CC BY
84
улучшались. Самые высокие их величины отмечены в IV и V опытных группах при введении в состав среды 0,45 и 0,6 г/л препарата. Подвижность спермиев в опытных группах была выше, чем в контроле, на 12,5; 21,9; 28,1 и 31,2 % (табл. 1), выживаемость - на 40,7; 59,2; 83,3 и 83,3 %, а сохранность акросом - на 4,0; 9,0; 15,0 и 15,0 % соответственно.
Такой эффект, вероятно, связано с увеличением устойчивости мембранных структур спермиев к криогенным повреждениям, а также со снижением интенсивности процессов перекисного окисления липидов под влиянием крезацина.
Оплодотворяемость свиноматок в опытных группах превышала контроль на 5,1; 11,3; 16,7 и 16,7 % (табл. 2). Наилучшие результаты получены в вариантах с введением на 1 л среды 0,45 или 0,6 г крезацина.
Выводы. Таким образом, введение в состав среды для замораживания спермы хряков препарата крезацин способствует значительному улучшению показателей замороженно-оттаянной спермы и, как следствие, повышению оплодотворяемости свиноматок. Многоплодие при этом практически не изменяется. Оптимальная доза препарата - 0,45 г/л среды.
Литература.
1. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах. //ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Серия биофизика. - 1991. - т. 29.
2. Ескин Г.В., Нарижный А.Г. Использование замороженно-оттаянной спермы хряков разных линий замораживании с антиоксидантами. //Сб. науч. тр. БГСХА, 2006.
3. Кононов В.П. Достижения и перспективы замораживания семени в свиноводстве. - М., 1983. - 75 с.
4. Нарижный А.Г. Применение антиоксидантов при глубоком охлаждении семени хряка. //С.-х. биология. - 1983. - № 4.
5. Кононов В.П., Черных В.Я., Нарижный А.Г. Устойчивость живчиков к глубокому охлаждению в зависимости от содержания витамина Е в рационе хряков. //Животноводство. - 1978. - № 1.
6. Джамалдинов А.Ч., Абузяров А.А.Повышение защитных свойств спермы хряков при криоконсервировании // Проблемы животноводства. Сб.науных трудов. Выпуск 4. - Белгород, 2005. - С. 24-27.
7. Джамалдинов А.Ч. Влияние скармливания пектинов хрякам на устойчивость спермы к замораживанию // Сб.научн.тр. БГСХА «Проблемы животноводства» - Вып. 6. - Белгород, 2006. - С. 28-30.
EFFECT INJECTION A PREPARATION KREZOTSIN IN COMPOSITION SPERM FREEZING MEDIUM
OF BOARS ON IT CRYO-STABILITY A.Ch. Dzhamaldinov, A.G. Narizhny, N.I. Kreindlina, A.N. Kuripko
Summary. The aim was to study the effect of the introduction of the krezatsina environment for freezing boar semen on her krioustoychivost. Preparing a concentrated sperm to freezing by the method of dialysis, which provides for the introduction of cryoprotective substances lactosecitrate chelate trisovoy (LGHTST) environment through a semipermeable membrane of the sperm without increasing its volume. Dialysis was carried out in spetsustroystve composed of 3 chambers separated by a semipermeable membrane. The inner chamber placed sperm, and two outer filled environment in the ratio 1:2 sperm Wednesday. As an antioxidant krezatsin administered at a dose of 0.15, 0.3, 0.45 and 0.6 g per 1 liter of medium. Studies have found that with the introduction of the environmental indicators krezatsina experimental group exceeded the control on motility at 12.5, 21.9, 28.1 and 31.2%, respectively, of the survival of spermatozoa of40.7, 59, 2, 83.3 and 83.3%, and the preservation of acrosome was higher by 4.0, 9.0, 15.0 and 15.0%, respectively. Krezatsina optimal dose for the introduction of the medium is 0.45 g per 1 liter of medium.
