CC BY
22
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241
ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
УДК: 615.276+618.46+612.592+616-002+612.11
(ее)]
ВЛИЯНИЕ КРИОКОНСЕРВИРОВАННОГО ЭКСТРАКТА ПЛАЦЕНТЫ НА ОТДЕЛЬНЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ЛЕЧЕБНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ И ТОКСИЧНОСТИ ДИКЛОФЕНАКА НАТРИЯ ПРИ АДЪЮВАНТ-ИНДУЦИРОВАННОМ АРТРИТЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Ф.В. Гладких1,2, Н.А. Чиж1, А.А. Манченко1, И.В. Белочкина1, И.П. Михайлова1
1 Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины 61016, Украина, г. Харьков, ул. Переяславская, д. 23
2 Государственное учреждение «Институт медицинской радиологии и онкологии им. С.П. Григорьева Национальной академии медицинских наук Украины»
61024, Украина, г. Харьков, ул. Пушкинская, д. 82
Актуальность. Нестероидные противовоспалительные препараты являются одними из наиболее востребованных классов лекарственных средств в клинике внутренней медицины. Однако применение указанных препаратов ассоциируется с широким спектром нежелательных реакций с вовлечением ряда органов и систем, в частности желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы и почек.
Цель. Охарактеризовать влияние криоконсервированного экстракта плаценты и диклофенака натрия при их комбинированном применении на состояние прооксидантно-оксидантной системы, активность воспалительных, деструктивных и цитолитических процессов, а также состояние белкового и липидного обмена по данным биохимических исследований у крыс с экспериментальным ревматоидным артритом.
Результаты. Введение диклофенака натрия и криоконсервированного экстракта плаценты крысам с адъювантным артритом привело к нормализации уровня активных продуктов тиобарбитуровой кислоты, что указывает на нивелирование признаков артрит-индуцированного оксидативного стресса. Также выявлено статистически достоверное (р=0,01) повышение активности супероксиддисмутазы на 30,6% относительно значений у крыс контрольной группы. Установлено усиление противовоспалительных свойств диклофенака натрия на фоне комбинированного применения диклофенака натрия с криоконсервированным экстрактом плаценты, так как уровень С-реактивного белка снизился (р<0,001) на 61,1% относительно нелеченых крыс, а уровень серомукоида статистически достоверно (р<0,01) снизился на 17,1% относительно показателей крыс группы монотерапии исследуемым нестероидным противовоспалительным препаратом. Показано, что уровень аланин-аминотрансферазы статистически достоверно (р<0,01) был ниже на 38,9%, а аспартат-аминотрансферазы - ниже на 37,9% (р<0,01) относительно показателей животных, которым вводили диклофенак натрия, что соответственно на 16,7% (р=0,02) и 17,2% (р<0,001) было ниже показателей крыс контрольной группы с нелеченым адъювантным артритом. Установленные изменения со стороны аминотрансфераз указывают на способность криоконсервированного экстракта плаценты нивелировать не только артрит-индуцированный цитолитический синдром, но и диклофенак-индуцированный. Комбинированное применение криконсервованого экстракта плаценты и диклофенака натрия сопровождалось нормализацией уровня общих липидов и фосфолипидов в сыворотке крови крыс на фоне экспериментального ревматоидного артрита. Так содержание фосфолипидов в пуле липидов статистически достоверно (р=0,02) выросло на 22,6% относительно показателей животных с адъювантным артритом без лечения.
Заключение. Исследование показало, что комбинированное применение диклофенака натрия и криконсервирован-ного экстракта плаценты приводит к восстановлению равновесия прооксидантно-антиоксидантной системы, более выраженному, чем при монотерапии диклофенаком натрия, снижению активности воспалительных, деструктивных и цитолитических процессов, а также восстановлению липидного обмена у крыс с экспериментальным ревматоидным артритом.
Ключевые слова: криоконсервированый экстракт плаценты; адъювантный артрит; противовоспалительная активность; нестероидные противовоспалительные препараты; диклофенак натрия
Для цитирования: Ф.В. Гладких, Н.А. Чиж, А.А. Манченко, И.В. Белочкина, И.П. Михайлова. Влияние криоконсервированного экстракта плаценты на отдельные биохимические показатели лечебной эффективности и токсичности диклофенака натрия при адъювант-индуцированном артрите в эксперименте. Фармация и фармакология. 2021;9(4):278-293. DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293 © Ф.В. Гладких, Н.А. Чиж, А.А. Манченко, И.В. Белочкина, И.П. Михайлова, 2021
For citation: F.V. Hladkykh, M.O. Chyzh, A.O. Manchenko, I.V. Belochkina, I.P. Mikhailova. Effect of cryopreserved placenta extract on some biochemical indices of therapeutic efficiency and toxicity of diclofenac sodium in adjuvant-induced experimental arthritis. Pharmacy & Pharmacology. 2021;9(4):278-293. DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
E-mail: fedir.hladkykh@gmail.com
Получено 28.05.2021
Принята к печати 16.08.2021
Scientific and Practical Journal
PHARMACY & PHARMACOLOGY
RESEARCH ARTICLE
DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
Список сокращений: АА - адъювантный артрит; АлАТ - аланин-аминотрансфераза; АОС - антиоксидантная система; АсАТ - аспартат-аминотрансфераза, в/ж - внутрижелудочно, в/м - внутримышечно; ГГТП - гамма-глутамилтраспепти-даза; ДН - диклофенак натрия; ЖКТ - желудочно-кишечный тракт; ИПКиК НАН Украины - Института проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины; КЭП - криоконсервированный экстракт плаценты; НПВП - нестероидные противовоспалительные препараты; ОС - оксидативный стресс; ПОЛ - перикисное окисление липидов; ПОЛ-АОС - перекисное окисление липидов-антиоксидантная система; СОД - супероксиддисмутаза; С-РБ -С-реактивный белок; ТБК-РП - активные продукты тиобарбитуровой кислоты; ЦОГ - циклооксигеназа; 95% ДИ - 95% доверительный интервал
EFFECT OF CRYOPRESERVED PLACENTA EXTRACT ON SOME BIOCHEMICAL INDICES OF THERAPEUTIC EFFICIENCY AND TOXICITY OF DICLOFENAC SODIUM IN ADJUVANT-INDUCED EXPERIMENTAL ARTHRITIS
F.V. Hladkykh1'2, M.O. Chyzh1, A.O. Manchenko1, I.V. Belochkina1, I.P. Mikhailova1
1 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine 23, Pereyaslavska Str., Kharkiv, Ukraine, 61015
2 State Organization "Grigoriev Institute for Medical Radiology and Oncology of the National Academy of Medical Sciences of Ukraine"
82, Pushkinska Str., Kharkiv, Ukraine, 61024
E-mail: fedir.hladkykh@gmail.com
Received 28 May 2021 Accepted 16 Aug 2021
Relevance. Non-steroidal anti-inflammatory drugs are among the top requested ones in the clinic of internal medicine. However, these drugs are associated with a wide range of adverse reactions involving a number of organs and systems, in particular the gastrointestinal tract, cardiovascular system and kidneys.
The aim of the study is to characterize the effect of the combined use of cryopreserved placenta extract and diclofenac sodium on the prooxidant-oxidative system, the activity of inflammatory, destructive and cytolytic processes, as well as protein and lipid metabolism in rats with experimental rheumatoid arthritis.
Results. The administration of diclofenac sodium and cryopreserved placenta extract to rats with adjuvant arthritis normalized the level of active products of thiobarbituric acid and hence was indicative of the neutralization of an arthritis-induced oxidative stress. A statistically significant (p=0.01) increase of in a superoxide dismutase activity (by 30.6% relative as compared with rats of the control group) has also been established. An increase in the anti-inflammatory properties of diclofenac sodium in the combined use of diclofenac sodium with a cryopreserved placenta extract has been found out. The level of C-reactive protein decreased (p<0.001) by 61.1% as compared with the untreated rats, and the level of seromucoid has been significantly (p<0.01) decreased by 17.1% as compared with the rats of the monotherapy group treated with the studied NSAIDs. It was shown that alanine aminotransferase and aspartate levels were significantly lower (by 38.9%, p<0.01 and by 37.9%, p<0.01, respectively) as compared with those of the animals that had been administrated with diclofenac sodium. Their indices were by 16.7% (p=0.02) and 17.2% (p<0.001) lower than the indices of the control group rats with untreated adjuvant arthritis. The established changes of aminotransferases levels indicate the ability of a cryopreserved placenta extract to level not only an arthritis-induced cytolytic syndrome, but also a diclofenac-induced one. The combined use of cryopreserved placenta extract and diclofenac sodium was accompanied by the normalization of the total lipids level and phospholipids in the blood serum of rats against the background of experimental rheumatoid arthritis. Thus, the content of phospholipids in the lipid pool statistically significantly (p=0.02) increased by 22.6% as compared with the indices of the animals with adjuvant arthritis without treatment.
Conclusion. The study showed that the combined use of diclofenac sodium and cryopreserved placenta extract leads to the restoration of the balance of the prooxidant-antioxidant system that is more pronounced than monotherapy with diclofenac sodium. A decrease in the activity of inflammatory, destructive and cytolytic processes, as well as the restoration of lipid metabolism in the rats with experimental rheumatoid arthritis, has also been observed.
