CC BY
26
Науковий вюник Льв1вського нацюнального утверсигету ветеринарно! медицини та бютехнологш 1мен1 С.З. Гжицького Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet7135
ISSN 2413-5550 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 619:616.15:619.612.015.3:636.2
Вплив комплексного лжування телят на обмш металопротеУшв та активнiсть ферментiв системи антиоксидантного захисту за гшопластично1 анеми
1.К. Жуковський1, Л.Г. Слiвiнська1, В.1. Левченко2 [email protected]
1Львiвський нацюнальний унiверситет ветеринарноI медицини та бютехнологш iменi С.З. Гжицького,
вул. Пекарська, 50, м. Львiв, 79010, Укра'та;
1 Бшоцертвський нацюнальний аграрний унiверситет, пл. Соборна, 8/1, м. Бша Церква, 09111, Украна
У статт1 наведено результати дослгджень телят, хворих гтопластичною анемгею на вмгст феруму, активностг фер-ментгв системи антиоксидантного захисту (АОЗ) та обмту металопротешгв.
Мжроелементне коригування рацюшв телят здшснювали шляхом включення до них премжсгв дефщитних мжроеле-ментгв (МЕ), як задавали у форм1 сульфатгв МЕ (перша дослгдна група) г хелатних сполук з метгошном (друга дослгдна група). Встановлено, що комплекте лгкування телят усувае основт клгнгчнг симптоми, дефщит феруму, нормалгзуе актив-шсть металоферментгв ргзних ланок системи АОЗ. Зокрема по заюнченню дослгду концентраця феруму вгроггдно (р < 0,001) тдвищувалась в 1,9 та 2,2 рази, ргвень гаптоглобту був вищий вгдповгдно на 47,1% г 49,3% у першш г другш групах поргвняно з початком дослгду. У сироватц кровг телят першог групи концентрацгя малонового альдеггду (МДА) знижувалась на 20,3% (р < 0,001), другое - на 29,8% (р < 0,001).
У результатг проведеного лгкування тдвищувалась актившсть гемовмгсних ферментгв: каталази на 31,2% г 36,8% (р < 0,001), пероксидази на 37,6% (р < 0,01) г 49,2% (р < 0,001) та цитохромоксидази (ЦХО) на 54,7% (р < 0,01) г 86,5% (р < 0,001). Визначення активностг дослгджуваних металопротешгв можуть бути тформативними дгагностичними кри-тергями метаболгчних порушень за гтопластично! анеми (ГПА) телят.
Кращг терапевтичний ефект установлено у лгкувант телят другоЧ групи, ,що утримували МЕ у форм1 хелатних сполук.
Ключовi слова: телята, анемгя, ферум, метаболгзм, металопротеши, гаптоглобт, церулоплазмт, малоновий диальдеггд, каталаза, пероксидаза, цитохромоксидаза, супероксиддисмутаза, глутатгонпероксидаза, метгонати.
Влияние комплексного лечения телят на обмен металлопротеинов и активность ферментов системы антиоксидантной защиты при гипопластической анемии
И.К. Жуковский1, Л.Г. Сливинская1, В.И. Левченко2 [email protected]
'Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З. Гжицкого,
ул. Пекарская, 50, г. Львов, 79010, Украина;
2Белоцерковский национальный аграрный университет, пл. Соборная, 8/1, г. Белая Церковь, 09111, Украина
Citation:
Zhukovskyy, I.K., Slivinska, L.G., Levchenko, V.I. (2016). Influence of complex treatment of calves suffering from hipoplastic anemia for metabolism of metalloproteins and enzyme activity of antioxidant defense system. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 18, 3(71), 158-162.
В статье приведены результаты исследований телят, больных, гипопластической анемией на содержимое ферума, активности ферментов системы антиоксидантной защите (АОЗ) и обмена металлопротеинов.
Микроэлементную коррекцию рационов теленков осуществляли путем включения к ним премиксов дефицитных микроэлементов (МЕ), которые задавали в форме сульфатов МЕ (первая опытная группа) и хелатних соединений с метионином (вторая опытная группа).
Установлено, что комплексное лечение телят устраняет основные клинические симптомы, дефицит ферума, нормализует активность металоферментов разных ланок системы АОЗ.
