутки, материал для исследования получали на 61-е и 91-е сутки. Крысы 5-й группы получали растворы СС14, этилового спирта и ОД в аналогичном режиме, при этом с 60-х по 90-е сутки - дополнительно раствор ОД, материал для исследования получали на 91-е сутки.
Перед забором образцов печени животных вводили в состояние наркоза путем внутримышечного введения смеси растворов тилетамина и золазепама по 5 мг/мл (10 мкл / кг массы тела), после чего производили декапитацию. Образцы печени фиксировали в 10%-м нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заключали в парафин. Из каждого образца на микротоме Мюгот НМ 355S (ТЪег-
mo Fisher Scientific, США) готовили по 4-6 срезов толщиной 5-6 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином [11, 12]. Морфологическое и морфо-метрическое исследование печени проводили с использованием светового микроскопа AxioStar (Carl Zeiss, Германия); при помощи тестовой системы из 25 точек (16 квадратов) подсчитывали численные плотности двуядерных гепатоцитов (Nai), в единице тестовой площади 1600 мкм2 определяли объемные плотности (Vv) гепатоцитов в состоянии дистрофии и некрозов [13, 14].
Статистическую обработку результатов исследования проводили, вычисляя среднее арифметическое значение (М), ошибку среднего арифметического значения (m), и представляли в виде M ± m. Различия между группами оценивали с помощью критерия Стьюдента, достоверными считались результаты при р < 0,05.
Результаты и их обсуждение
При исследовании результатов у крыс из 2-й группы (нелеченные) обнаружили гепатоциты в состоянии вакуольной дистрофии, которые занимали от 42 до 47 % паренхимы печени в разные периоды исследования (таблица). Некротизиро-ванные гепатоциты располагались в паренхиме печени диссеминированно, так же как и дистро-
Показатель Группа Время после начала токсического воздействия, сут
30 60 90
Объемная плотность (Уу) дистрофически измененных гепатоцитов, % 1-я группа 1,6 ± 0,29 - -
2-я группа 42,2 ± 0,41 42,3 ± 1,15 47,4 ± 1,38
3-я группа 58,3 ± 1,64* 62,9 ± 1,37* -
4-я группа - 60,4 ± 1,32* 71,1 ± 1,18*
5-я группа - - 57,9 ± 1,51*
Объемная плотность (Уу) некротизи-рованных гепатоцитов, % 1-я группа 0,3 ± 0,13 - -
2-я группа 36,9 ± 1,51 27,2 ± 1,31 28,2 ± 1,17
3-я группа 12,9 ± 1,14* 13,7 ± 0,96* -
4-я группа - 9,6 ± 0,65* 7,3 ± 0,67*
5-я группа - - 10,4 ± 1,05*
Количество (Ыш) двуядерных гепато-цитов 1-я группа 0,6 ± 0,08 - -
2-я группа 0,5 ± 0,07 0,6 ± 0,08 0,3 ± 0,06
3-я группа 0,6 ± 0,07 0,4 ± 0,05* -
4-я группа - 1,0 ± 0,12* 0,6 ± 0,08*
5-я группа - - 0,8 ± 0,14*
Примечание. * - отличие от величины соответствующего показателя группы контроля статистически значимо при р < 0,05.
Таблица. Структурные преобразования в паренхиме печени крыс, леченных ОД, при остром и хроническом токсическом гепатозах
Table. Structural changes in the liver parenchyma of rats treated with oxidized dextran in acute and chronic
toxic hepatosis
фически измененные гепатоциты, таких клеток было меньше (37, 27 и 28 % паренхимы органа на 30-е, 60-е и 90-е сутки эксперимента соответственно) (см. таблицу). Эти данные свидетельствуют о том, что не все дистрофически измененные клетки некротизируются даже через достаточно большой срок после воздействия повреждающих факторов. У животных, получавших токсиканты и ОД, наблюдали гепатоциты в состоянии вакуольной дистрофии, которые были крупнее, чем гепатоциты в норме, и у крыс, получавших токсиканты, - видимо, поскольку они пиноцитировали большое количество лизосомо-тропного [15, 16] ОД, такие клетки занимали от 60 до 70 % паренхимы органа (см. таблицу). При этом объемная плотность некротически измененных гепатоцитов у животных, получавших с токсикантами ОД, была в 3-4 раза меньше, чем у крыс, которым ОД не вводили (см. таблицу).