Keywords: cryopreserved placenta extract; adjuvant arthritis; anti-inflammatory activity; nonsteroidal anti-inflammatory drugs; diclofenac sodium
Abbreviations: AlAT - alanine-aminotransferase; AsAT - aspartate aminotransferase; AA - adjuvant arthritis; AOS - antioxidant system; COX - cyclooxygenase; CPE - cryopreserved placenta extract; C-RP - C- reactive protein; DS - diclofenac sodium; GGTP - gamma glutamyl traspeptidase; GI tract - gastrointestinal tract; i/g - intragastrically; i/m - intramuscularly; IPC & C NAS of Ukraine - Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine; LP - lipid peroxidation; LP-AOS - lipid peroxidation-antioxidant system; NSAIDs - non-steroidal anti-inflammatory drugs; OS - oxidative stress; RA - rheumatoid arthritis; SOD - superoxide dismutase; TBA-AP - active products of thiobarbituric acid; 95% CI - 95% Confidence interval
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241
ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
ВВЕДЕНИЕ
Среди многочисленных лекарственных средств, которые есть в арсенале клиницистов, нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) занимают особое место. Это обусловлено наличием у них неспецифического противовоспалительного и обезболивающего свойств, что обосновывает ежегодное увеличение их продаж на фоне старения населения, поскольку, как известно, частота их применения возрастает с возрастом. НПВП играют особую роль в симптоматической терапии больных с ревматическими заболеваниями: ревматоидный артрит (РА), анки-лозирующий спондилоартрит, подагра и др. [1-5].
Однако, не смотря на общепризнанную эффективность НПВП, их применение в клинической практике существенно ограничено риском развития нежелательных побочных эффектов со стороны различных органов и систем, в частности желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), сердечно-сосудистой системы, печени, почек [2-6]. К тому же в 25,0-35,0% случаев пациенты применяют НПВП нерационально и не учитывают наличия факторов риска развития нежелательных эффектов.
Известно, что максимальный риск сердечно-сосудистых осложнений имеет место при приёме препаратов, обладающих высокой селективностью к ци-клооксигеназе (ЦОГ) 2 типа (коксибов - целекоксиба, эторикоксиба и др.), в то время как риск осложнений со стороны ЖКТ наиболее характерен при приеме неселективных НПВП (диклофенака, индометацина, ибупрофена и др.) [3, 4]. Так в первые 7 дней приёма целекоксиба, повышение риска инфаркта миокарда составляет 92,0-99,0% [3, 7]. Нежелательные реакции со стороны ЖКТ - наиболее распространенная патология, обусловленная ингибированием ЦОГ-1 и как следствие снижением защитного потенциала слизистой оболочки пищеварительного тракта [8, 9]. Неселективные ингибиторы ЦОГ повышают риск ЖКТ-кровотече-ний в среднем в 4 раза, а селективные - в 3 раза [4, 5].
Проблема ЖКТ-переносимости широко применяемых НПВП обосновывает актуальность поиска эффективных цитопротективных препаратов, способных повышать устойчивость слизистой оболочки пищеварительного тракта [10, 11]. Лечение НПВП-индуци-рованной эзофагогастроэнтероколонопатии классически направлено на кислотосупрессивную терапию (ингибиторы протонной помпы, Н2-гистаминоблока-торы и др.), применение гастроцитопротекторов (де-нол, сукральфат и др.) и препаратов, которые восстанавливают содержание простагландинов в слизистой оболочке (мизопростол, ребамипид и др.) [5, 12-14]. Однако все указанные группы лекарственных средств недостаточно удовлетворяют клиницистов, поскольку направлены преимущественно на лечение НПВП-га-стропатии, в то время как НПВП способны вызывать поражения, в том числе, и дистальных отделов ЖКТ, а также имеют собственные побочные эффекты [13-19].
Одним из перспективных направлений терапии патологий ЖКТ является использование препаратов биологического происхождения, преимуществами которых является их комплексное фармакологическое действие и хорошая переносимость. [20-22].
В качестве средства коррекции ульцерогенного действия НПВП наше внимание привлек криокон-сервированный экстракт плаценты (КЭП) человека, обладающий мультивекторным спектром биологической активности [23-26].
Впервые криоконсервированные препараты плацентарной ткани человека были получены учеными Института проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины (ИПКиК НАН Украины), которые разработали и внедрили в практику уникальную методику его длительного хранения в низкотемпературной среде. Это обеспечило первенство Украины среди европейских стран по опыту крио-консервирования биологических тканей [26-31].
В предыдущих исследованиях нами показано, что КЭП способен нивелировать ульцерогенное действие НПВП, в частности диклофенака натрия, мелок-сикама, ибупрофена и др. [32-34]. В то же время по данным литературы КЭП присущи собственные противовоспалительные свойства [35], механизм которых, очевидно, связан с действием содержащихся в нем гормонов (прогестерона, эстрадиола, пролакти-на, гонадотропина и др.).
Кроме того, КЭП обладает выраженными анти-оксидантными свойствами и его противовоспалительное действие, возможно, связано с устранением провоспалительной модуляции реакций системы крови активными формами кислорода и продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в результате стимуляции физиологической антиоксидантной системы [35].
Все вышеуказанные факты обосновывают необходимость углубленного изучения механизмов терапевтического, в частности противовоспалительного, действия КЭП при его комбинированном использовании с НПВП.
ЦЕЛЬ. Охарактеризовать влияние криоконсер-вированного экстракта плаценты и диклофенака натрия при их комбинированном применении на состояние прооксидантно-антиоксидантной системы, активность воспалительных, деструктивных и цито-литических процессов, а также состояние белкового и липидного обмена по данным биохимических исследований у крыс с экспериментальным ревматоидным артритом.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследование проведено на базе ИПКиК НАН Украины в отделе экспериментальной криомеди-цины. Работа выполнена в контексте плановой научно-исследовательской работы «Деструктивные и
PHARMACY & DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
PHARMACOLOGY
восстановительные процессы в тканях in vivo после воздействия низких температур и биологически активных веществ» (шифр 2.2.6.113, номер государственной регистрации 0117U001049).
Исследование проведено на 28 половозрелых нелинейных крысах-самцах, полученных из вивария ИПКиК НАН Украины, массой 200-220 г, разделенных на 4 группы, по 7 животных в каждой: I -интактные крысы (n=7); II (контроль) - крысы (n=7) с экспериментальным РА без лечения; III - крысы (n=7) с экспериментальным РА, которым вводили диклофенак натрия (ДН) (8 мг/кг [36], внутрижелудочно (в/ж)); IV (n=7) - крысы с экспериментальным РА, которым вводили ДН (8 мг/кг, в/ж) и КЭП (0,16 мг/кг [37], внутримышечно (в/м)).
Режим введения и дозировки
исследуемых средств
Лечение АА проводилось с 14-го по 28-й день. ДН (ЧАО «Химфармзавод «Красная звезда»», ООО «Фармацевтическая компания «Здоровье»», Украина) вводили в/ж в дозе, равной ЕД50 по противовоспалительной активности на модели карагенин-ин-дуцированного отека - 8 мг/кг в виде эмульсии на полисорбате «Twin-80» [35, 37]. Указанная доза ДН соответствует разовой дозе для человека 88 мг (1,25 мг/кг), что согласуется с клиническими рекомендациями об использовании ДН у больных по 75-100 мг/сут. при его длительном применении и в 1,7 раза ниже его максимальной суточной дозы 150 мг [8].
Препарат КЭП «Криоцелл-криоэкстракт плаценты» (Государственное предприятие «Межведомственный научный центр криобиологии и криомеди-цины Национальной академии наук, Национальной академии медицинских наук и Министерства здравоохранения Украины», Украина) согласно инструкции, применяется у пациентов парентерально в разовой дозе 1,8 мл [37]. Перед применением препарата «Криоцелл-криоэкстракт плаценты» разовую дозу (0,16 мл/кг) экстемпорально разводили в 0,9% растворе хлорида натрия из расчета 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия /100 г массы тела. КЭП по 0,16 мл/ кг массы тела вводили в/м с интервалом 2 дня (всего 5 инъекций), соответственно на 14, 17, 20, 23 и 26 дни, что соответствовало инструкции к его клиническому применению - в/м по 1,8 мл с интервалом 2-3 дня курсом 1-5 инъекций.
Модель хронического иммунного воспаления
Для воспроизведения условий введения крысам НПВП, соответствующих их клиническому применению нами была выбрана модель экспериментального ревматоидного артрита (РА) - адъювантный артрит (АА) у крыс, которая имеет все морфофункци-ональные признаки РА и сопровождается типичной реакцией, основным звеном которой является Т-кле-точный иммунитет [38-40]. АА моделировали путем
субплантарного введение полного адъюванта Фрей-нда (ПАФ, Thermo Fisher Scientific, США) в заднюю правую конечность из расчета 0,1 мл на крысу. День введения адъюванта принимали за «0» день эксперимента [40-42]. Максимальное проявление местной воспалительной реакции, которая сопровождалась значительным увеличением объема конечности определялась на 12-14 сутки, далее активность воспалительного процесса постепенно уменьшалась.1
На 28 сутки эксперимента животных выводили из эксперимента и после декапитации животных отбирали образцы крови в пробирки с предварительно внесенным антикоагулянтом (2-х замещенной калийной солью этилендиаминотетрауксусной кислоты). Плазму отделяли центрифугированием в течение 15 мин при 3000 об/мин. Для получения сыворотки кровь отбирали в стеклянные пробирки без антикоагулянта и выдерживали при комнатной температуре (20-26°С) до полного отделения сыворотки, которую отбирали в пробирку и центрифугировали в течение 15-20 мин при 3000 об/мин.
