CC BY
33
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
УДК 616.-006.81-092.9-091.8 DOI 10.23683/0321-3005-2018-2-106-116
ВЛИЯНИЕ ХРОНИЧЕСКОЙ БОЛИ НА УРОВЕНЬ ПОЛОВЫХ ГОРМОНОВ, ПРОЛАКТИНА И ГОНАДОТРОПНЫХ ГОРМОНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ПАТОЛОГИЧЕСКИ ИЗМЕНЕННОЙ КОЖЕ У САМОК МЫШЕЙ В ДИНАМИКЕ РОСТА ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ МЕЛАНОМЫ
© 2018 г. И.М. Котиева1, О.И. Кит1, Е.М. Франциянц1, В.А. Бандовкина1, И.В. Каплиева1, Л.К. Трепитаки1, Н.Д. Черярина1, Ю.А. Погорелова1, М.В. Бликян1
1Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, Ростов-на-Дону, Россия
EFFECT OF CHRONIC PAIN ON THE LEVEL OF SEX HORMONES, PROLACTIN AND GONADOTROPINS IN SERUM AND PATHOLOGICALLY CHANGED SKIN OF FEMALE MICE IN DYNAMICS OF MALIGNANT MELANOMA GROWTH
I.M. Kotieva1, O.I. Kit1, E.M. Frantsiyants1, V.A. Bandovkina1, I.V. Kaplieva1, L.K. Trepitaki1, N.D. Cheryarina1, Yu.A. Pogorelova1, M.V. Blikjan1
1Rostov Research Institute of Oncology, Rostov-on-Don, Russia
Кит Олег Иванович - доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН, генеральный директор Ростовского научно-исследовательского онкологического института, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Котиева Инга Мовлиевна - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник, лаборатория изучения патогенеза злокачественных опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: super.gormon@ya. ru
Франциянц Елена Михайловна - доктор биологических наук, профессор, руководитель лаборатории изучения патогенеза злокачественных опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Бандовкина Валерия Ахтямовна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, лаборатория изучения патогенеза злокачественных опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: super.gormon@ya. ru
Каплиева Ирина Викторовна - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник, лаборатория изучения патогенеза злокачественных опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Oleg I. Kit - Doctor of Medicine, Professor, Corresponding Member, RAS, General Director, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Inga M. Kotieva - Candidate of Medicine, Senior Researcher, Laboratory of Malignant Tumor Pathogenesis Study, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Elena M. Frantsiyants - Doctor of Biological Sciences, Professor, Head of Laboratory of Malignant Tumor Pathogenesis Study, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Valeriya A. Bandovkina - Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher, Laboratory ofMalignant Tumor Pathogenesis Study, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: su-per.gormon@ya. ru
Irina V. Kaplieva - Candidate of Medicine, Senior Researcher, Laboratory of Malignant Tumor Pathogenesis Study, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
Трепитаки Лидия Константиновна - научный сотрудник, лаборатория изучения патогенеза злокачественных опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Черярина Наталья Дмитриевна - врач-лаборант, лаборатория изучения патогенеза злокачественных опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Погорелова Юлия Александровна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, лаборатория изучения патогенеза злокачественных опухолей, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: super.gormon@ya. ru
Бликян Марина Владимировна - кандидат медицинских наук, ассистент, кафедра патологической физиологии, Ростовский научно-исследовательский онкологический институт, ул. 14-я линия, 63, г. Ростов-на-Дону, 344037, Россия, e-mail: [email protected]
Lidiya K. Trepitaki - Researcher, Laboratory ofMalignant Tumor Pathogenesis Study, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, email: [email protected]
Natal'ya D. Cheryarina - Doctor - Laboratory Assistant, Laboratory ofMalignant Tumor Pathogenesis Study, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Yuliya A. Pogorelova - Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher, Laboratory ofMalignant Tumor Pathogenesis Study, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Marina V. Blikjan - Candidate of Medicine, Assistant, Department of Pathological Physiology, Rostov Research Institute of Oncology, 14-ya Liniya St., 63, Rostov-on-Don, 344037, Russia, e-mail: [email protected]
Признается роль гормонального фактора как в развитии меланомы, так и в реализации болевого синдрома. Влияние хронической боли на рост и развитие меланомы практически не исследовано. Цель статьи - изучение влияния хронической боли на центральный и локальный гормональные фоны кожи в динамике роста меланомы B16/F10 у самок мышей. Работа выполнена на самках мышей линии C57BL/6 (n=64) 8-недельного возраста с начальной массой 21-22 г. Животным основной группы с моделью хронической боли подкожно перевивали меланому B16/F10. Группой сравнения являлись самки мышей с перевитой меланомой B16/F10. В сыворотке крови, а также гомогенатах, полученных из кожи, опухоли и перифокальной зоны ИФА- и РИА-методами, определяли уровень эстрогенов, тестостерона, прогестерона, пролактина, ЛГ и ФСГ. Установлен системный и локальный дисбаланс эстрогенов, андрогенов и прогести-нов, а также гипофизарных гормонов у самок мышей с хроническим болевым синдромом. Выявленные изменения оказались во многом сходными с локальным гормональным фоном, вызванным ростом меланомы у самок мышей. После перевивки меланомы B16/F10 мышам с хронической болью выход опухоли и метастазирование происходят значительно раньше, чем в группе сравнения, а продолжительность жизни животных меньше. Хронический болевой синдром изменяет гормональный фон органа-мишени - кожи, в результате чего создается благоприятное поле для развития злокачественного процесса.
Ключевые слова: меланома, половые гормоны, гонадотропные гормоны, пролактин, хроническая боль.
The role of the hormonal factor is recognized in the development of both melanoma and pain syndrome. The effect of chronic pain on the growth and development of melanoma is poorly studied. The purpose of the study was to reveal the effect of chronic pain on the central and local hormonal profile of the skin in dynamics of the B16/F10 melanoma growth in female mice. The study included female C57BL/6 mice (n=64) aged 8 weeks weighing initially 21-22 g. B16/F10 melanoma was transplanted subcutaneously to animals of the main group with chronic pain. The control group included female mice with transplanted B16/F10 melanoma. Levels of estrogens, testosterone, progesterone, prolactin, LH and FSH were determined by ELISA and RIA in the blood serum and in homogenates of the skin, tumor and perifocal area. Results. We revealed systemic and local imbalance of estrogens and androgens and progestins, as well as pituitary hormones, in female mice with chronic pain. The changes were largely similar to the local hormonal profile caused by the melanoma growth in female mice. After the transplantation of B16/F10 melanoma to mice with chronic pain, tumor onset and metastasis occurred much earlier than in the controls, and the survival of animals was lower. Chronic pain changes the hormonal profile in the target organ, the skin, which results in a creation of conditions favorable for the development of the malignant process.
