CC BY
30
БИОЛОГИЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
УДК б17.55-089.1б8.1-0б-007.274-084:б15.37]-092. 9
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЦИКЛОФОСФАМИДА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫХ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ СПАЕК
И. Ф. Суфияров, Р. М. Шафиков, М. Т. Юлдашев
Спаечная болезнь брюшины (СББ) все еще остается актуальной проблемой абдоминальной хирургии. В основе проявления заболевания лежит патологическое развитие спаек в органах брюшной полости после перенесенных ранее операций и воспалительных заболеваний. Несмотря на совершенствование оперативной техники, применение малоинвазивных технологий, современной лекарственной терапии число больных с проявлением спаечной болезни брюшины не уменьшается, а наоборот, увеличивается пропорционально количеству оперативных вмешательств [1].
Основой патогенеза избыточного спай-кообразования считается патологическая гиперэргическая реакция соединительной ткани на перитонеальную травму и воспаление, связанное с ней [2]. При формировании внутрибрюшинных спаек происходит сложный процесс, который включает миграцию и пролиферацию различных клеточных структур, включая иммунокомпе-тентные клетки, мезотелиальные клетки и фибробласты, синтез внеклеточного мат-рикса для образования фиброзных спаек [1, 5]. В этой связи актуальным является создание управляемого временного иммуно-
дефицита, позволяющего снизить степень гиперэргической реакции соединительной ткани на операционную травму.
В научной литературе широко обсуждается применение цитостатического препарата «Циклофосфамид» в экспериментальной медицине для создания модели вторичного иммунодефицита. Циклофосфамид в малых дозах позволяет добиться выраженной имму-носупрессии Т-звена клеточного иммунитета на 5-7-й день после однократного введения [3, 4].
Целью нашего исследования явилось изучение возможности подавления гипер-эргической реакции соединительной ткани путем использования иммуносупрессора циклофосфамида.
Для реализации указанной цели нами были поставлены следующие задачи:
1. В эксперименте на животных разработать стандартную модель развития послеоперационных брюшинных спаек и проследить на гистологических препаратах процесс развития послеоперационных сращений в разные сроки после операции (контрольная группа).
2. Провести профилактику послеоперационных спаек путем введения препара-
та «Циклофосфамид» в брюшную полость в конце операции и изучить на гистологических препаратах процесс заживления ран и выраженность спаечного процесса в разные сроки (основная группа).
Материал и методы
Экспериментальная часть исследования выполнена на кафедре оперативной хирургии и хирургической анатомии Башкирского государственного медицинского университета под руководством зав. кафедрой профессора, д-ра мед. наук М. Т. Юлдашева.
Для выполнения поставленных задач нами проведены две серии экспериментов на кроликах породы шиншилла весом 3-3,5 кг. Оперативные вмешательства проводились с соблюдением всех правил экспериментов, асептики и антисептики под общим обезболиванием.
I серия экспериментов (контрольная группа) осуществлена на 30 кроликах. Разрабатывалась оптимальная модель развития брюшинных спаек у животных. Производилось десерозирование париетальной брюшины боковых стенок до капиллярного кровотечения. Дополнительно делалось десе-розирование дистального участка подвздошной кишки на протяжении 3,0 см от илеоце-кального угла до появления «кровавой росы». Животные выводились из эксперимента на 7, 14, 21-е сутки путем мгновенной декапита-ции под эфирным наркозом.
II серия экспериментов (основная группа) осуществлена на 30 кроликах. Всем животным производили операцию для индуцирования спаечного процесса в брюшной полости. Обезболивание - эфирный наркоз. Брюшную полость вскрывали срединным разрезом, выворачивали в сторону боковую стенку живота, обнажая париетальную брюшину. С обеих сторон производилось десеро-зирование париетальной брюшины боковых
стенок до капиллярного кровотечения. Дополнительно производилось десерозирова-ние дистального участка подвздошной кишки на протяжении 3,0 см от илеоцекального угла до появления «кровавой росы». Брюшную полость орошали раствором циклофосфамида 100 мг (30 мг/кг). Переднюю брюшную стенку послойно зашивали непрерывными швами кетгутом. На 7, 14, 21-е сутки эвтаназировали животных и проводили макроскопическое исследование, также брали образцы париетальной брюшины и спаек на гистологическое исследование.
Морфологические и гистохимические методы исследования осуществлены на кафедре гистологии Башкирского государственного медицинского университета.
Подсчет спаек в брюшной полости проводили на 7, 14, 21-е сутки после операции по методике, предложенной А. А. Воробьевым, А. Г. Бебуришвили [1], учитывая их частоту, тип, распространение.
Результаты исследования обработаны статистически (рассчитаны средние величины, критерий t Стьюдента).
Результаты и обсуждение
Результаты макроскопической оценки состояния органов брюшной полости. У всех 30 животных контрольной группы в брюшной полости обнаружен спаечный процесс, определяются как висцеро-париетальные, так и висцеро-висцеральные спайки, причем у 4 животных висцеро-париетальные спайки были представлены спаечным конгломератом кишечных петель.
У животных опытной группы картина была следующей. У 24 кроликов спаечного процесса в брюшной полости не определялось. У 6 животных определялись нежные, тонкие, единичные висцеро-париетальные спайки между петлей тонкой кишки и десе-розированной париетальной брюшиной.
У контрольной группы животных на 7-е сутки после операции париетальная брюшина (ПБ) характеризовалась значительной отечностью, пастозностью и синюшностью. Участки десерозированной брюшины были синюшно-багрового цвета с точечными кровоизлияниями. В большинстве случаев участки петель кишечника и сальника были рыхло припаяны фибринозными спайками к области раны ПБ. На 14-е сутки после операции отмечается уменьшение количества и протяженность припаянных участков петель кишечника и сальника. Морфологические сращения представляют собой скопления нежных, слабо извивающихся коллагеновых и эластических волокон с высоким содержанием клеточных элементов (рис. 1).
