CC BY
37
ИЗВЕСТИЯ ВУЗОВ. ПРИКЛАДНАЯ ХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ 2021 Том 11 N 1 PROCEEDINGS OF UNIVERSITIES. APPLIED CHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGY2021 Vol. 11 No. 1
Оригинальная статья / Original article УДК 579.66:579.017.8:579.264
DOI: https://doi.org/10.21285/2227-2925-2021 -11 -1 -125-135
Влияние наноселена как компонента питательной среды на основные параметры культивирования и антагонистическую активность бактерий рода Lactobacillus
© А.В. Омельченко*, В.С. Ржевская*, А.В. Крыжко**, Д.А. Панов*, И.А. Бугара*
* Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского, г. Симферополь, Российская Федерация, ** Научно-исследовательский институт сельского хозяйства Крыма, г. Симферополь, Российская Федерация
Резюме: Целью исследования являлось установление влияния наноселена на динамику роста и антагонистическую активность штаммов Lactobacillus casei IMB B-7343 и Lactobacillus plantarum IMB B-7344 относительно фитопатогенной бактерии Xanthomonas campestris В-4102. Наночастиць/ селена получали путем восстановления раствора селенита натрия L-цистеином в присутствии альгината натрия. Культивирование лактобактерий проводили на питательной среде MRS с добавлением коллоидного раствора наноселена в концентрации: 0,05; 0,1; 0,15; 0,2 и 0,25 мг/л (по селену). Бактерии культивировали в 96-луночном планшете в фотометре Multiskan FC при 36 °С в режиме постоянного встряхивания. Антагонистическую активность лактобактерий изучали методом агаровых блоков. Установлено, что добавление в питательную среду наноселена в концентрации от 0,2 до 0,25 мг/л способствовало сокращению длительности экспоненциальной фазы роста в среднем на 3 ч и уменьшению накопления биомассы штамма L. casei IMB B-7343 на 15,0%. Показано увеличение оптической плотности культуры этого штамма на 15,9% в стационарной фазе роста в варианте с добавлением к питательной среде раствора наноселена в концентрации 0,15 мг/л. Отмечено, что при культивировании штамма L. plantarum IMB B-7344 в питательной среде MRS с добавлением коллоидного раствора наноселена в концентрации 0,05-0,25 мг/л в фазу экспоненциального развития наблюдалось ускорение роста культуры в среднем на 5 ч относительно контроля. Отмечено, что при добавлении в питательную среду наноселена наблюдалось увеличение антагонистической активности штаммов лактобактерий по отношению к фитопатогенной бактерии X. campestris В-4102, особенно у штамма L. plantarum IMB B-7344 (зона подавления роста фитопатогена составила 14,5-15 мм).
Ключевые слова: наноселен, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Xanthomonas campestris, штамм, антагонистическая активность
Для цитирования: Омельченко А.В., Ржевская В.С., Крыжко А.В., Панов Д.А., Бугара И.А. Влияние наноселена как компонента питательной среды на основные параметры культивирования и антагонистическую активность бактерий рода Lactobacillus. Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2021. Т. 11. N 1. С. 125-135. https://doi.org/10.21285/2227-2925-2021-11-1-125-135
Effects of nanoselenium as a nutrient medium component on the main cultivation parameters and antagonistic activity
of Lactobacillus strains
Aleksandr V. Omelchenko*, Victoria S. Rzhevskaya*, Anastasiia V. Kryzhko**, Denis A. Panov*, Igor A. Bugara*
* V.I. Vernadsky Crimean Federal University, Simferopol, Russian Federation ** Institute of Agriculture of Crimea, Simferopol, Russian Federation
Abstract: The study aims to establish the effect of nanoselenium on the growth and antagonistic activity of the Lactobacillus casei IMB B-7343 and Lactobacillus plantarum IMB B-7344 strains against the phytopatho-genic bacterium Xanthomonas campestris B-4102. Selenium nanoparticles were obtained by reducing a solution of sodium selenite with L-cysteine in the presence of sodium alginate. The cultivation of Lactobacilli
was carried out in a MRS nutrient medium with the addition of a colloidal solution of nanoselenium at the following concentrations: 0.05; 0.1; 0.15; 0.2 and 0.25 mg/l (for selenium). Bacteria were cultured in a 96-well plate in a Multiskan FC photometer at 36 °C under constant shaking. The antagonistic activity of the strains was studied by the method of agar blocks. It was found that the addition of nanoselenium to the nutrient medium at a concentration of 0.2 to 0.25 mg/l contributed to a decrease in the duration of the exponential growth phase by an average of 3 hours, as well as to a decrease in the biomass accumulation of the L. casei IMB B-7343 strain by 15.0%. The optical density of this strain culture was observed to increase by 15.9% in the stationary growth phase under the addition of a nanoselenium solution to the nutrient medium at a concentration of 0.15 mg/l. During the cultivation of the L. plantarum IMB B-7344 strain in an MRS nutrient medium with the addition of a colloidal solution of nanoselenium at a concentration of 0.05-0.25 mg/l in the exponential development phase, an acceleration of the culture growth on average by 5 hours relative to the control was observed. It was noted that, upon the addition of nanoselenium to the nutrient medium, an increase in the antagonistic activity of lactobacillus strains against the phytopathogenic bacterium X. campestris B-4102 was observed, particularly in the L. plantarum IMB B-7344 strain (the zone of inhibition of the phytopathogen growth was 14.5-15 mm).
Keywords: nanoselenium, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Xanthomonas campestris, strain, antagonistic activity
For citation: Omelchenko AV, Rzhevskaya VS, Kryzhko AV, Panov DA, Bugara IA. Effects of nanoselenium as a nutrient medium component on the main cultivation parameters and antagonistic activity of Lactobacillus strains. Izvestiya Vuzov. Prikladnaya Khimiya i Biotekhnologiya = Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology. 2021;11(1):125-135. (In Russian) https://doi.org/10.21285/2227-2925-2021-11-1-125-135
ВВЕДЕНИЕ
В настоящее время на мировом рынке преобладают химические регуляторы роста и средства защиты растений. Однако широкое применение таких препаратов наносит непоправимый экологический ущерб [1]. Биологические средства защиты занимают лишь несколько процентов от общего объема таких препаратов. Их недостатком является узкая специфичность и большие потери [2]. Перспективным решением данной проблемы является разработка комплексных биопрепаратов на основе микроорганизмов и наночастиц биогенных элементов, обладающих как защитным, так и стимулирующим действием [3-8].