Keywords: melanoma, sex hormones, gonadotropins, prolactin, chronic pain.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Введение
Нейропатическая боль является серьезным хроническим заболеванием, которое может развиться при поражении как центральной нервной системы, так и периферических нервов. Учитывая, что в настоящее время методы лечения хронической нейропатической боли являются неудовлетворительными, исследование механизмов, с помощью которых повреждение нерва вызывает боль, остается в центре внимания исследователей [1, 2]. Имеется много доказательств различной чувствительности к экспериментальной боли и ответа на анальгетики в зависимости от половой принадлежности. Эстроген, прогестерон и другие половые гормоны играют сложную роль в ответе на боль. Несмотря на то что основные механизмы их влияния еще не выяснены, логическая возможность влияния половых гормонов на ноцицепцию привлекает внимание [3]. Взаимосвязь между концентрацией эстрогенов и болевой чувствительностью плохо изучена [4]. Клетки микроглии в центральной нервной системе, которые имеют половые рецепторы гормонов, активируются в ответ на раздражители, высвобождая цитокины и другие медиаторы, обладающие проноцицептивным действием, и могут усиливать ответ на боль. Хотя механизмы, лежащие в основе половых различий, не были полностью выяснены, считается, что в этот процесс могут быть вовлечены и периферические нервы, и центральная нервная система [5]. В частности, прогестерон является перспективным в качестве важного защитного средства против различных повреждений нервной системы [6]. Исследования на животных также показали, что тестостерон обладает обезболивающим и успокаивающим эффектом и модулирует опиоидную анальгезию [7, 8].
Базальные механические болевые пороги у самцов и самок крыс изменяются эстрогенозависимым способом [9]. Введение эстрогена, как было показано, приводит к сенсибилизации ноцицептивных нейронов, что уменьшает болевой порог [10, 11].
По данным исследований, кожа представляет собой эндокринный орган, клетки которого способны к локальному синтезу различных нейромедиаторов, стероидных гормонов и их пептидных регуляторов. Это делает ее аналогом гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой и гонадной систем [12, 13]. Универсальность и многофункциональность позволяют коже участвовать в поддержании гомеостаза всего организма и в то же время дают возможность для развития самой агрессивной и гетерогенной злокачественной опухоли, какой является меланома. Известно также, что стимуляцию меланогенеза вызывают, помимо прочего, гормоны половых желез [14, 15]. В ряде исследований сообщают о наличии корреляционных связей между риском возникновения
NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
злокачественной меланомы и некоторыми репродуктивными факторами [16]. Кроме того, в мела-номе обнаружены рецепторы эстрогенов [17]. Установлено, что рецептор меланоцитстимулирующего гормона MC1-R может принимать участие в развитии анальгетического ответа только у мышей-самок [18]. Таким образом, c учётом гормональной зависимости меланомы и хронического болевого синдрома сочетание этих двух патологий может привнести существенные изменения в течение онкологического заболевания и повлиять на результаты лечения.
Целью исследования явилось изучение в эксперименте влияния хронической боли на уровень половых и тропных гормонов в сыворотке крови, опухоли и окружающих ее тканях у самок мышей линии C57BL/6 в динамике роста перевивной меланомы B16/F10.
Материалы и методы исследования
Работа выполнена на самках мышей линии C57BL/6 (n=64) 8-недельного возраста с начальной массой 21-22 г. Животные были получены из ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий, филиал Андреевка» ФМБА (Московская область). В работе использовали клеточную линию ме-тастазирующей в легкие мышиной меланомы B16/F10, полученную из РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН (г. Москва). Животные содержались при естественном режиме освещения со свободным доступом к воде и пище. Все исследования проводились в соответствии с требованиями и условиями, изложенными в Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных и приказе Минздрава РФ № 267 от 19.06.03 «Об утверждении правил лабораторной практики».
Все самки находились в состоянии диэструса. Животные были распределены на группы: две контрольные (интактные (n=7) и контрольные мыши (контроль) с воспроизведением модели хронической боли (n=7)), группу сравнения (B16/F10) (мыши со стандартной подкожной перевивкой мела-номы B16/F10 (n=22)) и основную (Хр Б+В16М0) (мыши, которым меланому В16/F10 перевивали через 2 недели после создания модели хронической боли (n=28)). Мышам основной группы перевязывали седалищный нерв с двух сторон под ксила-золетило-вым наркозом. Через 2 недели после заживления операционной раны подкожно под правую лопатку вводили 0,5 мл взвеси опухолевых клеток меланомы B16/F10 в физиологическом растворе в разведении 1:10. Животным из группы сравнения перевивали меланому B16/F10 подкожно в той же дозе и объёме, что и в основной группе, но без воспроизведения модели хронической боли. При стандартной перевивке
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
опухоль появляется в 100 % случаев, достаточно быстро растёт и на 12-16-е сут роста метастазирует преимущественно гематогенно в легкие (60-90 %), реже - в печень и селезенку. Контрольными для основной группы животных служили мыши с двусторонней перевязкой седалищного нерва без онкопро-цесса (контроль); для группы сравнения - интактные мыши. Контрольных животных, а также мышей из основной и группы сравнения через 1, 2 и 3 недели эксперимента декапитировали на гильотине. Опухоль, перифокальную зону и кожу выделяли на льду. Из тканей получали 10%-е гомогенаты, приготовленные на 0,1М калий-фосфатном буфере рН 7,4, содержащем 0,1%-й Твин-20 и 1%-й БСА, в которых с помощью стандартных тест-систем ИФА- и РИА-методами определяли уровни пролактина, ЛГ, ФСГ, эстрадиола, тестостерона, прогестерона.
Статистический анализ результатов проводили с помощью пакета БТАШТГСА 6.0 ^-Бой, 2001). Результаты представлены в виде М±т, где М -арифметическое среднее значение; т - стандартная ошибка среднего. Оценка достоверности произведена с использованием ^критерия Стьюдента, уровень р<0,05 принимали как значимый. При этом соблюдались общие рекомендации для медицинских исследований.
NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
Результаты
После перевивки меланомы опухоль у мышей группы сравнения появлялись на 10-12-й день в 100 % случаев, а средняя продолжительность жизни самок составила 30,3±1,68 дня. У мышей основной группы опухоль появилась в 100 % случаев через 5-7 дней, при этом метастазы у мышей основной группы регистрировались уже через неделю после перевивки, а у мышей из группы сравнения - только через 4 недели. Средняя продолжительность жизни для мышей основной группы составила 19,17±1,35 дня.
Прежде всего, представляло интерес изучить влияние хронической боли на состояние системного гормо-ногенеза. В сыворотке крови у контрольных мышей с хронической болью, но без меланомы (табл. 1) уровни исследованных гормонов отличались от показателей у интактных мышей. Содержание эстрадиола, тестостерона и прогестерона в сыворотке у контрольных мышей превышало показатели интактных в 1,7, 5 и 7,8 раза соответственно (р<0,05). Кроме того, у контрольных самок с хронической болью в сыворотке крови оказался в 2,9 раза выше уровень ЛГ; у интактных животных коэффициент ЛГ/ФСГ также оказался повышен в 2,8 раза (р<0,05).
Таблица 1
Содержание половых гормонов, пролактина и гонадотропных гормонов в сыворотке крови самок мышей в динамике роста злокачественной меланомы / The contents of sex hormones, prolactin and gonadotropins in the serum of female mice in the dynamics of growth of malignant melanoma
Гормоны Интактные мыши После перевивки B16/F10, неделя
Контрольные мыши с болью 1-я 2-я 3-я
Эстрадиол, 1979,07±181 3156,15±2871 2420,67±2021-3 2001,02±174
пг/мл 3313,94±2751 2573,53±1822 2087,56±1862-3 1964,19±1612
Тестостерон, 0,01±0,001 0,01±0,001 0,01±0,001 0,04±0,0011-3
нг/мл 0,05±0,0041 0,04±0,0032 0,01±0,0012'3 0,01±0,0012
Прогестерон, 0,49±0,03 0,96±0,071 0,95±0,061 0,29±0,021-3
нг/мл 3,81±0,311 3,31±0,28 1,79±0,152-3 0,75±0,052-3
Пролактин, 0,12±0,01 0,41±0,031 0,5±0,041 0,24±0,021-3
нг/мл, 0,15±0,02 0,2±0,0192 0,2±0,022 0,29±0,0222-3
ЛГ, 0,3±0,029 0,11±0,011 0,13±0,0111 0,13±0,011
мМЕ/мл 0,86±0,071 0,17±0,0142 0,15±0,0121-2 0,13±0,0112
ФСГ, 0,16±0,014 0,1±0,011 0,1±0,011 0,13±0,01
мМЕ/мл 0,16±0,015 0,24±0,0182 0,23±0,0172 0,59±0,042-3
Коэффициент 1,9±0,14 1,1±0,101 1,3±0,121 1,0±0,091
ЛГ/ФСГ 5,4±0,411 0,7±0,0452 0,7±0,062 0,22±0,0192-3
Примечание. 1 - достоверно по сравнению с интактными мышами; достоверно по отношению к показателям: 2 - в ткани контрольных животных (р<0,05); 3 - в предыдущий срок исследования (р<0,05).
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
Значимых отличий в содержании пролактина в сыворотке крови у интактных и контрольных самок не установлено. После перевивки меланомы В16/Б10 в сыворотке крови у самок основной группы по сравнению с контролем (боль без меланомы) отмечено с 1-й недели прогрессивное снижение эстрадиола и тестостерона, а со 2-й недели - прогестерона. Так, уровень эстрадиола снизился через 1 неделю на 22,3 % (р<0,05), через 2 недели - на 37 (р<0,05), через 3 недели - на 40,7 (р<0,05). Содержание тестостерона в 1-ю неделю упало на 20 %, во 2-ю и 3-ю уменьшилось в 5 раз. Количество прогестерона в сыворотке крови снизилось во 2-ю неделю в 2,1 раза, в 3-ю - в 5,1 (р<0,05). Что касается гормонов гипофиза, то начиная с 1 -й недели эксперимента установлено их падение в сыворотке крови мышей основной группы, сохраняющееся вплоть до 3-й недели; уровня ЛГ - более чем в 5 раз, тогда как содержание ФСГ, напротив, возросло через 1 и 2 недели в среднем в 1,5 (р<0,05), через 3 недели - в 3,7 раза. Уровень коэффициента ЛГ/ФСГ резко уменьшился: через 1 и 2 недели - в 7,7 и в 8,3 раза соответственно, через 3 недели - в 24,5. В сыворотке крови у животных из группы сравнения иначе изменялся уровень половых гормонов в динамике роста меланомы по сравнению с мышами основной группы. Так, у мышей с меланомой В16/Б10 без хронической боли (группа сравнения) уровень эстрадиола в крови увеличился через 1 неделю на 59,5 % (р<0,05), через 2 - на 22,3 (р<0,05) по сравнению с интактными мышами, а через 3 недели возвращался к исходным значениям. На концентрацию тестостерона в сыворот-
NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
ке рост меланомы не оказывал никакого влияния первые 2 недели, но через 3 недели был установлен рост в 4 раза. В то же время содержание прогестерона возросло через 1 -2 недели после перевивки в среднем в 2, а затем снизилось в 1,7 раза к концу 3-й недели роста меланомы. В сыворотке крови животных группы сравнения в динамике роста экспериментальной меланомы уровень ЛГ и ФСГ снизился начиная с первой недели в 2,7 и в 1,6 раза соответственно, оставаясь на таком уровне вплоть до 3-й недели. Уровень коэффициента ЛГ/ФСГ в этом случае на протяжении всего срока эксперимента оставался ниже контрольных значений в среднем в 1,7 раза.
Далее представляло интерес изучение уровня гормонов в интактной и патологически измененной опухолевым ростом коже мышей с хронической болью. Установлено, что в коже контрольных мышей с хронической болью (табл. 2) уровень эстрадиола был повышен относительно ткани интактных животных в 3 раза, эстрона - в 2,9, прогестерона - в 2,1 раза. Содержание общего тестостерона, свободного тестостерона и пролактина в коже мышей с хронической болью было снижено в 1,3 (р<0,05), 1,8 (р<0,05) и 4,7 раза соответственно. В основной группе в динамике развития экспериментальной ме-ланомы за 3 недели исследования в коже, не затронутой патологическим процессом, не обнаружено достоверного изменения относительно соответствующего контроля (контроль с болью) уровней эстра-диола, общего и свободного тестостерона, прогестерона и пролактина (табл. 2).
