CC BY
56
УДК 615.324:616-002
ВЛИЯНИЕ ГИСТОХРОМА НА ЭКССУДАТИВНУЮ И ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ ФАЗЫ ЭКСПЕРМЕНТАЛЬНОГО ВОСПАЛЕНИЯ
Ольга Сергеевна ТАЛАЛАЕВА1, Наталья Петровна МИЩЕНКО2, Валерий Михайлович БРЮХАНОВ1, Яков Федорович ЗВЕРЕВ1, Сергей Александрович ФЕДОРЕЕВ2, Вячеслав Витальевич ЛАМПАТОВ1, Александр Юрьевич ЖАРИКОВ1
1 ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 40
2 Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН 690022, г. Владивосток, пр. 100 лет Владивостоку, 159
В опытах in vivo изучено влияние длительного введения препарата гистохром на разные стадии процесса воспаления. Антиэкссудативное действие изучали на модели острого воспалительного отека лапы крысы, индуцированного введением под плантарный апоневроз правой задней конечности животного 0,1 мл 1%о-го раствора каррагинана, влияние на течение пролиферативной фазы воспаления - на модели хлопчатобумажной гранулемы. Животным подопытных групп в течение 12 дней подкожно вводили гистохром в дозе 10 мг/кг. Контрольные крысы получали эквиобъемные количества воды. Экспериментально показано, что превентивное применение 10 мг/кг гистохрома подавляло формирование воспалительного отека лапы крыс на 58,5 % уже через час после введения каррагинана. Антиэкссудативное действие препарата сохранялось на высоком уровне в течение двух часов эксперимента и несколько ослабевало к концу периода наблюдения. Выявленный эффект гистохрома сопоставим с действием ряда классических нестероидных противовоспалительных средств, и может быть обусловлен его вмешательством в пусковые механизмы воспалительного процесса. Пролиферативную фазу воспаления гистохром не угнетает и, таким образом, не оказывает существенного влияния на течение хронического воспалительного процесса.
Ключевые слова: гистохром, противовоспалительное действие.
В последние десятилетия большое внимание уделяется созданию лекарственных препаратов на основе веществ природного происхождения. Интерес к таким соединениям обусловлен их относительно высокой биологической активностью и низкой токсичностью для организма человека. Выявление и экспериментальное обоснование новых свойств природных эффекторов является важным звеном фармакологических исследований.
С этих позиций перспективным соединением представляется хиноидный пигмент морских беспозвоночных эхинохром (2,3,5,6,8-пентагид-роксил-7-этил-1,4-нафтахинон). При изучении физико-химических свойств этого спинохрома было установлено, что, блокируя различные
свободнорадикальные реакции, эхинохром оказывает мощный антиоксидантный эффект. В Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН была разработана водорастворимая лекарственная форма эхинохрома — гистохром. Гистохром дал возможность активной молекуле проникать непосредственно к клеточной мишени, открывая новые возможности для лечения целого ряда заболеваний [1-3]. В частности, клинические испытания препарата в ведущих кардиологических учреждениях страны выявили его выраженный терапевтический эффект при ишемической болезни сердца и остром инфаркте миокарда [1, 3-5].
Вместе с тем опыт применения гистохрома в офтальмологической практике показал, что
Талалаева О.С. - к.м.н., ассистент кафедры фармакологии, е-шаИ: talalaeva_olga@mail.ru Мищенко Н.П. - к.х.н., ведущий научный сотрудник, е-mail: mischenkonp@mail.ru Брюханов В.М. - д.м.н., проф., ректор
Зверев Я.Ф. - д.м.н., проф. кафедры фармакологии, е-mail: zver@asmu.ru Федореев С.А. - д.х.н., зав. лабораторией Лампатов В.В. - д.б.н., проф. кафедры фармакологии Жариков А.Ю. - к.б.н., доцент кафедры фармакологии
препарат не только стимулирует репаративные и метаболические процессы в структурах глаза, но и способствует рассасыванию гемофтальмов различной локализации, уменьшает отек стро-мы роговицы и сетчатки. Более того, был выявлен выраженный терапевтический эффект гистохрома при комплексном лечении ряда воспалительных заболеваний глаз [2, 3, 6, 7].