В частности по окончании опыта концентрация железа достоверно (p < 0,001) повышалась в 1,9 и 2,2 раза, уровень гаптоглобина был выше соответственно на 47,1% и 49,3% по сравнению с началом опыта. В сыворотке крови телят первой группы концентрация малонового альдегида (МДА) снижалась на 20,3% (p <0,001), второй - на 29,8% (p < 0,001).
В результате проведенного лечения повышалась активность гемсодержащих ферментов: каталазы на 31,2% и 36,8% (p < 0,001), пероксидазы на 37,6% (p < 0,01) и 49,2% (p < 0,001) и цитохромоксидазы (ЦХО) на 54,7% (p < 0,01) и 86,5% (p < 0,001).
Определения активности исследуемых металлопротеинов могут быть информативными диагностическими критериями метаболических нарушений за гипопластической анемии (ГПА) телят.
Лучший терапевтический эффект установлено в лечении телят второй группы, что получали МЕ в форме хелатных соединений.
Ключевые слова: телята, анемия, ферум, метаболизм, металлопротеины, гаптоглобин, церулоплазмин, малоновый ди-альдегид, каталаза, пероксидаза, цитохромоксидаза, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, метионаты.
Influence of complex treatment of calves suffering from hipoplastic anemia for metabolism of metalloproteins and enzyme activity of antioxidant
defense system
I.K. Zhukovskyy1, L.G. Slivinska1, V.I. Levchenko2 [email protected]
Lviv national university of veterinary medicine and biotechnologies named after S. Gzhytskyj, Pekarska Str., 50, Lviv, 79010, Ukraine;
Bila Tserkva National Agrarian University, Soborna sq., 8/1, Bila Tserkva, 09111, Ukraine
The research results of calves suffering from hypo plastic anemia of iron content, enzyme activity of antioxidant protection (AOP) and the exchange metal protein are listed in the paper.
Trace element ration adjustments of calves were performed by including premixes scarce trace elements, which were in the form of sulphates ME (the first experimental group) and methionine chelate compounds (the second experimental group).
It is established that the complex treatment of calves eliminates the major clinical symptoms of iron deficiency, normalizes metal enzyme activity of various components of the system AOP. In particular at the end of the experiment, the concentration of iron significantly (p < 0,001) was increased at 1.9 and 2.2 times, the haptoglobin level of was respectively higher at 47.1% and 49.3% compared to the beginning of the experiment.
The malonic dialdehyde concentration in serum of calves of the first group decreased by 20.3% (p < 0.001) in the second group, where chelate compounds were applied - by 29.8% (p <0.001).
As a result of the treatment the hemoenzyme activity increased: catalases by 31.2% and 36,8% (p < 0,001), peroxidase by 37,6% (p < 0.01) and 49.2% (p < 0.001) and cytochrome oxidase by 54.7% (p <0.01) and 86.5% (p < 0.001).
Determination of investigated metal protein can be informative diagnostic criteria for metabolic disorders of calves suffering from hypo plastic anemia. The best therapeutic effect in the treatment of calves of the second group is made, which got minerals in the form of chelate compounds.
Key words: calves, anemia, iron metabolism, metal protein, haptoglobin, ceruloplasmin, malonic dialdehyde, catalase, peroxidase, cytochrome oxidase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase, metionaty.
Вступ
В 0CH0Bi патогенезу гшопластично! анемп (ГПА) е дефщит i дисбаланс багатьох бюелеменпв, передуам феруму, кобальту, купруму, мангану в оргашзм^ i як наслвдок цього, порушення метаболiчних процеав, зниження бюсинтезу гемоглоб^ та шших металопротешв (Völker and Rotermund, 2000; Slivinska, 2006; Jezek et al., 2009). Метаболiзм феруму в оргашзм^ тдтримка його гомеостазу, абсорбщя, транспорт до тканин, депонування i використання у CTrn^i ферумвмюних сполук вщбуваеться за посере-
дництвом металоглжопроте1шв кровi (Vladimirov et al., 1991; Rajkhowa et al., 2000).