Таблица 2
Уровень половых гормонов и пролактина в непораженной коже самок мышей с меланомой В16/ F10 и меланомой, сочетанной с хронической болью / The level of sex hormones and prolactin in the unaffected skin of female mice with the melanoma B16/ F10 melanoma and associated with chronic pain
Группа Эстрадиол, нмоль/г тк. Эстрон, пмоль/г тк. Тестостерон, нмоль/г тк. Тестостерон свободный, пмоль/г тк. Прогестерон, нмоль/г тк. Пролактин, мМЕ/г тк.
Интактные животные
Кожа интактная 0,57±0,04 262,4±21,1 12,8±1,0 0,78±0,05 1,0±0,07 6,6 ±0,50
Контроль 1,7±0,141 769,0±62' 9,8±0,8' 0,43±0,04' 2,1±0,2' 1,4±0,12'
1-я неделя роста меланомы B16/F10
B16/F10 0,62±0,03 321,5±28,1 18,2±1,5' 0,85±0,07 0,95±0,05 10,5±1,06'
ХрБ+Б16^10 2,0±0,23 919,3±762,3 9,7±0,93 0,42±0,033 2,5±0,243 1,4±0,143
2-я неделя роста меланомы B16/F10
B16/F10 0,68±0,05 353±25,2' 14,4±1,3 0,55±0,04' 0,96±0,06 9,03±0,6'
ХрБ+Б16^10 2,0±0,23 1076,1±981А3 10,4±1,03 0,47±0,04' 2,8±0,263 1,5±0,143
3-я неделя роста меланомы B16/F10
B16/F10 0,74±0,05' 403,2±33,2' 14,7±1,1 0,45±0,04' 1,02±0,09 3,13±0,25'
ХрБ+Б16^10 2,1±0,21,3 692,7±59',3 10,0±0,93 0,45±0,04 2,7±0,253 1,4±0,123
Примечание. Достоверно по отношению: 1 - к показателям в ткани интактных животных; 2 - к контролю (р<0,05); 3 - достоверно по сравнению с показателями в группе сравнения.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
Только уровень эстрона увеличился через 1 и 2 недели в 1,2 (р<0,05) и 1,4 раза (р<0,05) относительно контрольных величин, но через 3 недели с момента перевивки опухоли вернулся к исходным значениям. Вместе с тем некоторые показатели кожи мышей основной группы значимо отличались от показателей в непораженной коже самок мышей группы сравнения. Уровень эстрадиола с 1-й по 3-ю неделю роста мела-номы превосходил аналогичный показатель в группе сравнения в среднем в 2,9, эстрона - в 3 раза в течение 2 недель и в 1,7 (р<0,05) - через 3 недели, прогестерона - в 2,7 раза. Уровни общего тестостерона и пролактина с 1-й по 3-ю недели роста меланомы, напротив, были ниже, чем у животных группы сравнения: общего тестостерона - в 1,9, 1,4 и 1,5 раза (р1,2,з<0,05);
Содержание прогестерона у животных основной группы нарастало в ткани опухоли относительно показателей соответствующего контроля начиная со 2-й недели эксперимента - в 1,5 раза (р<0,05), через 3 недели - в 1,6 раза (р<0,05). При этом во все сроки исследования уровень прогестерона превышал показатели в ткани опухоли мышей группы сравнения в 2,3 и в 3,3 раза через 2 и 3 недели (табл. 2). Уровень пролактина в ткани опухоли мышей основной группы изменялся неодно-
пролактина - в 7,5, 6 и 2,2 раза. Содержание свободного тестостерона через одну неделю было в 2 раза ниже, чем у животных группы сравнения, а в дальнейшем не имело достоверных отличий от показателей в группе сравнения.
В ткани опухоли у мышей основной группы в динамике роста меланомы не обнаружено значимых изменений уровней эстрадиола, общего и свободного тестостерона относительно показателей соответствующего контроля (табл. 3).
Однако относительно показателей в ткани опухоли мышей группы сравнения содержание эстра-диола было выше через 2 недели - в 2,9, через 3 недели - в 2,7 раза, а уровень общего тестостерона, напротив, ниже через 3 недели - в 1,3 раза (р<0,05).
значно: через 1 неделю - возрос в 3,4 раза относительно соответствующего контроля; через 2 недели отмечено дальнейшее возрастание относительно предыдущего срока в 1,3 раза (р<0,05). Затем через 3 недели уровень пролактина в ткани опухоли снизился относительно показателя через 2 недели в 1,8 раза (р<0,05), но оставался выше значений соответствующего контроля в 2,4 раза (табл. 3). При этом во все сроки исследования содержание пролактина в ткани опухоли мышей основной группы остава-
Таблица 3
Уровень половых гормонов и пролактина в ткани опухоли самок мышей с меланомой В16/ F10 и меланомой, сочетанной с хронической болью / The level of sex hormones and prolactin in the tumor tissue in female mice with the melanoma B16/ F10 melanoma and associated with chronic pain
Группа Эстрадиол, нмоль/г тк. Эстрон, пмоль/г тк. Тестостерон, нмоль/г тк. Тестостерон свободный, пмоль/г тк. Прогестерон, нмоль/г тк. Пролактин, мМЕ/г тк.
