CC BY
97
УДК 619:591.463
СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ КРИОУСТОЙЧИВОСТИ СПЕРМЫ ХРЯКОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ
А.Ч. ДЖАМАЛДИНОВ, доктор биологических наук, главный научный сотрудник
А.Г. НАРИЖНЫЙ, доктор биологических наук, зав. лабораторией
Н.И. КРЕЙНДЛИНА, старший научный сотрудник А.Н. КУРИПКО, кандидат биологических наук, докторант
ВИЖ Россельхозакадемии E-mail: [email protected]
Резюме. Исследования проводили с целью изучения влияния включения крезацина в состав среды для замораживания спермы хряков на ее криоустойчивость. Концентрированную сперму готовили к замораживанию методом диализа, который предусматривает введение криопротекторных веществ лактозо-хелато-цитратно-трисовой(ЛГХЦТ) среды через полупроницаемую мембрану в сперму без увеличения ее объема. Диализ проводили в спецустройстве, состоящем из 3-х камер, разделенных полупроницаемыми мембранами. Во внутреннюю камеру помещали сперму, а две наружные заполняли средой в соотношении сперма: среда -1:2. В качестве антиоксиданта вводили крезацин в дозе 0,15; 0,3; 0,45 и 0,6г/л среды. Использование крезацина обеспечило увеличение подвижности спермиев, по сравнению с контролем, на 12,5; 21,9; 28,1 и 31,2 % соответственно, выживаемости спермиев - на 40,7; 59,2; 83,3и 83,3 %, сохранностиакросом - на 4,0; 9,0; 15,0 и 15,0 %. Оптимальная доза крезацинадля введения в состав среды для криоконсервации спермы хряков - 0,45 г/л.
Ключевые слова: крезацин, оплодотворение, качество спермы, криоконсервация спермы.
Один из важных технологических приемов повышения конкурентоспособности животноводства - улучшение воспроизводства стада путем использования искусственного осеменения.
В последние годы в стране многие предприятия по производству свинины с целью исключения инбридинга и улучшения селекционно-племенной работы вместо традиционного завозахряков используюткриоконсервированную сперму выдающихся хряков-производителей.
Однако в процессе криоконсервирования в жидком азоте имеет место разрушение липидного слоя мембран вследствие переокисления ненасыщенных жирных кислот. В свою очередь перекисные соединения под влиянием пероксидазы расщепляются с образованием молекулярного кислорода - активного окислителя. Так как сперма хряков богата субстратами, необходимыми для образования перекисей, остро стоит вопрос о защите мембран микросом и митохондрий, особенно чувствительных к переокислению.
Поэтому, чтобы в процессе замораживания предохранить мембраны спермиев от продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), необходимо снижать токсичность высоких концентраций кислорода.
Ранее при замораживании спермы хряков использовали такие антиоксиданты, как бутилокситолуол (БОТ), бути-локсианизол (БОА), дитретбутилкрезол (ДТВК), а также их сочетания [1...4].
По сведениям ряда авторов [4, 5] среди веществ, входящих в систему зашиты обоснована антиоксидантная и мембранопротекторная роль токоферола, который служит универсальным модификатором биологических мембран. Воздействие витамина приводит к качественному системному изменению состояния клетки в целом. В свете этих представлений возможно также объяснить его многочисленные эффекты, непосредственно не связанные с влиянием на перекисное окисление липидов.
Кроме того, в исследованиях при замораживании спермы хряков использовали такие антиоксиданты, как сукцинат хитозана и яблочный пектин [6, 7].
В последние годы внимание ученых привлек препарат крезацин - адаптоген и антиоксидант, который ранее хорошо зарекомендовал себя в сельскохозяйственной практике, в основном, для повышения морозоустойчивости растений и их регенерации.
В животноводстве крезацин использовали для повышения продуктивности цыплят-бройлеров и среднесуточного прироста массы поросят, увеличения оплодотво-ряемости свиноматок и количества их приплода, а также в кролиководстве и овцеводстве [2].
В связи с этим цель наших исследований - изучить влияние введения крезацина в состав среды для замораживания спермы хряков на ее криоустойчивость.