Биохимические методы исследования крови2
1. Содержание активных продуктов тиобарбитуро-вой кислоты (ТБК-РП) в сыворотке крови определяли спектрофотометрически по методу Asakawa Т. et al. [43] по реакции с ТБК и рассчитывали по показателям оптической плотности, определенным по светопоглощению при длине волны Л=535 нм, учитывая коэффициент молярной экс-тинкции окрашенного в красный цвет комплекса, который равен 1,56 х 105 моль-1/см-1 и выражали в мкмоль/л;
2. Активность супероксиддисмутазы (СОД) в сыворотке крови (КФ 1.15.1.1.) определяли спектрофотометрически по методу Костюка В.А. и соавт. [44], основанному на подавлении реакции окисления кверцетина, по показателям оптической плотности, определенным по светопоглощению при длине волны Л=406 нм. Активность СОД выражали в % ингибирования окисления кверцетина;
3. Содержание серомукоида в сыворотке крови определяли спектрофотометрически по методу Weimer H.E. и Moshin R.J., который заключается в осаждении белков сыворотки крови 1,8 М раствором перхлорной кислоты (HCIO4), выделении серомукоида из фильтрата с помощью фосфор-но-вольфрамовой кислоты и дальнейшем количественном определении по разнице светопо-глощения при длине волны Л=260 нм и Л=280 нм. Содержание серомукоида определяли в единицах оптической плотности (ед. опт. плотн.) и вы-
1 Стефанов О.В. ДоклЫчш дослщження лтарських засс^в : мето-дичш рекомендаций за ред. член-кор. АМН УкраУни О.В. Стефано-ва. - КиУв: Видавничи дiм «Авщена», 2001. - 527 с.
2 Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. Москва: МЕДпресс-ин-форм; 2009. 896 с.
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241
ражали в ммоль/л (коэффициент пересчета = 1; 1 ед. опт. плотн. =1 ммоль/л);
4. Содержание С-реактивного белка (С-РБ) в сыворотке крови определяли по степени агглютинации и помутнения согласно инструкции использования латексного диагностического теста для выявления С-реактивного белка в сыворотке крови «С-РБ латекс-тест» (ООО НПЛ «Гранум», Украина) и выражали в мг/л;
5. Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови (КФ 2.6.1.1) определяли спек-трофотометрически по методу Reitman S. и Frankel S. и выражали в мкмоль/(млхч). Исследования проводились с использованием наборов для биохимических исследований «АЛТ (Райт-ман-Френкеля с калибратором)» (ООО НПП «Фи-лисит-Диагностика», Украина);
6. Активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ) в сыворотке крови (КФ 2.6.1.1) определяли спектрофотометрически по методу Reitman S. и Frankel S. И выражали в мкмоль/(млхч). Исследования проводились с использованием наборов для биохимических исследований «АсАТ (Райт-ман-Френкеля с калибратором)» (ООО НПП «Фи-лисит-Диагностика», Украина);
7. Активность гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТП) в сыворотке крови определяли спектрофо-тометрическим методом и выражали в Ед/л. Исследования проводились с использованием наборов для биохимических исследований «ГТП» (ООО НПП «Филисит-Диагностика», Украина);
8. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови определяли спектрофотометрическим методом и выражали в мкмоль/л. Исследования проводились с использованием наборов для биохимических исследований «Щелочная фосфата-за» (ООО НПП «Филисит-Диагностика», Украина);
9. Содержание общего белка в сыворотке крови определяли спектрофотометрическим методом по биуретовой реакции и выражали в г/л. Исследования проводились с использованием наборов для биохимических исследований «Общий белок» (ООО НПП «Филисит-Диагностика», Украина);
10. Содержание общих липидов в сыворотке крови определяли спектрофотометрически по цветовой реакции с сульфофосфованилиновим реактивом, которая основывается на том, что продукты распада ненасыщенных жирных кислот, образующихся после кислотного гидролиза липидов, взаимодействуют с фосфорнованилиновим реактивом с образованием окрашенных комплексов, имеющих максимум поглощения при длине волны Л=530 нм. Липидные экстракты получали по методу Bligh E. G. и Dyer W. I. [45]. Фосфолипиды фракционировали методом Svetashev V. I. и Vaskovsky V. E., путем двумерной микротонкошаровой хроматографии [46]. Фосфолипиды идентифицировали по методу
ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
[47] и выражали их содержание по уровню неорганического фосфора в г/л.
Биоэтические аспекты исследования
Животных содержали в условиях вивария ИПКиК НАН Украины. В течении 14 дней крысы находились на карантине (в соответствии с санитарными нормами «Структура и содержание экспериментальных биологических клиник» (Приказ № 755 от 12.08.1997 г.) на водно-пищевом рационе со свободным доступом к пище и воде (согласно Приложения от 04.12.1977 г. к Приказу №163 от 10.03.1996 г. «Про суточные нормы кормления лабораторных животных и продуцентов»). Все экспериментальные исследования над лабораторными животными проводили в соответствии с требованиями надлежащей лабораторной практики и с соблюдением основных положений Конвенции Совета Европы об охране позвоночных животных, используемых в экспериментах и в других научных целях от 18 марта 1986 г.; Директивы Европейского парламента и Совета Евросоюза 2010/63/ЕС от 22 сентября 2010 г. о защите животных, используемых для научных целей; приказ Министерства здравоохранения Украины от 14 декабря 2009 г. №944 «Об утверждении порядка проведения доклинического изучения лекарственных средств и экспертизы материалов доклинического изучения лекарственных средств» и Закона Украины от 21 февраля 2006 г. № 3447-IV «О защите животных от жестокого обращения».
Комплексная программа исследований рассмотрена и согласована Комитетом по биоэтике при ИПКиК НАН Украины (выписка из протокола № 2 от 11 марта 2020).
Статистическая обработка
полученных результатов
Проведена с использованием прикладной программы для работы с электронными таблицами «Microsoft Office Excel 2003; 2013» (Microsoft Corporation, США) с помощью расширения «Real Statistics» (http://www. real-statistics.com/). Оценку характера распределения величин в каждой группе выборочной совокупности проводили с использованием W-критерия Шапиро-Вилка (Shapiro-Wilk test; n<50). Однородность дисперсий определяли по критерию Левена (Levene's test). Для оценки значимости выявленных различий исследуемых показателей при разных условиях эксперимента проводили статистический анализ с использованием параметрических и непараметрических критериев. При нормальном распределении независимых величин различия между группами определяли попарно по t-кри-терию Стьюдента. При ненормальном распределении по крайней мере одной из групп независимых величин различия между ними определяли попарно по непараметрическому ранговому U-критерию Манна-Уитни (Mann-Whitney). Полученные значения сравнивали с критическими при уровне достоверности выше 95,0%
PHARMACY & DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
PHARMACOLOGY
(p<0,05), выше 99,0% (p<0,01), выше 99,5% (p<0,005) и выше 99,9% (p<0,001) и делали вывод о вероятности погрешности. Цифровые данные в случае нормального распределения величин приведены в виде «M±m» (M±SE), где: M - среднее арифметическое значение; m (SE) - стандартная ошибка среднего арифметического или М (95% ДИ: 5% - 95%), где: 95% ДИ - 95% доверительный интервал. При ненормальном распределении полученных величин данные представлены в виде Ме [LQ; UQ], где Ме - медиана [LQ; UQ] - верхняя граница нижнего (первого) квартиля (lower quartile - LQ) и нижняя граница верхнего (третьего) квартиля (upper quartile - UQ).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Биохимические исследования периферической крови крыс с АА (контрольная группа) показали статистически достоверное (р<0,001) увеличение содержания ТБК-РП на 53,7% относительно показателей интактных животных (рис. 1), что указывает на активацию ПОЛ, что вероятно обусловлено развитием системного воспалительного процесса [47, 48].
Как известно продукты ПОЛ способствуют агрегации тромбоцитов, уменьшению синтеза простагланди-нов с антикоагулянтным действием, формированию синдрома цитолиза, выходу факторов свертывания крови и подавлению деления и регенерации клеток. ТБК-РП выступает эндогенным альдегидом, который является клинико-лабораторным маркером оксидативного стресса и широко применяется для контроля эффективности лечения целого ряда заболеваний - РА, остеоар-трит, ишемическая болезнь сердца и др. [49-51].
Монотерапия ДН крыс с АА привела к статистически достоверному (р<0,01) снижению уровня ТБК-РП на 19,0% относительно показателей животных контрольной группы в аналогичные сроки исследования. Комбинированное применение ДН и КЭП сопровождалось более выраженным снижением интенсивности процессов ПОЛ на что указывало уменьшение содержания ТБК-РП у крыс с АА на 31,7% относительно показателей крыс с АА без лечения, что в 1,7 раз превышало аналогично направленные изменения на фоне применения только ДН.
Следует отметить, что у животных с АА, которым вводили ДН и КЭП уровень ТБК-РП на 28 день эксперимента практически сопоставлялся с показателями интактных крыс и составлял 4,3 [3,6; 4,5] мкмоль/л (рис. 1), что указывает на нивелирование признаков АА-индуцированного оксидативного стресса и может расцениваться как один из механизмов лечебного действия исследуемых препаратов.
Установленная активация ПОЛ у крыс на фоне развития АА согласовывалась с параллельным истощением антиоксидантной системы (АОС) на что указывало статистически достоверно (р<0,01) снижение уровня СОД на 27,9% относительно показателей интактных животных (рис. 2).
Как известно, СОД совместно с другими ферментами АОС (каталаза, церулоплазмин, глутати-онпероксидаза, глутатионредуктаза и др.) выступают неотъемлемым компонентом ПОЛ-АОС. Оценка функционального состояния АОС определяет уровень компенсаторного и адаптивного ответа организма в условиях возможного развития ОС [51, 52].