Среди нанокомпозитных материалов, используемых для защиты растений от патогенных бактерий, важное место занимает селен [4, 9]. В отличие от ионных форм селен в форме наноча-стиц является менее токсичным и биологически доступным. Биологическая активность наночастиц селена, как и других биогенных элементов, зависит не только от размера, формы и устойчивости наночастиц, но и от свойств стабилизирующей матрицы [9, 10]. Известно, что селен в диспергированном до наноразмерных частиц виде обладает антибактериальным действием по отношению к фитопатогенным бактериям [3, 4, 8]. Данный биологический эффект заключается в нарушении мембранного потенциала бактериальной клетки, вызывающего ее гибель [4, 5, 11].
По литературным данным присутствие в среде селена оказывает положительное влияние на накопление биомассы лактобацилл [12-14]. Бактерии рода Lactobacillus способны продуцировать вещества с антибиотической активностью,
что позволяет им проявлять выраженный антагонизм в отношении различных микроорганизмов, в том числе фитопатогенных. Антагонистическая активность лактобактерий обусловлена такими метаболитами, как органические кислоты (преимущественно молочная), а также антимикробными и антибиотикоподобными соединениями - лизоцимом, перекисью водорода, бакте-риоцинами (лактацинами), диацетилом, гистами-ном и другими аминами [15, 16].
Различные заболевания растений, вызываемые патогенными бактериями, отрицательно влияют на урожайность сельскохозяйственных культур [3, 4, 11]. Наиболее распространенными и значимыми среди фитопатогенных бактерий являются облигатные аэробные бесспоровые бактерии рода Xanthomonas, представляющие собой одиночные грамотрицательные подвижные палочки с закругленными концами. Xanthomonas campestris является возбудителем сосудистого бактериоза и листовой пятнистости культурных растений. В эпифитотийные годы сосудистым бактериозом может поражаться до 80% посевов растений семейства Brassicaceae [17]. Предотвратить распространение сосудистого бактериоза трудно, сдержать его возможно путем использования обеззараженного посевного материала и устранения потенциальных источников заражения в поле. Бороться с патогеном, проникшим в восприимчивое растение, практически невозможно [18]. Потери урожая растений в результате развития этой болезни в разных регионах России составили от 23 до 57%, в Индии достигали 50%, а в Черногории - до 80% [17, 18].
Целью настоящего исследования явилось изучение влияния коллоидного раствора нано-
селена на динамику роста и антагонистическую активность лактобактерий Lactobacillus casei IMB B-7343 и Lactobacillus plantarum IMB B-7344 относительно фитопатогенной бактерии Xanthomo-nas campestris В-4102.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Материалом исследования служили штаммы молочнокислых стрептобацилл: Lactobacillus casei IMB B-7343, выделенный из самоквасных домашних кисломолочных продуктов, и Lactobacil-lus plantarum IMB B-7344, выделенный из силосованного зерна. Штамм L. casei IMB B-7343 является факультативной анаэробной мезофиль-ной гомоферментативной палочкообразной бактерией, штамм L. plantarum IMB B-7344 - мезо-фильной гомоферментативной анаэробной бактерией. Антагонистическую активность лактоба-цилл оценивали на культуре фитопатогенной бактерии Xanthomonas campestris В-4102, полученной из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов.
Водорастворимую композицию наночастиц селена получали по оригинальной методике, разработанной в Крымском федеральном университете им. В.И. Вернадского [19]. Для этого селенистокислый натрий (х.ч.) восстанавливали L-цистеином (Synex Pharma, Китай) в присутствии природного полисахарида альгината натрия (BioPolymer, Норвегия). Реакцию восстановления ионного селена проводили при рН= 6,5-7,0, при температуре 293 К. Концентрация селена в водном растворе составляла 0,050 г/л, альгината натрия - 1,00 г/л, массовое соотношение концентраций нуль-валентного селена: альгината натрия было равно 0,050. В результате окислительно-восстановительной реакции образовывался красновато-оранжевый коллоидный раствор наноселена с максимумом оптического поглощения при длине волны Л = 253 нм, что свидетельствовало об образовании наночастиц селена. Электронные спектры поглощения регистрировали с помощью псевдо-двухлучевого сканирующего спектрофотометра Shimadzu UV-1280 (Япония) в рабочем диапазоне длин волн 200-500 нм. Определение размера образующихся селеносодержащих наноструктур и изучение поверхности тонких пленок, полученных из водных растворов альгината и наноселена, проводили на сканирующем муль-тимикроскопе (СММ-2000, Россия). При изучении структур поверхности тонких пленок наблюдали наличие изолированных наноструктур, имеющих сферическую форму со средним диаметром частиц - 34 нм.
Культивирование лактобактерий проводили на питательной среде MRS [20]. В стерильную остывшую до 40 °С среду вносили наноселен в концентрации: 0,05; 0,1; 0,15; 0,2 и 0,25 мг/л (по селену). В качестве контроля использовали сре-
ду MRS, куда вместо растворов селена добавляли эквивалентное количество дистиллированной воды.
Для инокуляции питательной среды использовали 24-часовую культуру лактобактерий с титром 1,2"108. Микроорганизмы культивировали в 96-луночном планшете в фотометре Multiskan FC (Thermo Fisher Scientific, США) при температуре 36 °С в режиме постоянного встряхивания. Определение оптической плотности среды проводили при длине волны Л = 620 нм с периодичностью 1 ч в течение 70 ч.
Антагонистическую активность штаммов L. casei IMB B-7343 и L. plantarum IMB B-7344 по отношению к X. campestris В-4102 изучали методом агаровых блоков [21]. Для этого суточные культуры лактобактерий, выращенные в жидкой среде MRS с добавлением коллоидного раствора наноселена различной концентрации, высевали глубинно в чашки Петри и инкубировали при температуре 36 °С в течение 24 ч. Стерильным пробочным сверлом вырезали агаровый блок с выросшей культурой штамма лактобактерий и вставляли его в лунку в агаровом диске другой чашки Петри с только что глубинно засеянной культурой X. campestris В-4102. Чашки Петри выдерживали в течение 8 ч в холодильнике при температуре +5 °С для диффузии метаболитов лактобактерий из блока в толщу агара с тест-культурой, затем инкубировали в термостате при температуре 28 °С.
