Влияние новой калиевой соли на основе 3-тиетанилзамещенного триазола на систему гемостаза Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Биомедицина • № 3, 2016, С. 59-67

Влияние новой калиевой соли на основе 3-тиетанилзамещенного триазола на систему гемостаза

A.B. Самородов, Ф.Х. Камилов, А.Р. Халимов, Е.Э. Клен, Ф.А. Халиуллин

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Уфа

Контактная информация: СамородовАлександрВладимирович, [email protected]

В данной работе представлены результаты исследования активности новой калиевой соли 2-[3-бром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты в отношении системы гемостаза. Установлено, что калиевая соль 2-[3-бром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты проявляет высокую антиагрегационную активность в условиях in vitro и in vivo и эффективность в качестве средства профилактики генерализованного тромбоза в эксперименте в сравнении с применяемыми в практике лекарственными средствами. Результаты проведенного исследования позволяют считать данное соединение перспективным антитромботическим средством.

Ключевые слова: производные 3-тиетанилзамещенного триазола, система гемостаза, антитром-ботическая активность.

Введение

Тромбогемморагические заболевания в настоящее время являются наиболее распространенными видами патологии человека, удерживающими первое место среди причин инвалидизации и смертности, а также в значительной степени определяющие качество и среднюю продолжительность жизни населения [6]. Несмотря на широкий выбор лекарственных препаратов, селективных средств коррекции системы гемостаза на сегодняшний день не существует. Результаты предыдущих исследований, проведенных на кафедрах биологической и фармацевтической химии ГБОУ ВПО «Башкирского государственного медицинского университета» Минздрава России, направленных на поиск ан-тиагрегантов среди новых производных

азотсодержащих гетероциклов, демонстрируют высокий потенциал отдельных соединений данного класса производных [7].

Целью данной работы явилось представление первичных результатов исследования новой калиевой соли 2-[3-бром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио] уксусной кислоты [1] (соединение I) в отношении системы гемостаза.

Материалы и методы

Дизайн исследования.

Вся экспериментальная работа выполнена в соответствии с рекомендациями «Руководства по доклиническому изучению новых фармакологических веществ» [2] и проведена в несколько этапов. На первом этапе в условиях

in vitro, на крови здоровых доноров, оценили влияние соединения I и препаратов сравнения на адгезивно-агре-гационную функцию тромбоцитов и коагуляционный компонент гемостаза. Вторым этапом оценили эффективность антитромботического эффекта соединения I и препаратов сравнения на исходно компрометированных тромбоцитах в условиях in vitro: методом активированной тромбоэластографии смоделировали гиперактивность системы гемостаза с последующей оценкой эффективности препаратов сравнения и впервые синтезированного соединения I; в условиях ex vivo осуществили анализ функциональной активности тромбоцитов при различных тромбо-ишемических процессах для получения тромбоцитов в состоянии гиперагрегации и установили эффективную концентрацию (IC50) впервые синтезированного соединения I и препаратов-антиагрегантов. Завершили исследование изучением эффективности соединения I и препаратов сравнения при экспериментальном тромбозе на мышах.

Экспериментальная часть работы в условиях in vitro выполнена на крови доноров-мужчин и пациентов с остро возникшим тромбозом. Моделирование гиперактивности системы гемостаза в условиях in vitro методом активированной тромбоэластографии выполнено на крови здоровых доноров-мужчин в возрасте 18-24 лет. Исследование было одобрено этическим комитетом ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России (№ 2 от 17.10.2012 г.). От всех участников исследования было получено информированное согласие до момента забора крови.

В исследовании, направленном на изучение эффективности потенциальных антиагрегантов в условиях состоявшегося тромбоза, была использована кровь пациентов, находящихся в ане-стезиолого-реанимационном отделении I Республиканской клинической больницы им. Г.Г. Куватова (г. Уфа) в период 2012-2014 гг., со следующими заболеваниями: острый коронарный синдром (ОКС) - 22 пациента; тромбоэмболия легочной артерии (ТЭЛА) -29 пациентов; тромбоз глубоких вен (ТГВ) / мезентериальный тромбоз (МТ) - 23 пациента. Исходные показатели агрегации тромбоцитов госпитализированных пациентов были получены при заборе венозной крови до начала проведения антитромботической/тром-болитической терапии, согласно плану проведения интенсивной терапии. Анализу подвергали только результаты на образцах крови пациентов с установленным позже диагнозом, соответствующим указанным выше нозологиям. При выявлении у пациента тромбоцитов в состоянии гиперагрегации проводили определение зависимости «концентрация-эффект» исследуемого соединения и препаратов сравнения с расчетом IC50 - концентрации, при которой агрегация тромбоцитов снижается на 50%.

