Научная статья на тему 'Влияние геотермальной воды в составе твердых сред культивирования на морфологические свойства дрожжей рода Saccharomyces'

Влияние геотермальной воды в составе твердых сред культивирования на морфологические свойства дрожжей рода Saccharomyces Текст научной статьи по специальности «Химические технологии»

CC BY
6
6
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
геотермальная вода / штаммы Saccharomyces / морфология / клетки / гигантские колонии / geothermal water / Saccharomyces strains / morphology / cells / giant colonies

Аннотация научной статьи по химическим технологиям, автор научной работы — Исламмагомедова Эльвира Ахмедовна, Халилова Эсланда Абдурахмановна, Абакарова Аида Алевдиновна

Исследовано влияние геотермальных вод, расположенных на территории г. Махачкалы (Республика Дагестан), в составе твердых сред культивирования на культурально-морфологические особенности дрожжей рода Saccharomyces. Установлены изменения свойств клеток и формирование специфических параметров гигантских колоний дрожжей S. cerevisiae Y-503, S. cerevisiae DAW-3a, S. oviformis М-12х. Для сред YPD и PD в результате серии экспериментов подобраны оптимальные варианты, содержащие геотермальную и дистиллированную воду в соотношении 1:1 (скважина № 36) и 2:1 (скважина № 26). Показано, что оптимальной для роста дрожжей являлась среда YPD, при этом в популяции тетраплоидного штамма Y-503 средний размер клеток был несколько больше клеток штамма М-12х и значительно превышал показатели DAW-3a. Установлено, что использование в среде культивирования разбавленной воды из скважины № 36 наиболее эффективно и приводит к ускоренному росту дрожжевых колоний. В варианте геотермальная / дистиллированная вода данный показатель превышал контроль в 1,3 (Y-503, М-12х) раза; в варианте с геотермальной водой без разбавления – в 1,6 (Y-503) и 1,4 (М-12х) раза. Для клеток штамма S. cerevisiae Y-503 независимо от используемой среды характерно наличие различных, в том числе удлиненных, форм; DAW-3a – исключительно округлой; S. oviformis М-12х – округлых и овальных форм. Сравнительный анализ параметров колоний показал, что для всех вариантов характерна округлая форма, радиально исчерченная поверхность; плоский, с выпуклым центром профиль; светло-бежевый цвет и пастообразная, мажущаяся структура. В результате наших исследований разработана модифицированная питатель-ная среда PD-агар для выращивания дрожжей, содержащая в качестве дополнительного источника минеральных и органических соединений геотермальную воду из скважины № 36 Махачкалинского месторождения. Предложенный состав среды представляет интерес для дальнейшего использования ее в микробиологических исследованиях.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по химическим технологиям , автор научной работы — Исламмагомедова Эльвира Ахмедовна, Халилова Эсланда Абдурахмановна, Абакарова Аида Алевдиновна

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Influence of Geothermal Water in the Composition of Solid Cultivation Media on the Morphological Properties of the Yeast Genus Saccharomyces

The influence of geothermal waters located on the territory of the city of Makhachkala (Republic of Dagestan), in the composition of solid cultivation media, on the cultural and morphological features of genus Saccharomyces yeast was studied. Changes in cell properties and the formation of specific parameters of giant yeast colonies S. cerevisiae Y-503, S. cerevisiae DAW-3a, S. oviformis M-12x have been established. For YPD and PD media, as a result of a series of experiments, optimal options were selected containing geothermal and distilled water in a ratio of 1:1 (well No. 36) and 2:1 (well No. 26). It was shown that the YPD medium was optimal for yeast growth, while in the population of the tetraploid Y-503 strain, the average cell size was slightly larger than cell strain M-12x and significantly exceeded the DAW-3a values. Installed that the use of diluted water from well No. 36 in the cultivation medium is most effective and leads to accelerated growth of yeast colonies. In the variant geothermal / distilled water, this indicator exceeded the control by 1.3 (Y-503, M-12x) times; in the variant with geothermal water without dilution by 1.6 (Y-503) and 1.4 (M-12x) times. The cells of the S. cerevisiae Y-503 strain, regardless of the medium used, are characterized by the presence of various forms, including elongated ones; DAW-3a exceptionally rounded; S. oviformis M-12x rounded and oval shapes. A comparative analysis of the parameters of the colonies showed that all variants are characterized by a rounded shape, a radially striated surface; flat, with a convex center profile; light beige color and pasty, spreadable texture. As a result of our research, a modified nutrient medium PD has been developed an agar for growing yeast, containing geothermal water from well No. 36 of the Makhachkala field as an additional source of mineral and organic compounds. The proposed composition of the medium is of interest for its further use in microbiological studies.