Гшоксичний стан, що виникае за ГПА зумовлюе розвиток ряду метаболiчних порушень, зокрема, по-силення процеав пероксидного окиснення лшщв (ПОЛ) (Kazimirko et al., 2008; Gaäl et al., 2006). Пош-коджуючий ефект вшьнорадикального окиснення обмежуеться i регулюеться системою антиоксидант-ного захисту (АОЗ), головним чином антиоксидант-ними металоферментами (Bobyirev et al., 1994; Kazimirko et al., 2004; Hayajneh, 2014). Актившсть окремих ланок антиоксидантного захисту в органiзмi
TenHT Ta MexaHi3MH ii perynHuii b nrreparypi BucBiTneHo HegocTaTHbo.
MeTa po6oTH - bhbhhth 3mmh BinbHopaguKanbHoro OKHCHeHHH ninigiB Ta aKTHBHocTi ^epMemiB CHCTeMH A03, o6MiHy MeTanonpoTeiHiB y TenHT, xBopux rnA i BnnHB Ha ui npouecu KoMnneKCHoro niKyBaHHH (Kravtsiv et al., 2001).
MaTepia^ i MeTogu goc^ig^eHt
^ocnigu npoBogunu y roCnogapCTBax HbBiBCbKoi o6nacri Ha TenHTax 3gopoBHx Ta xBopux rinonnacmnHow aHeMiew HopHo-pa6oi nopogu 3- Mic. BiKy, io 3HaxogunucH b ogHaKoBHx yMoBax yTpuMaHHH Ta rogiBni.
3a npuHuunoM aHanoriB (BiK, MaCa Tina, CTaTb) nigi-6paHo TpH rpynu TenHT: KoHTponbHa rpyna - 10 KniHi-hho 3gopoBHx TenHT Ta gBi goCnigHi rpynu - no 10 TenHT, xBopux rnA.
Xbophm TenHTaM 3 niKyBanbHow MeTow 3rogoByBanu ME, io 6epyTb ynaCTb b reMonoe3i Ta BxogHTb go CKna-gy MeTanonpoTeiHiB i MeTanoeH3HMiB, a CaMe: $epyM, KynpyM, uhhk, MaHraH, Ko6anbT, nog Ta CeneH.
ME KopeKqiw pauioHiB TenHT 3gmcHwBanu mnHxoM BKnwneHHH go hhx npeMiKCy y $opMi cynb^ariB Fe, Co, Cu, Mn, Zn, CeneHiTy HaTpiw i nogugy Kaniw (nepma goCnigHa rpyna) i xenaTHux CnonyK 3 MeTioHiHoM (gpyra goCnigHa rpyna) b go3ax: 0,3 Mr/Kr; 0,06 Mr/Kr; 0,15 Mr/Kr; 0,20 Mr/Kr ; 0,25 Mr/Kr ; 0,1 Mr/Kr i 0,05 Mr/Kr ®hboi MaCH npoTHroM ogHoro MiCHUH.
Xbophm TBapuHaM gocnigHux rpyn BBogunu nigmKipHo BrraMffiHuft npenapaT "TpuBiT" b go3i 1,5 Mn ko^hhx 7 gHiB.
KpoB gnH gocnig®eHb Big6upanu Ha 1-y Ta 30-y go-6y eKCnepuMeHTy. ^nH gocnig®eHb 3pa3KH KpoBi Big TenHT ogep®yBanu b oguH i toh ®e nac 3paHKy 3 HpeMHoi BeHH, BHKopuCToBywHH m'eKuiHHi ronKH po3MipoM 1,2 x 40 mm, y CKnHHi npo6ipKH (10 Mn), hk aHTHKoarynHHT BHKopuCToByBanu renapuH. CupoBaTKy KpoBi ogep^yBanu niCnH uempH^yryBaHHH 3 napanenbHux npo6 npu 3000 o6./xb. npoTHroM 10 xb.