Взятие крови и центрифугирование. Забор крови проводили с использованием систем вакуумного забора крови BD Vacutainer® (Dickinson and Company, США). В качестве стабилизатора венозной крови использовали 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении 9:1.

Все тесты проводили на обогащенной и обедненной тромбоцитами плазмах. Образцы богатой тромбоцитами плазмы получали центрифугировани-

ем цитратной крови при 100g в течение 10 мин, бестромбоцитарной плазмы -при 300g в течение 15 мин. В работе использовалась центрифуга 0ПН-3.02 (ОАО ТНК «ДАСТАН», Киргизия).

Агрегация тромбоцитов. Исследование влияния соединения I и препаратов сравнения на агрегацию тромбоцитов в условиях in vitro на крови человека осуществляли с помощью лазерного анализатора агрегации тромбоцитов «Биола 230LA» (ООО НПФ «БИОЛА», Россия) [4]. В качестве индуктора агрегации использовали аде-нозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл, коллаген - 5 мг/мл, адреналин - 5 мкг/мл и ристомицин - 10 мг/мл производства «Технология-Стандарт» (г. Барнаул, Россия).

Коагуляционный компонент гемостаза. Определение антикоагуляцион-ной активности соединения I и гепарина натрия проводили общепризнанными клоттинговыми тестами на турбиди-метрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 (ЗАО «СОЛАР», Беларусь). Изучались показатели активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A. Clauss [2]. Определение антикоа-гуляционной активности исследуемых веществ проводили в концентрации 10 3 г/мл. В работе использовались реактивы фирмы «Технология-Стандарт» (г. Барнаул, Россия).

Тромбоэластография. Тромбоэла-стографию проводили на аппарате TEG 5000 (Haemoscope Corporation, США). При анализе тромбоэластограмм определяли общую тенденцию коагуляции (R), функциональную активность тромбоцитов и фибриногена (МА, Angle),

активность фибринолиза (CLT) и физико-механические свойства образовавшихся сгустков (G). В качестве активатора ТЭГ использовали 0,2 М раствор CaCl2, рекомбинантный тканевой фактор (Innovin®, Dade Behring, Германия) и тромбин («Технология-Стандарт», Россия).

Экспериментальные исследования в условиях in vivo выполнены c соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных для экспериментальных животных, правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ 3 51000.3-96 и 51000.4-96, ГОСТР 50258-92) и приказа Минздрава России № 199н от 01.04.2016 г. «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики».

Животные содержались в стандартных условиях вивария при естественном режиме освещения, температуре воздуха 20±2°С и влажности 55-60% в пластиковых клетках с подстилкой из древесных опилок. За 24 ч до начала исследовательской работы прекращали кормление без ограничения доступа к воде.

Моделирование коллаген-адреналинового тромбоза.

Исследовательская работа, направленная на изучение профилактического эффекта соединения I и пентоксифилли-на, как аналогового препарата при моделировании генерализованного коллаген-адреналинового тромбоза, выполнена на 60-ти белых беспородных мышах-самцах половозрелого возраста массой 20-22 г. Моделирование генерализованного тромбоза проводили по методу G.S. Di Minno [5]. Для определения

антитромботического эффекта за 1 ч до моделирования тромбоза контрольной группе мышей внутрибрюшинно вводили физ. раствор, экспериментальным группам - исследуемые вещества в эк-вимолярных концентрациях и аналогичном объеме. Моделирование генерализованного тромбоза проводили введением индукторов агрегации в хвостовую вену мышей. В качестве триггера тромбоза использовали смесь растворов коллагена и адреналина (0,5 и 0,06 мг/кг соответственно). Длительность наблюдения за животными составляла 14 суток.

Препараты сравнения.

В качестве препаратов сравнения в экспериментах использовали 3,7-диме-тил-1-(5-оксогексил)ксантин (Пенток-сифиллин, ОАО «Дальхимфарм», Россия), 2-ацетилоксибензойную кислоту (Ацетилсалициловая кислота, «Фармацевтическая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД», Китай) и гепарин натрия (ОАО «Синтез», Курган, Россия).