Key words: krezatsin, fertilization, sperm quality, sperm cryopreservation.
Таблица 2. Результативность осеменения свиноматок замороженно-оттаянной спермой хряков при использовании различных доз крезацина
Опоросилось Родилось поросят
Группа но число % всего на 1 свиноматку
I 25 13 52,0 119 9,15±0,03
II 28 16 57,1 148 9,25±0,03
III 30 19 63,3 176 9,27±0,03
IV 32 22 68,7 206 9,36±0,05**
V 32 22 68,7 205 9,32±0,05*
* р< 0,05; ** р< 0,01
отъема поросят. Осеменение проводили двукратно (первый раз сразу после выявления охоты, второй - через 24 ч после первого) объемом 100 мл с содержанием 3 млрд активных спермиев в дозе.
После осеменения определяли показатели воспроизводства свиноматок от замороженно-оттаянной спермы хряков, разбавленной средой с различным содержанием крезацина.
Результаты и обсуждение. С увеличением концентрации крезацина показатели замороженно-оттаянной спермы
УДК636.2:034.082.4: 57089.3:615.814
ВЛИЯНИЕ КОНДИЦИОННОЙ СРЕДЫ ЧЕРЕЗ ТОЧКИ АКУПУНКТУРЫ НА ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЗАМОРОЖЕНО-ОТТАЯННЫХ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Т.Е. ТАРАДАЙНИК, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник
Н.П. ТАРАДАЙНИК, кандидатбиологическихнаук, старший научный сотрудник
Г.Н. СИНГИНА, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
ВИЖ Россельхозакадемии
Г.В. КАЗЕЕВ, доктор сельскохозяйственных наук, профессор
А.В. КАЗЕЕВА РГАЗУ
E-mail: [email protected]
Резюме. Представлены результаты изучения эффективности способа повышения приживляемости заморожено-оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота у реципиентов посредством инъекции в точки акупунктуры микродоз кондиционной среды, полученной при культивировании эмбрионов крупного рогатого скота in vitro. Всего было пересажено 111 заморожено-оттаянных
эмбрионов, в том числе животным опытной группы - 61 эмбрион, контрольной - 50 эмбрионов. Реципиентам опытной группы сразу после трансплантации эмбриона в точки акупунктуры 25 и 30 вводили по 0,2 мл кондиционной среды. Результаты прижив-ляемости учитывали через 2 месяца после пересадки методом ректальной пальпации матки. В опытной группе она составила 45,9 %, в контрольной - на 17,9 % (р < 0,05) меньше.
Ключевые слова: крупный рогатый скот, трансплантацияэмбрио-нов, точки акупунктуры, приживляемость.
Повышение жизнеспособности и приживляемости эмбрионов у реципиентов при трансплантации остается актуальной проблемой, несмотря на значительные успехи в развитии этого метода. Установлено, что 80 % всех случаев эмбриональных потерь происходит до 17-го дн. развития зародыша; с 17-го по 42-й дн. смертность составляет 10...15 %, после 42-го дн. - 5 % [1, 2].
Приживляемость зародышей эмбрионов крупного рогатого скота, особенно заморожено-оттаянных, сильно варьирует [3]. В этой связи актуален поиск новых подходов и методов ее повышения.
Экспериментально доказано, что эмбрионы способны корректировать несоответствие материнской среды для своего успешного развития [1, 4]. Так, у крупного рогатого скота они продуцируют интерфероны, обладающие лютео-тропным эффектом [5, 6]. Попытки парентерального введения альфа-интерферона после искусственного осеменения с целью коррекции функции желтого тела показали [5], что для достижения ожидаемого эффекта необходимо введение его больших количеств. При этом значительно снизить вызывающую эффект дозу лекарственного вещества можно путем инъекции в точки акупунктуры (ТА) [7, 8].
