CC BY
35
HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro Ha^0Ha№H0ro ymBepcurery BeTepHHapHOi MegnuUHH Ta 6i0TexH0H0riH iMeHi C.3. f^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet6733
ISSN 2413-5550 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 577.574:591.5:504:597
Вплив йошв плюмбуму на лейкоцити кров1 коропа лускатого
М.Я. Онисковець, 1.Ю. Вахуткевич, О.Б. Скаб onyskovets_m@mail.ru
Львiвський нащональний аграрний ушверситет, вул. Володимира Великого, 1, Дубляни, Львiвська обл., 80381, Украша
Риби набагато uymnmrni, шж вищi хребетт, до важких Memanie, як здтснюють суттевий вплив на iмунологiчнi реак-цй оргатзму. Головна роль в iMyHHiü вiдповiдi оргатзму належить iмунокомпemeнmним клтинам, до яких вiдносяmь, на-самперед, лiмфоциmи. Вивчення лeйкоциmiв кровi дае можяивкть оцтити загальний фiзiологiчний стан оргатзму його cmiümicmb, здаттсть адаптуватись до умов середовища i, зокрема, до токсичних речовин, що забруднюють водойми. Тому метою роботи було до^дити змти лeйкоциmiв коропа лускатого за умов короткотривалоi дй Плюмбуму. Нeобхiднi кон-центрацп йошв Плюмбуму створювали шляхом внесення у водне середовище концентрацш 0,5 та 5 мг/л Pb(CH3COO)2. Риб з йонами Плюмбуму витримували 96 годин. Кров забирали за допомогою пaсmeрiвськоi птетки з серця риб. Шльтсть лей-коциmiв визначали шляхом тдрахунку в кaмeрi Горяева. Вiдносний вмкт лeйкоциmiв визначали на циmологiчних препаратах з кровi риб. Статистичне опрацювання рeзульmamiв проводили за допомогою програми Statistik з використанням t— коефщенту Ст 'юдента. У рeзульmami проведених до^джень було встановлено вiрогiднe збшьшення загальног кiлькосmi лeйкоциmiв на 36 — 52% (Р < 0,001) та зсув лейкоцитарног формули кровi лiворуч за рахунок збшьшення вмiсmу гiсmiоциmiв у риб до^дних груп. Отримаш результати свiдчamь про напружетсть нeспeцифiчноi ланки мунног системи риб за умов впливу йошв Плюмбуму.
KrnKoei слова: короп лускатий, Плюмбум, лейкоцити, iмуннa система, важю метали.
Рибы гораздо чувствительнее, чем высшие позвоночные, к тяжелым металлам, которые оказывают существенное влияние на иммунологические реакции организма. Главная роль в иммунном ответе организма принадлежит иммунокомпе-тентных клеток, к которым относят, прежде всего, лимфоциты. Изучение лейкоцитов крови дает возможность оценить общий физиологическое состояние организма его устойчивость, способность адаптироваться к условиям среды и, в частности, к токсических веществ, загрязняющих водоемы. Поэтому целью работы было исследовать изменения лейкоцитов карпа чешуйчатого в условиях кратковременной действия свинца. Необходимые концентрации ионов свинца создавали путем внесения в водную среду концентраций 0,5 и 5 мг/л Pb(CH3COO)2. Рыб с ионами свинца выдерживали 96 часов. Кровь забирали с помощью пастеровской пипетки из сердца рыб. Количество лейкоцитов определяли путем подсчета в камере Горяева. Относительное содержание лейкоцитов определяли на цитологических препаратах из крови рыб. Статистическая обработка результатов проводили с помощью программы Statistik с использованием t— коэффициента Стьюдента. В результате проведенных исследований было установлено достоверное увеличение общего количества лейкоцитов на 36— 52% (Р < 0,001) и сдвиг лейкоцитарной формулы крови влево за счет увеличения содержания гистиоцитов у рыб исследовательских групп. Полученные результаты свидетельствуют о напряженности неспецифического звена иммунной системы рыб в условиях воздействия ионов свинца.
Ключевые слова: карп чешуйчатый, Свинец, лейкоциты, иммунная система, тяжелые металлы.
Citation:
Onyskovets, M.J., Vakhutkevych, I.J., Skab, O.B. (2016). Lead influence on blood leukocytes scaly carp. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 18, 2(67), 146-148.