y CupoBaTui KpoBi BH3Hananu $epyM 3 6aTo$eHamponiHoM; uepynonna3MiH - 3 n-^eHineHguaMiHoM gurigpoxnopugoM (Ravin H. J., 1961); ranTorno6iH (Korinek J., 1963, b Mogu^iKauii npoxypoBCbKoi 3.-3., MoBmoBHH E.H., 1972); ManoHoBHH guanbgerig (M^A) 3 Tio6ap6iTypoBow KHCnoTow (Uchiyama M., Michara M., 1978, b Mogu^iKauii AHgpeeBoi' H. I. Ta iH., 1988); aKmBHicTb KaTana3H (KoponwK M.A. Ta iH., 1988); nepoKcuga3u (nonoB T., HeHKoBCbKa H., 1971); aKraBHicTb rnyTario-HnepoKCuga3H (rnO) - 3a mBugKicTw oKHCHeHHH BigHo-BneHoro rnyTaTioHy 3a HaHBHoCTi rigponepeKucy TpeT-6yTuny (Mohh B.M., 1986); CynepoKCHgguCMyTa3H (CO,3) - (3y6HHHHa E.E., (1983); uuToxpoMoKCuga3y (ЦХO) 3a W.Straus (1954) b Mogu^iKauii B.A. KeTnuH-CbKoro, E.H. MuxannoBoi (1968).
CTaTuCTuHHy o6po6Ky oTpuMaHux pe3ynbTaTiB npo-Bogunu 3a niuerooBaHow nporpaMow MS Excel. OuiHKy BiporigHoCTi 3ginCHWBanu 3a KpmepieM CTbwgeHTa (t). BiporigHow BBa^anu pi3Huuw npu p < 0,05 - 0,001 y nopiBHHHHi 3 KoHTponbHow rpynow TBapuH. Pe3ynbTaTu
CepegHix 3HaneHb BBa®anu CTamcrnHHo BiporigHuMu npu p < 0,05 - *, p < 0,01 - ** Ta p < 0,001 - ***.
Pe3ymTara Ta ix oSroBopeHHH
npu KniHinHoMy gocnig®eHHi TenHT, xBopux rnA BigMwanu - 3aranbHe npurHineHHH, BigCyTHiCTb aneTu-Ty, CyxiCTb mKipu, TbMHHiCTb BonoCHHoro noKpuBy, 6nigiCTb BuguMux cnrooBux o6onoHoK i koh'whktubu.
y TenHT, xBopux rnA KoHuempauiH ^epyMy b CupoBaTui KpoBi 6yna b Me®ax Big 8,6 go 13,6 MKMonb/n i b CepegHboMy CTaHoBuna 11,3 ± 0,63 MKMonb/n. nogi6Ha KapTuHa CnoCTepiranaCb y xBopux TenHT gpyroi rpynu, ge KoHueHTpauiH $epyMy CTaHoBuna b CepegHboMy 11,1 ± 0,69 MKMonb/n (8,5 -14,0 MKMonb/n). HrobKKH BMiCT gaHoro MiKpoeneMerna y CupoBaTui KpoBi BKa3ye Ha po3butok $epyMge$iuuTHoi aHeMii.
no 3aKiHneHHw goCnigy KoHuempauiH $epyMy BiporigHo (p < 0,001) nigBuiyBanacb b 1,9 Ta 2,2 pa3u nopiBHHHo 3 nonaTKoM goCnigy i b CepegHboMy CTaHoBuna 21,7 ± 0,38 Ta 23,6 ± 0,23 MKMonb/n n BignoBigHo. npoTe KoHuempauiH $epyMy y cupoBaTui KpoBi TBapuH gpyroi rpynu, ge 3acTocoByBanu xenaTHi CnonyKK MiKpoeneMeHTiB 6yna Buiow Ha 8,7% nopiBHHHo 3 nepmow.
y xBopux TBapuH gocnigHux rpyn piBeHb ranTorno6iHy y cupoBaTui KpoBi 6yB ннзbкнм, ^o noB'H3aHo 3 BuBinbHeHHHM BinbHoro reMorno6iHy y KpoBi xBopux TenHT i yTBopeHHHM 3 ranTorno6iHoM KoMnneKCy (Hp-Hb-KoMnneKC). OCTaHHin nonepeg^ye BTpaTu reMiHoBoro $epyMy, oCKinbKu nepe3 BenuKy MoneKynHpHy MaCy Hp-Hb-KoMnneKC He npoxoguTb nepe3 $inbTpu hupkobux Kny6onKiB. niCnH npoBegeHoro niKyBaHHH piBeHb ranTorno6iHy 6yB BignoBigHo bu^uh Ha 47,1% i 49,3% nopiBHHHo 3 nonaTKoM goCnigy (puC.1).