Ранее мы экспериментально доказали эмбриотропный эффект кондиционированных эмбрионами in vitro сред при введении их в точки акупунктуры коров в течение 10 дн. после искусственного осеменения [9, 10].
Цель представленных исследований заключалась в изучении влияния кондиционной эмбриональной среды, полученной при культивировании эмбрионов in vitro, на приживляемость заморожено-оттаянных эмбрионов при введении в точки акупунктуры реципиентов в день пересадки,.
Условия, материалы и методы. Для созревания ооцитов использовали модифицированную среду ТС-199 (Gibco), содержащую 10 % FCS, 10 мкг FSH/мл и 0,5 мкг LH/мл. Через 24 ч культивирования их переносили в среду оплодотворения. В опытах использовали только ооциты, окруженные компактным кумулюсом, с гомогенной ооплаз-мой. Среда оплодотворения представляла собой модифицированный раствор Tyrode, содержащий 10 мкг гепарина на 1 мл,20 мкМ пенициллинамина, 10 мкМ гипотаурина и 1 мкМ эпинефрина.
Капацитацию спермы проводили методом swim-up в среде Talp (модифицированный раствор Tyrode, содержащий 6 мг BSA/ мл, 1,25 мМ Na-пирувата). Сперму для оплодотворения добавляли к ооцитам так, чтобы конечная концентрация составляла 1,5х106 сперматозоидов/мл.
Через 18.20 ч соинкубации ооциты отмывали от сперматозоидов и клеток кумулюса осторожным пипетировани-ем в среде Talp-HEPES и переносили в 500 мкл среды CR1, где предполагаемые зиготы культивировали в течение 8 дн. Через 3 дн. культивирования эмбрионы переносили в свежую среду, а на 5 дн. к среде добавляли FCS. Созревание, оплодотворение и культивирование происходило в условиях инкубатора при +39 °С и 5 % СО2.
Среда CR1 представляет собой минимальный солевой буферный раствор. В процессе развития и жизнедеятельности ранние эмбрионы выделяют в окружающую среду (в
условиях in vitro - в культуру) вещества (ростовые факторы, интерфероны, фактор теплового шока и др.), необходимые для полноценного эмбриогенеза, особенно при возможных недостатках материнской системы. Их присутствие, на наш взгляд, может служить объяснением эмбриотропного эффекта кондиционной среды.
При введении сред в точки акупунктуры мы использовали разработанную ранее методику [9]: полученные на каждом этапе культивирования эмбрионов среды (Talp, CR1) собирали из культуральных планшетов с помощью микропипетки, замораживали в пробирках Eppendorf и хранили при температуре -70 °С до использования. Перед введением их размораживали при комнатной температуре и инъецировали с помощью иглы 0,8 х 40 и шприца в точки акупунктуры животных, согласно топографическому атласу (Казеев, 2000), №25 - на дорсо-медиальной линии тела в углублении между подвижным и неподвижным хвостовыми позвонками и №30 - на медиальной линии тела, между корнем хвоста и анусом.
Для трансплантации использовали эмбрионы, полученные от коров-доноров голштинской породы нехирургическим методом и замороженные в этиленгликоле с 4 % бычьего сывороточного альбумина, что предусматривает прямую пересадку непосредственно после оттаивания без оценки качества. Реципиенты - телки случного возраста в спонтанном и синхронизированном цикле.
Всего было пересажено 111 эмбрионов: 61 - животным опытной группы; 50 - реципиентам контрольной группы.
Особям обеих групп перед трансплантацией проводили сакральную эпидуральную анестезию 2 %-ным раствором новокаина. Пересадку эмбрионов осуществляли нехирургическим методом глубоко в рог матки.
Реципиентам опытной группы сразу после трансплантации вводили по 0,2 мл кондиционной среды в ТА 25 и (или) ТА 30.
Оценку эффективности приема осуществляли по фактической стельности, определяемой через 2 месяца после трансплантации методом ректальной пальпации матки.