8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 ■5 5,5
л
q
1 5.0 s
4.5 4.0 3,5 3,0
•
♦ 63
i
-♦-
5,1 i
:—I—
■в ♦4,3
Г ' -------
Интактные крысы Контроль АА + ДН АА + ДН + КЭП
(АА без лечения)
Рисунок 1 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на уровень ТБК-РП в периферической крови у крыс с АА на 28-е сутки эксперимента
Примечание: распределение величин ненормальное. Боксы включают результаты от 25-го до 75-го перцентиля, вертикальные линии за пределами боксов - минимальное и максимальное значения. Горизонтальная линия внутри бокса - медиана (► - медиана равна 25 (75) перцентилю), ♦ - среднее значение; • - р<0,05 относительно показателей интактных крыс, ■ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА без лечения; ▲ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА, леченных ДН
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241
ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
Рисунок 2 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на уровень СОД в периферической крови у крыс с АА на 28-е сутки эксперимента
Примечание: распределение величин ненормальное. Боксы включают результаты от 25-го до 75-го перцентиля, вертикальные линии за пределами боксов - минимальное и максимальное значения. Горизонтальная линия внутри бокса - медиана (► - медиана равна 25 (75) перцентилю), ♦ - среднее значение; • - р<0,05 относительно показателей интактных крыс, ■ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА без лечения; ▲ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА, леченных ДН
Рисунок 3 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на уровень серомукоида в периферической крови у крыс с АА на 28-е сутки эксперимента
Примечание: распределение величин ненормальное. Боксы включают результаты от 25-го до 75-го перцентиля, вертикальные линии за пределами боксов - минимальное и максимальное значения. Горизонтальная линия внутри бокса - медиана (► - медиана равна 25 (75) перцентилю), ♦ - среднее значение; • - р<0,05 относительно показателей интактных крыс, ■ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА без лечения; ▲ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА, леченных ДН
Scientific and Practical Journal
PHARMACY & PHARMACOLOGY
RESEARCH ARTICLE
DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
Рисунок 4 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на уровень С-РБ в периферической крови у крыс с АА на 28-е сутки эксперимента
Примечание: распределение величин ненормальное. Боксы включают результаты от 25-го до 75-го перцентиля, вертикальные линии за пределами боксов - минимальное и максимальное значения. Горизонтальная линия внутри бокса - медиана (► - медиана равна 25 (75) перцентилю), ♦ - среднее значение; • - p<0,05 относительно показателей интактных крыс, ■ - p<0,05 относительно показателей крыс с АА без лечения; ▲ - p<0,05 относительно показателей крыс с АА, леченных ДН
180 С-
Интакгные Контроль АА + ДН АА + ДН + КЭП
крысы (АА без лечения)
Рисунок 5 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на уровень щелочной фосфатазы в периферической крови у крыс с АА на 28-е сутки эксперимента
Примечание: распределение величин ненормальное. Боксы включают результаты от 25-го до 75-го перцентиля, вертикальные линии за пределами боксов - минимальное и максимальное значения. Горизонтальная линия внутри бокса - медиана (► - медиана равна 25 (75) перцентилю), ♦ - среднее значение; • - р<0,05 относительно показателей интактных крыс, ■ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА без лечения; ▲ - р<0,05 относительно показателей крыс с АА, леченных ДН
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241 ФАРМАЦИЯ И
ФАРМАКОЛОГИЯ
Таблица 1 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на маркеры цитолиза в периферической крови крыс с АА на 28-е сутки эксперимента (М±т (95% ДИ) или Ме UQ]; п=28)
Условия эксперимента
Исследуемый показатель, 1 группа II группа III группа IV группа
единицы измерения Интактные крысы Контроль (АА без лечения) АА + ДН АА +ДН +КЭП
п 7 7 7 7
Аланин-аминотрансфераза (АлАт), мкмоль/мл/ч 1,4 [1,3; 1,6] 1,8 [1,6; 1,9] р1-2=0,01 2,2 [2,1; 2,3] р13<0,01 Р2-3=0,01 1,5 [1,5; 1,6] Pl-4=0,17 р2Ч=0,02 Р2-4<0,01
Аспартат-аминотрансфера-за (АсАт), мкмоль/мл/ч 2,3 [2,1; 2,4] 2,9 [2,9; 3,5] р1-2<0,001 3,5 [3,3; 2,4] Pi-3<0,01 Р2-3=0,2 2,4 [2,3; 2,5] Р „=0,14 1-4 ' Р2-4<0,001 ^3-4<0,01
Гаммаглутамил-транспепти-даза (ГГТП), Ед/л 22,3±1,81 (95% ДИ: 18,7-25,8) 36,1±0,80 (95% ДИ: 34,6-37,7) р12<0,001 27,9±1,30 (95% ДИ: 25,3-30,4) Pi-3=0,03 р2 3<0,001 23,9±1,10 (95%% ДИ: 21,7-26,0) р =0,5 1-4 р2-4<0,001 Р3-4=0,04
Таблица 2 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на показатели белкового гомеостаза в периферической
крови крыс с АА на 28-е сутки эксперимента (М±т (95% ДИ) или Ме [LQ; UQ]; п=28)
Условия эксперимента
Исследуемый показатель, 1 группа II группа III группа IV группа
единицы измерения Интактные крысы Контроль (АА без лечения) АА +ДН АА +ДН +КЭП
п 7 7 7 7
Общий белок, г/л 78,9±1,45 (95% Д1: 76,0-81,7) 74,6±1,36 (95% ДИ: 71,9-77,2) р1-2= 0,05 74,7±0,92 (95%% ДИ: 72,9-76,5) р13= 0,03 Р2-3= 0,9 81,0±1,50 (95%% ДИ: 78,1-83,9) Р1-4= 0,3 р2-4=0,01 Р3-4<0,01
Альбумины, г/л 35,3±1,69 (95% ДИ: 32,0-38,6) 25,1±1,03 (95% ДИ: 23,1-27,2) р1-2<0,001 27,9±1,30 (95%% ДИ: 25,3-30,4) Pi-3<0,01 Р2-3=0,1 37,4±1,90 (95%% ДИ: 33,7-41,2) р =0,01 1-4 р2-4<0,001 Р3-4<0,01
Глобулины, г/л 45,7±1,54 (95% ДИ: 42,7-48,7) 49,6±1,29 (95% ДИ: 47,0-52,1) ры= 0,08 46,7±1,19 (95%% ДИ: 44,4-49,0) Pi-3=0,6 Р2-3=0,1 40,4±0,65 (95%% ДИ: 39,2-41,7) Р1-4 < 0,01 р24 < 0,001 р3-4 < 0,001
Соотношение «альбумины/ глобулины» 0,78±0,039 (95% ДИ: 0,70-0,85) 0,51±0,028 (95% ДИ: 0,46-0,57) р1-2<0,001 0,60±0,035 (95%% ДИ: 0,53-0,67) р13<0,01 Р2-3=0,07 0,93±0,045 (95%% ДИ: 0,84-1,02) р1-4=0,03 р2-4<0,001 р3-4<0,001
PHARMACY & DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
PHARMACOLOGY
Таблица 3 - Влияние ДН и его комбинации с КЭП на показатели липидного гомеостаза в периферической крови крыс с АА на 28-е сутки эксперимента (М±т (95% Д1) или Ме [LQ; UQ]; п=28)
Условия эксперимента
Исследуемый показатель, единицы измерения
I группа
II группа
III группа
Интактные крысы
Контроль (АА без лечения)
АА +ДН
IV группа
АА +ДН +КЭП
7
7
7
Общие липиды, г/л
3,0 [2,7-3,3]
5,1 [4,5-5,2] р1-2<0,001
4,4 [4,2-4,5] р13<0,001 р,.,= 0,07
3,3 [3,2-3,4] р = 0,1 р2.4<0,001 р3-4<0,001
7
n
2,0±0,05 (95% ДИ: 1,9-2,1) р,3=0,6 р2-3<0,001 2,1±0,05
Фосфолипиды, г/л 2,1±0,05 (95% ДИ: 2,0-2,2) 2,5±0,09 (95% ДИ: 2,3-2,7) (95% ДИ: 2,0-2,2) р«= 0,5
р1-2<0,001 р2-4<0,01 р3-4=0,2
Фосфолипиды относительно общих липидов, %
70,9±5,35 (95% ДИ: 60,4-81,4)
53,2±3,60 (95% ДИ:
46,2-60,3) р,2=0,02
46,9±1,80 (95% ДИ: 43,3-50,4) р13<0,01 р,-3=0,1
65,2±2,47 (95% ДИ: 60,3-70,0) р1-4=0,4
р2-4=0,02
р3.4<0,001
Монотерапия ДН крыс с АА привела к статистически достоверному (р=0,03) повышению активности СОД на 20,4% относительно показателей нелеченых животных (II группа), однако данное значение (59,0% ингибирования окисления кверцетина) все же на 13,2% было ниже показателей животных без АА (68,0 [64,0; 76,5] %).
На фоне комбинированного применения ДН и КЭП нами отмечено статистически достоверное (р=0,01) повышение активности СОД на 30,6% относительно значений у крыс контрольной группы, что лишь на 5,9% было ниже показателей интактных крыс и указывало на наиболее выраженное восстановление активности АОС.
Для оценки состояния соединительнотканных структур у крыс на фоне развития АА нами исследовался уровень серомукоидов, поскольку именно эта группа гликопротеинов поступает в плазму крови при разрушении, деградации или повреждении соединительной ткани. Кроме того, серомукоиды принято рассматривать как острофазные маркеры воспаления, которые могут служить индикатором выраженности воспалительного процесса поскольку их период жизни составляет около 5 дней [53-56].
Установлено, что на 28-й день эксперимента у крыс с АА отмечено статистически достоверный (р<0,001) рост уровня серомукоида в 2,2 раза относительно показателей интактных крыс (рис. 3).
Монотерапия ДН крыс с АА привела к статистически достоверному (р<0,01) снижению уровня изучаемого показателя на 31,4% относительно уровня нелеченых животных. Комбинированное применение ДН и КЭП привело к статистически достоверному
(р<0,01) еще большему снижению содержанию серомукоида на 17,1% относительно показателей крыс группы монотерапии ДН, который составил соответственно 0,18 [0,17; 0,18] ммоль/л.
«Золотым» маркером воспаления практически при всех патологических процессах по праву принято считать С-РБ, поскольку он имеет тенденцию значительно повышаться при повреждениях тканей, инфекциях бактериальной или вирусной природы, воспалении и злокачественных новообразованиях, а при некрозе тканей и вовсе может в течении суток возрастать до 300 мг/л [47, 57-61].