Эксперименты проводили в 3-кратной биологической повторности. Статистическую обработку данных осуществляли общепринятым методом с использованием коэффициента Стьюден-та [22], в таблицах и рисунках представлены средние арифметические значения и их стандартные ошибки.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
В последние десятилетия в пищевой и медицинской промышленности в питательные среды для получения жидких культур лактобацилл вносят соединения селена с целью использования полученных культур в качестве закваски или функционального ингредиента для приготовления продуктов питания, обогащенных селеном [12, 13, 23]. Известно, что некоторые лактобакте-рии могут накапливать и биотрансформировать соли селена в селенаминокислоты, наноселен и/или летучие соединения селена [24, 25]. Имеются данные о высокой переносимости лакто-бактериями селенита натрия - до 198 мг/л [25]. Бактерии L. bulgaricus способны накапливать в цитоплазме и во внеклеточном пространстве нетоксичный селен. Присутствие в среде селена способствует увеличению скорости роста лакто-бацилл и их способности подавлять болезнетворную микрофлору [26].
Внесение в питательную среду MRS колло-
идного раствора наноселена в исследованных концентрациях оказало влияние как на накопление биомассы культур штаммов L. casei IMB B-7343 и L. plantarum IMB B-7344, так и на сроки прохождения бактериями основных фаз развития. Культура штамма L. casei IMB B-734 в присутствии раствора наноселена развивалась медленнее. Максимальную задержку развития наблюдали в варианте с добавлением в среду MRS 0,25 мг/л раствора наноселена, где фаза ускорения роста завершилась в среднем на 3 ч позже, чем в контроле и составила 15 ч (рис. 1).
Время культивирования, ч.
-MRS MRS+0,05 мг/л Se -*-MRS+0,1 мг/л Se
-^MRS+0,15 мг/л Se -b-MRS+0,2 мг/л Se -"-MRS+0,25 мг/л Se
Рис. 1. Накопление биомассы культуры штамма L. casei IMB B-7343 на питательной среде MRS с добавлением коллоидного раствора наноселена
Fig. 1. Accumulation of L. casei strain IMB B-7343 biomass on MRS nutrient medium with colloidal solution of nanoselenium
Ингибирующее действие раствора наноселе-на в концентрации от 0,05 до 0,25 мг/л проявилось как в фазу экспоненциального развития, так и в фазу замедления роста. Максимальное угнетение роста отмечали в варианте с концентрацией наноселена 0,25 мг/л. Оптическая плотность культуры составила 0,22, что на 29,4% меньше чем в контроле. В целом же можно отметить, что добавление в питательную среду наноселена в концентрации 0,2-0,25 мг/л способствовало сокращению длительности экспоненциальной фазы в среднем на 3 ч (до 12 ч) и уменьшению накопления биомассы штамма L. casei IMB B-7343, оцениваемой по оптической плотности, на 15,0%. Фаза замедления роста во всех исследованных вариантах длилась в среднем 3 ч. Однако присутствие в среде раствора наноселена в концентрации 0,05-0,25 мг/л способствовало снижению оптической плотности культуры в среднем на 15,7% к контролю. В варианте с добавлением к питательной среде для культивирования штамма L. casei IMB B-7343 наноселена в концентрации 0,15 мг/л наблюдали короткую фазу экспоненциального развития, длившуюся в среднем 13 ч. Вместе с тем оптическая плотность культуры увеличивалась к 28 ч культивирования, составила 0,86 оптических единиц и, таким образом, достигла значения
контроля. При наблюдении роста штамма L. casei IMB B-7343 в стационарной фазе было отмечено, что в варианте с добавлением к питательной среде раствора наноселена в концентрации 0,15 мг/л оптическая плотность культуры увеличилась на 15,9%. В остальных вариантах опыта, т.е. при других концентрациях наноселе-на в растворах, значимого влияния на оптическую плотность бактериальной биомассы L. casei IMB B-7343 отмечено не было.
Анализ культивирования штамма L. plantarum IMB B-7344 в питательной среде MRS с добавлением наноселена позволил установить, что культура лактобактерий в фазе ускорения роста во всех вариантах развивалась синхронно в течение 17 ч (рис. 2).
Время культивирования, ч.
-MRS —•— MRS+0,05 мг/л Se -*-MRS+1,0 мг/л Se
-^MRS+1,5 мг/л Se -B-MRS+2,0 мг/л Se -"-MRS+0,25 мг/л Se
Рис. 2. Накопление биомассы культуры штамма L. plantarum IMB B-7344 на питательной среде MRS с добавлением коллоидного раствора наноселена
Fig. 2. Accumulation of L. plantarum strain IMB B-7344 biomass on MRS nutrient medium with colloidal solution of nanoselenium
В фазе экспоненциального развития наблюдалось ускорение роста культуры во всех опытных вариантах в среднем на 5 ч относительно контроля. При этом оптическая плотность культуры штамма IMB B-7344, культивируемого в средах с добавлением коллоидного раствора наноселена в концентрациях 0,05-0,25 мг/л, отличалась незначительно и превосходила контроль в 8,1 раз. Фаза замедления роста во всех экспериментальных образцах также наступала быстрее и длилась в среднем от 39 до 45 ч, в то время как в контроле ее наблюдали на 4 часа позже, то есть от 43 до 49 ч. Оптическая плотность культуры, выращенной на питательных средах с добавлением наноселена во всех исследованных концентрациях, достоверно не отличалась, составляла в среднем 1,49 единиц и на 13,8% превосходила контрольную. Достоверного влияния на оптическую плотность бактериальной биомассы штамма L. plantarum IMB B-7344 в стационарной фазе в остальных вариантах опыта отмечено не было.
При внесении в питательную среду MRS коллоидного раствора наноселена в концентрации
0,05-0,25 мг/л у всех изученных штаммов лакто-бактерий не наблюдалось значительных изменений культурально-морфологических свойств и размеров клеток. Так же, как и в контрольных, в опытных вариантах в чашках Петри штамм L. casei 1МВ В-7343 образовывал белые блестящие круглые колонии с ровным краем, гладкой поверхностью и выпуклым профилем, обладавшие однородной структурой и достигавшие в диаметре 1,5-1,7 мм (табл. 1). При прикосновении бактериальной петлей колония была мягкой, снималась с поверхности питательной среды полностью.
Клетки в мазках как контрольном, так и в опытных вариантах представляли собой изогнутые единичные палочки или палочки, образующие цепочки разной длины (1,1-1,2 х 0,6-0,8 мкм) (табл. 2).
Штамм L. plantarum 1МВ В-7344 как в опытных, так и контрольном вариантах формировал прозрачные, бесцветные круглые колонии с волнистым краем. Структура точечных колоний струйчатая, профиль выпуклый, максимальный диаметр составлял до 1 мм (см. табл. 1). Отмечено, что при прикосновении петлей колонии сухие, хрупкие.
