Влияние иммуносупрессии индуцированной циклофосфамидом на развитие послеоперационных брюшинных спаек Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА И БИОЛОГИЯ

УДК: 617.55-089.168.1-06-007.274-084:615.37-092.9 © И.Ф. Суфияров, Р.З. Латыпов, |С.В. Сибиряк|, Р.М. Шафиков, 2009

И.Ф. Суфияров, Р.З. Латыпов, С.В. Сибиряк, Р.М. Шафиков

ВЛИЯНИЕ ИММУНОСУПРЕССИИ ИНДУЦИРОВАННОИ ЦИКЛОФОСФАМИДОМ НА РАЗВИТИЕ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫХ

БРЮШИННЫХ СПАЕК

ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», г. Уфа

Проведено иммунологическое обоснование к применению циклофосфамида для профилактики спаечной болезни брюшины на 60 кроликах породы шишшилла: 30- опытной, 30- контрольной групп. Установлено, что послеоперационные брюшинные спайки развились только у 6(20%) животных опытной группы и у 30(100%) контрольной группы. Данные результаты позволяют судить о существенном снижении развития брюшинных сращений при применении циклофосфамида.

Ключевые слова: спаечная болезнь брюшины, циклофосфамид, профилактика.

I.F. Sufiyarov, R.Z. Latipov, |S.V. Sibiryak|, R.M. Shafikov

INFLUENCE OF IMMUNOSUPPRESSION INDUCED BY CYCLOPHOSPHAMID ON DEVELOPMENT POSTOPERATIVE ADHESION DESEASES

The immunological substantiation to application cyclophosphamid for preventive adhesion diseases on 60 rabbits of breed Chinshilla: 30 control groups. It is established, that postoperative adhesion has developed only at 6(20%) animal skilled groups whereas at control group 30(100%). Yielded results allow to judge essential decrease in development adhesion diseases at application cyclophosphamid.

Kew words: adhesion diseases, cyclophosphamid, preventive.

В последние десятилетия отмечается повышенный рост исследований в области профилактики послеоперационных спаек. Как правило, связано это с развитием тяжелых осложнений спаечной болезни брюшины, неудовлетворительными результатами первичной профилактики, ростом послеоперационной летальности. Поэтому поиск эффективных методов и лекарственных препаратов для профилактики развития брюшинных спаек остается актуальной задачей абдоминальной хирургии.

Одним из факторов развития патологического спайкообразования является присоединение аутоиммунного и аллергического компонентов в процессе регенерации брюшины. При формировании внутрибрюшинных спаек происходит сложный процесс, который включает миграцию и пролиферацию различных клеточных структур, включая иммуно-компетентные и мезотелиальные клетки и фибробласты, синтез внеклеточного матрикса для формирования фиброзных спаек. После операции спаечный процесс подвергается инволюции, но в 2-3% происходит патологическая пролиферация соединительной ткани, и брюшинные спайки становятся существенной проблемой организма.

Учитывая данные литературы, нам представляется, что одним из перспективных направлений для профилактики спаечной болезни является применение имунносупрес-сивных средств при высоком риске спайкооб-разования. В этой связи актуальным является создание управляемого временного иммунодефицита, позволяющего снизить степень ги-перэргической реакции иммунитета на операционную травму.

Целью нашего исследования явилось изучение развития послеоперационных спаек у экспериментальных животных на фоне им-мунносупрессии клеточного звена, вызванного циклофосфамидом.

Циклофосфамид - цитостатический препарат алкилирующего типа, производное бисхлорэтиламина. Циклофосфамид в экспериментальной медицине используется для создания модели вторичного иммунодефицита у животных. Обладает выраженным имму-носупрессивным действием с угнетением в малых дозах Т - субпопуляции лимфоцитов, в больших дозах преимущественно В - субпопуляции лимфоцитов. После однократного введения возникает выраженная иммунодепрессия в течение 5 - 7 дней. ЛД50 циклофосфамида 380 мг\кг. Лейкопения возникает у кроликов при дозе 40 мг\кг.

Для реализации указанной цели нами были поставлены следующие задачи:

- В эксперименте на животных разработать стандартную модель развития послеоперационных спаек и проследить процесс их развития в разные сроки после операции (контрольная группа).

- Произвести профилактику послеоперационных спаек путем введения препарата циклофосфамида в брюшную полость в конце операции по стимулированию спаечного процесса и изучить его выраженность в разные сроки (основная группа).