Интактные животные
Кожа интактная 0,57±0,04 262,4±21,1 12,8±1,0 0,78±0,05 1,0±0,07 6,6 ±0,50
Контроль 1,7±0,141 769,0±62' 9,8±0,81 0,43±0,04' 2,1±0,21 1,4±0,12'
1-я неделя роста меланомы B16/F10
ХрБ+Б16^10 1,9±0,15 515,4±452 10,4±1,0 0,43±0,03 1,9±0,15 4,7±0,382
2-я неделя роста меланомы B16/F10
B16/F10 0,63±0,04 519,3±29,5' 13,1±1,1 0,72±0,06 1,4±0,061 13,6±1,1'
ХрБ+Б16^10 1,8±0,153 594,7±48,52 11,0±1,1 0,50±0,043 3,2±0,282-3 6,1±0,542-3
3-я неделя роста меланомы B16/F10
B16/F10 0,74±0,04' 494,5±30,8' 12,8±1,2 0,37±0,031 1,1±0,1 5,5±0,2
ХрБ+Б16^10 2,0±0,23 1037±99,52-3 10,3±0,973 0,4±0,03 3,4±0,282-3 3,3±0,32-3
Примечание. Достоверно по отношению: 1 - к показателям в ткани интактных животных; 2 - к контролю (р<0,05); 3- достоверно по сравнению с показателями в группе сравнения.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
лось ниже значений в опухоли животных группы сравнения. Уровень эстрона в течение первых 2 недель роста опухоли у мышей основной группы снижался в среднем в 1,4 раза (р<0,05) относительно показателей соответствующего контроля, а через 3 недели возрос в 1,3 раза (р<0,05). При этом содержание эстрона в ткани опухоли мышей основной группы через 2 недели эксперимента достоверно не отличалось от показателей в опухоли животных группы сравнения, а через 3 недели эксперимента превышало их в 2,1 раза.
В ткани перифокальной зоны у мышей основной группы (табл. 4) показатели эстрадиола и тестостерона (общая и свободная формы) принципиально не отличались от значений в ткани опухоли. Значимые различия касались уровня эстрона, прогестерона и пролактина. При этом содержание эстрона в пери-фокальной зоне у мышей основной группы через 1 и 2 недели оказалось выше в 2 раза, чем в меланоме (р<0,05), а через 3 недели уровень в исследуемых образцах сравнялся. Следует отметить, что концентрация эстрона в перифокальной зоне во все исследуемые сроки превышала показатели не только по от-
NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
ношению к соответствующим контрольным величинам в среднем в 1,5 раза (р<0,05), но и аналогичные показатели у мышей группы сравнения в среднем в 3,1 раза. Уровень прогестерона в перифокальной зоне мышей основной группы с 1-й по 3-ю недели опухолевого роста оказался выше соответствующего контроля в среднем в 1,5 раза, при этом превышая показатели в опухоли только через одну неделю роста меланомы.
На протяжении всего роста меланомы концентрация прогестерона в перифокальной зоне у мышей основной группы превосходила значения у мышей группы сравнения в среднем в 3 раза. Уровень про-лактина в перифокальной зоне повысился через 2-3 недели в 1,4 раза (р<0,05) по сравнению с контролем, но все равно был ниже, чем в соответствующей опухолевой ткани, через 1 и 2 недели - в 3,1 раза, а через 3 недели - в 1,7. Следует отметить, что в группе сравнения уровень пролактина на протяжении всего эксперимента превышал показатели основной группы в 4,8 раза (через 2 недели) и в 2,3 -через 3 недели.
Таблица 4
Уровень половых гормонов и пролактина в ткани перифокальной зоны опухоли самок мышей с меланомой В16 / F10 и меланомой, сочетанной с хронической болью / The level of sex hormones and prolactin in the tissue of perifocal zone of the tumor in female mice with the melanoma B16/ F10 melanoma and associated with chronic pain
Группа Эстрадиол, нмоль/г тк. Эстрон, пмоль/г тк. Тестостерон, нмоль/г тк. Тестостерон свободный, пмоль/г тк. Прогестерон, нмоль/г тк. Пролактин, мМЕ/г тк.
Интактные животные
Кожа интактная 0,57±0,04 262,4±21,1 12,8±1,0 0,78±0,05 1,0±0,07 6,6 ±0,50
Кожа, контроль 1,7±0,14' 769,0±62' 9,8±0,81 0,43±0,04' 2,1±0,21 1,4±0,12'
1-я неделя роста меланомы B16/F10
ХрБ+Б16^10 2,1±0,19 1106,7±96,22 10,5±0,9 0,43±0,04 2,8±0,212 1,4±0,12
2-я неделя роста меланомы B16/F10
B16/F10 0,63±0,04 361,5±31,11 12,7±1,0 0,53±0,041 0,99±0,08 9,5±0,711
ХрБ+Б16^10 2,0±0,173 1181,6±982,3 10,0±1,0 0,5±0,04 3,3±0,312,3 2,0±0,182,3
3-я неделя роста меланомы B16/F10
B16/F10 0,72±0,05' 389,1±26,71 15,4±1,0 0,5±0,03' 1,02±0,07 4,6±0,31
ХрБ+Б16^10 2,1±0,203 1175,1±11023 10,0±0,93 0,5±0,04 3,1±0,282,3 2,0±0,152,3
Примечание. Достоверно по отношению: 1 - к показателям в ткани интактных животных; 2 - к контролю (р<0,05); 3 - достоверно по сравнению с показателями в группе сравнения.