Это позволило нам предположить наличие возможного противовоспалительного действия гистохрома, и целью данного исследования стало изучение влияния гистохрома на экссуда-тивную и пролиферативную фазы воспаления.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В экспериментах использовали препарат «Гистохром, раствор для внутривенного введения 1 %» (Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, г. Владивосток).
Для оценки противовоспалительной активности гистохрома определяли его влияние на разные стадии процесса воспаления [8, 9]. Эксперименты выполнены на крысах линии Wistar массой 180-210 г. Режим дозирования и схема введения гистохрома подопытным животным основаны на традиционных методах применения растительных противовоспалительных средств, так как эхинохром представляет собой вещество природного происхождения. При этом были учтены особенности курсового применения гистохрома в практической медицине.
Антиэкссудативное действие изучали на модели острого воспалительного отека лапы крысы, индуцированного введением под план-тарный апоневроз правой задней конечности животного 0,1 мл 1%-го раствора каррагинана. Предварительно подопытным животным в течение 12 дней подкожно вводили гистохром в дозе 10 мг/кг (п = 16). Измерение объема правой задней конечности проводили с помощью плетизмометра через 60, 120 и 240 минут после введения флогистика. Животные контрольной группы на протяжении 12 дней вместо препарата получали эквиобъемное количество воды (п = 18). На основании данных среднего прироста объема конечности животных, полученных в результате трех параллельных измерений, рассчитывали степень противовоспалительной активности (X) по формуле: X = ((Рк - Ро)/Рк) х х 100 %, где Рк - средний прирост объема конечности в контроле, Р0 - средний прирост объема конечности в опыте. Если величина X превышает 30 %, то, как принято считать, препарат обладает выраженным противовоспалительным действием.
Влияние гистохрома на течение пролифе-ративной фазы воспаления изучали на модели хлопчатобумажной гранулемы. Наркотизированным крысам в асептических условиях имплантировали стерильные хлопчатобумажные тампоны массой 20 мг. Ежедневно, начиная со дня операции, на протяжении 12 дней прооперированные животные подопытной группы получали гистохром в дозе 10 мг/кг подкожно (п = 18). Контрольные крысы получали эквиобъемные количества воды (п = 18). По окончании курса введения препарата марлевые имплантанты с образовавшейся вокруг них грануляционной тканью извлекали и определяли массу влажной и высушенной до постоянной массы гранулемы. Массу грануляционно-фиброзной ткани определяли по разнице между массой образовавшейся гранулемы и массой марлевого имплантанта (20 мг). Разницу между влажной и сухой массами гранулемы оценивали как экссудативный компонент воспалительной реакции [9].
Умерщвление подопытных животных производили передозировкой эфирного наркоза с соблюдением требований Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных или иных научных целей (Страсбург, 1986 г.), и в соответствии с Федеральным законом Российской Федерации «О защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997.
Полученные результаты подвергали статистической обработке методом вариационных рядов, вычисляли среднее арифметическое значение (М), ошибку среднего арифметического значения (т) и представляли в виде М ± т. Различия между группами оценивали с помощью критерия Стъюдента, достоверными считали результаты при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Экспериментально установлено, что уже через 60 мин после введения каррагинана объем конечности в контрольной группе крыс увеличился на 0,53±0,061 см3 (р < 0,001) (табл. 1). При этом максимальный объем лапы определялся через 4 ч после введения флогистика. Так, если исходный объем конечности контрольных животных составлял в среднем 1,31±0,038 см3, то к концу периода наблюдения этот показатель возрастал почти в 1,7 раза, составив 2,39±0,037 см3 (р < 0,001). В этих условиях превентивное применение гистохрома существенно подавляло формирование воспалительного отека лапы крыс. Из табл. 1 видно, что эффект препарата достигал максимума уже через 1 ч после инъек-
Таблица 1
Влияние длительного введения гистохрома на формирование каррагинанового отека
правой задней конечности крыс
Время после инъекции каррагинана, ч Показатель Контроль Гистохром
1 Прирост, см3 Противовоспалительная активность, % 0,53 ± 0,061* 0,22 ± 0,031* 58,5
2 Прирост, см3 Противовоспалительная активность, % 0,85 ± 0,046* 0,41 ± 0,054* 51,8
4 Прирост, см3 Противовоспалительная активность, % 1,08 ± 0,046* 0,80 ± 0,076* 25,9
Примечание: Звездочкой обозначены достоверные отличия от величины исходных показателей соответствующей группы; подчеркнуты цифры, отражающие выраженную противовоспалительную активность.