- Изучить иммунный статус животных контрольной и основной групп на 7, 14-е сутки после операции.

- На основе полученных результатов обосновать возможность применения имму-носупрессивной терапии для предупреждения развития перитонеальных спаек при высоком риске спайкообразования.

Материал и методы

Эксперименты проведены на 60 кроли-ках-самцах (2 серии по 30 животных) породы шиншилла весом 3-3,5 кг. Оперативные вмешательства проводились с соблюдением всех правил экспериментов, асептики и антисептики под общим обезболиванием. Всем животных производилась стандартная операция по стимулированию спаечного процесса. После лапаротомии производилось десерозирование париетальной брюшины боковых стенок до капиллярного кровотечения. Дополнительно производилось десерозирование дистального участка подвздошной кишки на протяжении 3,0 см от илеоцекального угла до появления «кровавой росы». В основной группе животных в конце операции брюшную полость орошали раствором циклофосфамида 100 мг (30 мг\кг). Переднюю брюшную стенку послойно зашивали непрерывными швами кетгутом. Животные выводились из эксперимента на 7, 14-е сутки путем мгновенной декапи-тацией под эфирным наркозом. Подсчет спаек в брюшной полости проводили на 7, 14-е сутки после операции по методике, предложенной А.А.Воробьевым, А.Г.Бебуришвили [1], учитывая их частоту, тип, распространение.

Производили определение иммунного статуса кроликов контрольной и основной групп на 7, 14-е сутки путем определения общего количества лейкоцитов, развернутой лейкоформулы, поглотительной активности фагоцитов, интенсивности кислородзависимо-го метаболизма (НСТ - тест) в периферической крови. Результаты исследования обрабо-

таны статистически (рассчитаны средние величины, критерий Стьюдента).

Обсуждение результатов

Результаты макроскопической оценки состояния брюшной полости.

У всех 30 животных контрольной группы в брюшной полости спаечный процесс, определяются как висцеропариетальные, так и висцеровисцеральные спайки, причем у 4 животных висцеропариетальные спайки были представлены спаечным конгломератом кишечных петель.

У животных опытной группы картина была следующей. У 24 кроликов спаечного процесса в брюшной полости не определялось. У 6 животных определялись нежнейшие, тончайшие, единичные висцеропариетальные спайки между петлей тонкой кишки и десеро-зированной париетальной брюшиной.

Результаты оценки спаечного процесса.

В основной группе животных имеется наличие послеоперационных спаек в 6 случаях, что достоверно отличается от контрольной группы - 30 (р<0.001). Средние значения плотности послеоперационных спаек представлены в табл. 1.

Таблица 1.

Частота образования, распространенность, тип и плотность

послеоперационных спаек (М±т, п=30)

Группа Частота и характер спаечного процесса

число случаев распро- странен- ность тип плотность сумма баллов

1-я контроль (30) 30 3,2±0,3 2,5±0,2 2,2±0,1 7,9±0,6

2-я опытная (30) 6 1,0±0,1 1,0±0,1 0,5±0,2 2,5±0,4

Таблица 2.

Динамика изменений лейкоформулы на 7, 14-е сутки после

Из табл. 2 следует, что на 7-е сутки у животных опытной группы происходит достоверное снижение (иммуносупрессия) лейкоцитов периферической красной крови с их увеличением на 14-е сутки. Тогда как у животных контрольной группы происходит увеличение лейкоцитов периферической красной крови на 7-е сутки с их последующим снижением на 14-е сутки. Эти данные свидетельствуют о достоверном иммуносупрессорном действии циклофосфана у животных опытной группы.

операции с применением циклофосфана —30, р< 0,05)

Вид Группа До операции 7-е сутки 14-е сутки

Лейкоциты, 10*9/л Контроль 6,5 ±0,3 7,5±0,6* 3,5±0,4

Опыт 4,8±0,4 7,6±0,2

Нейтрофилы Контроль 1,2±0,06 2,1±0,1 0,8±0,04

Опыт 1,0±0,2* 1,4±0,1

Лимфоциты Контроль 4,9±0,2 5,0±0,2* 2,6±0,1

Опыт 3,8±0,04 5,9±0,5

Таблица 3.