Статистическая обработка.

Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10.0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Для описания групп использованы медиана и межквартильный интервал. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса (для независимых наблюдений) и Фридмена (для повторных наблюдений). Выживаемость оценивали от времени инъекции в хвостовую вену взвеси коллагена и адреналина до момента гибели или по истечении 14-ти суток наблюдений. Анализ выживаемости проведен при

помощи метода Каплана-Мейера. Различия выживаемости между группами оценивались при помощи критерия Вил-коксона. Критический уровень значимости (р) для статистических критериев принимали равным 0,05. Величину IC50 соединения I и препаратов сравнения рассчитывали с помощью нелинейного фиттинга кривых, описывающих анти-агрегационную активность (%) по логарифмическому уравнению с четырьмя параметрами, используя программное обеспечение GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., США).

Результаты и их обсуждение

Результаты исследования влияния соединения I и препаратов сравнения на индуктор-индуцированную агрегацию тромбоцитов представлены в табл. 1. Установлено, что соединение I превосходит пентоксифиллин и ацетилсалициловую кислоту как по уровню, так и по спектру антиагрегационной активности - IC50, при которой агрегация тромбоцитов, индуцированная АДФ, снижается на 50%, и для соединения I составляет 1,6х10-3 М/л, для пентоксифиллина -2,2х10"3М/л.

Следующим этапом установили влияние соединения I и гепарина натрия на коагуляционный компонент системы гемостаза. Соединение I проявляет ан-тикоагуляционную активность исключительно удлинением активированного парциального тромбопластинового времени в среднем на 63,1% относительно контроля, что значительно превышает активность препарата сравнения в аналогичной концентрации (табл. 2). Влияния на другие показатели коагулограм-мы соединения I и препарата сравнения не отмечалось.

Таблица 1

Показатели антиагрегационной активности иентоксифиллина и соединения I при индуктор-индуцированной агрегации тромбоцитов Ме (25-75)

Вещество Концентрация, М/л АДФ, 20 мкг/мл Коллаген, 5 мг/мл Адреналин, 5 мкг/мл Ристоми- цин, 10 мг/мл IC50, М/л

2*10-3 61,0 (58,7-64,3) p1=0,002 p2=0,0001 100,0 (100,0-100,0) p1<0,00001 p2<0,00001 23 7 (19,6-26,5) p1<0,0001 p2<0,0001 0,0 (0,0-0,0)

Соединение I 10-3 26,4 (23,5-27,1) p1=0,0003 p2<<0,001 20,4 (16,7-24,1) p1=0,001 p2=0,0007 12,1 (9,8-14,5) p1=0,002 p2=0,003 0,0 (0,0-0,0) 1,6х10"3

510-4 13,6 (10,4-15,4) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0)

4х10-3 63,7 (58,9-9,2) p1=0,003 p2=0,001 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0)

Пентокси-филлин 2х10-3 48,4 (42,7-56,5) p1<0,00005 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 2,2х10-3

10-3 12,7 (10,5-15,6) p1<0,006 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0)

5х10-4 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0)

Аспирин 2х10-3 13,7 (10,8-16,4) 11,6 (9,5-14,7) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 4,2х10-3

10-3 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0)

Примечание: представлены медиана и межквартильный интервал, 1С50 рассчитан для АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов, н/д - нет данных п=7; р1 - уровень статистической значимости различий признаков в сравнении с контролем; р2- уровень статистической значимости различий признаков группы препарата сравнения и соединения I.

Таблица 2

Влияние соединения I и препарата сравнения на коагуляционные свойства плазмы

Соединение n АПТВ, % к контролю ПВ, % к контролю Фибриноген, % к контролю

Соединение I 7 63,1 (56,5-64,3)* 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0)

Гепарин 7 54,7 (51,3-57,4) 0,0 (0,0-0,0) 0,0 (0,0-0,0)

Примечание: представлены медиана и межквартильный интервал, п=7; АПТВ - активированное парциальное (частичное) тромбопластиновое время, ПВ - про-тромбиновое время; * - уровень статистической значимости различий признаков группы гепарина натрия и соединения I (р=0,003).