Методом микроскопии установлено, что культура штамма L. plantarum 1МВ В-7344, выращенная с добавлением в питательную среду коллоидного раствора наноселена в концентрации 0,05-0,25 мг/л, образовывала цепочки по 5-6 клеток, в то время как в контроле наблюдали преимущественно одиночные и парные клетки. Размер клеток штамма L. plantarum 1МВ В-7344 в
контрольном и опытных вариантах достоверно не различался и составлял 1,8-2,0 х 0,6-0,8 мкм (см. табл. 2).
Известно, что различные соединения селена способны подавлять рост условно-патогенных бактерий. Так, 0,2%-й раствор наночастиц селена подавляет рост P. aeruginosa и S. aureus, а элементарный селен - E. coli и S. aureus. Имеются данные о способности бактерий рода Lactobacillus, выращенных на питательных средах, содержащих селенометионин и селеноци-стеин, эффективно подавлять рост патогенной E. coli; штаммов L. plantarum и L. johnsonii, выращенных на средах, содержащих наноселен и селенит натрия, подавлять рост Candida albicans, L. gasseri, S. enterica, K. pneumoniae, S. flexneri, P. vulgaris и S. epidermidis. Биогенный наноселен (наноселен, образованный лактобак-териями при добавлении в среду селенита натрия) обладает антимикробными свойствами [27-31]. Также в литературе имеются данные, свидетельствующие о способности лактобакте-рий подавлять рост фитопатогенных бактерий рода Xanthomonas [32].
В результате проведенных исследований отмечено, что при добавлении в питательную среду MRS раствора наноселена в концентрации от 0,05 до 0,25 мг/л наблюдалось увеличение антагонистической активности штаммов лактобакте-рий L. casei 1MB B-7343 и L. plantarum 1MB B-7344 по отношению к фитопатогенной бактерии X. campestris В-4102 по сравнению с контрольным вариантом (табл. 3).
Таблица 1. Влияние коллоидного раствора наноселена на размер колоний бактерий штаммов
L. casei 1MB B-7343 и L. plantarum 1MB B-7344
Table 1. Influence of nanoselenium colloidal solution on the size
of L. casei 1MB B-7343 and L. plantarum 1MB B-7344 strains colonies
Вариант опыта Размер колонии, мм
L. casei 1MB B-7343 L. plantarum 1MB B-7344
MRS (контроль) 1,7±0,4 1,0±0,1
MRS + 0,05 мг/л Seo 1,6±0,3 1,0±0,1
MRS + 0,1 мг/л Seo 1,5±0,5 1,1±0,1
MRS + 0,15 мг/л Seo 1,6±0,4 1,0±0,1
MRS + 0,2 мг/л Seo 1,7±0,3 1,0±0,1
MRS + 0,25 мг/л Seo 1,7±0,4 1,0±0,1
Таблица 2. Влияние коллоидного раствора наноселена на размер клеток бактерий штаммов
L. casei 1MB B-7343 и L. plantarum 1MB B-7344
Table 2. Influence of nanoselenium colloidal solution on the cell size
of L. casei 1MB B-7343 and L. plantarum 1MB B-7344 strains
Вариант опыта Размер клеток, мкм
L. casei 1MB B-7343 L. plantarum 1MB B-7344
MRS (контроль) 1,1 ±0,5 х 0,6±0,2 1,9±0,3 х 0,7±0,1
MRS + 0,05 мг/л Seo 1,2±0,4 х 0,8±0,3 1,8±0,2 х 0,6±0,1
MRS + 0,1 мг/л Seo 1,1 ±0,5 х 0,7±0,3 1,9±0,4 х 0,7±0,1
MRS + 0,15 мг/л Seo 1,0±0,5 х 0,6±0,4 1,9±0,3 х 0,7±0,1
MRS + 0,2 мг/л Seo 1,1 ±0,4 х 0,7±0,3 2,0±0,2 х 0,8±0,1
MRS + 0,25 мг/л Seo 1,1 ±0,4 х 0,6±0,2 1,9±0,2 х 0,6±0,1
Таблица 3. Антагонистическая активность штаммов
L. casei IMB B-7343 и L. plantarum IMB B-7344 относительно X. campestris В-4102 Table 3. Antagonistic activity
of L. casei IMB B-7343 and L. plantarum IMB B-7344 strains to X. campestris B-4102
Варианты опыта Зоны подавления роста X. campestris В-4102, мм
L. casei IMB B-7343 L plantarum IMB B-7344
MRS (контроль) 45,0±0,5 40,0±1,3
MRS + 0,05 мг/л Se° 51,0±1,0 54,5±0,5
MRS + 0,1 мг/л Se° 51,0±1,1 55,0±0,8
MRS + 0,15 мг/л Se° 52,0±0,8 55,0±0,7
MRS + 0,2 мг/л Se° 52,0±1,0 55,0±1,0
MRS + 0,25 мг/л Se° 52,0±1,2 55,0±1,1
Зона подавления роста бактерий штамма X. campestris В-4102 при добавлении коллоидного раствора наноселена в питательную среду MRS для штамма L. casei IMB B-7343 в опытных вариантах увеличилась на 6-7 мм, а L. plantarum IMB B-7344 - на 14,5-15 мм, что составляет 13,3-15,5 и 36-37,5% соответственно по сравнению с контролем. Достоверной разницы
между концентрациями наноселена (0,05-0,25 мг/л) в питательной среде MRS и проявлением антагонистической активности штамма L. casei IMB B-7343 не отмечено. Наиболее высокая антагонистическая активность по отношению к X. campestris В-4102 выявлена у штамма L. plantarum IMB B-7344 (рис. 3).
Рис. 3. Антагонистическая активность L. casei IMB B-7343 (а) и L. plantarum IMB B-7344 (b) относительно
X. campestris В-4102
Fig. 3. Antagonistic activity of L. casei IMB B-7343 (a) and L. plantarum IMB B-7344 (b)
to X. campestris B-4102
b
a
ВЫВОДЫ
Установлено, что максимальная задержка развития культуры штамма L. casei IMB B-7343 происходила в варианте опыта с добавлением в среду MRS 0,25 мг/л коллоидного раствора наноселена, где фаза ускорения роста завершилась в среднем на 3 ч позже чем в контроле и составила 15 ч. Добавление в питательную среду наноселена в концентрации 0,2-0,25 мг/л способствовало сокращению длительности экспоненциальной фазы в среднем на 3 ч (до 12 ч) и уменьшению накопления биомассы штамма L. casei IMB B-7343, оцениваемой по оптической плотности,на 15,0%. Показано, что увеличение оптической плотности культуры штамма L. casei
IMB B-7343 на 15,9% в стационарной фазе роста происходило в варианте с добавлением к питательной среде раствора наноселена в концентрации 0,15 мг/л.