Текст научной работы на тему «Влияние геотермальной воды в составе твердых сред культивирования на морфологические свойства дрожжей рода Saccharomyces»

ISSN 1026-2237 BULLETIN OF HIGHER EDUCATIONAL INSTITUTIONS. NORTH CAUCASUS REGION. NATURAL SCIENCE. 2024. No. 1

Научная статья

УДК 663.125/663.252.4

doi: 10.18522/1026-2237-2024-1-141-150

ВЛИЯНИЕ ГЕОТЕРМАЛЬНОЙ ВОДЫ В СОСТАВЕ ТВЕРДЫХ СРЕД КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ДРОЖЖЕЙ

РОДА 8А ССИАЯОМУСЕ8

Эльвира Ахмедовна Исламмагомедова1^, Эсланда Абдурахмановна Халилова2, Аида Алевдиновна Абакарова3

1:2, з Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского федерального исследовательского центра РАН, Махачкала, Россия

1 islammagomedova@mail.ruB

2 eslanda61 @mail. ru

3 aida. abacarva@rambler. ru

Аннотация. Исследовано влияние геотермальных вод, расположенных на территории г. Махачкалы (Республика Дагестан), в составе твердых сред культивирования на культурально-морфологи-ческие особенности дрожжей рода Saccharomyces. Установлены изменения свойств клеток и формирование специфических параметров гигантских колоний дрожжей S. cerevisiae Y-503, S. cerevisiae DAW-3a, S. oviformis М-12х. Для сред YPD и PD в результате серии экспериментов подобраны оптимальные варианты, содержащие геотермальную и дистиллированную воду в соотношении 1:1 (скважина № 36) и 2:1 (скважина № 26). Показано, что оптимальной для роста дрожжей являлась среда YPD, при этом в популяции тетраплоидного штамма Y-503 средний размер клеток был несколько больше клеток штамма М-12х и значительно превышал показатели DA W-3a. Установлено, что использование в среде культивирования разбавленной воды из скважины № 36 наиболее эффективно и приводит к ускоренному росту дрожжевых колоний. В варианте геотермальная / дистиллированная вода данный показатель превышал контроль в 1,3 (Y-503, М-12х) раза; в варианте с геотермальной водой без разбавления - в 1,6 (Y-503) и 1,4 (М-12х) раза. Для клеток штамма S. cerevisiae Y-503 независимо от используемой среды характерно наличие различных, в том числе удлиненных, форм; DAW-3a - исключительно округлой; S. oviformis М-12х - округлых и овальных форм. Сравнительный анализ параметров колоний показал, что для всех вариантов характерна округлая форма, радиально исчерченная поверхность; плоский, с выпуклым центром профиль; светло -бежевый цвет и пастообразная, мажущаяся структура. В результате наших исследований разработана модифицированная питательная среда PD-агар для выращивания дрожжей, содержащая в качестве дополнительного источника минеральных и органических соединений геотермальную воду из скважины № 36Махачкалинского месторождения. Предложенный состав среды представляет интерес для дальнейшего использования ее в микробиологических исследованиях.

Ключевые слова: геотермальная вода, штаммы Saccharomyces, морфология, клетки, гигантские колонии

Для цитирования: Исламмагомедова Э.А., Халилова Э.А., Абакарова А.А. Влияние геотермальной воды в составе твердых сред культивирования на морфологические свойства дрожжей рода Saccharomyces // Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион. Естеств. науки. 2024. № 1. С. 141-150.

Статья опубликована на условиях лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International (CC-BY 4.0).

© Исламмагомедова Э.А., Халилова Э.А., Абакарова А.А., 2024

ISSN 1026-2237 BULLETIN OF HIGHER EDUCATIONAL INSTITUTIONS. NORTH CAUCASUS REGION. NATURAL SCIENCE. 2024. No. 1

Original article

INFLUENCE OF GEOTHERMAL WATER IN THE COMPOSITION OF SOLID CULTIVATION MEDIA ON THE MORPHOLOGICAL PROPERTIES OF THE YEAST GENUS SACCHAROMYCES

Elvira A. Islammagomedova1B, Eslanda A. Khalilova2, Aida A. Abakarova3

1:2,3 Са^'ргап Institute of Biological Resources, Dagestan Federal Research Center, Russian Academy of Sciences, Makhachkala, Russia

