CC BY
51
УДК 615.742. А.О. Занданов, З.Г. Самбуева,
С.В. Лемза, Т.А. Ажунова, С.М. Николаев
ВЛИЯНИЕ КЛЕВЕРА ЛУПИНОВОГО НА ЖЕЛЧЕВЫДЕЛИТЕЛЬНУЮ ФУНКЦИЮ ПЕЧЕНИ У БЕЛЫХ КРЫС
Отвар и экстракт сухой Trifolium lupinaster L. в экспериментах на белых крысах обладают выраженной желчегонной активностью. Экстракт Trifolium lupinaster L. при СС14 -гепатите оказывает гепатопротектор-ное действие.
Ключевые слова: Trifolium lupinaster L., желчегонная активность, токсический гепатит.
A.O. Zandanov, Z.G. Sambueva, S.v. Lemza, T.A. Azhunova, S.M. Nikolaev
the influence of trifolium lupinaster L. on holeretic function of white rats’ liver
The experiments on white rats showed a strong holeretic activity of decoction and dry extract from Trifolium lupinaster L. Its extract exerts hepatoprotective effect at CCl-hepatitis.
Key words: Trifolium lupinaster L., holeretic activity, toxic hepatitis.
Существенный вклад в арсенал фармакотерапевтических средств для лечения заболеваний печени и билиарной системы, а также для профилактики возможных осложнений гепатита и предупреждения хронизации процесса вносят фитопрепараты, которые способствуют нормализации иммунной системы, восстановлению функциональной активности гепатоцитов и оттока желчи, а также предупреждают развитие холецистита и желчнокаменной болезни [3; 6]. Одним из применяемых в тибетской медицине растений при заболеваниях печени является клевер лупиновый - Trifolium lupinaster L. из семейства Fabaceae [1; 5; 7]. В народной медицине клевер лупиновый применяется в качестве ранозаживляющего и противовоспалительного средства [8]. В надземной части клевера лупинового содержатся алкалоиды, аскорбиновая кислота; идентифицировано около 20 соединений фенольной природы, выявлено наличие пальмитиновой, олеиновой и линолевой кислот [2].
Цель исследования оценить желчегонную активность отвара и экстракта клевера лупинового при экспериментальном гепатите, вызванном введением 4-хлористого углерода.
Материалы и методы исследования
Растительное сырье было собрано в Прибайкальском районе Республики Бурятия в июле 2009 г. Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 170-200 г в осенне-зимний период.
В первой серии экспериментов определяли желчегонную активность у интактных крыс: отвар клевера лупинового, приготовленного по требованиям ГФ XI [4], вводили в объеме 1,0 мл однократно в двенадцатиперстную кишку; водный раствор экстракта клевера лупинового вводили в дозах 100 и 300 мг/кг однократно в двенадцатиперстную кишку в объеме 1,0 мл.
В другой серии экспериментов оценивали влияние экстракта клевера лупинового на желчевыделительную функцию печени у крыс при токсическом гепатите, вызванном путем подкожного 4-кратного введения 50%-ного масляного раствора (V/V) тетрахлорметана (СС14) в объеме 4 мл/кг 1 раз в сутки.
Сухой экстракт клевера лупинового был получен и стандартизован в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. Экстракт клевера лупинового вводили внутрижелудочно в экспериментально-терапевтической дозе 300 мг/кг в течение 10 дней, начиная с 4 дня от начала введения гепатотропного яда, 1 раз в сутки, в форме водного раствора (10 мл/ кг). Крысам контрольной группы вводили эквиобъемное количество очищенной воды. Исследования проводили через 7, 14 и 21 сутки от начала эксперимента.
О характере желчеобразования и желчевыделения судили по скорости секреции желчи, общему количеству выделенной желчи, концентрации желчных кислот, по количеству выделенных в каждой часовой порции холестерина и билирубина [9].
Полученные результаты обработаны с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни [9].
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований установлено (табл. 1, 2), что отвар клевера лупинового оказывает выраженное желчегонное действие. В частности, скорость секреции желчи возрастала на 3139%, общее количество выделенной желчи превышало данный показатель у крыс контрольной группы на 30%. При введении лабораторным животным отвара клевера лупинового содержание желчных кислот в желчи возрастало на 30%, билирубина - на 33%, холестерина - на 70% по сравнению с показателями у крыс контрольной группы.