ции каррагинана, когда его антиэкссудативная активность составила 58,5 %. Интересно, что выявленный эффект гистохрома сопоставим с действием таких классических нестероидных противовоспалительных средств, как ацетилсалициловая кислота или диклофенак [10-12]. Антиэкссудативное действие гистохрома сохранялось на высоком уровне в течение двух часов эксперимента, а затем несколько ослабевало.
Известно, что процесс формирования карра-гинанового отека в течение первого часа связан с дегрануляцией тучных клеток и высвобождением таких медиаторов воспаления, как гиста-мин и серотонин. В последующие 60 мин фло-гогенный эффект поддерживается накапливающимся в очаге воспаления брадикинином, а после этого - простагландинами типа Е [13]. Учитывая эффективность гистохрома в период энергичного нарастания отека, можно предположить его вмешательство в пусковые механизмы воспалительного процесса. Не исключено, что препарат не только угнетает сосудистый компонент воспаления, но, стабилизируя мембраны тучных клеток, препятствует их дегрануляции.
При изучении антипролиферативных свойств установлено, что в данных экспериментальных условиях гистохром не оказывал существенного влияния на пролиферативный компонент воспаления, хотя во всех экспериментах выявлена тенденция к ослаблению воспалительной реакции. Из табл. 2 видно, что
Таблица 2
Влияние длительного введения гистохрома на формирование хлопчатобумажной гранулемы у крыс
масса сухой и влажной воспалительной гранулемы, равно как и разность между ними, достоверно не отличались от таковой у контрольной группы животных, не получавших гистохром.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, обнаруженное в эксперименте угнетение экссудативной стадии воспаления под действием гистохрома указывает на его эффективность при остром воспалении и является предпосылкой для расширения терапевтического использования препарата. В частности, превентивное применение гистохрома может стать полезным в процессе фармакологической подготовки больных перед хирургическим вмешательством для профилактики послеоперационного асептического воспаления. Превентивное введение нестероидных противовоспалительных средств с этой целью ограничивают их многочисленные побочные эффекты.
Вместе с тем отсутствие эффекта на проли-феративную фазу воспаления позволяет заключить, что в данных экспериментальных условиях гистохром не оказывает существенного влияния на течение хронического воспалительного процесса.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Пат. 2137472 РФ. Лекарственный препарат «Гистохром» для лечения острого инфаркта миокарда и ишемической болезни сердца / Г. Б. Еля-ков, О.Б. Максимов, Н.П. Мищенко и др.; опубл. 20.09.1999.
2. Пат. 2134107 РФ. Препарат «Гистохром» для лечения воспалительных заболеваний сетчатки и роговицы глаз / Г.Б. Еляков, О.Б. Максимов, Н.П. Мищенко и др.; опубл.10.08.1999.
3. Мищенко Н.П., Федореев С.А., Догадо-ва Л. П. Препарат гистохром для офтальмологии // Вестн. ДВО РАН. 2004. (3). 111-119.
Показатель Контроль Гистохром
Влажная масса, мг 94 ± 5,8 82 ± 3,7
Сухая масса, мг 14,9 ± 1,07 12,6 ± 0,92
Разность, мг 79 ± 4,8 69 ± 3,1
4. Закирова А.Н., Иванова М.В., Голубятников В.Б. и др. Фармакокинетика и клиническая эффективность гистохрома у больных острым инфарктом миокарда // Эксперим. клин. фармакол. 1997. 60. (4). 21-24.
5. Закирова А.Н., Лебедев А.В., Кухарчук В.В. и др. Антиоксидант гистохром: влияние на перекис-ное окисление липидов и реологические свойства крови у больных нестабильной стенокардией // Тер. архив. 1996. (8). 12-14.