Для статистического анализа изменчивости по качественным признакам и определения достоверности разности использовали критерий Стьюдента [11].
Поскольку достоверных различий по доле выживших эмбрионов в зависимости от локализации и количества используемых точек акупунктуры мы не наблюдали, данные по животным опытной группы рассматривали в совокупности.
Результаты и обсуждение. При введении кондиционной эмбриональной среды в точки акупунктуры животных-реципиентов после нехирургической пересадки заморожено-оттаянных эмбрионов прижилось 28 из 61 эмбриона, или 45,9±6,4 %, что достоверно (р<0,05) выше, чем в контроле, где прижилось лишь 14 из 50 эмбрионов, или 28,0±6,3 %.
Довольно низкий показатель приживляемости заморожено-оттаянных эмбрионов (28 %) у интактных животных-реципиентов, вероятно, обусловлен, в большей степени, их физиологическим состоянием, в частности качеством желтого тела, активность которого во многом определяет подготовленность эндометрия к адекватному развитию и успешной имплантации эмбриона. Поскольку для криоконсервации, как правило, используют эмбрионы только отличного и хорошего качества, эффект эмбриональной кондиционной среды, на наш взгляд, можно объяснить ее определенным лютеотропным действием. Известно, что восстановление функции органа через точки акупунктуры происходит при любом методе воздействия на ТА (иглами, электромагнитными волнами, раздражающими вещества----------------------------------------------- 71
ми и др.). В ответ на это воздействие в живом организме Выводы. Введение кондиционной эмбриональной
происходит выработка биологически активных факторов, среды в точки акупунктуры реципиентов после нехирурги-
регулирующих функции организма на местном, органном ческой пересадки достоверно повышает приживляемость
и системном уровнях. Кондиционная эмбриональная среда, заморожено-оттаянных эмбрионов на 17,9 %.
которая содержит присущие эмбриону факторы, позволяет Полученные результаты представляют научный интерес
усилить так называемый «эмбриональный сигнал», что дает для изучения механизмов, обусловливающих оптимальное
больше шансов на успешную имплантацию. Это предпо- эмбриональное развитие, атакже имеют практическое зна-
ложение требует проведения дальнейших исследований по чение для повышения эффективности метода транспланта-
изучению компонентов и механизма действия эмбриональ- ции эмбрионов крупного рогатого скота и принципиально
ных факторов, в частности, через биологически активные нового подхода к решению общебиологической проблемы
точки организма. снижения эмбриональной смертности.
Литература.
1. Hansen P. J. Embryonic mortality in cattle from the embryo's perspective//J. Anim. Sci.- 2002. - 80(2). - Р. 33-44.
2. O'Connor М. Causes of embryonic mortality in cattle // Dairy and Animal Science at Penn State. - 2008. - 11(6). - P.1-2.
3. Mapletoft R.J., Hasler J.F. Assisted reproductive technologies in cattle: a review// Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. - 2005. - 24 (1). - P. 393-403
4. Ashworth C.J., Bazer F.W. Changes in ovine conceptus and endometrial function following asynchronous embryo transfer or administration of progesterone. //Biol Reprod. - 1989. - 40. - Р. 425-433.
5. Barros C.M., Betts J.G., Thatcher W.W., Hansen P.J. Possible mechanisms for reduction of circulating concentration by interferon-a in cows: Effects on hyperthermia, luteal cells, metabolism of progesterone and secretion of luteinizing hormone. //J. Endocrinol. - 1992. - 133. - P. 175-182.
6. Michael, D.D. Fibroblast Growth Factor-2 Is Expressed by the Bovine Uterus and Stimulates Interferon-{tau} Production in Bovine Trophectoderm.- Endocrinology. - 2006. - 7. - P.3571-3579.
7. Казеев Г.В. Ветеринарная акупунктура. - М., 2000. - 399 с.