Условия, материалы и методы. Сперму для замораживания брали в ОАО АГ «Рост» Домодедовского района Московской области от племенных хряков крупной белой породы. Ее получали мануальным методом и использовали лишь густую фракцию.
Для разбавления спермы использовали среду следующего состава: лактоза - 84 г; глюкоза медицинская безводная - 6 г; триаммоний цитрат - 2 г; трилон-Б - 4 г; трис (оксиметил)-аминометан - 0,6 г; полиген - 0,6 г; глицерин - 40 мл; вода дистиллированная - 1000 мл. В качестве антиоксиданта вводили крезацин в дозе 0,15;
0,3; 0,45 и 0,6 г на 1 литр среды.
Крезацин - триэтаноламмониевая соль ортокрезокси-уксусной кислоты, фитогормон, белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде. Он не проявляет канцерогенного, тератогенного, гонадотоксического, эм-бриотоксического, мутагенного и аллергенного действия, не накапливается в организме и не повреждает ДНК.
Концентрированную сперму подготавливали к замораживанию методом диализа, который предусматривает введение криопротекторных веществ лактозо-хелато-цитратно-трисовой (ЛГХЦТ) среды через полупроницаемую мембрану в сперму без увеличения ее объема. Диализ проводили в спецустройстве, состоящем из 3-х камер, разделенных полупроницаемыми мембранами, во внутреннюю помещали сперму, а две наружные заполняли средой в соотношении сперма: среда - 1:2.
После диализной обработки сперму замораживали, а перед осеменением свиноматок оттаивали.
В замороженно-оттаян-ной сперме определяли подвижность и выживаемость спермиев, а также сохранность акросом.
Для осеменения использовали основныхсвиноматок крупной белой породы после
Таблица 1. Влияние введения в состав среды крезацина на показатели замороженно-оттаянной спермы хряков
Показатель Доза препарата, г/л среды
0 0,15 0,3 1 0,45 0,6
Подвижность, % Выживаемость при 39оС, усл. ед Сохранность акросом, % 32±0,1 54±5,0 51+12.9 36+0.1* 76±5,8 55+12.8 39+0.15** 86±7** 60+12.6 41+0.18*** 99+9.0*** 66+12.2 42+0.18*** 99+9.0*** 66+12.2
* р< 0,05; **р< 0,01; ***р< 0,001 Достижения науки и техники АПК, №8-2012
улучшались. Самые высокие их величины отмечены в IV и V опытных группах при введении в состав среды 0,45 и 0,6 г/л препарата. Подвижность спермиев в опытных группах была выше, чем в контроле, на 12,5; 21,9; 28,1 и 31,2 % (табл. 1), выживаемость - на 40,7; 59,2; 83,3 и 83,3 %, а сохранность акросом - на 4,0; 9,0; 15,0 и 15,0 % соответственно.
Такой эффект, вероятно, связано с увеличением устойчивости мембранных структур спермиев к криогенным повреждениям, а также со снижением интенсивности процессов перекисного окисления липидов под влиянием крезацина.
Оплодотворяемость свиноматок в опытных группах превышала контроль на 5,1; 11,3; 16,7 и 16,7 % (табл. 2). Наилучшие результаты получены в вариантах с введением на 1 л среды 0,45 или 0,6 г крезацина.
Выводы. Таким образом, введение в состав среды для замораживания спермы хряков препарата крезацин способствует значительному улучшению показателей замороженно-оттаянной спермы и, как следствие, повышению оплодотворяемости свиноматок. Многоплодие при этом практически не изменяется. Оптимальная доза препарата - 0,45 г/л среды.
Литература.
1. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах. //ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Серия биофизика. - 1991. - т. 29.
2. Ескин Г.В., Нарижный А.Г. Использование замороженно-оттаянной спермы хряков разных линий замораживании с антиоксидантами. //Сб. науч. тр. БГСХА, 2006.
3. Кононов В.П. Достижения и перспективы замораживания семени в свиноводстве. - М., 1983. - 75 с.
4. Нарижный А.Г. Применение антиоксидантов при глубоком охлаждении семени хряка. //С.-х. биология. - 1983. - № 4.