KoHueHTpauiH M^A y CupoBaTui KpoBi xBopux TenHT mgBu^yeTbCH, ^o BKa3ye Ha 3poCTaHHH npoueCiB nepo-KCugHoro oKuCHeHHH ninigiB (nOH) (puC. 2). y pe3ynb-TaTi npoBegeHoro niKyBaHHH y CupoBaTui KpoBi TenHT nepmoi rpynu KoHuempauiH M^,A 3Hu®yeTbCH Ha 20,3% (p < 0,001), y gpyrin rpyni, ge 3aCToCoCoByBanu xenaTHi CnonyKu - Ha 29,8% (p < 0,001).
Цepynonnaзмiн (KynpyMBMiCHun) 6inoK nna3Mu KpoBi BBa^aeTbCH ochobhum aHTuoKCugaHToM nna3Mu KpoBi, BigHoBnwe b KpoBi CynepoKCugm paguKanu go MoneKynHpHoro OKCureHy i Bogu Ta 3axuiBae Big nom-Kog^eHHH ninigHi CTpyKTypu MeM6paH, a TaKo® Mo6ini3ywnu $epyM 3 geno, B6ygoBye Fe3+ b CTpyKTypy TpaHC^epuHy.
y TenHT xBopux rnA BMiCT uepynonna3MiHy y CupoBaTui KpoBi nigBuiyeTbCH go 0,17 - 0,18 r/n. ^epe3 30 gHiB BigMweHo BiporigHe 3Hu®eHHH gaHoro noKa3HuKa go 0,09 ± 0,003 r/n y nepmin rpyni Ta 0,07 ± 0,002 r/n (p < 0,001) - gpyrin (puC. 3).
AKTuBHiCTb cynepoкcнggнcмyтaзн (CO^) y KniHin-ho 3gopoBux TBapuH b CepegHboMy CTaHoBuna 0,39 ± 0,007 (0,34 - 0,42)% 6noK. peaK/1r Hb. HaMu BCTaHoBneHo Hu3bKy aKTuBHicTb ^epMeHTiB AO3 - CO^, i rnO y xBopux TenHT rnA (puc. 4, 5). AKTuBHicTb CO^, i rnO 3a 3rogoByBaHHH ME y $opMi HeopraHinHux co-
gen (nepma rpyna) 36inbmHnacb Ha 33,3% (p < 0,001) i no cnonyK, ^0 MicxaTbca b nna3Mi KpoBi i BonogiroTb
26,6% (p < 0,01) Bign0BigH0, nopiBHaHO 3 nonaraoM amuoKcHgaHTHoro aKTHBHic™, BigHocaTb reMBMicHi
giKyBaHHH. Kpa^i n0Ka3HHKH aKTHBHocTi COn Ta rnO $epMemu: KaTana3a, nep0Kcuga3a Ta цнтохpомокcнga-
BcTaHOBH^H 3a 3rogoByBaHHa ME y $opMi xenaTHux 3a, BMicT akhx y xBopux TenaT 6yB HH3bKHM (puc. 6 - 8). KOMnneKciB.
0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1
0,62
0,37 0,38
3gopoBi
II
nn
3gopoBi
II
nn
m O
0,18 0,16 0,14 0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0
160 140 120 100 80 60 40 20 0
0,18 0,17
0,07
3gopoBi
140,3
II
nn
99,7 99,4
12
3gopoBi
II
HA
3gopoBi I II
nn
0
1
0
0
I
I
I
I
300 250 200 150 100 50
244,8
247
179,7 180,1
Здоров1
II
ПД
У результата проведеного лшування актившсть да-них ферменпв пвдвищилася: каталази на 31,2% i 36,8% (p < 0,001), пероксидази на 37,5% (p < 0,01), 49,2% (p < 0,001) та цитохромоксидази (ЦХО) на 54,7% (p < 0,01), 86,5% (p < 0,001) вадповадно у пер-шiй i другiй групах.
Висновки
1. Лiкування телят, хворих ГПА сприяло покращенню клiнiчного стану хворих тварин, тдви-щенню вмiсту феруму в сироватщ кровi, показникiв ензимно! системи антиоксидантного захисту: активностi каталази, пероксидази, ЦХО, СОД i ГПО.