Отмечено, что при культивировании штамма L. plantarum IMB B-7344 в питательной среде MRS с добавлением коллоидного раствора наноселена в концентрации 0,05-0,25 мг/л культура лактобактерий во всех вариантах в фазе ускорения роста развивалась синхронно в течение 17 ч. В фазу экспоненциального развития наблюдалось ускорение роста культуры во всех опытных вариантах с добавлением наноселена в среднем на 5 ч относительно контроля.
Установлено, что при внесении в питательную
среду MRS коллоидного раствора наноселена в концентрации 0,05-0,25 мг/л у штаммов лактобак-терий L. casei 1MB B-7343 и L. plantarum 1MB B-7344 значительных изменений культурально-морфо-логических свойств и размеров клеток не наблюдалось. Исключение составила культура штамма L. plantarum 1MB B-7344, выращенная с добавлением в питательную среду коллоидного раствора наноселена в концентрации 0,05-0,25 мг/л, которая образовывала цепочки по 5-6 клеток, в то время как в контроле наблюдали преимущественно одиночные и парные клетки.
Отмечено, что при добавлении в питательную среду MRS раствора наноселена в концентрации 0,05-0,25 мг/л наблюдалось увеличение антагонистической активности штаммов лак-тобактерий L. casei 1MB B-7343 и L. plantarum 1MB B-7344 по отношению к фитопатогенной бак-
терии X. campestris В-4102, по сравнению с контрольным вариантом. Наиболее высокая антагонистическая активность по отношению к X. campestris В-4102, выявлена у штамма L. plantarum 1MB B-7344: зона подавления роста фитопатогена составила 14,5-15 мм.
Таким образом, полученные в результате исследований параметры культивирования лакто-бактерий на среде MRS с добавлением коллоидного раствора наноселена в изученных концентрациях (0,05-0,25 мг/л) свидетельствуют, что штаммы L. casei 1MB B-7343 и L. plantarum 1MB B-7344 являются технологичными и с учетом антагонистической активности относительно X. campestris В-4102, могут быть рекомендованы для разработки на их основе комплексного биопрепарата для защиты растений от фитопатогенов.
СПИСОК Л
1. Санин С.С., Мотовилин А.А., Корнева Л.Г., Жохова Т.П., Полякова Т.М., Акимова Е.А. Химическая защита пшеницы от болезней при интенсивном зернопроизводстве // Защита и карантин растений. 2011. N 8. С. 3-10.
2. Егоров Н.П., Шафронов О.Д., Егоров Д.Н., Сулейманов Е.В. Разработка и проведение экспериментальной оценки эффективности применения в растениеводстве новых видов удобрений, полученных с использованием нанотехнологий // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. 2008. N 6. С. 94-99.
3. Papkina A.V., Perfileva A.I., Zhivetev M.A., Bo-rovskiy G.B., Graskova I.A., Lesnichaya M.V., et al. Effect of selenium and arabinogalactan nanocompo-site on viability of the phytopathogen Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus // Doklady Biological Sciences. 2015. Vol. 461. Issue1. P. 89-91. https://doi.org/10.1134/S001249661501010X
4. Perfileva A.I., Nozhkina O.A., Graskova I.A., Sidorov A.V., Lesnichaya M.V., Aleksandrova G.P., et al. Synthesis of selenium and silver nano-biocomposites and their influence on phytopathogen-ic bacterium Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus //Russian Chemical Bulletin. 2018. Vol. 67. Issue 1. P. 157-163. https://doi.org/10.1007/s1 1172-018-2052-4
5. Perfileva A.I., Nozhkina O.A., Graskova I.A., Dyakova A.V., Pavlova A.G., Klimenkov I.V., et al. Selenium nanocomposites having polysaccharid matrices stimulate growth of potato plants in vitro infected with ring rot pathogen // Doklady Biological Sciences. 2019. Vol. 489. Issue 1. P. 184-188. https://doi.org/10.1134/S0012496619060073
6. Zhao L., Lu L., Wang A., Huiling Zhang, Min Huang, Honghong Wu, Baoshan Xing, Zhenyu Wang, Rong Ji. Nano-Biotechnology in Agriculture: Use of Nanomaterials to Promote Plant Growth and Stress Tolerance // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2020. Vol. 68. Issue 7. P. 1935-1947.
https://doi.org/10.1021/acs.jafc.9b06615
7. Нурминский В.Н., Перфильева А.И., Капустина И.С., Граскова И.А., Сухов Б.Г., Трофимов Б.А. Ростостимулирующая активность нанокомпо-зитов селена в природных полимерных матрицах при прорастании семян культурных растений // Доклады Российской академии наук. Науки о жизни. 2020. Т. 495. N 1. С. 607-611. https://doi.org/ 10.31857/S2686738920060207
8. Cremonini E., Zonaro E., Donini M., Lampis S., Boaretti M., Dusi S., et al. Biogenic selenium nano-particles: characterization, antimicrobial activity and effects on human dendritic cells and fibroblasts // Microbial Biotechnology. 2016. Vol. 9. Issue 6. P. 758-771. https://doi.org/10.1111/1751-7915.12374
9. Nozhkina O.A., Perfileva A.I., Graskova I.A., Nurminsky V.N., Klimenkov I.V., Dyakova A.V., et al. The biological activity of a selenium nanocomposite encapsulated in carrageenan macromolecules with respect to ring rot pathogenesis of potato plants // Nanotechnologies in Russia. 2019. Vol. 14. Issue 56. P. 255-262. https://doi.org/10.1134/S1995078019 030091
10. Nikonov I.N., Folmanis J.G., Kovalenko L.V., Laptev G.Y., Folmanis G.E., Egorov I.A., et al. Biological activity of nanoscale colloidal selenium // Doklady Biochemistry and Biophysics. 2012. Vol. 447. Issue 1. P. 297-299. https://doi.org/10.1134/S16076729 12060075
11. Perfileva A.I., Tsivileva O.M., Koftin O.V., Anis'kov A.A., Ibragimova D.N. Selenium-containing nanobiocomposites of fungal origin reduce the viability and biofilm formation of the bacterial phytopathogen Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus // Nanotechnologies in Russia. 2018. Vol. 13. Issue 56. P. 268-276. https://doi.org/10.1134/S19950780 18030126
12. Mangiapane E., Lamberti C., Pessione A., Galano E., Amoresano A., Pessione E. Selenium effects on the metabolism of a Se-metabolizing Lac-
tobacillus reuteri: analysis of envelope-enriched and extracellular proteomes // Molecular Bio-Systems. 2014. Vol. 10. Issue 6. P. 1272-1280. https://doi. org/10.1039/C3MB70557A
13. Pescuma M., Gomez-Gomez B., Perez-Corona T., Font G., Madrid Y., Mozzi F. Food prospects of selenium enriched Lactobacillus acidophilus CRL 636 and Lactobacillus reuteri CRL 1101 // Journal of Functional Foods. 2017. Vol. 35. P. 466-473. https://doi.org/10.1016/jjff.2017.06.009
14. Martinez F.G., Moreno-Martin G., Pescuma M., Madrid-Albarran Y., Mozzi F. Biotransformation of selenium by lactic acid bacteria: formation of seleno-nanoparticles and seleno-amino acids // Frontiers Bioengineering and Biotechnology. 2020. Vol. 8. P. 506. https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.00506
15. Черкасов С.В., Семенов А.В. Микробная регуляция антагонистической активности лакто-бактерий // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). 2012. Т. 109. N 2. С. 78-82.
