CC BY
29
А. А. Спасов, Д. Ф. Кучерявенко, О, А, Салазникова Кафедра фармакологии ВолГМУ
ВЛИЯНИЕ ГЛИКЛАЗИДА НА ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ¡СРОВ^ ЛАБОРАТОРНЫХ КРЫС
УДК 615.252.349:591.11
Основной целью исследования явилось изучение влияния препарата «Гликлазид» на гемобиологические свойства крови. В результате было показано, что гликлазид при введении его диабетным крысам ингибирует агрегацию тромбоцитов, снижает вязкость крови и проявляет выраженную фибринслитическую активность.
Ключевые слова: диабет, агрегация тромбоцитов, фибринолитическая активность, вязкость крови
Социальная значимость сахарного диабета (СД) определяется большим количеством сосудистых осложнений [5]. Поэтому очень важным является создание новых гипогликемических средств с положительным влиянием на гемореологические параметры. Для многих гипогликемических препаратов характерно влияние на агрегацию тромбоцитов и реологию крови. Одним из наиболее эффективных пероральных противодиабетических средств является «Гликлазид» — препарат сульфонилмоче-вины второго поколения с уникальными свойствами, который позволяет не только эффективно контролировать уровень глюкозы в крови, но и обладает антитромбогенными свойствами [6]. Поэтому нам представилось интересным посмотреть, как влияет гликлазид на другие звенья системы гемостаза, а именно на реологию крови, антитромбогенную и фиб-риполитическую активность.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучить влияние гликпазида на различные звенья гемостаза лабораторных крыс.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Влияние препарата «Гликлазид» на систему гемостаза изучали на 60 белых нелинейных крысах обоего пола массой 180—250 г. Препарат вводился внутрижелудочно крысам в дозе 5 мг/кг за 2 часа до исследования. На втором этапе эксперимента у крыс вызывалась тяжелая форма экспе-
риментального стрептозотоцинового диабета. Уровень глюкозы в крови определяли глюкозооксидаз-ным методом с использованием набора «Глюкоза ФКД» (Россия). Забор крови для исследования осуществлялся из нижней полой вены наркотизированных животных. На третьем этапе эксперимента опыты были выполнены на интактных крысах и животных со стрептозотоциновым диабетом при семидневном введении им исследуемого препарата.
Для комплексной оценки состояния реологических свойств крови определялись следующие гемореологические параметры агрегация тромбоцитов, вязкость крови, величина гематокрита. Влияние гликлазида на агрегацию и количество активированных тромбоцитов изучали на двухканаль-so.v лазерном анализаторе агрегации (модель 220 LA) научно-производственной фирмы «Биола» (г, Москва). Определение агрегации тромбоцитов проводили по методу Bom G. (1962) в модификации Габбасова 3. .А. и др. [2]. В качестве индуктора агрегации использовали аденозиндифосфор-ную кислоту (АДФ) фирмы «Reanai» (Венгрия) в концентрации 5 мкМ. Количество активированных тромбоцитов подсчитывали с помощью специальной компьютерной программы [2].
Вязкость крови определялась при помощи вискозиметра ротационного типа анализатора крови реологического (АКР-2) [3] при трех скоростях сдвига (20е'1, 100е'1, 200е"1). Влияние веществ на агрегацию эритроцитов оценивали по индексу аг-
регации, рассчитываемому как отношение вязкости крови при скорости сдвига 20е"1 к вязкости крови при 200е"1 [1 ]. Величина гематокрита определялась по унифицированному методу, описанному Меньшиковым В. В. [4]. Вязкость крови измерялась при стандартизированном гематокрите — 40 %.
Определение фибринолитической активности проводилось по методу Astrup G., Mullertrs S.(1952), модифицированному Меньшиковым В. В. (1987) [4].
Статистическая обработка результатов осуществлялась с использованием t-критерия Стью-дента и парного критерия Вилкоксона при помощи пакета статистических программ STATISTIKA6.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В первой серии исследований, проводившихся на интактных животных при однократном введении препарата, установлено, что гликлазид проявил антиагрегационную активность. На фоне его введения способность кровяных пластинок к агрегации достоверно снижалась на 70 %, а число активированных форм тромбоцитов на 11 % (р < 0,05) (табл. 1). ТАБЛИЦА 1
Влияние гликлазида на АДФ-индуцируемую агрегацию и количество активированных тромбоцитов крови
у крыс 1-й и 2-й серий (М± т)
N п/п Гликлазид при однократном и 7-дневном введении Количество активированных тромбоцитов, % Агрегация тромбоцитов Д % по отношению к контролю
Контроль Опыт
1. Интактные крысы 16,75 ± 1,78 5,75 ± 0,98* -70,14 ± 4,12*
2. Диабетные крысы 24,00 ±2,44 6,33 ± 0,33* -77,60 ± 1,00*
3. Интактные крысы (7 дней) 17,82 ±2,51 6,02 ± 1,13 -32,17 ± 1,62*
4. Диабетные крысы (7 дней) 26,05 ±1,34 8, 45 ± 1,74 -74,67 ± 3,90*
'данные статистически значимы по отношению к контролю (р < 0,05).