Установлено, что развитие экспериментального РА у крыс привело к статистически достоверному (р<0,001) увеличению уровня С-РБ в 4,5 раза относительно показателей интактных животных (рис. 4).
На фоте монотерапии ДН данный показатель снизился (р<0,001) на 33,3%, а на фоне комбинированного введения ДН и КЭП - снизился (р<0,001) на 61,1% относительно значений у крыс с АА без лечения. Полученные данные указывают на выраженные противовоспалительные свойства ДН, которые потенцируются при совместном применении с КЭП, однако могут быть связаны и с собственной противовоспалительной активностью КЭП.
Установленные биохимические признаки активного воспалительного процесса и развивающийся при этом дисбаланс в системе ПОЛ-АОС обосновывает целесообразность детального анализа активности маркеров цитолиза на фоне лечения крыс с АА - АлАТ, АсАТ и ГГТП [62, 63].
Исследование показало, что развитие АА у крыс сопровождалось увеличением содержания АлАТ на
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241
ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
28,6% (р=0,01), АсАТ на 26,1% (р<0,001) и ГГТП на 62,2% (р<0,001) относительно показателей интактных крыс (табл. 1).
Аминотрансферазы являются сложными белками-ферментами, которые катализируют процессы трансаминирования и обеспечивая синтез отдельных аминокислот в организме. Доказано, что под влиянием повреждающего факторов нарушается энергетический метаболизм гепатоцитов, что приводит к повышению проницаемости клеточных мембран и появлению в сыворотке крови компонентов цитоплазмы.
Поскольку маркер повреждения клеточных -ГГПТ в наибольшей степени содержится в почках, печени и тонкой кишке то можно предположить о наличии воспалительного процесса в указанных органах, что сопоставляется с данными литературы о системности воспалительного процесса при РА, аналогом которого является АА у животных [50].
Применение ДН привело к усилению цитолити-ческих процессов, на что указывало еще большее возрастание исследуемых маркеров в периферической крови - так АлАТ был выше на 22,2% (р<0,01), а АсАТ - на 20,7% (р=0,2) относительно показателей крыс с АА без лечения, что на 57,1% (р<0,01) и 52,2% (р<0,01) соответственно превышало показатели интактных животных (табл. 1). Летальности в группе комбинированного применения ДН и КЭП не отмечено. Указанные изменения со стороны активности аминотрансфераз согласуются с данными о гепато-токсическом действии ДН [3, 8, 64-66].
Также установлено, что на фоне применения ДН ГГТП статистически достоверно (р<0,001) снизилась на 22,9% относительно показателей животных контрольной группы (табл. 1).
Особое внимание привлекают показатели ци-толитических процессов у крыс с АА на фоне комбинированного применения ДН и КЭП (табл. 1). Так установлено, что АлАТ статистически достоверно (р<0,01) был ниже на 38,9%, а АсАт - ниже (р<0,01) на 37,9% относительно показателей животных, которым вводили ДН, что соответственно на 16,7% (р=0,02) и 17,2% (р<0,001) было ниже показателей крыс контрольной группы с нелеченым АА. Установленные изменения со стороны аминотрансфераз указывают на способность КЭП нивелировать не только АА-ин-дуцированный цитолитический сидром, но и сопутствующий цитолиз, усиливаемый ДН, что указывает на универсальность его цитопротективной активности, вероятно, обусловленной его способность стабилизировать клеточные мембраны, а также его анти-оксидантными свойствами.
Кроме того установлено, что комбинированное применение ДН и КЭП сопровождалось также статистически достоверным (р<0,001) снижением уровня ГГТП на 28,6% относительно нелеченых крыс с АА, что на 11,4% было ниже (р=0,01) чем у крыс, леченных только ДН (табл. 1).
Оценка уровня щелочной фосфатазы в периферической крови у крыс с АА показала, что развитие системного аутоиммунного воспаления сопровождалось статистически достоверным (р<0,001) повышением указанного металлопротеина на 77,3% относительно показателей интактных крыс и составило 390 [335; 405] мкмоль/чхл (рис. 5).
Щелочная фосфатаза - гетерогенный энзим, состоящий из отдельных изоферментов, каждый из которых сосредоточен в определенном органе: печени, костной ткани, кишечнике, плаценте. Локализуясь на клеточной мембране, фермент подключается к транспортировке биологически важных соединений, в первую очередь, фосфора. Щелочная фосфатаза активно участвует в процессах фосфорно-кальцие-вого обмена в организме. Рост активности щелочной фосфатазы указывает на активацию процессов ремо-делирования костной ткани, поскольку ее костная фракция синтезируется остеобластами и их предшественниками и участвует в минерализации костного матрикса [50, 67-69]. Повышение активности данного фермента может указывать на повышение остеоб-ластической активности и усиление деструктивных изменений в печени или возникновения холестаза у крыс с АА [3].
Монотерапия ДН привела к статистически достоверному (р<0,01) снижению активности щелочной фосфатазы на 28,2%, а комбинированное применение ДН и КЭП сопровождалось более выраженным снижением активности указанного фермента на 38,5% (р<0,01) относительно показателей нелеченых крыс с АА (рис. 5).
Изучение белкового спектра крови крыс с АА показало, что уровень общего белка практически не имел различий у интактных крыс и крыс с АА (табл. 2).
Изучение содержания отдельных белковых фракций показало, что развитие АА у крыс сопровождалось статистически достоверным (р<0,001) снижением содержания альбуминов на 28,7% относительно показателей интактных крыс. Альбумины - наиболее гомогенная фракция протеинов, основной функцией которых является поддержание коллоидно-осмотического давления, а также транспорт углеводов, ли-пидов, гормонов и пигментов. Организм пациента с активным РА более активно потребляет альбумины в месте воспаления, в результате чего развивается ги-поальбуминемия.
Кроме того, отмечено, что у крыс с АА незначительно возрастало содержание глобулинов на 8,4% (р=0,04) относительно показателей интактных животных. Как известно, при длительном подостром прогрессирующем процессе наблюдается, главным образом, гипергамаглобулинемия, что связано с ростом уровня аутоантител [50, 51, 70, 71].
Указанные изменения приводили к статистически достоверному (р<0,001) снижению значения аль-бумин/глобулинового соотношения периферической
Scientific and Practical Journal
PHARMACY & PHARMACOLOGY
RESEARCH ARTICLE
DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
крови на 34,2% относительно показателей интактных животных (табл. 3). Изменение соотношения протеиновых фракций, как правило, соответствует тяжести РА и отражает динамику воспалительного процесса [50, 51, 70, 72].
Монотерапия ДН привела к статистически достоверному (р=0,04) снижению значения альбумин/ глобулинового соотношения на 17,5% относительно крыс с АА без лечения. Комбинированное же применение ДН и КЭП сопровождалось полным повышением (р=0,01) исследуемого соотношения на 19,5% выше чем у интактных животных, что обусловлено повышением уровня альбуминов практически до уровня интактных животных и в то же время на 11,6% ниже (р<0,01) значения у интактных крыс содержание глобулинов (табл. 3).
Важную роль в жизнедеятельности клетки играют липиды, которые выступают структурными компонентами биомембран, энергетическим субстратом клетки, участвующие в реакциях сигнальной трансдукции, экзо- и эндоцитоза и тому подобное. Кроме того, они участвуют в фиксации белков фос-фолипидного бислоя и обеспечивают их соответствующую ориентацию в клеточной мембране, является неполярным средой для жирорастворимых субстратов и кофакторов ферментов, обусловливают их фол-динг, а также выполняют роль регуляторов и модуляторов ферментативной активности [69, 73].
Исследование показало, что у крыс на фоне развития АА отмечается статистически достоверное (р=0,02) снижение доли фосфолипидов в пуле общих липидов на 25,0%. При этом отмечено рост общего уровня липидов (р<0,001) в 1,7 раза и непропорциональный рост содержания фосфолипидов (р<0,001) в 1,2 раза, что обусловлено активацией циклооксиге-назного пути метаболизма мембранных фосфолипи-дов (табл. 3).
На фоне монотерапии ДН отмечено снижение уровня общих липидов (р=0,07) в 1,3 раза и снижение уровня фосфолипидов (р<0,001) так же в 1,3 раза относительно показателей животных с АА без лечения, что соответствовало развитию еще большего дисбаланса содержания фосфолипидов в пуле общих липидов - их содержание снизилось еще на 6,3%, однако указанные изменения не достигли уровня статистической значимости (р=0,1).
На фоне комбинированного применения ДН и КЭП у крыс с АА отмечена статистически достоверная (р=0,02) гармонизация липидного баланса - содержание фосфолипидов вырос на 22,6% относительно показателей животных с АА без лечения и составил соответственно 2,1±0,05 (95% ДИ: 2,0-2,2) г/л. Ука-
занные изменения наблюдались на фоне снижения уровня общих липидов в сыворотке крови (р<0,001) на 35,3% относительно показателей нелеченых крыс и составили соответственно 3,3 [3,2-3,4] г/л, что сопоставлялось с показателями интактных животных 3,0 [2,7-3,3] г/л.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Введение диклофенака натрия и криоконсер-вированного экстракта плаценты крысам с адъю-вантным артритом привело нормализации уровня активных продуктов тиобарбитуровой кислоты, что указывает на нивелирование признаков артрит-ин-дуцированного оксидативного стресса. Также выявлено статистически достоверное (р=0,01) повышение уровня супероксиддисмутазы на 30,6% относительно значений у крыс контрольной группы.
Установлено усиление противовоспалительных свойств диклофенака натрия на фоне комбинированного применения диклофенака натрия с крио-консервированным экстрактом плаценты - уровень С-реактивного белка снизился (p<0,001) на 61,1% относительно нелеченых крыс, а уровень серомукоида статистически достоверно (р<0,01) снизился на 17,1% относительно показателей крыс группы монотерапии исследуемым НПВП.