Обсуждение
В результате исследования выявлено, что кожа у мышей с хронической болью по сравнению с ин-тактными животными перенасыщена эстрогенами -эстрадиолом и эстроном, а также прогестероном, но испытывает недостаток тестостерона. При этом
в сыворотке крови у животных с хронической болью содержатся повышенные количества эстрадиола, тестостерона, прогестерона и ЛГ. Роль половых и гипофизарных гормонов в ноцицептивных процессах окончательно неясна [4]. Многие исследования показывают увеличение в плазме крови
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
или в локальных очагах уровней эстрогенов параллельно увеличению ноцицептивной чувствительности [19-21]. В [22] использовалась модель воспаления для изучения роли прогестерона в развитии стойкой боли и гипералгезии у лактирующих крыс с сохраненными яичниками и у овариэктоми-рованных крыс. Результаты свидетельствуют о том, что прогестерон способен модулировать ранние нейрогенные события, инициированные травмой, и его применение может представлять собой полезную стратегию предотвращения развития центральной хронической боли [23]. Общий вывод из многих исследований состоит в том, что тестостерон, предположительно, с помощью рецепторов андрогенов является защитным, или антиноцицеп-тивным. Влияние тестостерона на развитие боли не так широко изучено, как эстрадиола, однако большинство исследований поддерживают его анти-ноцицептивную, или защитную, роль. В то же время в исследовании установлено, что у мышей из группы сравнения рост перевивной меланомы B16/F10 сопровождался повышением содержания эстрадиола и эстрона в коже, опухоли и перифо-кальной зоне и снижением уровней общей и свободной форм тестостерона. Кроме того, в сыворотке крови в динамике роста меланомы B16/F10 выявлен рост концентрации эстрадиола в 1-ю неделю после перевивки, прогестерона и пролактина - на протяжении всего эксперимента, а также снижение содержания ЛГ. В итоге по ряду параметров эндокринный фон кожи у мышей с хронической болью оказался схожим с фоном кожи у мышей группы сравнения с растущей меланомой. Как показал эксперимент, перевивка меланомы B16/F10 самкам мышей с хроническим болевым синдромом привела к резкой активации злокачественного процесса, что выразилось в раннем появлении опухоли (уже через 7 дней) и в быстром метастазировании (через одну неделю) без существенного роста объемов опухолевых узлов. Можно сказать, что мела-нома была перевита на подготовленную хроническим болевым синдромом почву, позволившую злокачественным клеткам максимально быстро реализовать свое развитие. Ряд исследований показывает, что различные клеточные линии меланомы содержат половые гормоны. В частности, SK-MEL-28 и UACC-257 содержат самые высокие уровни эстрона (21,50 и 36,36 пг/106 клеток соответственно) и эстрадиола (146,59 и 130,70 пг/106 клеток соответственно) [24]. В клеточных линиях IIB -MEL-LES и IIB-MEL-IAN тестостерон, дигидроте-стерон, эстрадиол и прогестерон значительно сти-
NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
мулировали пролиферацию клеток [25]. В [26] показано, что клетки SNA меланомы непосредственно реагируют на введение тестостерона и что этот эффект модулируется светом. Интересным оказался тот факт, что как в реализации болевого эффекта у самок мышей, так и в синтезе меланина принимает участие рецептор меланокортина-1 (MC1R) [18]. Ранее нами было показано, что развитие и рост перевивной меланомы B16/F10 являются сложным многостадийным процессом, изменяющим гормональный баланс не только непосредственно в злокачественной опухоли, но и в организме в целом. Нарушения гормоногенеза возникают на начальных стадиях путем аутокринных механизмов регуляции клетками перевитой и растущей меланомы, а затем паракринным способом распространяют свое влияние на близлежащие ткани и центральные регуляторные системы организма [27]. Выявленные изменения эндокринного баланса в коже самок мышей под влиянием хронической боли оказались однонаправленными с теми, которые были вызваны ростом перевивной мела-номы B16/F10. Безусловно, требуются дальнейшие исследования, однако на основании полученных результатов можно предположить, что некоторые хронические заболевания, в число которых входит и хронический болевой синдром, способны повышать не только риск возникновения меланомы кожи, но и агрессивность заболевания, подготавливая почву для возникновения и роста злокачественной опухоли.
Заключение
Анализ полученных в настоящем исследовании результатов показал, что хроническая боль изменяет системный и локальный гормоногенез, вероятно, за счет влияния как на функцию гипофиза, о чем свидетельствует резкое изменение в крови коэффициента ЛГ/ФСГ, так и на местный синтез гормонов. Состояние гормонального баланса в коже мышей под действием хронической боли готовит орган-мишень для развития в нем злокачественного процесса, так как именно такие перестройки локального гормоногенеза в коже развивались в динамике роста меланомы без хронической боли в группе сравнения. Требуются дальнейшие исследования влияния хронической боли на развитие меланомы кожи, так как в свете полученных результатов можно предположить неблагоприятный прогноз течения заболевания и риск раннего метастазирования у больных даже на ранних стадиях в случае сопутствующего хронического болевого синдрома.
ISSN 0321-3005 ИЗВЕСТИЯ ВУЗОВ. СЕВЕРО-КАВКАЗСКИЙ РЕГИОН._ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ. 2018. № 2
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION. NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
Литература
1. Крыжановский Г.Н. Важное событие в отечественной медицине // Боль. 2003. № 1 (1). С. 4-5.
2. MachelskaH., ChelikM.O. Recent advances in understanding neuropathic pain: glia, sex differences, and ep-igenetics // F1000Res. 2016. Vol. 5. P. 2743. DOI 10.12688/f1000research.9621.1 .PMCID PMC5224690.
3. Maurer A.J., Lissounov, KnezhevichI., CandidoK.D., Knezhevich N.N. Pain and sex hormones: an overview of modern understanding // Pain Manag. 2016. Vol. 6. (3). P. 285-296. DOI 10.2217/PMT-2015-0002.
4. Linn H.N., Conlon A., Kidwell K.M., Griffith K., Smerage J.B., Schott A.F., Hayes D.F., Williams D.A., Clough D.J., Garth S.E. The effect of estrogens on the depletion of pain sensitivity in aromatase inhibitor-treated women with early stage breast cancer // J. Pain. 2014. Vol. 15 (5). P. 468-475. DOI 10.1016/j.jpain.2014.01.487. PMCID PMC4063362. NIHMSID NIHMS560398.
5. Manson J.E. Pain: Sexual differences and consequences for treatment // Metabolism. 2010. Vol. 59, Suppl. 1. Р. 16-20. DOI 10.1016 / j.metabol.2010.07.013.
6. JarahiM., Sheibani V., Safakhah HA., Torkmandi H., Manson J.E. The effect of progesterone on neuropathic pain responses in the experimental animal model for peripheral neuropathy in rats: behavioral and electrophysiological studies // Neuroscience. 2014. Vol. 256. P. 403-411. DOI 10.1016 / j.neuroscience.2013.10.043.
7. Creating R.M., Mogil J.S., Aloisi A.M. Sexual differences in pain and analgesia: the role of sex hormones // Eur. J. Pain. 2004. Vol. 8. P. 397-411.
8. Edinger K.L., Fry C.A. Soothing and analgesic effects Testosterone may be in part due to the action of its 5alpha-reduced metabolites in the hippocampus // Psycho-neuroendocrinology. 2005. Vol. 30. P. 418-430.
9. Khazarsky S.G., Dina O.A., Zeleny P., Levin J.D. Estrogen regulates adrenal medullary function to produce sexual dimorphism in the nociceptive threshold and beta-adrenergic receptor-mediated hyperalgesia in rats // Eur. J. Neurosci. 2005. Vol. 21. P. 3379-3386. DOI 10.1111 / j.1460-9568.2005.04158.x.
10. Taymen T., Levin J.D. Signaling pathway in sensi-tization: to the nociceptor of cell biology // Neuron. 2007. Vol. 55. P. 365-376. DOI 10.1016 / j.neuron.2007.07.008.
11. Woolf C.J., Ma Q. Nociceptors-pain stimuli detectors // Neuron. 2007. Vol. 55. P. 353-364. DOI 10.1016 / j.neuron.2007.07.016.