При анализе влияния гликлазида на показатель вязкости крови при различных скоростях сдвига было обнаружено недостоверное снижение данного показателя при высоких скоростях сдвига и было статистически значимым только при скорости сдвига 20е 1 (табл. 2).
В результате изучения влияния гликлазида на фибринолитическую активность крови интактных крыс при однократном введении была выявлена способность препарата активировать фибринолиз на 14,8 %
(р > 0,05). При этом плазминовая активность не изменялась, а активность активаторов плазминогена недостоверно повышалась на 29,4 %(табл. 3).
Во второй серии экспериментов проводились исследования на диабетных крысах. При этом за-
регистрировано достоверное увеличение агрег; ЦИИ ТрОМбОЦИТОВ И ВЯЗКОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ, ЧТО Я!
ляется важной причиной ухудшения реологиче( ких свойств крови.
Как видно из табл. 1, количество и функщ ональная активность тромбоцитов крыс на мод< ли стрептозотоцинового диабета достоверно о' личалась по сравнению с контрольными крыс; ми. Поэтому нам показалось интересным выя нить, как изменяются вышеуказанные параме ры у диабетных крыс под влиянием гликлазид Согласно данным, представленным в табл. снижение агрегации тромбоцитов в ответ на АД под влиянием гликлазида у диабетных крыс бы; достоверным и более выраженным по сравнени с интактными крысами, а число активированнь тромбоцитов было снижено в 3,7 раза относител но контроля. Известно, что АДФ повышает п ступление внеклеточного Са2+ путем открыт; АДФ-зависимых неселективных кальциевых к налов. Снижение поступления внеклеточного Cí в тромбоциты под действием АДФ, выявленж нами на фоне введения гликлазида, обусловл вает достоверное снижение агрегации тромбоц тов на данный индуктор у диабетных крыс и св детельствует о более выраженном повышен! чувствительности к инсулину под действием пт* лазида, что может приводить к повышению пр дукции N0 в тромбоцитах и индуцировать обр зование циклического гуанозинмонофосфа (цГМФ), блокирующего кальциевые каналы.
В ходе проведенного исследования бы. также обнаружено статистически значимое увег чение показателей вязкости крови в группе крьи СД по отношению к здоровым животным во вс< диапазоне скоростей сдвига (табл. 2).
ТАБЛИЦА 2
Влияние гликлазида на вязкость крови у крыс 1-й и 2 ■ серии при различных скоростях сдвига (М±т)
N п/п Гликлазид при однократном и 7-дневном введении Вязкость крови при различных скоростях сдвига сПз ИАЭ
200 с" 100 с" 20 с
1. Интактные крысы Контроль 3,45 ± 0,06 3,57 ± 0,09 4,85 ±0,07 1,40 ±0,
Гликлазид 3,34 ± 0,03 3,44 ± 0,02 4,53 ± 0,04* 1,35 ± 0
2. Диабетные крысы Контроль 3,78 ± 0,07 3,97 ± 0,09 6,33 ± 0,27 1,67 ± 0
Гликлазид 3,51 ± 0,09* 3,62 ± 0,06* 4,61 ± 0,03* 1,31 ±0
3. Интактные крысы (7дней) Контроль 3,50 ± 0,07 3,60 ± 0,07 4,87 ± 0,08 1,39 ± 0
Гликлазид 3,37 ± 0,02 3,47 ± 0,07 4,55 ± 0,05* 1,35 ±0
4. Диабетные крысы (7дней) Контроль 3,79 ±0,09 4,03 ± 0,09 6,24 ± 0,04 1,64 ± 0
Гликлазид 3,60 ± 0,08* 3,67 ± 0,07* 4,55 ± 0,11* 1,26 ± 0
* данные достоверны по отношению к конт
лю ( р < 0,05 ).
Так, при скоростях сдвига 200е1 данный I казатель в группе здоровых животных достовеЕ превышал величины контрольной группы на 9
что свидетельствует о способности эритроцитов к деформации.
Но следует отметить гораздо большие изменения вязкостных характеристик при низкой скорости сдвига (20е-1) — увеличение на 30 %. Это может свидетельствовать о выраженных нарушениях структуры и функции эритроцитарных мембран, а также активации процессов агрегатообра-зования. Данное предположение подтверждается достоверным увеличением индекса агрегации эритроцитов на 19 %. Гликлазид достоверно снижал вязкость крови при всех скоростях сдвига у крыс со стрептозотоциновым диабетом (табл. 2). Так при высоких скоростях сдвига (200е'1 и 100е-1) гликлазид достоверно снижал вязкость крови на 8 и 9 % соответственно, что указывает на его способность улучшать деф эрмабельность эритроцитов, При низкой скорости сдвига (20е"1) снижение вязкости относительно контрольных показателей составило 27,2 %.