Показано, что уровень аланин-аминотрансфе-раз статистически достоверно (р<0,01) был ниже на 38,9%, а аспартат-аминотрансферазы - ниже (р<0,01) на 37,9% относительно показателей животных, которым вводили диклофенак натрия, что соответственно на 16,7% (р=0,02) и 17,2% (р<0,001) было ниже показателей крыс контрольной группы с нелеченым адъювантным артритом. Установленные изменения со стороны аминотрансфераз указывают на способность криоконсервированного экстракта плаценты нивелировать не только артрит-индуцированный цитолитический сидром, но и диклофенак-индуци-рованный.
Комбинированное применение криконсерво-ваного экстракта плаценты и диклофенака натрия сопровождалось нормализацией уровня общих липидов и фосфолипидов в сыворотке крови крыс на фоне экспериментального ревматоидного артрита. Так содержание фосфолипидов в пуле фосфолипидов статистически достоверно (р=0,02) выросло на 22,6% относительно показателей животных с адъювантной артритом без лечения.
В дальнейшем, для корректной оценки активности воспалительного процесса целесообразно определение уровня матриксных металлопротеиназ и гомоцистеина.
БЛАГОДАРНОСТИ
Авторы выражают благодарность лаборантам Отдела экспериментальной криомедицины З.Е. Губенко и Л.М. Гордеевой и заведующей вивария Л.В. Бацуновой Института проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины за помощь в проведении экспериментальных исследований.
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241
ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
ФИНАНСОВАЯ ПОДДЕРЖКА
Данное исследование не имело финансовой поддержки от сторонних организаций.
КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ВКЛАД АВТОРОВ
Ф.В. Гладких - идея, концепция и дизайн исследования, координация и участие в проведении экспериментальной работы, сбор материалов, статистическая обработка и анализ полученных данных, написание основного текста статьи и формулирование выводов; Н.А. Чиж - концепция исследования, участие в проведении экспериментальной работы, сбор материалов, редактирование текста статьи; А.А. Манченко - участие в проведении экспериментальной работы, сбор материалов; И.В. Белочкина - участие в проведении экспериментальной работы, сбор материалов, поисково-аналитическая работа; И.П. Михайлова - участие в проведении экспериментальной работы,
сбор материалов.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Zeng C., Wei J., Persson M. S. M., Sarmanova A., Doherty M., Xie D., Wang Y., Li X., Li J., Long H., Lei G., Zhang W. Relative efficacy and safety of topical non-steroidal antiinflammatory drugs for osteoarthritis: a systematic review and network meta-analysis of randomised controlled trials and observational studies // British Journal of Sports Medicine. - 2018. - Vol. 52, No.10. - Р. 642-650. DOI: https://doi.org/10.1136/bjsports-2017-098043.
2. Балабанцева А.П., Каратеев А. E. Частота и клинико-эн-доскопические особенности сочетанных НПВП-ин-дуцированных гастроинтестинальных повреждений // Современная ревматология. 2018. - Т. 12, №4. -С. 95-100. DOI: https://doi.org/10.14412/1996-7012-2018-4-95-100.
3. Ушкалова Е.А., Зырянов С.К., Затолочина К.Э. Безопасность и переносимость НПВС: фокус на ацеклофенак // Медицинский совет. - 2019. - №9. - С. 110-120. - DOI: https://doi.org/10.21518/2079-701X-2019-9-110-120.
4. Fischbach W. Drug-induced gastrointestinal bleeding // Internist. - 2019. - Vol. 60, No.6. - Р. 597-607. DOI: https://doi.org/10.1007/s00108-019-0610-y.
5. Тршус Ф.П. Рзвиток уявлень про мехаызм дм несте-рощних протизапальних лтарських засобiв та аналь-гети^в-антитретиюв Фармаколопя та лтарська токси-колопя. - 2012. - Т. 2, №27. - С. 68-72.
6. Гладких Ф.В. Мультимодальная анальгезия: полипраг-мазия в обезболивании или рациональное применение нестероидных противовоспалительных средств для предотвращения хронизации боли // Траeкторiя науки: мiжнародний електронний науковий журнал = Traektoria Nauki = Path of Science. - 2020. - Т. 6, №7. -С. 4009-4018. DOI: http://dx.doi.org/10.22178/pos.60-5.
7. Bally M., Dendukuri N., Rich B., Nadeau L., HelinSalmivaara A., Garbe E., Brophy J. M. Risk of acute myocardial infarction with NSAIDs in real world use: bayesian meta-analysis of individual patient data // British Medical Journal. - 2017. - No.357. DOI: http:// dx.doi.org/10.1136/bmj.j1909.
8. Каратеев А.Е., Насонов Е.Л., Ивашкин В.Т., Мартынов А.И., Яхно Н.Н., Арутюнов Г.П., Алексеева Л.И., Абуза-рова Г.Р., Евсеев М.А., Кукушкин М.Л., Копенкин С.С., Лила А.М., Лапина Т.Л., Новикова Д. С., Попкова Т.В., Ребров А.П., Скоробогатых К.В., Чичасова Н.В. Рациональное использование нестероидных противовоспа-
лительных препаратов. Клинические рекомендации // Научно-практическая ревматология. - 2018. - №56. -С. 1-29. DOI: https://doi.org/10.14412/1995-4484-2018-1-29.
9. Cooper C., Chapurlat R., Al-Daghri N., Herrero-Beaumont G., Bruyere O., Rannou F., Roth R., Uebelhart D., Reginster J. Y. Safety of oral non-selective non-steroidal anti-Inflammatory drugs in osteoarthritis: what does the literature say? // Drugs & Aging. - 2019. - Vol. 36, No.1. - С. 15-24. DOI: https://doi.org/10.1007/s40266-019-00660-1.
10. Лазебник Л.Б., Голованова Е.В., Алексеенко С.А., Бакунина Н.В., Барановский А.Ю., Белова Г.В., Бордин Д.С., Вьючнова Е.С., Гайдукова И.З., Гимаева З.Ф., Каш-кина Е.И., Козлова И.В., Кокорин В.А., Лапина Е.Д., Ли Е.Д., Мигуськина Е.И., Мирончев О.В., Онучина Е.В., Охлобыстин А.В., Пасечников В. Д., Пахомова И.Г., Позднякова О.Ю., Путинцева И.В., Сарсенбаева А.С., Свиридова Т.Н., Симаненков В.И., Симонова Ж.Г., Сит-кин С.И., Ткаченко Е.И., Туркина С.В., Хабарова Ю.А., Шевяков М.А., Яковенко Э.П., Яковлев А.А., Янковая Т.Н. Рекомендации по профилактике и лечению эзофа-го-гастро-энтеро-колопатий, индуцированных нестероидными противовоспалительными препаратами // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология.
- 2018. - Т.3, №151. - С. 4-18. - https://www.nogr.org/ jour/article/view/567/562.
11. Yang J.H., Lee B.H., Eum K.S., Suk K.S., Park J.O., Kim H.S., Lee H.M., Moon S.H. Prevalence of gastrointestinal and cardiovascular risk in patients with degenerative lumbar spinal disease // Clinics in Orthopedic Surgery. - 2020. -Vol. 12, No.3. - Р. 343-352. DOI: https://doi.org/10.4055/ cios20021.
12. Каратеев А.Е. Обладают ли нестероидные противовоспалительные препараты патогенетическим действием? // Современная ревматология. - 2012. - №4. - С. 13-22.
13. Каратеев А.Е. Селективные ингибиторы циклооксиге-назы-2 и «защищенные» нестероидные противовоспалительные препараты: два метода профилактики лекарственных осложнений // Клиническая медицина.
- 2014 - №8. - С. 54-61.
14. Davis A., Robson J. The dangers of NSAIDs: look both ways. British Journal of General Practice. - 2016. - Vol. 66, No.645. - Р. 172-173. DOI: https://doi.org/10.3399/ bjgp16X684433.
15. Довгань Е.В. Клиническая фармакология нестероид-
PHARMACY & DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
PHARMACOLOGY
ных противовоспалительных препаратов: курс - на безопасность // Российский медицинский журнал. -2017. - №13. - С. 979-985.
16. Степанюк Н.Г., Гладких Ф.В., Басараб О.В. Аналiз по-бiчних реакцм на xni застосування анальгети^в-ан-титрети^в та нестеро!'дних протизапальних засобiв, якi призначались лтарями закладiв охорони здоров'я Подiльського регюну у 2015 роцi // Галицький лтар-ський вiсник. - 2016. - Т. 2, №23. - С. 60-63. - Режим доступу: http://ojs.ifnmu.edu.ua/index.php/gmj7article/ view/545.
17. Bjarnason I., Takeuchi K. Intestinal permeability in the pathogenesis of NSAID-induced enteropathy // Journal of Gastroenterology. - 2009. - No.44. - P. 23-29. DOI: https://doi.org/10.1007/s00535-008-2266-6.
18. Голованова Э.В. Защита слизистой желудочно-кишечного тракта от повреждающего действия нестероидных противовоспалительных средств // Клиническая геронтология. - 2017. - №1-2. - С. 47-51.
19. Гладких Ф.В. Превентивно-лечебные стратегии фар-макокоррекции гастропатии, индуцированной нестероидными противовоспалительными препаратами // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2017. - №4. - С. 14-23. DOI: http:// dx.doi.org/10.17816/RCF15414-23.
20. Куксгауз И.А., Шекунова Е.В., Кашкин В.А., Фаустова Н.М., Гущин Я.А., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Изучение гастропротективного эффекта препарата Алфлутоп на модели индуцированной диклофенаком гастропатии у крыс // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2019. - №5. - С. 15-21. DOI: https:// doi.org/10.31146/1682-8658-ecg-165-5-15-21.