12. Slominski A. Neuroendocrine activity of the mela-nocyte // Exp. Dermatol. 2009. Vol. 18, № 9. P. 760-763.
13. Slominski A.T., Zmijewski M.A., Skobowiat C., Zbytek B., Slominski R.M., Steketee J.D. Sensing the environment: regulation of local and global homeostasis by the skin's neuroendocrine system // Adv. Anat. Embryol. Cell. Biol. 2012. Vol. 212. P. 1-115.
14. Кичигина Т.Н., Грушин В.Н., Беликова И.С., Мя-делец О.Д. Меланоциты: строение, функции, методы выявления, роль в кожной патологии // Вестн. ВГМУ. 2007. Т. 6, № 4. C. 1-16.
15. Jang Y.H., Lee J.Y., Kang H.Y., Lee E.S., Kim Y.C. Oestrogen and progesterone receptor expression in me-lasma: an immunohistochemical analysis // J. Eur. Acad. Dermatol Venereol. Forthcoming. 2010. Vol. 24 (11). P. 1312-1316. DOI 10.1111/j.1468-3083.2010.03638.x.
16. Karagas M.R., Zens M.S., Stukel T.A., Swerdlow A.J., Rosso S., Osterlind A. Pregnancy history and incidence in melanoma in women : a pooled analysis // Cancer Causes Control. 2006. Vol. 17. P. 11-19.
17. De Giorgi V., Mavilia C., Massi D., Gozzini A., Aragona P., Tanini A., Sestini S., PaglieraniM., Boddi V., Brandi M.L, Lotti T. Estrogen receptor expression in cutaneous melanoma: a real-time reverse transcriptase-poly-merasechain reaction and immunohistochemical study // Arch. Dermatol. 2009. Vol. 145 (1). P. 30-36. DOI 10.1001/archdermatol.2008.537.
18.Mogil J.S., Ritchie J., Smith S.B., Strasburg K., Kaplan L., Wallace M.R., Romberg R.R., Bijl H., Sarton E.Y., Fillingim R.B., Dahan A. Melanocortin-1 receptor gene variants affect pain and mu-opioid analgesia in mice and humans // J. Med. Genet. 2005. Vol. 42 (7). P. 583-587. PMID 15994880. PMCID PMC1736101. DOI 10.1136/jmg.2004.027698.
19. Allen L., McCarson K.E. Estrogen increases noci-ception-induced brain derived neurotrophic gene expression factor in the female rat // Neuroendocrinology. 2005. Vol. 81. P. 193-199.
20. Liu B., Eisenach J.C., Tong S. Chronic estrogen sensitizes a subset of mechanosensitive afferents of the innervating cervix // J. Neurophysiol. 2005. Vol. 93. P.2167-2173.
21. Evrard N.S. Synthesis of Estrogen in the dorsal horn: a new central mechanism of hormonal regulation of pain // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2006. Vol. 291. P. R291-R299. DOI 10.1152/ ajpregu.00930.2005.
22. Ren K., Wei F., Dubner R., Murphy A., Hoffman G.E. Progesterone weakens persistent inflammatory hyperal-gesia in female rats: involvement of the spinal NMDA receptor mechanisms // Brain Res. 2000. Vol. 865 (2). P. 272-277.
23. Coronel M.F., Labombarda F., De Nicola A.F., Gonzalez S.L. Progesterone reduces the expression of spinal cyclooxygenase-2 and inducible nitric oxide synthase and prevents allodynia in a rat model of central neuropathic pain // Eur. J. Pain. 2014. Vol. 18 (3). P. 348-359. DOI 10.1002/j.1532-2149.2013.00376.x.
24.Xu Xia, Veenstra T.D. The concentration of endogenous estrogens and estrogen metabolites in the lines of human tumor cells NCI-60 // Genome Med. 2012. Vol. 4 (4). DOI 10.1186/gm330. PMCID PMC3446259.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
25. Morvillo V., Luthy I.A. , Bravo A.I. , Capurro M.I. , Portels P., Calander R.S., Mordoh J. Androgen receptors in the human melanoma cell lines IIB-MEL-LES and IIB-MEL-IAN and human melanoma metastases // Melanoma Res. 2002. Vol. 12 (6). P. 529-538.
26. Allil P.A., Visconti M.A., Castrucci A.M., Isoldi M.C. The photoperiod and testosterone modulate the growth and melanogenesis of s91 murine melanoma // Med. Chem. 2008. Vol. 4 (2). P. 100-105.
27. Бандовкина В.А., Франциянц Е.М., Погорело-ва Ю.А., Черярина Н.Д. Особенности стероидогенеза при экспериментальной меланоме В16 // Молекулярная медицина. 2015. № 5. С. 47-51.
References
1. Kryzhanovskii G.N. Vazhnoe sobytie v otech-estvennoi meditsine [An important event in domestic medicine]. Bol'. 2003, No. 1 (1), pp. 4-5.
2. Machelska H., Chelik M.O. Recent advances in understanding neuropathic pain: glia, sex differences, and ep-igenetics. F1000Res. 2016, vol. 5, p. 2743. DOI 10.12688/f1000research.9621.1. PMCID PMC5224690.
3. Maurer A.J., Lissounov, Knezhevich I., Candido K.D., Knezhevich N.N. Pain and sex hormones: an overview of modern understanding. Pain Manag. 2016, vol. 6. (3), pp. 285-296. DOI 10.2217/PMT-2015-0002.
4. Linn H.N., Conlon A., Kidwell K.M., Griffith K., Smerage J.B., Schott A.F., Hayes D.F., Williams D.A., Clough D.J., Garth S.E. The effect of estrogens on the depletion of pain sensitivity in aromatase inhibitor-treated women with early stage breast cancer. J. Pain. 2014, vol. 15 (5), pp. 468-475. DOI 10.1016/j.jpain.2014.01.487. PMCID PMC4063362. NIHMSID NIHMS560398.
5. Manson J.E. Pain: Sexual differences and consequences for treatment. Metabolism. 2010, vol. 59, suppl. 1, pp. 16-20. DOI 10.1016 / j.metabol.2010.07.013.
6. Jarahi M., Sheibani V., Safakhah H.A., Torkmandi H., Manson J.E. The effect of progesterone on neuropathic pain responses in the experimental animal model for peripheral neuropathy in rats: behavioral and electrophysio-logical studies. Neuroscience. 2014, vol. 256, pp. 403-411. DOI 10.1016/j.neuroscience.2013.10.043.