Рис. 1. Развитие грануляционной ткани спайки брюшины контрольной группы животных на 14-е сутки после эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином.
Микрофото. Ок. 10, об. 20
При этом разделение припаянных участков от поверхности раны затруднено. На 21-е сутки значительно уменьшились отек и гиперемия вокруг раны ПБ. В гистологических препаратах спайки представлены соединительной тканью с большим содержанием пучков коллагеновых и эластических волокон. Соединительная ткань хорошо вас-куляризирована, что обусловлено наличием множества сосудов различного калибра. В собственной пластинке слизистой оболочки
выраженная лимфоцитарная инфильтрация. Подпаянные петли кишечника и сальника представлены сформированными тяжисты-ми плотными спайками.
В основной группе животных на 7-е сутки после проведенного эксперимента определяется частичное восстановление как висцеральной, так и париетальной брюшины (рис. 2).
Рис. 2. Частичное восстановление однослойного плоского эпителия-мезотелия брюшины основной группы животных на 7-е сутки после эксперимента.
Окраска гематоксилином и эозином.
Микрофото. Ок. 10, об. 40
Висцеральная брюшина покрыта однослойным плоским эпителием-мезотелием. Соединительнотканная основа состоит из ориентированных и извилистых коллаге-новых и эластических волокон, имеющих вытянутую или полигональную форму. Мышечная оболочка в зоне эксперимента также без изменений. В слизистой оболочке, в рыхлой соединительной ткани в умеренном количестве встречаются клетки лимфоидной ткани, они диффузно распространены среди фибробластов, оседлых макрофагов и плазматических клеток. Париетальная брюшина также имеет ровную поверхность с восстанавливающим мезотелием, имеющим однослойное плоское или кубическое строение и расположенным на базальной мембране. На 14-е сутки соединительнотканная осно-
ва восстанавливающей серозной оболочки характеризуется большим количеством макрофагов и фиброцитов. Микрососуды без видимых изменений. Мышечная и слизистая оболочки также без изменений, за исключением диффузного расположения лимфоцитов в ворсинках. На 21-е сутки брюшина гладкая, блестящая на всем протяжении, имеющая розовый оттенок.
Результаты оценки выраженности спаечного процесса. В основной группе животных наличие послеоперационных спаек констатировано в 6 случаях, что достоверно отличается от контрольной группы - 30 (р<0,001). Средние значения плотности послеоперационных спаек представлены в таблице.
Таким образом, применяемый циклофос-фамид, даже в малых дозах, при однократном введении в брюшную полость в условиях эксперимента на животных достоверно снижает частоту образования послеоперационных спаек по сравнению с контролем в 5 раз.
Выводы
1. Применение циклофосфамида при оперативных вмешательствах на органах брюшной полости позволяет достоверно снизить риск развития спаечной болезни брюшины.
2. Циклофосфамид в малых дозах не оказывает токсического действия на тканевые структуры брюшины после операции.
Библиографический список
1. Воробьев, А. А. Хирургическая анатомия оперированного живота и лапароскопическая хирургия спаек/А. А. Воробьев,
A. Г. Бебуришвили.- Волгоград: Издатель, 2001.
2. Плечев, В. В. Спаечная болезнь брюшины/
B. В. Плечев, В. М. Тимербулатов, Р. З. Ла-тыпов.- Уфа: Башкортостан, 1999.
3. Сакаева, Д. Н. Влияние эритромицина на иммунитет при иммунодефиците/ Д. Н. Сакаева, Д. Н. Лазарева //Экспери-
ментальная и клиническая фармакология.- 1999.- Т. 62.- № 1.- С. 50-52.
4. Смирнов, О. Н. Экспериментальное обоснование миелопротекторного действия мексидола/О. Н. Смирнов, В. А. Инчина,
A. В. Зорькина//Российский онкологический журнал.- 2000.- № 5.- С. 25-27.
5. Adhesions: pathogenesis and prevention-panel discussion and summary/! Holmdahl,
B. Risberg, D. E. Beck et al.//European Journal of Surgery Supplement.- 1997.- № 577.-P. 56-62.
Уровень спаечного процесса в зависимости от иммуносупрессии
(по А. А. Воробьеву, А. Г. Бебуришвили (M±m, n=60)
Группа Частота и характер спаечного процесса
Число случаев Распространенность Тип Плотность Сумма баллов
1-я, контроль (n=30) 30 3,2±0,3 2,5±0,2 2,2±0,1 7,9±0,6
2-я, опыт (n=30) 6 1,0±0,1 1,0±0,1 0,5±0,2 2,5±0,4
I. F. Sufiyarov, R. M. Shafikov, M. T. Yuldashev
EXPERIMENTAL MORPHOLOGICAL GROUNDING FOR USING CYCLOPHOSPHAMID IN
PREVENTION OF POSTOPERATIVE PERITONEAL ADHESIONS
Experimental grounding for cyclophos-phamid application to prevent peritoneal adhesions was carried out on 60 Chinchilla rabbits: 30 rabbits - experimental group, 30 - control. It was established that postopera-
tive peritoneal adhesions developed only in 6 (20%) animals of experimental group whereas in 30 (100%) control ones. The given results confirm the essential decrease of peritoneal adhesion development using cyclophosphamid.
Keywords: adhesive disease, cyclophos-phamid, prevention.
Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа
Материал поступил в редакцию 27.01.2008
© Суфияров И. Ф., Шафиков Р. М., Юлдашев М. Т., 2008