21. Гулевский А.К., Абакумова Е.У., Моисеева Н.Н., Долгих О.Л. Влияние фракции пуповинной крови (до 5 кДа) крупного рогатого скота на биохимические показатели крови при экспериментальной субхронической язве желудка крыс // Украинский биохимический журнал.
- 2008. - Т. 80, №2. - С. 120-127.
22. Жариков А.Ю., Лоренц С.Э., Бобров И.П., Мазко О.Н., Макарова О.Г. Поиск новых молекул олигопептидов для фармакологической коррекции НПВС-индуциро-ванной язвы желудка // Биомедицина. - 2019. - Т. 15, №3. - С. 90-97. DOI: https://doi.org/10.33647/2074-5982-15-3-90-97.
23. Гулида М.О., Мирошниченко E.B., Берёзка Н.И., Гаря-чий E.B. Примене-ние экстракта плаценты в комплексном лечении больных ревматоидным артритом // Експериментальна i кл^чна медицина. - 2014. - Т. 1, №62. - С. 168-171.
24. Капустянська А.А. Застосування препарату «Крю-целл-крюекстракт плаценти» в комплексному лтуван-н загострення подагричного артриту з метаболiчним артритом // Актуальн проблеми сучасно!' медицини: Вкник Укра'нсько!' медично! стоматолопчно!' академп.
- 2010. - Т. 10, №30. - С. 54-58.
25. Pogozhykh O., Prokopyuk V., Figueiredo C., Pogozhykh D. Placenta and placental derivatives in regenerative therapies: experimental studies, history, and prospects. Stem Cells International. - 2018. - No.2018. - P. 1-14. DOI: https://doi.org/10.1155/2018/4837930.
26. Shepitko K.V. Application of cryopreserved placenta preparations in the small intestine pathologies in rats for their further use in exigent conditions // Bulletin of
problems biology and medicine. - 2019. - Vol. 4, No.154. P. 56-61. DOI: http://doi.org/10.29254/2077-4214-2019-4-2-154-56-61.
27. Petrenko Y.A., Petrenko A.Y., Martin I., Wendt D. Perfusion bioreactor-based cryopreservation of 3D human mesenchymal stromal cell tissue grafts // Cryobiology. -2017. - No.76. - Р. 150-153. DOI: http://doi.org/10.1016/'. cryobiol.2017.04.001.
28. Rogulska O., Tykhvynska O., Revenko O., Grischuk V., Mazur S., Volkova N., Vasyliev R., Petrenko A., Petrenko Y. Novel cryopreservation approach providing off-the-shelf availability of human multipotent mesenchymal stromal cells for clinical applications // Stem Cells International. - 2019. - No.2019. - 4150690. DOI: https://doi. org/10.1155/2019/4150690.
29. Pogozhykh D., Pogozhykh O., Prokopyuk V., Kuleshova L., Goltsev A., Blasczyk R., Mueller T. Influence of temperature fluctuations during cryopreservation on vital parameters, differentiation potential, and transgene expression of placental multipotent stromal cells // Stem Cell Research & Therapy. - 2017. - Vol. 8, No.1. - Р. 66. DOI: https://doi. org/10.1186/s13287-017-0512-7.
30. Капустянська А.А. Застосування препарату «Крю-целл-крюекстракт плаценти» в комплексному лтуван-hí загострення подагричного артриту з метаболiчним артритом. Актуальн проблеми сучасно!' медицини: Вкник Укра'нсько! медико-стоматолопчно!' академп. -2010. - Т. 10, №30. - С. 54-58.
31. Прокопюк В.Ю., Фалько О.В., Муcатова 1.Б., Прокопюк О.С., Роенко О.О., Терехова О.О., Чуб О.В. Крюкон-сервування та низькотемпературне збер^ання пла-центарних бюоб'ек^в // Проблеми крюбюлогп i крю-медицини. - 2015. - Т. 25, №4. - С. 291-310.
32. Гладких Ф.В., Чиж Н.А. Механизмы защиты слизистой оболочки желудка в условиях применения криоэкс-тракта плаценты при диклофенак-индуцированной гастропатии. Сборник материалов сателлитной дистанционной научно-практической конференции студентов и молодых учёных «Фундаментальная наука в современной медицине-2021». МЫськ: Заклад освiти «Бторуський державний медичний уыверситет». -2021. - С. 436-340.
33. Гладких Ф.В., Чиж Н.А., Слета И.В. Исследование гастро-протекторной активности криоконсервированного экстракта плаценты при ибупрофен-индуцированном поражении желудка в эксперименте. Материалы VII Республиканской научно-практической конференции молодых ученых «Современные достижения молодых учёных в медицине-2020». Гродно. Гродно: Заклад освiти «Гродненський державний медичний ушверси-тет». - 2020. - С. 57-60.
34. Гладких Ф.В, Чиж М.О. Модулящя мелоксикамчндуко-ваних змЫ секреторно! та моторно!' активност шлунка шляхом застосування крюекстракту плаценти // Пра-ц Наукового Товариства iм. Т.Г. Шевченка. Медичи науки. - 2021. - Т. 64, №1. - С. 84-94. DOI: https://doi. org/10.25040/10.25040/ntsh2021.01.08. Режим доступу: https://mspsss.org.ua/index.php/journal/article/ view/400.
35. Gryshchenko N.G., Klimenko N.A., Gorgol N.I., Tatarko S.V. Effect of placental cryoextract on chronic inflammation of the ovaries in mice // Medicine today and tomorrow. -2010. - Vol. 2-3, No.47-48. - P. 7-17.
ISSN 2307-9266 e-ISSN 2413-2241
ФАРМАЦИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ
36. Брунь Л.В., МаколЫець В.1. Дослщження впливу низь-коЫтенсивного iнфрачервоного лазерного випромшю-вання на концентра^ю диклофенаку натрiю у плазмi кровi щурiв методом високоефективно''' рщинно''' хро-матографп. Медична та кл^чна хiмiя. - 2016. - Т. 18, №2. - С. 54-59.
37. Рыболовлев Ю.Р., Рыболовлев Р.С. Дозирование веществ для млекопитающих по константам биологической активности // Доклады АН СССР. - 1979. - Т. 247, №6. - С. 1513-1516.
38. Орловская И.А., Цырендоржиев Д.Д., Щелкунов С.Н. Ревматоидный артрит: лабораторные модели заболевания // Медицинская иммунология. - 2015. - Т. 17, №3. - С. 203-210.
39. Громыко М.В., Грицук А.И. Экспериментальные модели ревматоидного артрита //Проблемы здоровья и экологии. - 2012. - Т. 2, №32. - С. 115-118.
40. Freund J. Some aspects of active immunization. Annual Review of Microbiology. - 1947. - No.1. - P. 291-308.
41. Choudhary N., Bhatt L.K., Prabhavalkar K.S. Experimental animal models for rheumatoid arthritis // Immunopharmacology and Immunotoxicology. - 2018. -Vol. 40, No.3. - Р. 193-200. DOI: https://doi.org/10.1080/ 08923973.2018.1434793.
42. Alavala S., Nalban N., Sangaraju R., Kuncha M., Jerald M. K., Kilari E. K., Sistla R. Anti-inflammatory effect of stevioside abates Freund's complete adjuvant (FCA)-induced adjuvant arthritis in rats // Inflammopharmacology. -2020. - Vol. 28, No.6. - Р. 1579-1597. DOI: https://doi. org/10.1007/s10787-020-00736-0.
43. Asakawa T., Matsushita S. coloring condition of thiobarbituric acid test for detecting lipid hydroperoxides // Lipids. - 1980. - Vol. 15, No.3. - P. 137-140.
44. Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалёва Ж.В. Простой и чувствительный метод определения активности су-прокиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина // Вопросы медицинской химии. - 1990. -№2. - С. 88-91.
45. Bligh E.G., Dyer W.I. A rapid method of total lipid extraction and purification // Canadian Journal of Biochemistry and Physiology. - 1959. - Vol. 37, No.8. - P. 911-917.
46. Svetashev V.I., Vaskovsky V.E. A simplified technique for thin layer microchromatography of lipids // Journal of Chromatography. - 1972. - No.67. - P. 376-378.
47. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin I.M. A universal reagent for phospholipid analysis // Journal of Chromatography. -1975. - No.114. - P. 129-141.
48. Mititelu R.R., Padureanu R., Bacanoiu M., Padureanu V., Docea A. O., Calina D., Barbulescu A. L., Buga A. M. Inflammatory and oxidative stress markers-mirror tools in rheumatoid arthritis // Biomedicines. - 2020. - №8(5). - Р. 125. DOI: https://doi.org/10.3390/ biomedicines8050125.
49. Войтенко Н.Г., Макарова М.Н., Зуева А.А. Вариабельность биохимических показателей крови и установление ре-ференсных интервалов в доклинических исследованиях. Сообщение 1: крысы // Лабораторные животные для научных исследований. - 2020. - №1. - С. 47-53. - DOI: https://doi.org/10.29296/2618723X-2020-01-06.
50. Гладких Ф.В., Степанюк Н.Г. Характеристика терапев-тичного ефекту iбупрофену та його комбЫацп з вшбо-роном за даними гематолопчних показниюв на моделi ад'ювантного артриту у ш^в // Львiвський медичний
часопис. - 2015. - №4. - С. 64-70. Режим доступа: http://nbuv.gov.ua/UJRN/Lmch_2015_21_4_14.
51. Подольський В. В., Подольський В. В. Перекисне окис-лення лт^в як прояв оксидативного стресу в ор-raHi3Mi жЫок i3 змЫами репродуктивного здоров'я на tni соматоформних захворювань i3 порушення-ми вегетативного гомеостазу // Акушерство та пне-колопя. - 2017. - № 2. - С. 98-104. DOI: https://doi. org/10.11603/24116-4944.2017.2.8095.
