CC BY
20
В. В. ГРИБ, Г. И. СТЕПАНЮК, Е. Н. ДОРОШЕНКО, Н. В. ЗАИЧКО
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕЧЕБНОГО ДЕЙСТВИЯ НАТРИЕВОЙ СОЛИ 4-(3-МЕТИЛ-2-ОКСО-2Н-[1, 2, 4] ТРИАЗИНО-[2, 3-С]-ХИНАЗОЛИН-6-ИЛ) БУТАНОВОЙ КИСЛОТЫ (СОЕДИНЕНИЕ DSK-38) И ДИКЛОФЕНАКА ПО БИОХИМИЧЕСКИМ ПОКАЗАТЕЛЯМ КРОВИ НА МОДЕЛИ АДЪюВАНТНОГО АРТРИТА
Кафедра фармакологии Винницкого национального медицинского университета им. Н. И. Пирогова МЗО Украины, Украина, 21018, г. Винница, ул. Пирогова, 56; тел. (+38 0432) 611400. E-mail: pharmacoloqy@vnmu.edu.ua
Курсовое введение крысам с моделью адъювантного артрита натриевой соли 4-(3-метил-2-оксо-2Н-[1, 2, 4]-триазино [2, 3-с] хиназолин-6-ил) бутановой кислоты (соединение DSK-38, 2 мг/кг, в/бр), как и диклофенака (4 мг/кг, в/бр), вызывало у животных ослабление признаков воспалительной реакции. Об этом свидетельствовали статистически значимое снижение в крови под влиянием обоих веществ уровня МДА при одновременном возрастании активности СОД, положительная динамика серомукоидов и активности гамма-глутамилтранспептидазы, а также нормализация содержания фракций альбуминов и глобулинов относительно нелеченых животных. При этом по эффективности соединения DSK-38 не уступало, а в ряде наблюдений (по способности нормализовать показатели серомукоидов и гамма-глутамилтранспептидазы) превосходило препарат сравнения. В группе животных, леченных диклофенаком, одна крыса погибла от перфоративной язвы желудка, на фоне DSK-38 летальность отсутствовала.
Ключевые слова: натриевая соль 4-(3-метил-2-оксо-2Н-[1, 2, 4]триазино[2, 3-с]хиназолин-6-ил) бутановой кислоты, диклофенак, адъювантный артрит.
V. V. GRIB, G. I. STEPANYUK, E. N. DOROSHENKO, N. V. ZAICHKO
COMPARATIVE CHARACTERISTICS OF THERAPEUTIC ACTION OF THE SODIUM SALT OF 4- (3-METHYL-2-OXO-2H- [1, 2, 4] TRIAZINO [2, 3-C] QUINAZOLIN -6-YL) BUTYRIC ACID (COMPOUND DSK-38) AND DICLOFENAC BIOCHEMICAL BLOOD PARAMETERS ON ADJUVANT ARTHRITIS MODEL
Vinnitsa national medical university N. I. Pirogov, Ukraine, 21018, Vinnitsa, str. Pirogov, 56; tel. (+38 0432) 611400. E-mail: pharmacoloqy@vnmu.edu.ua
Course administering rats with adjuvant arthritis model, a sodium salt of 4- (3-methyl-2-oxo-2H- [1, 2, 4] triazino [2, 3-c]-quinazolin-6-yl) butyric acid (compound DSK-38, 2 mg/kg i/p) as diclofenac (4 mg/kg i/p), resulted in animals attenuation characteristics of the inflammatory reaction. This was evidenced by a statistically significant reduction in the blood under the influence of the two substances MDA level while increasing the activity of SOD, the positive dynamics seromucoid activity and gamma-glutamyl and normalization of albumin and globulin fractions relative to untreated animals. In this connection performance DSK-38 does not concede, and in some cases (on the ability to normalize indicators seromucoid and gamma-glutamyl) superior-drug comparisons. In the group of animals treated with diclofenac, one rat died of perforated ulcer, against DSK-38-lethality absent.
Key words: sodium salt of 4- (3-methyl-2-oxo-2H- [1, 2, 4] triazino [2, 3-c] quinazolin-6-yl) butyric acid, diclofenac, adjuvant arthritis.
Введение тотоксичность), которые ограничивают широкое
применение этих препаратов [5, 14]. Поэтому се-Современные нестероидные противовоспа- годня ведется интенсивный поиск новых молекул лительные средства (НПВС) не всегда удовлет- с противовоспалительным и анальгетическим воряют запросы клиницистов в связи с наличием действием, пригодных для создания на их основе ряда побочных эффектов (гастро-, нефро- и гепа- более эффективных и безопасных НПВС [16].