Таблица 1
Влияние отвара и экстракта клевера лупинового На скорость секреции желчи у интактных крыс
Группы животных Скорость секреции желчи в течение 5 часов, мг/мин/100 г
1 ч 2 ч 3 ч 4 ч 5 ч
Контрольная (Н2О) Опытная 1 (отвар клеве- 5,8±0,4 5,4±0,2 4,1±0,3 4,1±0,3 4,0±0,1
ра лупинового) б,0±0,2 7,1±0,3* 5,б±0,4* 5,7±0,3* 4,б± 0,3
Контрольная (Н2О) Опытная 2 (экстракт клевера лупинового): 5,4±0,4 4,б±0,4 4,0±0,5 3,7±0,3 3,8±0,4
100 мг/кг 5,7±0,4 б,0±0,б б,0±0,4* 5,1±0,3* 5,5±0,5
300 мг/кг 4,9±0,5 5,5±0,5 5,3±0,4* 5,2±0,3* 4,б±0,4
Примечание: * - здесь и далее различия достоверны по сравнению с контролем при Р < 0,05
При введении крысам экстракта клевера лупинового в дозе 100 мг/кг отмечалось наиболее выраженное желчегонное действие. В частности, скорость секреции желчи при введении испытуемого экстракта возрастала на 30-47%, общее количество выделенной желчи повышалось на 40% по сравнению с показателями у животных контрольной группы. Наряду с этим экстракт клевера лупинового оказывал стимулирующее влияние на синтез и выделение желчных кислот, содержание которых в желчи при введении его в дозе 300 мг/кг возрастало на 59% по сравнению с соответствующим показателем в контроле. Кроме того, указанный экстракт способствовал повышению содержания в желчи холестерина, содержание которого возрастало на 61% по сравнению с показателями в контроле.
Таблица 2
Влияние отвара и экстракта клевера лупинового на биохимический состав желчи у интактных крыс
Группы животных Общее кол-во желчи за 2-5 часы Желчные кислоты Билирубин Холестерин
мг/ 100 г
Контрольная (Н2О) 105б±52 4,бб 0,084 0,0б2
Опытная 1 (отвар клевера лупинового) 1380±б7* б,0б 0,112 0,10б
Контрольная (Н2О) Опытная 2 (экстракт клевера лупино-вого): 9бб±40 4,38 0,150 0,0б0
100 мг/кг 1350±б5* 5,03 0,147 0,097
300 мг/кг 1236±52* б,98 0,177 0,097
При токсическом повреждении печени лабораторных животных, вызванном введением СС14, отмечалось резкое угнетение желчевыделительной и холатообразовательной функции печени: снижалась интенсивность секреции желчи, подавлялся синтез и выделение с желчью желчных кислот, билирубина и холестерина (табл. 3, 4). Как следует из приведенных таблиц, курсовое введение экстракта клевера
лупинового в экспериментально-терапевтической дозе 300 мг/кг сопровождалось повышением скорости секреции желчи через 7 суток от начала эксперимента на 36-57% по сравнению с показателями у животных контрольной группы. Наряду с этим суммарное содержание желчных кислот в желчи возрастало через 7, 14 и 21 сутки на 30, 94 и 39% соответственно. Кроме того, применение экстракта клевера стимулировало выведение холестерина и в значительной степени билирубина с желчью.
В дополнительной серии экспериментов определяли острую токсичность отвара клевера лупинового на белых крысах обоего пола с массой 160 ±10 г при однократном внутрижелудочном введении; наблюдение за общим состоянием и поведением животных осуществляли в течение 14 дней. Установлено, что введение отвара в максимально возможном вводимом объеме не сопровождалось интоксикацией и гибелью крыс в течение всего периода наблюдения. Общее состояние и поведенческие реакции у крыс данной группы практически не отличались от таковых у крыс контрольной группы.
Таблица 3
Влияние экстракта клевера лупинового на скорость секреции желчи у белых крыс при токсическом гепатите
Группы животных Скорость секреции желчи в течение 4 часов, мг/ мин на 100 г
1-й час 2-й час 3-й час 4-й час
Интактная 5,4±0,3 5,2±0,4 5,4±0,2 4,7±0,1
7 сутки:
Контрольная (СС14 + Н2О) 3,8±0,3 4,2±0,2 4,1 ±0,3 3,5±0,2
Опытная (СС14 + экстракт клевера
лупинового) 5,2±0,5* 6,1±0,6* 5,3±0,4 5,5±0,5*
14 сутки:
Контрольная (СС14 + Н2О) 4,6±0,1 4,6±0,3 4,1 ±0,5 4,4±0,4
Опытная (СС14 +экстракт клевера
лупинового) 4,7±0,4 6,1±0,5* 5,9±0,1* 4,5±0,3
21 сутки:
Контрольная (СС14 + Н2О) 4,4±0,3 5,3±0,1 5,1±0,1 5,0±0,2
Опытная (СС14 +экстракт клевера
лупинового) 6,2±0,5* 7,0±0,6* 6,9±0,3* 6,1±0,3*
Таблица 4
Влияние экстракта клевера лупинового на общее количество и биохимический состав желчи у белых у крыс при токсическом гепатите
Группы животных Общее кол-во желчи за 1-4 часы Желчные кислоты Билирубин Холестерин
мг/ 100 г
Интактная 1242+78 8,08 0,096 0,106
7 сутки:
Контрольная (СС14 + Н2О) 936+51 6,82 0,068 0,065
Опытная (СС14 +экстракт клеве- 1326+108* 8,88 0,142 0,111
ра лупинового)
14 сутки:
Контрольная (СС14 + Н2О) 1062+32 4,56 0,084 0,096
Опытная (СС14 +экстракт клеве-
ра лупинового) 1272±98* 8,85 0,094 0,105
21 сутки:
Контрольная (СС14 + Н2О) 1188+61 5,79 0,098 0,094
Опытная (СС14 +экстракт клеве-
ра лупинового) 1572±57* 8,06 0,109 0,128
Острую токсичность экстракта клевера лупинового определяли на беспородных белых мышах обоего пола с массой 20-23 г при внутрибрюшинном введении. DL50 определяли по методу Кербера в диапазоне доз с интервалом 250 мг/кг. Установлено, что DL50 экстракта клевера лупинового составляет 2500 ± 176 мг/кг. Полученные результаты позволяют отнести клевер лупиновый к группе практически нетоксичных веществ по действующей классификации [9].