НСТ-тест (N=30, р< 0,05) ___________

Вид Группа До операции 7-е сутки 14-е сутки

НСТ спонтанный Контроль 0,05±0,004 0,08±0,004

ИА Опыт 0,07±0,01 0,1±0,01 0,05±0,003

НСТ спонтанный, Контроль 3,6±0,2 6±0,5

% Активации Опыт 4±0,33 7,6±0,6 3±0,1

Динамика фагоцитоза (N=30, р< 0,05). Таблица 4.

Вид Группа До операции 7-е сутки 14-е сутки

Фагоцитарное Контроль 45,9±3 53±0,6 47,6±3,4

число Опыт 61±0,7 63±2

Фагоцитарный Контроль 4,4±0,2 3,2±0,1 4,0±0,2

индекс Опыт 4,9±0,1 5,1±0,07

В контрольной группе животных развивается значительный лейкоцитоз на 7-е сутки после операции преимущественно за счет гранулоцитов, при этом показатели лимфоцитов остаются на дооперационном уровне. Пик роста нейтрофилов идет за счет появления юных форм клеток в первые 7 суток после операции. В начале процесса нейтрофилы активируются (о чем свидетельствует повышение их фагоцитарной активности), но в целом уровень фагоцитоза резко падает, так как много юных форм клеток. На 14-е сутки содержание лейкоцитов в периферической крови снижается, развивается относительная лейкопения. Отмечается резкое снижение как нейтрофилов, так и лимфоцитов на фоне снижения фагоцитарной активности нейтрофилов до операционного (исходного) уровня, что является благоприятным симптомом течения воспалительного процесса. О формировании спаечного процесса косвенно можно судить по резкому усилению физиологической активности нейтрофилов (резкий рост процента активных клеток НСТ - теста). Это подтверждается клиническим заживлением послеоперационной раны, формированием спаечного процесса в брюшной полости.

При применении циклофосфана определяется подавление лейкоцитов всех типов, преимущественно лимфоцитов, угнетение нейтрофилов незначительное. В опытной группе животных развивается выраженная лейкопения на 7-е сутки после операции. Максимальная лейкопения связана с тем, что

в первые сутки идет выброс зрелых клеток из депо, частично компенсирующие иммунодефицит. Параллельно с указанными изменениями происходит усиление фагоцитарной активности нейтрофилов, по НСТ - тесту -резкий рост числа активированных нейтрофи-лов на 7-е сутки.

На 14-е сутки в периферической крови животных опытной группы наблюдается лейкоцитоз за счет повышения общего количества как нейтрофилов, так и лимфоцитов. Связано это с выведением циклофосфана из организма и последующей компенсаторной реакцией иммунной системы на воспалительный процесс. Отмечается резкое снижение числа активных нейтрофилов в процентном отношении и по индексу активации НСТ - теста. Поскольку изучение фагоцитоза проводилось на интактных животных, а не на фоне инфекции, отсутствие активации «дыхательного взрыва» является вполне естественным.

Заключение

В контрольной группе происходит вышеописанная патологическая гиперэргическая реакция в ответ на операционную травму, достоверно подтвержденная лабораторными данными периферической красной крови. В опытной группе достоверные лабораторные данные свидетельствуют о снижении гиперэр-гической реакции иммунной системы макроорганизма. Увеличение фагоцитарной активности сегментоядерных нейтрофилов (качественные показатели) при относительно меньшем увеличении их количества по сравнению с контрольной группой объясняется способностью циклофосфана увеличивать механизмы перекисного окисление липидов. Проще говоря, увеличивается качественная активность сегментоядерных нейтрофилов, их «специализация», количество переходит в качество.

Таким образом, применяемый цикло-фосфан даже в малых дозах при однократном введении в брюшную полость в условиях эксперимента на животных достоверно и эффективно снижает образование послеоперационных спаек (в 5 раз по сравнению с контролем).

Сведения об авторах статьи Суфияров И.Ф. - ассистент кафедры хирургических болезней, к.м.н.,

Латыпов Р.З. - профессор кафедры госпитальной хирургии, д.м.н.,

Сибиряк С.В.| - профессор кафедры фармакологии, д.м.н.

Шафиков Р.М. - соискатель кафедры госпитальной хирургии, республика Башкортостан, Салаватский р-н, пос. Янгантау, ул. Центральная д.5 кв.2. Тел.: 8-927-637-48-96. E-mail: [email protected]

ЛИТЕРАТУРА

1. Воробьев, А.А. Хирургическая анатомия оперированного живота и лапароскопическая хирургия спаек. / А.А.Воробьев, А.Г.Бебуришвили - Волгоград: Издатель, 2001.-240

2. Плечев, В.В. Спаечная болезнь брюшины / В.В.Плечев, В.М.Тимербулатов, Р.З.Латыпов -Уфа: Башкортостан, 1999. - 350 с.