16. Чичерин И.Ю., Погорельский И.П., Лундов-ских И.А., Малов А.А., Шабалина М.Р., Дармов И.В. Динамика содержания лактобацилл, микробных метаболитов и антибактериальной активности растущей культуры Lactobacillus plantarum 8Р-А3 // Журнал инфектологии. 2013. Т. 5. N 3.
C.50-55.
17. Taylor J.D., Conway J., Roberts S.J., Astley
D., Vicente J.G. Sources and origin of resistance to Xanthomonas campestris pv. campestris in Brassica genomes // Phytopathology. 2002. Vol. 92. Issue 1. P. 105-111. https://doi.org/10.1094/PHYT0.2002. 92.1.105
18. Артемьева А.М., Игнатов А.Н., Волкова А.И., Кочерина И.В., Коноплева М.Н., Чесноков Ю.В. Физиолого-генетические компоненты устойчивости к сосудистому бактериозу у линий удвоенных гаплоидов Brassica rapa L. // Сельскохозяйственная биология. 2018. Т. 53. N 1. С. 157-169. https://doi.org/10.15389/agrobiology.2018.1.157rus
19. Пат. № 159620, Российская Федерация. Способ получения водорастворимой композиции наночастиц, содержащей наночастицы селена / И.Н. Юркова, Э.П. Панова, Д.А. Панов, А.В. Омельченко; патентообладатель Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского; заявл. 26.04.2013; опубл. 10.02.2016. Бюл. № 4.
20. Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. М.: Наука, 1975. 390 с.
21. Сэги Й. Методы почвенной микробиологии / пер. с венг. И.Ф. Куренного. М.: Колос, 1983. 296 с.
22. Трухачёва Н.В. Математическая статистика в медико-биологических исследованиях с применением пакета Statistica: монография. М.: ИГ «ГЭОТАР-Медиа», 2013. 384 с.
23. Pophaly S.D., Poonam, Singh P., Kumar H., Tomar S.K., Singh R. Selenium enrichment of lactic acid bacteria and bifidobacteria: a functional food
perspective // Trends in Food Science Technology. 2014. Vol. 39. Issue 2. P. 135-145. https://doi.org/ 10.1016/j.tifs.2014.07.006
24. Moreno-Martin G., Pescuma M., Pérez-Corona T., Mozzi F., Madrid Y. Determination of size and mass-and number-based concentration of biogenic SeNPs synthesized by lactic acid bacteria by using a multimethod approach // Analytica Chimica Acta. 2017. Vol. 992. P. 34-41. https://doi.org/10. 1016/j.aca.2017.09.033
25. Zambonino M.C., Quizhpe E.M., Jaramillo F.E., Rahman A., Vispo N.S., Jeffryes C., et al. Green synthesis of selenium and tellurium nanoparti-cles: current trends, biological properties and biomedical applications // International Journal Molecular Sciences. 2021. Vol. 22. Issue 3. P. 989. https:// doi.org/10.3390/ijms22030989
26. Xia S.K., Chen L., Liang J.Q. Enriched selenium and its effects on growth and biochemical composition in Lactobacillus bulgaricus // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2007. Vol. 55. Issue 6. P. 2413-2417. https://doi.org/10.1021/jf062946j
27. Gonzalez-Olivares L.G., Contreras-Lopez E., Flores-Aguilar J.F., Rodriguez-Serrano G.M., Cas-taneda-Ovando A., Jaimez-Ordaz J., et al. Inorganic selenium uptake by Lactobacillus ssp. // Revista Mexicana de Ingeniería Química. 2016. Vol. 15. Issue 1. P. 33-38.