8. Казеев Г.В, Казеева А.В, Ильина Г.В. Информационная терапия заболеваний животных по точкам акупунктуры. // Материалы девятого Московского Междунар. ветеринарного конгресса. - М., 2001. - C. 251-252.
9. Тарадайник Т.Е., Сингина Г.Н., Казеева А.В., Тарадайник Н.П. Влияние факторов, продуцируемых предимплантацион-ными эмбрионами, на создание оптимальных условий для эмбрионального развития // Международный вестник ветеринарии, Тематический вестник: «Новые аспекты в биотехнологии репродукции животных». - 2008. - №3. - C.53.
10. Тарадайник Т.Е., Сингина Г.Н., Смирнова М.Л. Изучение эмбриопротекторных свойств кондиционированной среды, полученной при культивировании in vitro эмбрионов крупного рогатого скота//Проблемы биологии продуктивных животных. - 2011. - №2. - С. 19-22
11. Петухов В.Л. и др. Ветеринарная генетика с основами вариационной статистики. - М., 1985. - С. 150-153.
INFLUENCE OF CONDITIONED MEDIUM THROUGH ACUPOINTS ON VIABILITY OF FROZEN-
THAWED BOVINE EMBRYOS T.E. Taradaynik, N.P. Taradaynik, G.N. Singina, G.V. Kazeev, A.V. Kazeeva
Summary. In the trial 111 frozen - thawed bovine embryos were assign to 2 groups: the treatment (n=61) was injection at once after ET into acupoints 25, 30 (Kazeev G.V., 2000) of recipients by 0.2 ml of conditioned medium obtained by cultivation of bovine embryos in vitro, control group (n=50) was intact. The embryo protective effect was estimated at 2 mo after ET by rectal palpation. The number of viability in treated and control groups was 45.9% and 28.0% respectively. There is shown that injection of conditioned medium in acupoints, after embryo transfer, raises level of viability of frozen-thawed bovine embryos by 17.9% in comparison with control (p<0.05).
Key words: bovine, embryo transfer, acupoints, viability.
УДК 636.2.082.3.034
НОВЫЙ ЗООТЕХНИЧЕСКИЙ КРИТЕРИЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ СРОКА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
МОЛОЧНЫХ КОРОВ В СТАДЕ
В.И. СЕЛЬЦОВ, кандидат сельскохозяйственных наук, зав. лабораторией
А.А. СЕРМЯГИН, кандидат сельскохозяйственных наук,старший научный сотрудник
М.Х. ТОХОВ, кандидат сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник ВИЖ Россельхозакадемии E-mail: [email protected]
Резюме. Исследования проведены с целью повышения срока использования молочной коровы в стаде путем оптимизации продолжительности циклов выращивания и воспроизводства. Для этого был введен оценочный критерий - коэффициент эффективности использования (КЭИ) животного. При разработке критерия
проанализированы группировки данных по продуктивным и экономическим показателям 282коров симментальской породы. Учтены такие показатели, какживая масса, возраст первого отёла, средний, наивысший и пожизненный удой, число отёлов, дата выбытия, себестоимость и цена реализации мяса и молока. На основе общих затрат по двум циклам использования животного рассчитаны валовой доход прибыль (убыток), уровень рентабельности (окупаемости). Установлена положительная и достоверная связь КЭИ с такими показателями, как пожизненный удой, число телят, возраст в лактациях, возраст в месяцах(г=0,78...0,84), максимальный и средний удой (г=0,32...0,51), прибыль, рентабельность, валовой доход и общие затраты (г=0,78...0,88); отрицательная зависимость между КЭИ и возрастом 1-го отёла (г= -0,37), а также стоимостью выращивания (г= -0,30). С ростом КЭИ от 0,4 до 0,9 срок использования коровы в стаде увеличивался с 16,7 до 30,0 мес., рентабельность - с -0,2до 4,3 %, а при КЭИ более 1,6 про-