3. Сакаева, Д.Н. Влияние эритромицина на иммунитет при иммунодефиците / Д.Н.Сакаева, Д.Н.Лазарева //Экспериментальная и клиническая фармакология.-1999.-Т. 62, № 1.- С.50-52.

4. Смирнов, О.Н. Экспериментальное обоснование миелопротекторного действия мексидола / О.Н.Смирнов, В.А.Инчина, А.В.Зорькина //Российский онкологический журнал.-2000.-№5.-С.25-27.

5. Holmdahl, L., Risberg, B., Beck, D.E., Bums, J.W., Chegini, N., di Zerega, G.S., and Ellis, H. Adhesions: pathogenesis and prevention-panel discussion and summary. European Journal of Surgery Supplement -1997. -№577, -P. 56-62.

УДК 615.214. 015.15. 076.9: 577.31] - 092.9 © О.Ю. Годоражи, Л. А. Валеева, Э.М. Нургалина, 2009

О.Ю. Годоражи, Л.А. Валеева, Э.М. Нургалина ВЛИЯНИЕ Н2-АНТАГОНИСТА ФАМОТИДИНА НА СУТОЧНЫЕ БИОРИТМЫ ПАРАМЕТРОВ ИНДИВИДУАЛЬНОГО ПОВЕДЕНИЯ

ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», г. Уфа

Статья посвящена изучению влияния Н2-антагониста фамотидина на суточные биоритмы параметров индивидуального поведения крыс. Данные получены при введении препарата в дозе 40 мг/кг в течение 10 дней и дальнейшем тестировании животных по методике «открытое поле».

Ключевые слова: суточные биоритмы, головной мозг, гистаминовые рецепторы, фамотидин.

O.Yu. Godorazhi, L.A. Valeyeva, E.M. Nurgalina THE INFLUENCE OF H2-RECEPTOR ANTAGONIST FAMOTIDINE ON BIORHYTHMS OF INDIVIDUAL RHYTHM BEHAVIOR

The paper presents results of the study of H2-receptor antagonist famotidine influence on biorhythm patterns of individual rat behavior. The results were obtained by administrating an agent in a dose of 24 mg/kg for 10 days and testing animals by the method of «open field».

Key words: daily biorhythms, brain, histamine receptors, famotidine.

Важную роль в жизнедеятельности организмов играют биоритмы. Циркадианные колебания зависят не только от фотопериодизма, но и определяются внутренними механизмами управления, такими как супрахиаз-матические ядра гипоталамуса (СХЯ), эпифиз, гиппокамп, базальные ганглии. В зависимости от характера участия в формировании психоэмоциональных реакций выделяют десинхронизирующие (гиппокамп) и синхронизирующие (СХЯ, стриатум) структуры в механизмах управления биоритмами. Так, у животных с разрушенным гиппокампом уменьшалась тревожность, возрастала стабильность поведенческих ритмов [1]. Для многих лекарственных препаратов, влияющих на центральную нервную систему (ЦНС), установлено изменение чувствительности к ним в течение суток. В механизмах действия психотропных средств, как и в патогенезе некоторых заболеваний головного мозга (ГМ), участвует гистаминер-гическая система. Гистамин влияет на целе-

вые нейроны через взаимодействие с 4 типами рецепторов [3]. Известно, что Н2-рецепторы локализуются в базальных ганглиях, гиппокампе, которые имеют значение в управлении биоритмами [4]. Многие антидепрессанты, нейролептики являются блокаторами Н2-рецепторов в нейрональной ткани [3]. По литературным данным, антагонист Н2-рецепторов фамотидин может улучшать состояние больных шизофренией, рефрактерной к типичным антипсихотическим препаратам, влияя на негативные симптомы заболевания, значит, данные рецепторы играют роль в патофизиологии шизофрении [6]. Другие авторы отмечали при введении крысам фамотидина снижение эффекта дофаминомиметиков, что также может вносить вклад в патогенез шизофрении, уменьшая позитивные симптомы [5]. Н2-блокаторы усиливают консолидацию памяти, секрецию вазопрессина, адренокор-тикотропного гормона, пролактина [3,7]. Од-