28. Tran P.L., Hammond A.A., Mosley T., Cortez J., Gray T., Colmer-Hamood J.A., et al. Orga-noselenium coating on cellulose inhibits the formation of biofilms by Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus // Applied and Environmental Microbiology. 2009. Vol. 75. Issue. 11. P. 3586-3592. https://doi.org/10.1128/AEM.02683-08
29. Khalid A.Q., AlJohny B.O., Wainwright M. Antibacterial effects of pure metals on clinically important bacteria growing in planktonic cultures and biofilms // African Journal of Microbiology Research. 2014. Vol. 8. Issue 10. P. 1080-1088. https://doi. org/10.5897/AJMR2013.5893
30. Yang J., Huang K., Qin S., Wu X., Zhao Z., Chen F. Antibacterial action of selenium-enriched probiotics against pathogenic Escherichia coli // Digestive Diseases and Sciences. 2008. Vol. 54. Issue 2. P. 246-254. https://doi.org/10.1007/s10620-008-0361-4
31. Kheradmand E., Rafii F., Yazdi M.H., Sepahi A.A., Shahverdi A.R., Oveisi M.R. The antimicrobial effects of selenium nanoparticle-enriched probiotics and their fermented broth against Candida albicans // DARU Journal of Pharmaceutical Science. 2014. Vol. 22. Article number 48. https://doi.org/10.1186/2008-2231-22-48
32. Visser R., Holzapfel W.H., Bezuidenhout J.J., Kotze J.M. Antagonism of lactic acid bacteria against phytopathogenic bacteria // Applied and Environmental Microbiology. 1986. Vol. 52. Issue 3. P. 552-555. https://doi.org/10.1128/AEM.52.3.552-555.1986
REFERENCES
1. Sanin SS, Motovilin AA, Korneva LG, Zhokhova TP, Polyakova TM, Akimova EA. Chemical protection of wheat from the diseases under the conditions of intensive grain production. Zashchita i kar-antin rastenii. 2011 ;8;3-10. (In Russian)
2. Egorov N.P., Shafronov O.D., Egorov D.N., Suleimanov E.V. Development and experimental estimation of application efficiency of new nanotechnol-ogy fertilizers in crop production. Vestnik Nizhego-rodskogo universiteta im. N.I. Lobachevskogo = Vestnik of Lobachevsky University of Nizhni Novgorod. 2008;6;94-99. (In Russian)
3. Papkina AV, Perfileva AI, Zhivetev MA, Bo-rovskiy GB, Graskova IA, Lesnichaya MV, et al. Effect of selenium and arabinogalactan nano-composite on viability of the phytopathogen Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus. Doklady Biological Sciences. 2015;461(1):89-91. https://doi.org/10.11 34/S001249661501010X
4. Perfileva AI, Nozhkina OA, Graskova IA, Si-dorov AV, Lesnichaya MV, Aleksandrova GP, et al. Synthesis of selenium and silver nanobiocomposites and their influence on phytopathogenic bacterium Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus. Russian Chemical Bulletin. 2018;67(1):157-163. https:// doi.org/10.1007/s11172-018-2052-4
5. Perfileva AI, Nozhkina OA, Graskova IA, Dyakova AV, Pavlova AG, Klimenkov IV, et al. Selenium nanocomposites having polysaccharid matrices stimulate growth of potato plants in vitro infected with ring rot pathogen. Doklady Biological Sciences. 2019;489(1):184-188. https://doi.org/10. 1134/S0012 496619060073
6. Zhao L, Lu L, Wang A, Zhang H, Huang M, Wu H, et al. Nano-Biotechnology in Agriculture: Use of Nanomaterials to Promote Plant Growth and Stress Tolerance. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2020;68(7):1935-1947. https://doi.org/10. 1021/ acs.jafc.9b06615
7. Nurminskiy VN, Perfil'eva AI, Kapustina IS, Graskova IA, Sukhov BG, Trofimov BA. Growth-stimulating activity of natural polymer-based nanocomposites of selenium during the germination of cultivated plant seeds. Doklady Rossiiskoi akademii nauk. Nauki o zhizni. 2020;495(1):607-611. (In Russian) https://doi.org/10.31857/S2686738920060207
8. Cremonini E, Zonaro E, Donini M, Lampis S, Boaretti M, Dusi S, et al. Biogenic selenium nanopar-ticles: characterization, antimicrobial activity and effects on human dendritic cells and fibroblasts. Microbial Biotechnology. 2016;9(6):758-771. https:// doi. org/10.1111/1751-7915.12374
9. Nozhkina OA, Perfileva AI, Graskova IA, Nur-minsky VN, Klimenkov IV, Dyakova AV, et al. The biological activity of a selenium nanocomposite encapsulated in carrageenan macromolecules with respect to ring rot pathogenesis of potato plants. Nanotechnologies in Russia. 2019;14(5-6):255-262. https://doi.org/10.1134/S1995078019030091
10. Nikonov IN, Folmanis JG, Kovalenko LV, Laptev GY, Folmanis GE, Egorov IA, et al. Biological activity of nanoscale colloidal selenium. Doklady Biochemistry and Biophysics. 2012;447(1):297-299. https://doi.org/10.1134/S1607672912060075
11. Perfileva AI, Tsivileva OM, Koftin OV, Anis'kov AA, Ibragimova DN. Selenium-containing nanobiocomposites of fungal origin reduce the viability and biofilm formation of the bacterial phytopathogen Clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus. Nanotechnologies in Russia. 2018;13(5-6):268-276. https://doi.org/10.1134/S1995078018030126
12. Mangiapane E, Lamberti C, Pessione A, Galano E, Amoresano A, Pessione E. Selenium effects on the metabolism of a Se-metabolizing Lactobacillus reuteri: analysis of envelope-enriched and extracellular proteomes. Molecular BioSystems. 2014;10(6):272-1280. https://doi.org/10.1039/C3MB 70557A
13. Pescuma M, Gomez-Gomez B, Perez-Corona T, Font G, Madrid Y, Mozzi F. Food prospects of selenium enriched Lactobacillus acidophilus CRL 636 and Lactobacillus reuteri CRL 1101. Journal of Functional Foods. 2017;35;466-473. https:// doi. org/10.1016/j.jff.2017.06.009
14. Martinez FG, Moreno-Martin G, Pescuma M, Madrid-Albarran Y, Mozzi F. Biotransformation of selenium by lactic acid bacteria: formation of seleno-nanoparticles and seleno-amino acids. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 2020;8:506. https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.00506
15. Cherkasov SV, Semenov AV. Microbial regulation of antagonistic activity of lactobacilli. Sibirskii meditsinskii zhurnal (Irkutsk) = Siberian Medical Journal (Irkutsk). 2012;109(2):78-82. (In Russian)
16. Chicherin IYu, Pogorelskiy IP, Lundovskikh IA, Malov АА, Shabalina MR, Darmov IV. Dynamics of the content of lactobacilli, microbial metabolites and antimicrobial activity of growing culture of Lactobacillus plantarum 8P-A3. Zhurnal infektologii = Journal Infectology. 2013;5(3):50-55. (In Russian)
17. Taylor JD, Conway J, Roberts SJ, Astley D, Vicente JG. Sources and origin of resistance to Xan-thomonas campestris pv. campestris in Brassica genomes. Phytopathology. 2002;92(1):105-111. https:// doi.org/10.1094/PHYTO.2002.92.1.105
18. Artemyeva AM, Ignatov AN, Volkova AI, Kocherina NV, Konopleva MN, Chesnokov YuV. Physiological and genetic components of black rot resistance in double haploid lines of Brassica rapa l. Sel'skokhozyaistvennaya biologiya = Agricultural Biology 2018;53(1):157-169. (In Russian) https://doi. org/10.15389/agrobiology.2018.1.157rus
19. Yurkova IN, Panova EP, Panov DA, Omel'chenko AV. A method for obtaining a water-soluble composition of nanoparticles containing selenium nanoparticles. Patent RF, no. 159620; 2015. (In Russian)
20. Kvasnikov EI, Nesterenko OA. Lactic acid
bacteria and ways of their use. Moscow: Nauka; 1975. 390 p. (In Russian)
21. Szegi J. Talajmikrobiologial vizsgalati mod-szerek. Budapest, 1979. (Russ. ed.: Metody poch-vennoi mikrobiologii. Moscow: Kolos; 1983. 296 p.)