6. Красногорская В.Н., Басинский С.Н., Басин-ский А.С. Клинические результаты применения трансхориоидального введения гистохрома при лечении дистрофических заболеваний сетчатки // Рус. мед. журн. 2007. 8. (1). 3-5.
7. Полунин Г.С., Воробьева О.К., Макашова Н. В. и др. Опыт применения препарата гистохром в офтальмологической практике // Рефракц. хирургия офтальмол. 2003. 3. (2). 23-28.
8. Тихомирова С.В., Брюханов В.М., Зверев Я. Ф. и др. Антиоксидантное действие сбора
лекарственных растений, применяемого при экспериментальном гломерулонефрите // Нефрология. 2004. 8. (2). 155-156.
9. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2005. 832 с.
10. Кац Д.В., Егоров А.Е., Егорова Т.Е. Противовоспалительный эффект 0,1% раствора дикло-фенака натрия при лазерных офтальмологических вмешательствах у пациентов с глаукомой // Рус. мед. журн. 2008. 9. (2). 57-61.
11. Мазуров В.И., Якушева В.А. Диклофенак натрия в терапевтической практике // Рус. мед. журн. 2004. 12. (12). 712-715.
12. Насонов Е.Л. Нестероидные противовоспалительные препараты // Рус. мед. журн. 1999. 7. (8). 9-12.
13. Дыгай А.М., Клименко Н.А. Воспаление и гемопоэз. Томск, 1992. 276 с.
THE INFLUENCE OF HISTOCHROME ON EXUDATIVE AND PROLIFERATIVE PHASES OF THE EXPERIMENTAL INFLAMMATION
Olga Sergeevna TALALAEVA1, Natalia Petrovna MISHCHENKO2, Valery Mikhajlovich BRYUKHANOV1, Yakov Fjodorovich ZVEREV1, Sergey Aleksandrovich FEDOREYEV2, Vjacheslav Vitalevich LAMPATOV1, Aleksandr Yurevich ZHARIKOV1
1Altai State Medical University of Roszdrav, 656038, Barnaul, Lenin av., 40
2Pacific ocean s Institute of Bioorganic Chemistry FWB RAN 690022, Vladivostok, 100years of Vladivostok av., 159
In experiences in vivo influence of long introduction of a preparation histochrom on different stages of process of an inflammation was investigated. Antiexudative action was studied on model of a sharp inflammatory hypostasis of a paw of the rat, induced by introduction under plantar aponeurosis the right back finiteness with animal 0.1 ml of 1 % carrageenan solution. The histochrome's effect on current proliferative phases of an inflammation was studied on model cotton granulomas. Animal of experimental groups within 12 days hypodermically entered histochrom in a doze of 10 mg/kg. Control rats received the same quantities of water. It was experimentally shown, that preliminary application of 10 mg/kg histochrom suppressed formation of an inflammatory hypostasis of a paw of rats on 58.5 % in one hour after carrageenan injection. Antiexudative action of the preparation was kept at a high level within two hours of experiment and weakened by the end of the period of supervision a little. The revealed effect of histochrom is comparable with the action of some classical nonsteroid anti-inflammatory agents, and can be caused by his intervention in starting mechanisms of inflammatory process. Proliferative phase of an inflammation by histochrom does not oppress and, thus, does not render essential influence on current of chronic inflammatory process.
Key words: histochrome, antiinflammatory action.
Talalaeva O.S. - candidate of medical sciences, assistant of the chair ofpharmacology, e-mail: talalaeva_olga@mail.ru
Mishchenko N.P. - candidate of chemical sciences, e-mail: mischenkonp@mail.ru Bryukhanov V.M. - doctor of medical sciences, professor, rector
Zverev Ya.F. - doctor of medical science, professor of the chair for pharmacology, e-mail: zver@asmu.ru
Fedoreyev S.A. - doctor of chemical sciences, head of the laboratory
Lampatov V.V. - doctor of biological sciences, professor of the chair for pharmacology
Zharikov A.Yu. - candidate of biological sciences, assistant professor of the chair for pharmacology