Из приведенных данных очевидно, что ОД обладает выраженными гепатопротекторными свойствами и способствует стимуляции процессов внутриклеточной репаративной регенерации, о возможности которой у млекопитающих писал академик Д.С. Саркисов [6]. О том, что это не результат активации деления гепатоцитов, косвенно свидетельствует отсутствие увеличения численной плотности двуядерных гепатоцитов (см. таблицу) - результата эндомитозов.
Очевидно, что эти свойства ОД сопряжены с его лизосомотропностью [17]. Ранее нами показано, что ОД способен стимулировать репаратив-ные процессы в печени при профилактическом его введении мышам, зараженным вирусами птичьего гриппа [17], а также в составе противотуберкулезной композиции [9], но механизмы этого плохо изучены. Для исследования развития процессов внутриклеточной репаративной регенерации нужна поврежденная, но живая клетка. Этим условиям отвечают гепатоциты в состоянии вакуольной дистрофии. Использованные в настоящем эксперименте токсиканты метаболизируются ферментами (оксигеназы смешанных функций) гепатоцитов, расположенными в гладком эндо-плазматическом ретикулуме. Продукты метаболизма токсикантов инициируют образование липидных перекисей в мембранах гладкого эндо-плазматического ретикулума, и в первую очередь повреждают его мембраны, проницаемость которых увеличивается. Это и формирует «картину» вакуольной дистрофии. Данные соединения в своих патогенных эффектах «короткодистантны». Нами показано (электронно-микроскопически), что на ранних стадиях действия СС14 гранулярный эндоплазматический ретикулум, где произ-
водится синтез «для» гепатоцитов и на «экспорт», повреждается позднее гладкого [15].
Следует обратить внимание на еще один феномен, связанный с лизосомотропностью ОД. В связи с медленной биодеградабельностью (по результатам с тритиевой меткой) [9] ОД выводится из организма через 7 суток. Ранее в макрофагах мы наблюдали явление, названное нами феноменом пролонгированной персистенции лизосомо-тропных факторов разной природы, избирательно накапливающихся в вакуолярно-лизосомальном аппарате клеток в связи с медленным деградированием или при отсутствии такового [16]. Длительное (6 месяцев) лечение мышей противотуберкулезной композицией изониазида с ОД приводило к гипертрофии эпителиоидных клеток типа А в связи с гиперплазией их внутриклеточных мембран в 2 раза, прикрепленных рибосом -в 2 раза и свободных рибосом в полисомах - в 3 раза [18]. Поглощение перитонеальными макрофагами синтетических наноалмазов увеличивало их прорегенеративный потенциал, повышало экспрессию и секрецию лизосомальных проте-аз - катепсина В и D, матриксных металлопро-теиназ 1 и 9 [19]. ОД усиливает альтернативную активацию макрофагов [20]. Эти данные свидетельствуют о том, что феномен пролонгированной персистенции в вакуолярном аппарате клеток лизосомотропных веществ, если они не обладают деструктивными свойствами в отношении поглотивших их клеток, может проявляться неспецифической стимуляцией активности пластических процессов в них. Возможно, что данный феномен имел место и в гепатоцитах животных, получавших ОД на всем протяжении эксперимента, а не только в фагоцитирующих клетках.
Заключение
ОД обладает свойствами гепатопротектора и способностью стимулировать процессы внутриклеточной репаративной регенерации гепатоцитов после токсических повреждений печени. Эти свойства, видимо, могут проявиться способностью ОД профилактировать постдеструктивные фибротические осложнения в печени, но механизмы данного феномена требуют дальнейших исследований.
Список литературы / References
1. Альтшулер В.Б. Алкоголизм. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 264 с.
Al'tshuler V.B. Alcoholism. Moscow: GJeO-TAR-Media, 2010. 264 p. [In Russian].