Результаты регистрации тромбоэ-ластограмм образцов цитратной крови (ЦК), активированных тканевым фактором (ТФ) и тромбином (ТР) (табл. 3), демонстрируют снижение показателя R, характеризующего время образования первых нитей фибрина (представляет собой энзиматическую часть коагуляции). Время R сокращается в среднем на 24% (p<0,001) при внесении тканевого фактора и на 43,5% (p<0,0001) - тромбина. Показатель Angle, характеризующий скорость роста фибриновой сети и её структурообразование, статистически значимо увеличивается под влиянием

активаторов свертывания. Данный показатель удлиняется в среднем на 15,1% (p<0,001) при действии тканевого фактора и на 23,5% - тромбина (p<0,001). Показатель МА, характеризующий функциональное состояние фибриногена и активность тромбоцитов, при действии тромбина и тканевого фактора удлиняется в среднем на 22,7% относительно контроля. Наиболее значимым в нашем исследовании является показатель прочности сгустка - G. Данный показатель в условиях активации свертывании тканевым фактором и тромбином статистически значимо увеличивается

Таблица 3

Динамика показателей тромбоэластограмм в присутствии изучаемых веществ в зависимости от активатора, Ме (25-75)

Показатель ЦК, n=7 ЦК+ТФ, n=7 ЦК+TR, n=7

Контроль R, min 12,8(10,3-15,6) 9,7(7,4-10,6) 7,2(5,1-8,7)

Angle, deg 44,7(39,8-49,4) 51,4(49,1-53,8)ß 56,3(53,6-59,8)ß

MA, mm 57,3(54,2-61,2) 69,4(65,2-71,8)ß 68,4(66,1-70,2)ß

G, dyn/cm2 5,7(4,5-8,1) 17,5(13,6-20,7)ß 18,6(16,4-19,2)а t

CLT, min 38,7(35,4-42,4) 44,6(42,3-47,8)а 45,6(43,2-47,4)

Пентокси-филлин R, min 14,6(13,2-15,8) 9,5(8,4-10,4) 8,4(7,2-9,4)

Angle, deg 33,7(29,6-35,2)* 43,7(41,9-45,6)** 47,8(44,8-48,2)**

MA, mm 41,8(39,8-45,6)* 53,7(51,2-55,6)** 61,7(59,2-62,8)**

G, dyn/cm2 4,1(3,6-4,4)** 11,5(10,6-13,5)* 13,9(12,5-14,7)*

CLT, min 36,2(31,2-38,7) 42,1(39,6-44,2) 43,1(39,7-44,7)

Аспирин R, min 13,6(11,2-14,4) 9,1(8,5-11,3) 9,3(8,1-10,7)

Angle, deg 33,7(29,6-35,2)** 46,4(41,2-48,5)* 41,2(37,9-44,7)*

MA, mm 36,3(31,2-39,5)* 44,7(41,2-48,5)** 39,5(37,5-43,1)*

G, dyn/cm2 3,7(3,1-4,6)* 8,4(7,2-9,4)** 7,9(7,6-8,2)**

CLT, min 38,4(36,7-39,4) 39,6(37,4-40,2) 36,2(34,1-39,8)

Соединение I R, min 13,1(12,3-15,4) 8,2(7,6-9,4) 7,4(5,9-7,0)

Angle, deg 22,4(20,4-23,1)** 35,8(35,4-37,7)** 38,5(34,6-40,7)**

MA, mm 23,5(22,4-25,3)** 25,9(24,9-29,3)** 31,4(29,1-34,1)**

G, dyn/cm2 2,7(2,0-3,1)** 6,9(5,3-7,5)** 7,4(6,8-8,5)**

CLT, min 37,1(34,9-36,5) 34,9(32,6-36,4) 36,2(35,1-39,6)

Примечание: а - р<0,05; ß - р<0,001 - ЦК+ТФ или ЦК+TP в сравнении с ЦК;

* - р<0,05; ** - р<0,001 - в сравнении с контролем; f - p<0,05 - ЦК+ТФ в сравнении с

CB+TR.

Биомедицина • № 3, 2016 64

в 2,5 раза. Результаты, полученные на данном этапе, полностью соотносятся с данными литературы и объясняются особой ролью избытка тромбина и тканевого фактора в развитии тромбоза [3].