Влияние ионов свинца на лейкоциты крови карпа чешуйчатого
М.Я. Онисковец, И.Ю. Вахуткевич, ОБ. Скаб onyskovets_m@mail.ru
Львовский национальный аграрный университет, ул. Владимира Великого, 1, г. Дубляны, Львовская обл., 80381, Украина
Lead influence on blood leukocytes scaly carp
M.J. Onyskovets, I.J. Vakhutkevych, O.B. Skab onyskovets_m@mail.ru
Lviv National Agrarian University, Volodymyr Velykyi Str., 1, Dubliany, Lviv, 80381, Ukraine
Fishes much more sensitive than higher vertebrates, heavy metals that have a significant effect on immunological reactions. The main role in the immune response of the body belongs to immune cells, which include primarily lymphocytes. The study of white blood cells makes it possible to assess the general physiological condition of the body its stability, ability to adapt to environmental conditions and in particular to toxic substances that pollute water bodies. The purpose of the work was to investigate changes in leukocyte carp flake under conditions of short-term action Lead. Required Lead concentrations of ions created by introducing into water concentrations of 0.5 and 5 mg/l Pb(CH3COO)2. Lead ions of fish kept 96 hours. Blood is taken using the Pasteur pipette with heart fish. The number of leukocytes was determined by counting in the Goryaev's chamber . The relative content of leukocytes determined in cytological specimens offish blood. Statistical analysis of the results was performed using Statistik using Student's t-factor. As a result of studies found a likely increase in the total number of white blood cells to 36 - 52% (P < 0,001) and shift leuko-cytic blood left by the increase of histiocytes in fish research groups. The results indicate the tension level of non-specific immune system offish under the conditions of influence Lead ions.
Key words: scaly carp, lead, leukocytes, the immune system, heavy metals.
Вступ
1мунна система риб, яка здшснюе захист внутрш-нього середовища ввд вторгнення чужорщних антиге-шв, е чутливим показником стану як самого оргашз-му, так i середовища юнування (Zabotkina and Lapiro-va, 2003). Вщомо, що риби набагато чутливш^ шж вищi хребетш, до важких металiв, яш здшснюють суттевий вплив на iмунологiчнi реакцп оргашзму. Вивчення лейкоципв кровi дае можливють ощнити загальний фiзiологiчний стан оргашзму (Drohomyretska and Mazepa, 2009), його стшшсть, здатшсть адаптуватись до умов середовища i, зокре-ма, до токсичних речовин, що забруднюють водойми (Marth et al., 2001; Kondrateva and Kitashova, 2002). Тому метою роботи було дослщити змши лейкоципв коропа лускатого за умов короткотривало! дд Плюм-буму.
MaTepia™ i методи дослвджень
Дослщи проведено у акварiумах об'емом 200 л, в яш розмщували по 5 особин. Здшснювали постшну аерацш i пiдтримували температурний режим води на рiвнi 18-20 °С. Перед дослiдом тварин адаптували до лабораторних умов протягом 3 дiб. Риб пвд час експе-рименту не годували.
Необхщш концентрацй' йонiв Плюмбуму у вах се-рiях дослiдiв створювались шляхом внесения у водне середовище концентрацш 0,5 та 5 мг/л, що вщповвдае 5 та 50 санггарно-ппешчним граничнодопустимим концентрацiям (ГДК) Pb(CH3COO)2 «х.ч.».
Риб у присутностi йонiв Плюмбуму витримували 96 годин. Контрольнi показники отримували вiд шд-дослвдних особин коропа лускатого, яш перебували у водному середовищi без додавання йошв Плюмбуму. Кров забирали за допомогою пастерiвськоl пiпетки з серця риб, з використанням як антикоагулянту розчи-ну гепарину з розрахунку 10 од/мл кров^
К1льк1сть лейкоцитiв кровi визначали шляхом шд-рахунку в камерi Горяева. Вiдносний вмiст лейкоципв
визначали на цитологiчних препаратах з кровi риб згiдно до ввдповщних методик.
Статистичне опрадювапня результатiв проводили за допомогою програми Statistik з використанням ^коефщенту Ст'юдента.
Результати та Тх обговорення
Аналiз даних лггератури сввдчить про те, що проблема впливу сполук важких металiв на iмунну систему риб потребуе подальших дослвджень. Ведомо, що змши з боку iмунiтету риб за впливу важких металiв проявляються швидше i тривають довше, н1ж у ссав-цiв (Kondrateva and Kitashova, 2002). Головна роль в iмуннiй вщповщ органiзму належить iмунокомпетен-тним клiтинам, до яких вщносять, насамперед, лiмфо-цити, а також макрофаги/моноцити i нейтрофiли (Bols et al., 2001).
У результал проведених дослщжень було встано-влено, що за умов впливу Плюмбуму у периферичнш кровi коропа вiдбуваеться збшьшення кiлькостi лей-коцитiв (P < 0,001) (табл.).