2. Global status report on alcohol 2004. Geneva: WHO, Department of Mental Healthand Substance Abuse, 2004. 94 p.
3. Азжаргал Б., Батбаатар Г., Бира Н. Сравнительный анализ некоторых лабораторных показателей при алкогольном и вирусных гепатитах. Сиб. мед. ж. (Иркутск). 2013; 118 (3): 38-40.
Azzhargal B., Batbaatar G., Bira N. Comparative analysis of some laboratory parameters in alcoholic and viral hepatitis. Sibirskiy meditsinskiy zhurnal (Irkutsk) = Siberian Medical Journal (Irkutsk). 2013; 118 (3): 38-40. [In Russian].
4. Shield K.D., Rylett M., Rehm J. Успехи и упущенные возможности общественного здравоохранения. Тенденции в потреблении алкоголя и смертности, относимой на счет алкоголя, в Европейском регионе ВОЗ, 1990-2014 гг. М.: Европейский офис ВОЗ по профилактике неинфекционных заболеваний и борьбе с ними, 2015. 81с.
Shield K.D., Rylett M., Rehm J. Public health successes and missed opportunities trends in alcohol consumption and attributable deaths in the European Region WHO, 1990-2014. Moscow: WHO European Office for the Prevention and Control of Noncommuni-cable Diseases, 2015. 81 p. [In Russian].
5. Буко В., Лукивская О., Белонов-ская Е. Перспективы противофиброзной терапии хронических заболеваний печени. Наука и инновации. 2013; 130 (12): 56-60.
Buko V., Lukivskaja O., Belonovskaja E. Prospects for anti-fibrotic therapy of chronic liver diseases. Nau-ka i innovatsii = Science and Innovation. 2013; 130 (12): 56-60. [In Russian]
6. Саркисов Д.С. Очерки по структурным основам гомеостаза. М.: Медицина, 1977. 351 с.
Sarkisov D.S. Essays on the structural foundations of homeostasis. Moscow: Meditsina, 1977. 351 p. [In Russian].
7. Матвеев А.В. Анализ международных исследований по препаратам группы лекарств для печени. Симферополь: АРИАЛ, 2013. 384 с.
Matveev A.V. Analysis of international studies on drugs in the group of drugs for the liver. Simferopol: ARIAL, 2013. 384 p. [In Russian].
8. Шкурупий В.А., Потапова О.В., Шарко-ва Т.В., Шестопалов А.М., Троицкий А.В. Влияние профилактического введения окисленного декстрана на процессы повреждения и репаративной регенерации в печени мышей после их инфицирования вирусом гриппа A/H5N1. Бюл. эксперим. биол. и мед. 2014; 158 (10): 485-490.
Shkurupy V.A., Potapova O.V., Sharkova T.V., Shestopalov A.M., Troitskii A.V. Effects of preventive administration of oxidized dextran on liver injury and reparative regeneration in mice infected with influenza A/H5N1 virus. Bull. Exp. Biol. Med. 2015; 158: 483488.
9. Шкурупий В.А. Туберкулезный гранулематоз. Цитофизиология и адресная терапия. М.: РАМН, 2007. 536 с.
Shkurupy V.A. Tuberculous granulomatosis. Cy-tophysiology and targeted therapy. Moscow: RAMN, 2007. 536 p. [In Russian].
10. Волчек В.С., Сотникова В.В., Колесникова К.И., Дохов О.В. Использование токсического действия тетрахлорметана при индуцировании экспериментального цирроза печени у кроликов и крыс. Актуал. науч. исслед. в соврем. мире. 2018; 43 (6): 124-128.
Volchek V.S., Sotnikova V.V., Kolesnikova K.I., Dokhov O.V. The use of the toxic effect of carbon tetrachloride in the induction of experimental liver cirrhosis in rabbits and rats. Aktual'nyye nauchnyye issledovani-ya v sovremennom mire = Actual Scientific Research in the Modern World. 2018; 43 (6): 124-128. [In Russian].
11. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника. М.: Медицина, 1996. 544 с.
Sarkisov D.S., Perov Ju.L. Microscopic technique. Moscow: Meditsina, 1996. 544 p. [In Russian].
12. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии: учебное пособие. Арх. патол. 2004; 66 (3): 61.