Препараты сравнения оказывают различное влияние на показатели активированных тромбоэластограмм. Действие ацетилсалициловой кислоты и пентокси-филлина характеризуется значимым снижением показателя максимальной амплитуды (МА). Однако их антиагрегационная активность эффективнее реализуется при активации свертывания тканевым фактором в сравнении с тромбином. Ацетилсалициловая кислота в данных условиях эксперимента эффективнее пентоксифил-лина устраняет гиперкоагуляцию, вызванную избытком тромбина и тканевого фактора. В присутствии антиагрегантов показатели, ответственные за коагуляци-онный компонент гемостаза (R и Angle), изменений не претерпевают. Соединение I проявляет антиагрегационную активность, аналогичную препаратам сравнения: эффективность больше на ТФ-акти-вированной тромбоэластограмме. При

этом показатели МА тромбоэластограм-мы статистически значимо снижаются в сравнении с контрольными значениями и препаратами сравнения. Показатель прочности сгустка (G) в присутствии соединения I практически снижается до значений тромбоэластограмм, регистрируемых без активации тромбином и тканевым фактором. Таким образом, впервые синтезированное соединение I демонстрирует потенциально высокую антитромботиче-скую активность на модели гиперкоагуляции системы гемостаза.

Следующим этапом оценили эффективность новой калиевой соли на основе тиетансодержащего триазола, как потенциального антиагреганта, на крови пациентов с состоявшимся тромбозом, в условиях ex vivo, и сравнили с данными, полученными на интактных тромбоцитах здоровых добровольцев (табл. 1). Результаты исследования эффективности препаратов сравнения и соединения I на исходно компрометированных тромбоцитах представлены в табл. 4. Аналоговый препарат - пентоксифил-лин в условиях in vitro способен эффек-

Таблица 4

Показатели аитиагрегациоиной активности изученных веществ на крови пациентов

с тромбозом, Ме (25-75)

Концентрация, М/л 40х10-4 20х10-4 10х10-4 5х10-4 IC50, М/л

Антиагрегационная активность, % Пентоксифиллин 42,8* (41,1-44,8) 25,8* (21,5-26,5) 6,9** (4,6-8,1) 0,0 (0,0-0,0) 4,4х10"3

Аспирин 51,8** (55,7-61,3) 30,4* (27,8-33,4) 17,9* (16,2-21,4) 0,0 (0,0-0,0) 3,9х10"3

Соединение I 54,6* (47,2-59,6) 27,6* (23,1-32,5) 12,1* (7,7-16,2) 0,0 (0,0-0,0) 3,4х10-3

Примечание: представлена АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов; * - р<0,05, ** - р<0,001 - уровень статистической значимости различий в сравнении с концентрацией 40*Ю-4М/л; а - р<0,05; Р - р<0,001 - уровень статистической значимости различий в группах интактных (табл. 1) и тромбоцитов в состоянии гиперагрегации.

тивно корректировать гиперактивность тромбоцитов. Концентрация, при которой АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов снижается на 50%, составляет 4,4*Ю-3 М/л. Сопоставление показателей зависимости «концентрация-эффект» для интактных тромбоцитов (табл. 1) и тромбоцитов в состоянии гиперактивности демонстрирует двукратное увеличение дозы для достижения аналогичного эффекта. IC50 пентокси-филлина в группе контроля составила 2,2*10-3 М/л. Ацетилсалициловая кислота, аналогично пентоксифиллину, в условиях in vitro способна корректировать гиперактивность тромбоцитов. При этом расчетное IC50 ацетилсалициловой кислоты составляет 4,2*10~3 М/л для контрольной группы и 3,9*10"3М/л - в условиях гиперактивности тромбоцитов. Таким образом, эффективность аспирина в условиях in vitro при исходно компрометированных тромбоцитах возрастает.

Впервые синтезированное соединение I в условиях in vitro проявляет антиагрегационную активность, превосходящую показатели препаратов сравнения. При этом наблюдается эффект, подобный пентоксифиллину: IC50 для интактных тромбоцитов превышает практически в 2 раза аналогичный показатель для тромбоцитов в состоянии гиперактивности. IC50 для соединения

I на тромбоцитах в состоянии гиперактивности составляет 3,4*Ю-3 М/л.