Заключение
Таким образом, отвар и сухой экстракт клевера лупинового обладают желчегонной активностью и гепатозащитным действием, что обусловлено содержанием в нем различных классов биологически активных веществ, для которых характерны свойства стимуляции холереза [2]. Природные вещества различных классов, являясь высокоактивными соединениями, оказывают непосредственное влияние на гепатоциты и опосредованное - на гладкомышечный элемент желчных путей и сосудистую систему, тем самым предупреждают формирование литогенной желчи, обеспечивают повышение функциональных возможностей гепатобилиарной системы.
Литература
1. Баторова С.М., Яковлев Г.П., Николаев С.М., Самбуева З.Г. Растения тибетской медицины: опыт фармакогностического исследования. - Новосибирск, 1989. - 159 с.
2. Биологически активные вещества растительного происхождения. - М., 2001-2002. Т. 1. 350 с.; Т. 2. 764 с.; Т. 3. 216 с.
3. Виноградова Т.А., Гажев В.Н. Практическая фитотерапия. М., 2001. - 640 с.
4. Государственная фармакопея СССР XI изд. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - М., 1990. Вып. 2. С. 238.
5. Дашиев Д.Б. «Чжуд-ши»: канон тибетской медицины. - М., 2001. - 766 с.
6. Корсун В.Ф., Николаев С.М., Даргаева Т.Д. и др. Лекарственные растения в гепатологии. - М., 2005. - 274 с.
7. Николаев С.М., Дашиев Д.Б., Асеева Т.А. Тибетская традиция врачевания и перспективы использования ее опыта в современных условиях // Традиционная медицина: Восток и Запад. 2006. № 2. - С. 15-22.
8. Полная энциклопедия народной медицины. - СПб., 2002. - 639 с.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Департамент контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств. Научный центр экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. Фармакологический комитет МЗ РФ. - М., 2000.
Занданов Александр Октябрьевич - кандидат медицинских наук, доцент, декан медицинского факультета Бурятского государственного университета. Улан-Удэ, ул. Октябрьская, 31. Тел. 44-55-03.
Николаев Сергей Матвеевич - доктор медицинских наук, профессор кафедры клинической фармакологии и фитотерапии БГУ, заведующий лабораторией экспериментальной фармакологии ИОЭБ СО РАН. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, тел. (3012)433463. E-mail: smnikolaev@mail.ru
Самбуева Зинаида Гомбожаповна - кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, тел. (3012)43-37-13.
Лемза Сергей Васильевич - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ИОЭБ СО РАН. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, тел. (3012)43-37-13.
Ажунова Татьяна Александровна - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник ИОЭБ СО РАН. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, тел. (3012)43-37-13. E-mail: azhunova@biol.bscnet.ru.
Zandanov Alexander Oktyabrievich - cand. of medical sci., assosiate, dean of medical faculty of Buryat State University. Ulan-Ude, Oktyabr’skaya str., 31, tel. 44-55-03.
Nikolaev Sergey Matveevich - dr of medical sci., professor, head of laboratory of experimental pharmacology, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6, ph. (3012) 43-37-13, e-mail: smnikolaev@ mail.ru.
Sambuyeva Zinaida Gombozhapovna - cand. of biol. sci., senior scientist of Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6, Institute of General and Experimental Biology, ph. (3012) 43-37-13.
Lemza Sergey Vasilievich - cand. of biol. sci., senior scientist of Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6, ph. (3012) 43-37-13.
Azhunova Tatyana Alexandrovna - dr of biol. sci., leading scientist of Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6, ph. (3012) 43-37-13, e-mail: azhunova@biol.bscnet.ru.