52. Agrahari G., Sah S. K., Nguyen C. T., Choi S. S., Kim H. Y., Kim T. Y. Superoxide dismutase 3 inhibits LL-37/KLK-5-mediated skin inflammation through modulation of EGFR and associated inflammatory cascades // Journal of Investigative Dermatology. - 2020. - Vol. 140, No.3. - P. 656-665. DOI: https://doi.org/10.1016/jjid.2019.08.434.
53. Nguyen N.H., Tran G.B., Nguyen C.T. Anti-oxidative effects of superoxide dismutase 3 on inflammatory diseases // Journal of Molecular Medicine. - 2020. - Vol. 98, No.1. - Р. 59-69. DOI: https://doi.org/10.1007/s00109-019-01845-2.
54. Suchdev P.S., Williams A.M., Mei Z., Flores-Ayala R., Pasricha S.R., Rogers L.M., Namaste S.M. Assessment of iron status in settings of inflammation: challenges and potential approaches // The American Journal of Clinical Nutrition. - 2017. - Vol. 106, No.6. - Р. 1626-1633. DOI: https://doi.org/10.3945/ajcn.117.155937.
55. Iwanczak B., Ruczka M., Matusiewicz M., Pytrus T., Matusiewicz K., Krzesiek E. Correlation between biomarkers (calprotectin, seromucoid, metalloproteinase-3 and CRP) and clinical and endoscopic activity of ulcerative colitis in children // Advances in Medical Sciences. - 2020. - Vol. 65, No.2. - Р. 259-264. DOI: https://doi.org/10.1016/'. advms.2020.03.004.
56. Namaste S.M., Aaron G.J., Varadhan R., Peerson J.M., Suchdev P.S., BRINDA Working Group. Methodologic approach for the biomarkers reflecting inflammation and nutritional determinants of anemia (BRINDA) project // The American Journal of Clinical Nutrition. - 2017. - Vol. 106, No.1. - Р. 333-347. DOI: https://doi.org/10.3945/ ajcn.116.142273.
57. Smith S.A., Waters N.J. Pharmacokinetic and pharmacodynamic considerations for drugs binding to alpha-1-acid glycoprotein // Pharmaceutical Research.
- 2018. - Vol. 36, No.2. - Р. 30. DOI: https://doi.org/ 10.1007/s11095-018-2551-x.
58. Sproston N.R., Ashworth J.J. Role of C-Reactive Protein at Sites of Inflammation and Infection // Frontiers in Immunology. - 2018. - No.9. - Р. 754. DOI: https://doi. org/10.3389/fimmu.2018.00754.
59. Lapic I., Padoan A., Bozzato D., Plebani M.. Erythrocyte sedimentation rate and C-reactive protein in acute inflammation // American Journal of Clinical Pathology.
- 2020. - Vol. 153, No.1. - Р. 14-29. DOI: https://doi. org/10.1093/ajcp/aqz142.
60. Yao Z., Zhang Y., Wu H. Regulation of C-reactive protein conformation in inflammation // Inflammation Research.
- 2019. - Vol. 68, No.10. - Р. 815-823. DOI: https://doi. org/10.1007/s00011-019-01269-1.
61. Avan A., Tavakoly Sany S.B., Ghayour-Mobarhan M., Rahimi H.R., Tajfard M., Ferns G. Serum C-reactive protein in the prediction of cardiovascular diseases: Overview of the latest clinical studies and public health practice // Journal of Cellular Physiology. - 2018. - Vol. 233, No.11.
- Р. 8508-8525. DOI: https://doi.org/10.1002/jcp.26791.
PHARMACY & DOI: 10.19163/2307-9266-2021-9-4-278-293
PHARMACOLOGY
62. Li W., Cao T., Luo C., Cai J., Zhou X., Xiao X., Liu S. Crosstalk between ER stress, NLRP3 inflammasome, and inflammation // Applied Microbiology and Biotechnology.
- 2020. - Vol. 104, No.14. - P. 6129-6140. DOI: https:// doi.org/10.1007/s00253-020-10614-y.
63. Wang J., Xia J., Yan X., Yang Y., Wei J., Xiong Y., Wu W., Liu Y., Chen Y., Jia B., Chen Z., Zhang Z., Ding W., Huang R., Wu C. The gamma-glutamyl transpeptidase to platelet ratio predicts liver inflammation in chronic hepatitis B with normal or mildly elevated alanine transaminase // Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology.
- 2020. - Vol. 44, No.6. - P. 913-922. DOI: https://doi. org/10.1016/j.clinre.2020.01.011.
64. Ndrepepa G, Colleran R, Kastrati A. Gamma-glutamyl transferase and the risk of atherosclerosis and coronary heart disease // Clinica Chimica Acta. - 2018. - No.476. - P. 130-138. DOI: https://doi.org/10.1016/jj.cca.2017.11.026.
65. Mohi-Ud-Din R., Mir R. H., Sawhney G., Dar M.A., Bhat Z.A. Possible pathways of hepatotoxicity caused by chemical agents // Current drug metabolism. - 2019. - Vol. 20, No.11. - P. 867-879. DOI: https://doi.org/10.2174/13892 00220666191105121653.
66. Jung S.H., Lee W., Park S.H., Lee K.Y., Choi Y.J., Choi S., Kang D., Kim S., Chang T.S., Hong S.S., Lee B.H. Diclofenac impairs autophagic flux via oxidative stress and lysosomal dysfunction: Implications for hepatotoxicity // Redox Biology. - 2020. - No.37. - P. 101751. DOI: https://doi. org/10.1016/j.redox.2020.101751.
67. Vyas A., Purohit A., Ram H. Assessment of dose-dependent reproductive toxicity of diclofenac sodium in male rats // Drug and Chemical Toxicology. - 2019. - Vol. 42, No.5. -P. 478-486. DOI: https://doi.org/10.1080/01480545.201 7.1421659.
68. Yeh J.C., Wu C.C., Choy C.S., Chang S.W., Liou J.C., Chen K.S., Tung T.H., Lin W.N., Hsieh C.Y., Ho C.T., Wang T.M., Chang J.F. Non-pepatic Alkaline phosphatase, hs-CRP and progression
of vertebral fracture in patients with rheumatoid arthritis: a population-based longitudinal study // Journal of Clinical Medicine. - 2018. - Vol. 7, No.11. - Р. 439. DOI: https://doi. org/10.3390/jcm7110439.
69. Jo S., Han J., Lee Y.L., Yoon S., Lee J., Wang S.E., Kim T.H. Regulation of osteoblasts by alkaline phosphatase in ankylosing spondylitis // International Journal of Rheumatic Diseases. - 2019. - Vol. 22, No.2. - Р. 252-261. DOI: https://doi.org/10.1111/1756-185X.13419.
70. Hirschmugl B., Crozier S., Matthews N., Kitzinger E., Klymiuk I., Inskip H. M., Harvey N. C., Cooper C., Sibley C.P., Glazier J., Wadsack C., Godfrey K.M., Desoye G., Lewis R.M. Relation of placental alkaline phosphatase expression in human term placenta with maternal and offspring fat mass // International Journal of Obesity. -2018. - Vol. 42, No.6. - Р. 1202-1210. DOI: https://doi. org/10.1038/s41366-018-0136-8.
71. Liao K.P., Solomon D.H. Lipids and cardiovascular risk through the lens of rheumatoid arthritis //Arthritis & Rheumatology. - 2019. - Vol. 71, No.9. - Р. 1393-1395. DOI: https://doi.org/10.1002/art.40891.
72. Крть 1.Й., Гаврилюк А.М., Стойка Р.С., Чоп'як В.В., KiT Ю.Я. Характеристика ензиматично!' активност та бокового складу сироватки кровi rnypiB за умови Ыдуко-ваного iмунiзацieю запалення суглобiв // Експеримен-тальна та кл^чна фiзiологiя та бiохiмiя. - 2014. - №2. - С. 15-23.
73. Гладких Ф.В., Михайлова 1.П., Манченко А.О. Вплив диклофенаку натр^ та його комбшацп з крюконсерво-ваним екстрактом плаценти на лтщний баланс в сиро-ватц кровi при експериментальному ревмато!'дному артритк Матерiали XXVII Мiжнародноí науково-прак-тично!' конференцп молодих вчених та студенев «Topical issues of new medicines development» (18-19 березня 2021 р.); Хар^в: Нацюнальний фармацевтич-ний уыверситет МОЗ Укра'ни. - 2021. - С. 272-273.
АВТОРЫ
Гладких Фёдор Владимирович - аспирант (доктор философии в области здравоохранения по специальности «222 - Медицина») отдела экспериментальной криомедициы, Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины; младший научный сотрудник группы лучевой патологии и паллиативной медицины отдела радиологии, ГУ «Институт медицинской радиологии и онкологии им. С.П. Григорьева Национальной академии медицинских наук Украины». ORCID ID: 0000-00017924-4048. E-mail: fedir.hladkykh@gmail.com
Чиж Николай Алексеевич - кандидат медицинских наук, старший исследователь, и. о. заведующего отделом экспериментальной криомедициы, Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины. ORCID ID: 0000-0003-0085-296X. E-mail: chizh.cryo@gmail.com
Манченко Анна Александровна - кандидат медицинских наук, младший научный сотрудник отдела экспериментальной криомедицины, Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины. ORCID ID: 0000-0001-59824504. E-mail: anna.gorlenko@gmail.com
Белочкина Ирина Владиславовна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник отдела экспериментальной криомедициы, Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины. ORCID ID: 00000003-0090-2971. E-mail: ibelochkina@ukr.net
Михайлова Ирина Павловна - научный сотрудник отдела экспериментальной криомедициы, Институт проблем криобиологии и криомедицины Национальной академии наук Украины. ORCID ID: 0000-0001-9388-2820. E-mail: expcryomed@gmail.com