В связи с этим наше внимание привлекли производные (3-R-2-okco-2H-[1, 2, 4]триазино[2, 3-с] хиназолин-6-ил) алкикарбоновых кислот, синтезированные в Запорожском государственном медицинском университете под руководством профессора С. И. Коваленко. Среди данного класса соединений выявлены вещества с обезболивающим, антиоксидантным, противогипоксическим и противоишемическим эффектами, которые в наибольшей степени присущи натриевой соли 4-(3-метил-2-оксо-2Н-[1, 2, 4]триазино[2, 3-с] хи-назолин-6-ил) бутановой кислоты (соединение DSK-38) [10, 11].
Комплекс фармакологических эффектов, присущих этому веществу, дает основание надеяться на наличие у него лечебного действия при адъю-вантном артрите, что и послужило предпосылкой для проведения данного исследования. В качестве референс-препарата избран диклофенак натрия - золотой стандарт НПВС.
Цель работы - дать сравнительную оценку лечебного действия DSK-38 и диклофенака при адъювантном артрите (АА) по динамике биохимических показателей крови.
Материалы и методы
Исследование проведено на 42 нелинейных крысах-самцах массой 140-205 г, разбитых на 6 групп по 7 особей в каждой: 1-я - интактный контроль (14-е сутки); 2-я - интактный контроль (28-е сутки); 3-я - крысы с АА без лечения (контрольная патология, эвтаназия на 14-е сутки); 4-я - крысы с АА без лечения (контрольная патология, эвтаназия на 28-е сутки); 5-я - крысы с АА, леченные соединением DSK-38 (2 мг/кг, в/бр); 6-я - крысы с АА, леченные диклофенаком (4 мг/кг, в/бр). Дозы обоих веществ соответствовали их 1/2 ЕД50 по противовоспалительному эффекту [15].
АА моделировали путем однократного субплан-тарного введения в правую заднюю конечность крыс 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда («Thermo scientific», США). Лечение проводили с 14-й по 28-й день инокуляции адъюванта. Величину лечебного действия изучаемых веществ оценивали на 28-й день эксперимента по динамике маркеров воспалительной реакции в крови относительно контрольных (нелеченых) животных [12].
Для биохимических исследований использовали сыворотку крови, которую получали известным методом [7] путем центрифугирования крови при 1500 g 15 мин при t = 18-22° С.
Активность гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТ) (КФ 2.3.2.2) в сыворотке крови определяли унифицированным методом с использованием набора «ГГТ» («Филисит-Диагностика», Украина). Содержание серогликоидов (серомукоидов) определяли турбодиметрическим методом с помощью набора «Серогликоиды» («Филисит-Диа-
гностика», Украина), малонового диальдегида (МДА) - по реакции с тиобарбитуровой кислотой [1], активность супероксиддисмутазы (СОД, КФ 1.15.1.1) - по проценту торможения окисления кверцетина [6], общий белок - биуретовым методом, альбумины - по реакции с бромкрезоловым зеленым унифицированными методами с использованием наборов «Общий белок» и «Альбумин» («Филисит-Диагностика», Украина), рассчитывали содержание глобулинов и альбумин/глобули-новый (А/Г) коэффициент.
Цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики с определением ^кри-терия Стьюдента [8]. Достоверными считали изменения показателей при р<0,05. Полученные данные представлены в таблице.
Результаты и обсуждение
Из данных, представленных в таблице, видно, что у нелеченых крыс с АА имеют место значительные отклонения от нормы биохимических показателей крови, что свидетельствует о наличии воспалительного процесса. На это указывало в первую очередь увеличение в крови нелеченых крыс с АА содержания серомукоидов относительно интактных животных: на 14-е сутки - на 63,7%, а 28-е сутки - на 97,8% (р<0,05). Рост уровня серомукоидов, как известно, наблюдается при многих воспалительных процессах, в т. ч. при ревматоидном артрите и ревмокардите [9]. Также в оба срока эксперимента у контрольных животных отмечено нарушение показателей прооксидантно-антиоксидантного гомеостаза. Так, уровень МДА достоверно увеличился относительно интактных животных на 14-е сутки опыта на 58,5%, а на 28-е -на 40,9%. При этом активность СОД снизилась соответственно на 24,8% и 19,9% (р<0,05).