Фибринолитическая активность крови животных с экспериментальным СД была понижена в 2,4 раза, наблюдалось уменьшение плазминовой активности и активности активаторов плазминоге-на в 3,4 и 2,1 раза соответственно по сравнению с интактными животными (табл. 3). Введение глик-лазида больным крысам приводило к активации фибринолитического процесса. При этом фибрино-литическая активность увеличивалась в 2,3 раза (р < 0,05), плазминовая активность возрастала в 3 раза, а активность активаторов плазминогена достоверно увеличивалась в 2,1 раза.
ТАБЛИЦА 3
Влияние гликлазида на фибринолитическую активность крови у крыс 1-й и 2-й серий (М± т)
№ n/n Гликлазид при однократном и семидневном введении Фибриноли- тическая активность, мм2 Плазминовая активность, мм2 Активность активаторов плазминогена, мм2
1. Интакт- ные крысы Контроль 27,00 ± 1,62 10,20 ±0,89 16,80 ± 1,47
Гликлазид 31,00 ±2,05 9,25 ± 0,55 21,75 ±2,59
2. Диабет- ные крысы Контроль 11,25 ±2,30 3,00 ± 1,15 7,92 ± 1,19
Гликлазид 26,00 ±6,16 9,00 ± 1,87* 17,00 ±4,41
3. Интакт-ные крысы (7 дней) Контроль 28,50 ± 3,86 9,00 ± 1,08 19,66 ± 1,78
Гликлазид 37,33 ± 1,18 10,33 ±0,72 23,66 ±2,41
4. Диабет-ные крысы (7 дней) Контроль 12,75 ± 1,10 4,50 ±0,64 7,75 ±0,94
Гликлазид 37,33 ± 1,18* 10,33 ±0,72* 10,33 ±0,72*
* данные достоверны по отношению к контролю (р < 0,05).
В связи с тем, что при СД проводится длительная гипогликемическая терапия, то представилось интересным оценить эффективность действия гликлазида на различные звенья гемостаза и его способность к образованию активных мета-
болитов при семидневном внутрижелудочном введении его лабораторным животным.
Как свидетельствуют результаты эксперимента, представленные в табл. 1 и 2, изменений в комплексе гемореологических параметров и влияния на агрегацию тромбоцитов как интактных, так и диабетных крыс при семидневном введении им гликлазида не наблюдалось по сравнению с однократным введением.
Что касается фибринолитической активности гликлазида при семидневном введении интактным и диабетным крысам (табл. 3), то она увеличивалась по сравнению с однократным введением.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенная серия экспериментов, а также анализ литературных данных и сопоставление их с результатами наших исследований позволяют заключить, что гликлазид улучшает реологические свойства и функциональную активность тромбоцитов крови. Снижение процессов активации и агрегации тромбоцитов под действием гликлазида уменьшает выделение в кровь тромбоцитарных факторов свертывания, которые являются пусковым моментом каскада свертывания крови. Кроме того, гликлазид обладает фибринолитической активностью, которая оказалась более выраженной при длительном введении гликлазида, что подтверждает образование его активных метаболитов [5]. Повышение фибринолитической активности было обусловлено увеличением активности активаторов плазминогена в крови и сосудистой стенке, улучшением возможности их освобождения, а также возрастанием активности плазмина. Существенное увеличение плазминовой активности позволяет предположить, что гликлазид или его метаболиты могут выступать в роли активатора, непосредственно превращая плазминоген в плазмин.
Таким образом, помимо гипогликемизирующих свойств, гликлазид воздействует на некоторые ключевые механизмы развития диабетической ангиопа-тии, предотвращая развитие или прогрессирование сосудистых осложнений сахарного диабета.
ЛИТЕРАТУРА
1. Викулов /1. Д., Осетров И. А. II Физиология человека.-2001,-№ 5.-С. 24-132.
2. Габбасов 3. А, Попов Е. Г., Гаврилов И. Ю. и др. II Лабораторное дело. —1989. — № 10.—С. 15—18.
3. Добровольский Н. А, Лопухин Ю, М., Парфенов А. С. и др, // Реологические исследования в медицине: сб, науч. тр. — М.: НЦХ РАМН, 1998.-С. 45-51.
4. Меньшиков В. В„ Делекторская Л, Н„ Золотницкая Р. П. и др. II Лабораторные методы исследования в клинике. — М,: Медицина, 1987, —368 с.
5. Новикова Ю. В., Рунихин А. Ю. II Русский медицинский журнал,-2007. -Т. 15, № .27.-С, 2060-2070.
6. Siluk D., Kaliszan R., Haber Р., et al. II Diabetologia. — 2002.-№ 45.-P. 1034-1037,