Дальнейшая работа выполнена в условиях in vivo. Результаты исследования антитромботического эффекта соединения I и пентоксифиллина при генерализованном коллаген-адреналиновым тромбозе представлены в табл. 5. В группе контроля инъекция взвеси адреналина и коллагена приводит к гибели всех животных в течение трех суток. При этом более 50% мышей погибло в течение первого часа эксперимента. Легкие, извлеченные после гибели животных, были темно-красного цвета, по всей площади наблюдались множественные тромбы. Пентоксифиллин статистически значимо (p<0,01) снижает падеж мышей по сравнению с контролем. Выживаемость в группе пентоксифиллина на 14-е сутки наблюдения составила 58,3%. Основной падеж пришелся на первые сутки после введения индукторов тромбоза. Макроскопическая оценка извлеченных легких демонстрирует значительное снижение зоны тромбоэмболического поражения. В экспериментальной группе животных, получивших соединение I, гибель статистически значимо меньше в сравнении с контролем (p1<0,01) и препаратом сравнения (p<0,001). На 14-е сутки эксперимента показатель выживаемости при внутрибрюшинном введении соединения I составил 75,1%. Основная

Таблица 5

Показатели выживаемости при моделировании системного коллаген-адреналинового

тромбоза, М±8Б

Соединение Контроль Пентоксифиллин Соединение I p2

Время жизни, ч 2,0±1,8 165,8±157,6* 206,9±135,2* <0,001

Примечание: * - уровень статистической значимости различий признаков в контрольной и опытной группах (р1<0,01); р2- уровень статистической значимости различий признаков в группах, получавших пентоксифиллин и соединение I, при %2=33,1.

гибель животных пришлась на первые сутки наблюдения. Легкие животных, которым вводили соединение I, имели нормальную окраску с минимальными точечными потемнениями. Выживаемость животных в группе, получавших соединение I, значимо превышает таковую в контрольной группе и на 25% - в группе у животных, получавших пенток-сифиллин.

Заключение

Таким образом, калиевая соль 2-[3-бром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триа-золил-5-тио]уксусной кислоты демонстрирует высокую антиагрегационную активность в условиях in vitro и in vivo, а также эффективность в качестве средства профилактики генерализованного тромбоза в эксперименте, что позволяет считать данное соединение перспективным антитромботическим средством.

Список литературы

1. Клен Е.Э., Халиуллин Ф.А., Спасов A.A., Макарова H.H., Багаутдинова Л. Ф., Науменко Л.В. Синтез и гемореологические свойства

новых производных 1,2,4-триазола // Хим,-фарм. журн, 2008, Т, 42, № 9, С, 15-17,

2. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, Ч, 1, -М,:ГрифиК, 2012,944 с,

3. Badimon J.J., Lettino М., Toschi V. Local inhibition of tissue factor reduces the thrombogenicity of disrupted human atherosclerotic plaques: Effects of TFPI on plaque thrombogenicity under flow condition // Circulation, 1999, No, 14, P, 1780-1787,

4. Born G.V. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal // Nature, 1962, УО1, 194, Р, 927-929,

5. DiMinno G.S. Mouse antithrombotic assay: a simple method for the evaluation of antithrombotic agents in vivo, Potentiation of antithrombotic activity by ethyl alcohol / G,S, DiMinno // J, Pharmacol, exp, ther, 1983, yol, 225, P, 57-60,

6. Patrono C.,AndreottiF.,ArnesenH. Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis // European Heart J, 2011, yol, 32, P, 2922-2932,

7. Samorodov A., Kamilov F., Timirkhanova G., Samorodova A., Khaliullin F., Murataev D. Antithrombotic activity of new 1-ethylxanthine cyclohexylammonium salt // FASEB J, 2014, No, 28, P, 1054-5,

The study of new potassium salt based on 3-thietanil-substituted triazole in respect to hemostasis system

A.V. Samorodov, F.Kh. Kamilov, A.R. Khalimov, E.E. Klen, F.A. Khaliullin

The paper shows preliminary preclinical findings of new potassium salt of 2-[3-bromine-l-(thietanil-3)-l,2,4-triazolil-5-thio]acetic acid in regards to hemostasis system. The research has determined that potassium salt of 2-[3-bromine-l-(thietanil-3)-l,2,4-triazolil-5-thio]acetic acid shows high antiaggregational activity under condition in vitro and in vivo, it is more efficient as means to experimentally prevent generalized thrombosis in comparison with the practically applied therapeutic agents. The findings allow to consider this compound a promising antithrombotic drug.

Key words: 3-thietanil-substituted triazole derivatives, hemostasis, antithrombotic activity.