Одновременно у нелеченых крыс с АА в оба срока эксперимента имел место определенный рост активности ГГТ - маркера повреждения мембран клеток [9]; на 14-е сутки опыта - на 37,3% (р>0,05), а на 28-е - на 64,0% (р<0,05) относительно интактных животных. Согласно данным литературы [4, 9], ГГТ в значительных количествах содержится в мембранах эпителиальных клеток печеночных канальцев, проксимальных канальцев нефрона, в ЖКТ. Поэтому можно предположить, что рост активности ГГТ является отражением воспалительной реакции и деструктивных процессов в указанных органах нелеченых животных с АА.
В то же время в сыворотке крови нелеченых крыс наблюдались отклонения в составе белковых фракций, без существенных изменений показателя общего белка. Так, на 28-е сутки эксперимента концентрация альбумина уменьшилась на 14,6% при одновременном росте уровня глобулинов на 23,0% относительно здоровых животных
(р < 0,05). При этом коэффициент А/Г достоверно снизился на 31,5%.
Согласно данным литературы [9], гипоальбу-минемия может быть признаком прежде всего нарушения белок-синтезирующей функции печени, а также указывать на нарушения функционального состояния почек. Увеличение в сыворотке крови содержания глобулинов, согласно точке зрения исследователей [9, 13], как правило, указывает на наличие воспалительного процесса в организме.
Курсовое введение крысам с АА соединения DSK-38 (2 мг/кг, в/бр), также как и диклофенака (4 мг/кг, в/бр), способствовало ослаблению признаков воспалительной реакции, вызванной адъ-ювантом Фрейнда. Свидетельством этому было достоверное снижение в конце лечения содержания в крови МДА соответственно на 32,5% и 25,4% при одновременном росте активности СОД соответственно на 44,0% (р<0,05) и 15,9% (р>0,05) относительно нелеченых животных (таблица). При этом величины обоих показателей на фоне DSK-38, как и диклофенака, практически не отличались от аналогичных показателей здоровых животных. По способности нормализовать в крови нарушенные показатели прооксидантно-антиоксидантного равновесия DSK-38 в определенной степени превосходило эталонный антифлогистик, особенно по влиянию на активность СОД (таблица).
На уменьшение степени воспалительной реакции на фоне лечения крыс с АА с помощью соединения DSK-38, как и диклофенака, указывала также положительная динамика содержания в крови серомукоидов и активности ГГТ. При этом по эффективности DSK-38 в определенной степени превосходило эталонный НПВС: под действием производного хиназолина в отличие от диклофенака величины указанных биохимических показателей в конце эксперимента достигали уровня ин-тактных животных. А по степени нормализующего влияния на активность ГГТ DSK-38 достоверно превосходило эталонный антифлогистик.
В то же время соединение DSK-38 в такой же степени, как и диклофенак, способствовало нормализации уровней фракций альбуминов и глобулинов в крови крыс с АА. В пользу этого свидетельствовала также нормализация коэффициента А/Г. При этом оба вещества существенно не влияли на содержание общего белка в крови (таблица).
В группе крыс с АА, леченных DSK-38, отсутствовала летальность, в то время как на фоне диклофенака одно животное (14,3% от общего количества крыс в группе) погибло от перфоративной язвы желудка.
Оценивая результаты проведенного исследования, можно отметить, что на фоне курсового введения крысам с АА соединения DSK-38, подобно диклофенаку, имеет место нормализация
в крови биохимических показателей воспалительной реакции, что может быть признаком их лечебного действия при данном патологическом состоянии. При этом по степени противовоспалительного эффекта DSK-38 приравнивалось к эталонному антифлогистику, а порой и превосходило его в эффективности. Это касается более выразительного его действия на активность СОД и ГГТ.
Следует также отметить неспособность диклофенака в отличие от DSK-38 вызывать полное восстановление в крови крыс с АА уровня серо-мукоидов и активности ГГТ. Недостаточная эффективность диклофенака при АА согласуется с данными литературы [2, 3] о том, что на фоне действия классических НПВС, в т. ч. диклофена-ка, вместе с ослаблением воспаления в суставах в крови могут сохраняться, а иногда и ухудшаться, гематологические и биохимические показатели воспалительной реакции, что, вероятно, является отражением способности препаратов данной группы вызывать дистрофические и деструктивные изменения во внутренних органах, в частности, в желудке, печени и почках. Правомочность этих данных подтверждается в наших исследованиях наличием летальности в группе животных, леченных диклофенаком.