2. 1нформативними критерiями для дiагностики метаболiчних порушень за ГПА телят е визначення активностi ензимiв АОЗ.
3. Кращий терапевтичний ефект установлено у л^ванш телят друго! групи, яким застосовували МЕ у формi хелатних сполук.
Перспективи подальших до^джень. На основi отриманих результатiв дослщжень будуть розробленi рекомендацй' щодо використання тестiв в раннiй дiаг-ностищ метаболiчних порушень та застосування хелатних комплекав МЕ за лшування телят, хворих ГПА.
Бiблiографiчнi посилання
Slivinska, L.H. (2006). Erytrotsytopoez ta obmin zaliza u tilnykh koriv. Visnyk Bilotserkiv. derzh. ahrar. un-tu: Zb. nauk. prats. Bila Tserkva. 40, 182-188 (in Ukrainian).
Völker, H., Rotermund, L. (2000). The possibilities of oral iron supply in calves to maintain their health status. Deutsche Tierarztliche Wochenschrifto. 107, 16-22.
Jezek, J, Staric, J, Nemec, M, Zadnik, T, Klinkon, M. (2009). Relationship between blood haemoglobin and serum iron concentrations and heart girth in pre-weaned dairy calves. Italian Journal of Animal Science. 8, 151-153.
« о
12 n
10 -
6 -
Здоров1
II
ПД
Vladimirov, Yu.A., Azizova, O.A., Deev, A.I., Kozlov, A.V., Osipov, A.N. (1991). Svobodnyie radikalyi v zhivyih sistemah. Biofizika. Itogi nauki i tehniki, VINITI. M. 29, 252 (in Russian).
Rajkhowa, S., Dutta, G.N., Hazarika, G. (2000). Comparative study on the efficacy of iron dextran chelated iron and E Hb a herbo-mineral product for treatment and prevention anaemia in calves and kids. Phytomedica. 1(1,2), 29-36.
Kravtsiv, R.Y., Stadnik, A.M., Zhukovskiy, I.K. (2004). Mikroelementnaya korrektsiya aktivnosti metallofer-mentov antioksidantnoy zaschityi pri gipoplastich-eskoy anemii telyat. Svobodnyie radikalyi, antioksi-dantyi i zdorove zhivotnyih. Mater. mezhd. n.-p. konf. Voronezh, VNIVIPFiT. Voronezh, 215-219 (in Ukrainian).
Gaal T., Ribiczeyne-Szabo, P., Stadler, K. (2006). Free radicals, lipid peroxidation and the antioxidant system in the blood of cows and newborn calves around calving. Biochem Physiol B Biochem Mol. 143, 391-396.
Kazimirko, V.K., Maltsev, V.I., Butyilin, V.Yu., Gorobets, N.I. (2004). Svobodnoradikalnoe okislenie i antioksidantnaya terapiya. K.: Morion.
Bobyirev, V.N., Pochernyava, V.F., Starodubtsev, S.G. i dr. (1994). Spetsifichnost sistem antioksidantnoy zaschityi organov i tkaney - osnova differentsirovan-noy farmakoterapii antioksidantami. Eksperim. i klin. Farmakologiya. 57(1), 47-54.
Hayajneh, F.M.F. (2014). Antioxidants in dairy cattle health and disease. Bulletin of University of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine Cluj-Napoca. Veterinary Medicine. 71, 104-109.
Kazimirko, V.K., Maltsev, V.I., Butyilin, V.Yu., Gorobets, N.I. (2004). Svobodnoradikalnoe okislenie i antioksidantnaya terapiya. K.: Morion (in Russian).
Kravtsiv, R.I., Novikov, V.P., Stadnyk, A.M. (2001). Syntez, metabolichnyi ta produktyvnyi vklad koordynatsiinykh spoluk mikroelementiv z metioninom u koriv i bychkiv. Naukovo-tekhnichnyi biuleten instytutu biolohii tvaryn. Lviv. 1-2, 87-92 (in Ukrainian).
Cmammn nadiuMxa do peda^ii 5.10.2016
8
4
2
0
0
I
I