Avtandilov G.G. Basic lines of quantitative pathological anatomy. Guide. Arkhiv patologii = Archive of Pathology. 2004; 66 (3): 61. [In Russian].
13. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.
Avtandilov G.G. Medical morphometry. Manual. Moscow: Meditsina, 1990. 384 p. [In Russian].
14. Weibel E.L. Stereological methods. London: Academ, 1979. 415 p.
15. Шкурупий В.А. Ультраструктура клеток печени при стрессе. Новосибирск: Наука, 1989. 140 с.
Shkurupij V.A. Ultrastructure of liver cells under stress. Novosibirsk: Nauka, 1989. 140 p. [In Russian].
16. Шкурупий В.А., Курунов Ю.Н., Яковчен-ко Н.Н. Лизосомотропизм - проблемы клеточной физиологии и медицины. Новосибирск, 1999. 289 с.
Shkurupij V.A., Kurunov Ju.N., Jakovchenko N.N. Lysosomotropism - problems of cell physiology and medicine. Novosibirsk, 1999. 289 p. [In Russian].
17. Шкурупий В.А. Цитоморфологические аспекты патогенеза вирусного гриппа и его неспецифической профилактики. Новосибирск: Наука, 2019. 259 с.
Shkurupij V.A. Cytomorphological aspects of viral influenza pathogenesis and its nonspecific prophylaxis. Novosibirsk: Nauka, 2019. 259 p. [In Russian].
18. Шкурупий В.А., Козяев М.А., Надеев А.П. Ультраструктура эпителиоидных клеток типа А при БЦЖ-гранулематозе и введении лизосомотропной формы изониазида. Бюл. эксперим. биол. и мед. 2006; 141 (4): 474-477.
Shkurupii V.A., Kozyaev M.A., Nadeev A.P. Ultrastructural characteristics of type A epithelioid cells during BCG-granulomatosis and treatment with lysosomotropic isoniazid. Bull. Exp. Biol. Med. 2006; 141: 487-490.
19. Нещадим Д.В., Архипов С.А., Шкуру-пий В.А. Ахраменко А.В., Троицкий А.В., Карпов М.А. Исследования влияния наноалмазов на прорегенеративный потенциал макрофагов in vitro. Фундам. исслед. 2015; 6 (2): 1222-1226.
Neshchadim D.V., Arkhipov S.A., Shkurupiy V.A. Akhramenko A.V., Troitsky A.V., Karpov M.A. Investigation of the effect of nanodiamonds on the regenerative potential of macrophages in vitro. Fundamen-
tal'nye issledovaniya = Fundamental research. 2015; 6 (2): 1222-1226. [In Russian].
20. Чечушков А.В., Кожин П.М., Зайцева Н.С., Лемза А.Е., Меньщикова Е.Б., Троицкий А.В., Шкурупий В.А. Окисленный декстран усиливает альтернативную активацию макрофагов мышей оппозитных линий. Бюл. эксперим. биол. и мед. 2015; 160 (12): 749-753.
Chechushkov A.V., Kozhin P.M., Zaitseva N.S., Lemza A.E., Men'shchikova E.B., Troitskii A.V., Shku-rupy V.A. Oxidized dextran enhances alternative activation of macrophages in mice of opposite lines. Bull. Exp. Biol. Med. 2016; 160 (6). 783-786.
Сведения об авторах:
Вячеслав Алексеевич Шкурупий, проф., академик РАН, ORCID: 0000-0002-5078-4216, e-mail: [email protected]
Михаил Александрович Карпов, к.м.н., ORCID: 0000-0002-8200-3998, e-mail: [email protected] Виталий Дмитриевич Клочин, ORCID: 0000-0002-5418-1375, e-mail: [email protected]
Information about the authors:
Viacheslav A. Shkurupiy, professor, academician of the RAS, ORCID: 0000-0002-5078-4216, e-mail: [email protected]
Mikhail A. Karpov, candidate of medical sciences, ORCID: 0000-0002-8200-3998, e-mail: [email protected] Vitalii D. Klochin, ORCID: 0000-0002-5418-1375, e-mail: [email protected]
Поступила в редакцию 31.07.2021 Received 31.07.2021
Принята к публикации 19.09.2021 Accepted 19.09.2021