22. Trukhacheva NV. Mathematical statistics in biomedical research using the Statistica package. Moscow: GEOTAR-Media; 2013. 384 p. (In Russian)
23. Pophaly SD, Poonam, Singh P, Kumar H, Tomar SK, Singh R. Selenium enrichment of lactic acid bacteria and bifidobacteria: a functional food perspective. Trends in Food Science & Technology. 2014;39(2):135-145. https://doi.org/10.1016yj.tifs. 2014.07.006
24. Moreno-Martin G, Pescuma M, Pérez-Corona T, Mozzi F, Madrid Y. Determination of size and mass-and number-based concentration of biogenic SeNPs synthesized by lactic acid bacteria by using a multimethod approach. Analytica Chimica Acta. 2017; 992:34-41. https://doi.org/10.1016Zj.aca.2017.09.033
25. Zambonino MC, Quizhpe EM, Jaramillo FE, Rahman A, Vispo NS, Jeffryes C, et al. Green synthesis of selenium and tellurium nanoparticles: current trends, biological properties and biomedical applications. International Journal Molecular Sciences. 2021 ;22(3):989. https://doi.org/10.3390/ijms22030989
26. Xia SK, Chen L, Liang JQ. Enriched selenium and its effects on growth and biochemical composition in Lactobacillus bulgaricus. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2007;55(6):2413-2417. https:// doi.org/10.1021/jf062946j
27. Gonzalez-Olivares LG, Contreras-Lopez E, Flores-Aguilar JF, Rodriguez-Serrano GM, Cas-
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
Омельченко Александр Владимирович,
к.б.н., доцент кафедры ботаники и физиологии растений и биотехнологий, Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского, 295007, г. Симферополь, пр-т Академика Вернадского, 4, Российская Федерация, И e-mail: [email protected]
Ржевская Виктория Степановна,
соискатель кафедры фармации,
Крымский федеральный университет
им. В.И. Вернадского,
295051, г. Симферополь, б-р Ленина, 5/7,
Российская Федерация,
e-mail: [email protected]
Крыжко Анастасия Владимировна,
к.с-х.н., ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной генетики, протеомики и биоинформатики в сельском хозяйстве,
Научно-исследовательский институт сельского хозяйства Крыма,
taneda-Ovando A, Jaimez-Ordaz J, et al. Inorganic selenium uptake by Lactobacillus ssp. Revista Mexicana de Ingeniería Química. 2016;15(1):33-38.
28. Tran PL, Hammond AA, Mosley T, Cortez J, Gray T, Colmer-Hamood JA, et al. Organoselenium coating on cellulose inhibits the formation of biofilms by Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. Applied and Environmental Microbiology. 2009;75(11):3586-3592. https://doi.org/10.1128/ AEM.02683-08
29. Khalid AQ, AlJohny BO, Wainwright M. Antibacterial effects of pure metals on clinically important bacteria growing in planktonic cultures and biofilms. African Journal of Microbiology Research. 2014;8
(10):1080-1088. https://doi.org/10.5897/AJMR2013. 5893
30. Yang J, Huang K, Qin S, Wu X, Zhao Z, Chen F. Antibacterial action of selenium-enriched probiotics against pathogenic Escherichia coli. Digestive Diseases and Sciences. 2008;54(2):246-254. https:// doi.org/10.1007/s10620-008-0361-4
31. Kheradmand E, Rafii F, Yazdi MH, Sepahi AA, Shahverdi AR, Oveisi MR. The antimicrobial effects of selenium nanoparticle-enriched probiotics and their fermented broth against Candida albicans. DARU Journal of Pharmaceutical Science. 2014;22. Article number 48. https://doi.org/10.1186/2008-2231-22-48
32. Visser R, Holzapfel WH, Bezuidenhout JJ, Kotze JM. Antagonism of lactic acid bacteria against phytopathogenic bacteria. Applied and Environmental Microbiology. 1986;52(3):552-555. https://doi.org/ 10.1128/AEM.52.3.552-555.1986
INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Aleksandr V. Omelchenko,
Cand. Sci. (Biology), Associate Professor, Department of Botany and Physiology of Plants and Biotechnology, V.I. Vernadsky Crimean Federal University, 4, Academician Vernadsky Ave., Simferopol, 295007, Russian Federation, El e-mail: [email protected]
Victoria S. Rzhevskaya,
candidate of the Department of Pharmacy, V.I. Vernadsky Crimean Federal University, 5/7, Lenin B/v, Simferopol, 295051, Russian Federation, e-mail: [email protected]
Anastasiia V. Kryzhko,
Cand. Sci. (Agriculture), Leading Researcher, Laboratory of Molecular Genetics, Proteomics and Bioinformatics in Agriculture Research Institute of Agriculture of Crimea, 150, Kievskaya St., Simferopol, 295453, Russian Federation,
295453, г. Симферополь, ул. Киевская, 150, e-mail: [email protected]
Российская Федерация, e-mail: [email protected]
Панов Денис Александрович,
к.х.н., доцент кафедры общей
и физической химии,
Крымский федеральный университет
им. В.И. Вернадского,
295007, г. Симферополь,
пр-т Академика Вернадского, 4,
Российская Федерация,
e-mail: [email protected]
Бугара Игорь Александрович,
к.б.н., доцент кафедры ботаники и физиологии растений и биотехнологий, Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского, 295007, г. Симферополь, пр-т Академика Вернадского, 4, Российская Федерация, e-mail: [email protected]
Заявленный вклад авторов
Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.
Поступила в редакцию 18.01.2020. Одобрена после рецензирования 23.02.2020. Принята к публикации 28.02.2021.
Denis A. Panov,
Cand. Sci. (Chemistry), Associate Professor, Department of General and Physical Chemistry, V.I. Vernadsky Crimean Federal University, 4, Academician Vernadsky Ave., Simferopol, 295007, Russian Federation, e-mail: [email protected]
Igor A. Bugara,
Cand Sci. (Biology), Associate Professor, Department of Botany and Physiology of Plants and Biotechnology, V.I. Vernadsky Crimean Federal University, 4, Academician Vernadsky Ave., Simferopol, 295007, Russian Federation, e-mail: [email protected]
Contribution of the authors
The authors contributed equally to this article.
Conflict interests
The authors declare no conflict of interests regarding the publication of this article.
The final manuscript has been read and approved by all the co-authors.
The article was submitted 18.01.2020. Approved after reviewing 23.02.2020. Accepted for publication 28.02.2021.