7. Creating R.M., Mogil J.S., Aloisi A.M. Sexual differences in pain and analgesia: the role of sex hormones. Eur. J. Pain. 2004, vol. 8, pp. 397-411.
8. Edinger K.L., Fry C.A. Soothing and analgesic effects Testosterone may be in part due to the action of its 5alpha-reduced metabolites in the hippocampus. Psycho-neuroendocrinology. 2005, vol. 30, pp. 418-430.
9. Khazarsky S.G., Dina O.A., Zeleny P., Levin J.D. Estrogen regulates adrenal medullary function to produce sexual dimorphism in the nociceptive threshold and beta-adrenergic receptor-mediated hyperalgesia in rats. Eur. J. Neurosci. 2005, vol. 21, pp. 3379-3386. DOI 10.1111 / j.1460-9568.2005.04158.x.
NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
10. Taymen T., Levin J.D. Signaling pathway in sensitization: to the nociceptor of cell biology. Neuron. 2007, vol. 55, pp. 365-376. DOI 10.1016 / j.neuron.2007.07.008.
11. Woolf C.J., Ma Q. Nociceptors-pain stimuli detectors. Neuron. 2007, vol. 55, pp. 353-364. DOI 10.1016 / j.neuron.2007.07.016.
12. Slominski A. Neuroendocrine activity of the melanocyte. Exp. Dermatol. 2009, vol. 18, No. 9, pp. 760763.
13. Slominski A.T., Zmijewski M.A., Skobowiat C., Zbytek B., Slominski R.M., Steketee J.D. Sensing the environment: regulation of local and global homeostasis by the skin's neuroendocrine system. Adv. Anat. Embryol. Cell. Biol. 2012, vol. 212, pp. 1-115.
14. Kichigina T.N., Grushin V.N., Belikova I.S., My-adelets O.D. Melanotsity: stroenie, funktsii, metody vy-yavleniya, rol' v kozhnoi patologii [Melanocytes: structure, functions, methods of detection, role in skin pathology]. Vestn. VGMU. 2007, vol. 6, No. 4, pp. 1-16.
15. Jang Y.H., Lee J.Y., Kang H.Y., Lee E.S., Kim Y.C. Oestrogen and progesterone receptor expression in melasma: an immunohistochemical analysis. J. Eur. Acad. Dermatol Venereol. Forthcoming. 2010, vol. 24 (11), pp. 1312-1316. DOI 10.1111/j.1468-3083.2010.03638.x.
16. Karagas M.R., Zens M.S., Stukel T.A., Swerdlow A.J., Rosso S., Osterlind A. Pregnancy history and incidence in melanoma in women: a pooled analysis. Cancer Causes Control. 2006, vol. 17, pp. 11-19.
17. De Giorgi V., Mavilia C., Massi D., Gozzini A., Aragona P., Tanini A., Sestini S., Paglierani M., Boddi V., Brandi M.L, Lotti T. Estrogen receptor expression in cutaneous melanoma: a real-time reverse transcriptase-poly-merasechain reaction and immunohistochemical study. Arch. Dermatol. 2009, vol. 145 (1), pp. 30-36. DOI 10.1001/archdermatol.2008.537.
18. Mogil J.S., Ritchie J., Smith S.B., Strasburg K., Kaplan L., Wallace M.R., Romberg R.R., Bijl H., Sarton E.Y., Fillingim R.B., Dahan A. Melanocortin-1 receptor gene variants affect pain and mu-opioid analgesia in mice and humans. J. Med. Genet. 2005, vol. 42 (7), pp. 583-587. PMID 15994880. PMCID PMC1736101. DOI 10.1136/jmg.2004.027698.
19. Allen L., McCarson K.E. Estrogen increases noci-ception-induced brain derived neurotrophic gene expression factor in the female rat. Neuroendocrinology. 2005, vol. 81, pp. 193-199.
20. Liu B., Eisenach J.C., Tong S. Chronic estrogen sensitizes a subset of mechanosensitive afferents of the innervating cervix. J. Neurophysiol. 2005, vol. 93, pp. 21672173.
21. Evrard N.S. Synthesis of Estrogen in the dorsal horn: a new central mechanism of hormonal egulation of pain. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2006, vol. 291, pp. R291-R299. DOI 10.1152/aj-pregu.00930.2005.
ISSN 0321-3005 IZVESTIYA VUZOV. SEVERO-KAVKAZSKII REGION.
22. Ren K., Wei F., Dubner R., Murphy A., Hoffman G.E. Progesterone weakens persistent inflammatory hyperalgesia in female rats: involvement of the spinal NMDA receptor mechanisms. Brain Res. 2000, vol. 865 (2), pp. 272-277.
23. Coronel M.F., Labombarda F., De Nicola A.F., Gonzalez S.L. Progesterone reduces the expression of spinal cyclooxygenase-2 and inducible nitric oxide synthase and prevents allodynia in a rat model of central neuropathic pain. Eur. J. Pain. 2014, vol. 18 (3), pp. 348-359. DOI 10.1002/j.1532-2149.2013.00376.x.
24. Xu Xia, Veenstra T.D. The concentration of endogenous estrogens and estrogen metabolites in the lines of human tumor cells NCI-60. Genome Med. 2012, vol. 4 (4). DOI 10.1186/gm330. PMCID PMC3446259.
NATURAL SCIENCE. 2018. No. 2
25. Morvillo V., Luthy I.A., Bravo A.I., Capurro M.I., Portels P., Calander R.S., Mordoh J. Androgen receptors in the human melanoma cell lines IIB-MEL-LES and IIB-MEL-IAN and human melanoma metastases. Melanoma Res. 2002, vol. 12 (6), pp. 529-538.
26. Allil P.A., Visconti M.A., Castrucci A.M., Isoldi M.C. The photoperiod and testosterone modulate the growth and melanogenesis of s91 murine melanoma. Med. Chem. 2008, vol. 4 (2), pp. 100-105.
27. Bandovkina V.A., Frantsiyants E.M., Pogorelo-va Yu.A., Cheryarina N.D. Osobennosti steroidogeneza pri eksperimental'noi melanome V16 [Features of steroidogenesis in experimental melanoma B16]. Molekulyarnaya meditsina. 2015, No. 5, pp. 47-51.
Поступила в редакцию /Received_12 декабря 2017 г. /December 12, 2017