Следовательно, на основании полученных данных можно утверждать, что натриевой соли 4-(3-метил-2-оксо-2Н-[1, 2, 4] триазино [2, 3-с]хи-назолин-6-ил) бутановой кислоты (соединение DSK-38) в дозе 2 мг/кг в/бр присуще достаточно выраженное лечебное действие при АА у крыс, по величине которого оно не уступает диклофенаку натрия (4 мг/кг, в/бр), а в ряде наблюдений превосходит его. Полученные данные свидетельствуют о перспективности углубленного изучения фармакологических свойств и безопасности DSK-38 на предмет его пригодности для создания нового НПВС, конкурентоспособного с диклофенаком.
Таким образом, 1) курсовое введение крысам с адъювантным артритом натриевой соли 4-(3-ме-тил-2-оксо-2Н-[1, 2, 4]триазино[2, 3-с]хиназолин-6-ил) бутановой кислоты (соединение DSK-38, 2 мг/кг, в/бр), как и диклофенака натрия (4 мг/кг, в/бр), вызывает признаки противовоспалительного действия, на что указывает положительная динамика биохимических показателей крови; 2) на фоне действия DSK-38, как и диклофенака, в конце лечения имеет место достоверное снижение в сыворотке крови содержания серомукоидов, МДА (при одновременном возрастании активности СОД), нормализация показателей гамма-глута-милтранспептидазы и белковых фракций относительно нелеченых животных. При этом по величине лечебного действия DSK-38 не уступает препарату сравнения, а в ряде наблюдений превосходит его в эффективности.
CT)
Кубанский научный медицинский вестник № 5 (154) 2015
Влияние соединения DSK-38 и дикпофенака на динамику биохимических показателей крови у крыс з АА (М±т)
№ группы Условия опыта МДА, мкмоль СОД, у. е./л Серому коиды, у. е. ГГТ, н моль/мин/л Общий белок, г/л Альбумины, г/л Глобулины, г/л А/Г
1 Интактные крысы, 14-е сутки (п=7) 4,6±0,37 55,7±1,46 0,190±0,014 22,18±1,24 68,91 ±2,09 30,36±0,93 38,55±2,26 0,81±0,07
2 Интактные крысы, 28-е сутки (п=7) 4,91 ±0,24 50,6±2,96 0,186±0,017 23,36±1,38 66,67±1,64 31,00±0,77 35,66±2,26 0,89±0,08
3 АА без лечения, 14-е сутки (контроль, п=7) 7,29±0,36*1 41,9±2,53*1 0,311±0,026*1 30,45±3,66 66,60±0,89 27,31±0,61*1 39,29±0,91 0,70±0,03
4 АА без лечения, 28-е сутки (контроль, п=7) 6,92±0,29*2 40,5±2,6*2 0,368±0,045*2 38,31 ±3,28 70,34±0,80 26,47±0,85*2 43,87±1,17*2 0,61±0,03*2
5 АА+ОЭК-38 (п=7) 4,67±0,60*4 58,36±2,71 *4 6 0,216±0,014*4 19,78±1,87*46 65,34±1,11*4 36,34±2,19*4 29,99±1,0*24 1,07±0,09*14
6 АА+дикпофенак (п=6) 5,16±0,71*4 46,97±2,84 0,243±0,017*24 28,70±1,72*24 65,69±1,92 34,31 ±1,82*4 31,37±2,03*4 1,11±0,07*4
Примечание: *- р < 0,05 относительно группы, обозначенной цифрой возле звездочки.
ЛИТЕРАТУРА
1. Владимиров Ю. А., Арчаков А. И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. - М.: Наука, 1972. -220 с.
2. Джузенова Б. С. Сравнительная оценка эффективности преднизолона и современных нестероидных противовоспалительных препаратов (вольтарена и индометацина) в терапии острого ревматизма // Тер. архив. - 1981. - Т. 53. № 7. -С. 114-118.
3. Ишанкулова Б. А., Медник Г. Я. Влияние ибупрофена при различных путях его ввведения на течение адъюван-тного артрита у белых крыс // Вопр. клиники, патогенеза и терапии сердечно-сосудистой системы. - Душанбе, 1981. -С. 37-39.
4. Камышников В. С. О чем говорят медицинские анализы?: Справочное пособие. - Минск: Белорусская наука, 2001. - 189 с.
5. Каратеев А. Е. Применение НПВП: Схематический подход // Острые и неотложные состояния в практике врача. -2012. - № 2 (3). - С. 14-16.