5. Кононов В.П., Черных В.Я., Нарижный А.Г. Устойчивость живчиков к глубокому охлаждению в зависимости от содержания витамина Е в рационе хряков. //Животноводство. - 1978. - № 1.
6. Джамалдинов А.Ч., Абузяров А.А.Повышение защитных свойств спермы хряков при криоконсервировании // Проблемы животноводства. Сб.науных трудов. Выпуск 4. - Белгород, 2005. - С. 24-27.
7. Джамалдинов А.Ч. Влияние скармливания пектинов хрякам на устойчивость спермы к замораживанию // Сб.научн.тр. БГСХА «Проблемы животноводства» - Вып. 6. - Белгород, 2006. - С. 28-30.
EFFECT INJECTION A PREPARATION KREZOTSIN IN COMPOSITION SPERM FREEZING MEDIUM
OF BOARS ON IT CRYO-STABILITY A.Ch. Dzhamaldinov, A.G. Narizhny, N.I. Kreindlina, A.N. Kuripko
Summary. The aim was to study the effect of the introduction of the krezatsina environment for freezing boar semen on her krioustoychivost. Preparing a concentrated sperm to freezing by the method of dialysis, which provides for the introduction of cryoprotective substances lactosecitrate chelate trisovoy (LGHTST) environment through a semipermeable membrane of the sperm without increasing its volume. Dialysis was carried out in spetsustroystve composed of 3 chambers separated by a semipermeable membrane. The inner chamber placed sperm, and two outer filled environment in the ratio 1:2 sperm Wednesday. As an antioxidant krezatsin administered at a dose of 0.15, 0.3, 0.45 and 0.6 g per 1 liter of medium. Studies have found that with the introduction of the environmental indicators krezatsina experimental group exceeded the control on motility at 12.5, 21.9, 28.1 and 31.2%, respectively, of the survival of spermatozoa of40.7, 59, 2, 83.3 and 83.3%, and the preservation of acrosome was higher by 4.0, 9.0, 15.0 and 15.0%, respectively. Krezatsina optimal dose for the introduction of the medium is 0.45 g per 1 liter of medium.
Key words: krezatsin, fertilization, sperm quality, sperm cryopreservation.
Таблица 2. Результативность осеменения свиноматок замороженно-оттаянной спермой хряков при использовании различных доз крезацина
Опоросилось Родилось поросят
Группа но число % всего на 1 свиноматку
I 25 13 52,0 119 9,15±0,03
II 28 16 57,1 148 9,25±0,03
III 30 19 63,3 176 9,27±0,03
IV 32 22 68,7 206 9,36±0,05**
V 32 22 68,7 205 9,32±0,05*
* р< 0,05; ** р< 0,01
отъема поросят. Осеменение проводили двукратно (первый раз сразу после выявления охоты, второй - через 24 ч после первого) объемом 100 мл с содержанием 3 млрд активных спермиев в дозе.
После осеменения определяли показатели воспроизводства свиноматок от замороженно-оттаянной спермы хряков, разбавленной средой с различным содержанием крезацина.
Результаты и обсуждение. С увеличением концентрации крезацина показатели замороженно-оттаянной спермы
УДК636.2:034.082.4: 57089.3:615.814
ВЛИЯНИЕ КОНДИЦИОННОЙ СРЕДЫ ЧЕРЕЗ ТОЧКИ АКУПУНКТУРЫ НА ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЗАМОРОЖЕНО-ОТТАЯННЫХ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Т.Е. ТАРАДАЙНИК, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник
Н.П. ТАРАДАЙНИК, кандидатбиологическихнаук, старший научный сотрудник
Г.Н. СИНГИНА, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
ВИЖ Россельхозакадемии
Г.В. КАЗЕЕВ, доктор сельскохозяйственных наук, профессор
70 ------------------------------------------------
А.В. КАЗЕЕВА РГАЗУ
E-mail: [email protected]
Резюме. Представлены результаты изучения эффективности способа повышения приживляемости заморожено-оттаянных эмбрионов крупного рогатого скота у реципиентов посредством инъекции в точки акупунктуры микродоз кондиционной среды, полученной при культивировании эмбрионов крупного рогатого скота in vitro. Всего было пересажено 111 заморожено-оттаянных
__ Достижения науки и техники АПК, №8-2012