За умов впливу 5 ГДК Плюмбуму ввдзначено зрос-тання дослiджуваного показника на 36% i за умов 50 ГДК Плюмбуму - на 52%. Отримаш результати мож-на пояснити зростанням кiлькостi ушкоджених та мертвих клгган, як1 елiмiнуються лейкоцитами. У лейкоцитарнш формулi кровi Cyprinus carpio L. не спостершалось вiрогiдних змiн у шлькосп лiмфоцитiв, моноцитiв, еозинофiлiв.
Як видно з таблищ, вiдбуваеться вiрогiдне зни-ження кiлькостi сегментоядерних нейтрофшв. За умов впливу Плюмбуму у концентрацй' 0,5 мг/л у 2 рази, а за умов 5 мг/л - у 3,4 разу. Разом з тим компенсаторно зросла шльшсть юних форм лейкоципв (пстюципв) за умов ди уах використаних концентрацш Плюмбуму. Показано, що за умов концентрацй Плюмбуму, що ввдповщае 50 ГДК ввдбуваеться мак-симальне зростаиия кiлькостi пстюципв на 20 % (P < 0,001), у порiвияннi з контрольною групою.
Таблиця
Морфолопчний стан лейкоципв коропа лускатого за ди Плюмбуму, % __(M ± m; n = 5)__
Показник Контроль Концентрацш Плюмбуму (Pb2+)
0,5 мг/л (5 ГДК) 5 мг/л (50 ГДК)
Лейкоцити, 10 9 /л 16,59 ± 0,50 25,72 ± 0,34*** 34,92 ± 1,43***
Шмфоцити, % 68,5 ± 2,0 68,8 ± 1,36 67,6 ± 1,03
Моноцити, % 2,3 ± 1,13 1,4 ± 0,24 1,6 ± 0,24
Еозинофши, % 3,5 ± 0,58 2,6 ± 0,51 2,4 ± 0,51
Сегментоядерш нейтрофши, % 4,7 ± 0,93 2,4 ± 0,60* 1,4 ± 0,24**
Паличкоядерш нейтрофши, % - - -
Пстюцити, % 21,8 ± 0,98 24,8 ± 1,28* 27,0 ± 0,71***
Примтка. Рiзииця вiрогiдна поршняно з контролем: * - Р < 0,05; ** - Р < 0,01; *** - Р < 0,001.
Висновки
Таким чином, за ди тдвищених концентрацш Плюмбуму було встановлено вiрогiдне збшьшення загально! шлькосп лейкоцитiв на 36-52 % (P < 0,001) та зсув лейкоцитарно! формули кровi лiворуч за раху-нок збiльшення вмiсту гiстiоцитiв у риб дослвдних груп. Отриманi результати сввдчать про напруженiсть неспецифiчноl ланки ¡мунно! системи риб за умов впливу йошв Плюмбуму.
Перспективи подальших дослгджень. Наступш до-сладження будуть спрямованi на вивчення функцюна-льного стану лейкоципв кровi коропа лускатого за умов дп пiдвищених концентрацш Плюмбуму, а зок-рема пролiферативноl активностi лiмфоцитiв.
Бiблiогpaфiчнi посилання
Drohomyretska, I.Z., Mazepa, M.A. (2009). Vplyv ioniv vazhkykh metaliv na limfotsyty Cyprinus carpio L. Pytannia bioindykatsii ta ekolohii. Zaporizhzhia: ZNU, 14(2), 182-192 (in Ukrainian).
Drohomyretska, I.Z., Mazepa, M.A. (2009). Osoblyvosti leikotsytarnoi formuly krovi ta krovotvornykh orhaniv Cyprinus carpio L. za dii toksychnykh kontsentratsii ioniv nikeliu. Uch. zap. Tavr. nats. un.-ta im. V.I. Vernadskogo. Seriya Biologiya. 22(1), 9-15 (in Ukrainian).
Zabotkina, E.A., Lapirova, T.B. (2003). Vliyanie tya-zhelyih metallov na immunofiziologicheskiy status ryib. Uspehi sovrem. biologii. 123(4), 401-408 (in Russian).
Kondrateva, I.A., Kitashova A.A. (2002). Sovremennyie predstavleniya ob imunnoy sisteme ryib. Funktsion-irovanie i regulyatsiya immunnoy sistemyi ryib. Im-munologiya. 2, 97-101 (in Russian).
Bols, N.C., Brubacher, J.L., Ganassin, R.C. (2001). Eco-toxicology and innante immunity in fish. De-velompental and Comparative Immunology. 25, 853873.
Marth, E., Jelovcan, S., Kleinhappl, B. (2001). The effect of heavy metals on the immune system at low concentrations. International Journal of Occupational Medicine and Environmental Health. 14(4), 375-386.
Cmammn nadiümna do peda^ii 3.09.2016