6. Костюк В. А., Потапович А. И., Ковалева Ж. В. Простой и чувствительный метод определения активности супероксид-дисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина // Вопр. мед. химии. - 1990. - № 2. - С. 88-91.
7. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник / Под. ред. В. В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - 368 с.
8. Лапач С. Н, Чубенко А. В., Бабич П. Н. Статистика в науке и бизнесе: Практ. руководство. - К.: Морион, 2002. -640 с.
9. Скляров О. Я. (ред. ). Бiохiмiчнi показники в нормi i при патологи. - К.: Медицина, 2007. - 320 с.
10. Степанюк Г. I., Семененко Н. О., Коваленко С. I. та iн. ОцЫка церебропротекторноТ дм похщних (3^-2-оксо-2Н-
[1, 2, 4]триазино[2, 3-с]хшазолЫ-6чл) карбонових кислот на моделi гострого порушення мозкового кровооб^ в щурiв // Фармаколопя та лкарська токсиколопя. - 2011. - № 6 (25). -С. 22-26.
11. Степанюк Г. I., Чорноiван Н. Г., Коваленко С. I., та iн. Скриынг аналгетичноТ активност в ряду похщних (3^-2-оксо-2Н-[1, 2, 4]триази-но[2, 3-с]хЫазолш-6чл) карбонових кислот // Фармаколопя та лкарська токсиколопя. - 2011. - № 1 (20). -С. 52-55.
12. Стефанов А. В. (ред. ). Доклинические исследования лекарственных средств. Методические рекомендации. -К.: Авиценна, 2002. - 568 с.
13. Цыганенко А. Я., Жуков В. И., Леонов В. В. и др. Клиническая биохимия. - Харьков: Факт, 2005. - 456 с.
14. Чекман I. С., Вiкторов О. П., Горчакова Н. О. та iн. Не-стероТдн протизапальн препарати: Тх ефективнють i доступ-нють, прийнятнють для патента. Фармаконагляд за безпекою застосування (монографiя). - К.: Пол^раф Плюс, 2011. -118 с.
15. Чорноiван Н. Г., Гриб В. В., Дорошенко О. М., Степанюк Г. I. Порiвняльна оцЫка анальгетичного ефекту похщного хшазолЫу (сполука DSK-38) та диклофенаку на моделi вюце-рального болю // Кл^чна фарма^я: 20 роив в УкраТнк Мат. Нацюнального конгресу. - Харив, 2013. - С. 236-237.
16. Юрченко А. I., Степанюк Г. I., Коваленко С. I., Шабельник К. П. Порiвняльна оцшка анальгетичноТ дм похщних 4-оксо(амшо) хшазолшу, диклофенаку натр^ та кеторолаку на моделi оцтовокислих корчiв // Кл^чна фармаколопя та фармакотератя захворювань у св^ доказовоТ медицини: Мат. 7-Т Всеукр. наук.-практ. конф. з мiжнарод. участю з клш. фармакологи - Вшниця, 2013. -С. 135-136.
Поступила 14.09.2015
С. Е. ГУМЕНЮК1, А. Г. ГРИГОРЬЕВ1, А. В. ГУБИШ1, Р. А. БАТЧАЕВА1, П. Г. СТОРОЖУК2
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ФОРМИРОВАНИЯ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ПРИ АЛЛОПЛАСТИКЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Кафедра хирургии педиатрического и стоматологического факультетов и 2кафедра фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Минздрава России, Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4; тел. 8-960-49-20-993. E-mail: Red-Koma@yandex.ru
Использование инородных материалов в современной герниологии, с одной стороны, уменьшает количество рецидивов, а с другой - увеличивает риск развития ряда осложнений: обильная экссудация и возможное инфицирование в послеоперационной ране, обширная рубцовая деформация зоны операции, стойкий болевой синдром и возможное снижение фертильности у мужчин. В эксперименте на 30 крысах изучалось влияние препаратов «мезогель» и «йодопирон» на особенности течения раневого процесса при операциях с использованием сетчатого экспланта. Гистологическими методами оценивалась полноценность формирования соединительной ткани, степень вовлеченности в рубцовый процесс расположенных в зоне операции тканей и структур. По сравнению с контрольной группой животных установлены относительно низкая плотность и меньшее количество коллагеновых волокон. В контрольной группе животных отмечались выраженная пролиферативная реакция в окружающих протез тканях, грубая деформация и вовлечение в рубцовый процесс расположенных рядом структур.
Ключевые слова: йодопирон, мезогель, сетчатый эксплант, соединительная ткань.