1 islammagomedova@mail.ruB

2 eslanda61 @mail.ru

3 aida.abacarva@rambler.ru

Abstract. The influence of geothermal waters located on the territory of the city of Makhachkala (Republic of Dagestan), in the composition of solid cultivation media, on the cultural and morphological features of genus Saccharomyces yeast was studied. Changes in cell properties and the formation of specific parameters of giant yeast colonies S. cerevisiae Y-503, S. cerevisiae DA W-3a, S. oviformis M-12x have been established. For YPD and PD media, as a result of a series of experiments, optimal options were selected containing geothermal and distilled water in a ratio of 1:1 (well No. 36) and 2:1 (well No. 26). It was shown that the YPD medium was optimal for yeast growth, while in the population of the tetraploid Y-503 strain, the average cell size was slightly larger than cell strain M-12x and significantly exceeded the DA W-3a values. Installed that the use of diluted water from well No. 36 in the cultivation medium is most effective and leads to accelerated growth of yeast colonies. In the variant geothermal / distilled water, this indicator exceeded the control by 1.3 (Y-503, M-12x) times; in the variant with geothermal water without dilution - by 1.6 (Y-503) and 1.4 (M-12x) times. The cells of the S. cerevisiae Y-503 strain, regardless of the medium used, are characterized by the presence of various forms, including elongated ones; DA W-3a - exceptionally rounded; S. oviformis M-12x - rounded and oval shapes. A comparative analysis of the parameters of the colonies showed that all variants are characterized by a rounded shape, a radially striated surface; flat, with a convex center profile; light beige color and pasty, spreadable texture. As a result of our research, a modified nutrient medium PD has been developed - an agar for growing yeast, containing geothermal water from well No. 36 of the Makhachkala field as an additional source of mineral and organic compounds. The proposed composition of the medium is of interest for its further use in microbiological studies.

Keywords: geothermal water, Saccharomyces strains, morphology, cells, giant colonies

For citation: Islammagomedova E.A., Khalilova E.A., Abakarova A.A. Influence of Geothermal Water in the Composition of Solid Cultivation Media on the Morphological Properties of the Yeast Genus Saccharomyces. Bulletin of Higher Educational Institutions. North Caucasus Region. Natural Science. 2024;(1):141-150. (In Russ.).

This is an open access article distributed under the terms of Creative Commons Attribution 4.0 International License (CC-BY4.0).

Использование возобновляемых ресурсов в различных биотехнологиях, в частности, применение экологически безопасных геотермальных вод, в настоящее время вызывает большой интерес. Дагестан, обладающий большими запасами подземных вод, является одним из перспективных регионов России для их промышленного освоения. Изучение механизма влияния геотермальной воды в составе среды культивирования на метаболизм дрожжей имеет важное значение для поиска стрессоустойчивых штаммов. Способность микроорганизмов изменять метаболизм в различных условиях, а также определенная концентрация органических и минеральных компонентов в составе мелассной среды культивирования послужили основанием для использования геотермальных вод в качестве дополнительного источника питания дрожжевой клетки. Было создано новое научное направление, разработаны технологии производства прессованных и сушеных хлебопекарных дрожжей, хлебобулочной продукции и биосинтеза этанола [1-4]. Биохимические преобразования, происходящие в различных условиях культивирования дрожжей, оказывают влияние на их морфологические свойства. Характеристика гигантских колоний, формиро-

вание которых зависит от определенных индивидуальных свойств клеток и состава среды выращивания, является параметром, по которому можно рассматривать и оценивать морфологию рода Saccharomyces [5-7]. Известно, что одним из механизмов адаптации рода Saccharomyces является полиплоидия, обеспечивающая в условиях стресса некоторое преимущество, поэтому генетически предопределенные специфические особенности дрожжей представляют интерес как для научных исследований, так и поиска штаммов, толерантных к экстремальным условиям и используемых в биотехнологических процессах [8, 9]. Ранее было исследовано влияние различных значений температуры, рН, NaCl, этанола и глюкозы в составе твердых сред культивирования на морфологические особенности клеток и гигантских колоний тетраплоида S. cerevisiae Y-503 и гаплоида DAW-За [10]. Определенный интерес представляет использование в исследованиях стрессоустойчивого винного штамма S. oviformis М-12х, полученного в результате мутагенного действия холода сверхнизких температур [2, 4].

Цель работы - изучение влияния геотермальной воды в составе твердых сред культивирования на морфологические особенности клеток и гигантских колоний дрожжей рода Saccharomyces.

Объекты исследования: S. cerevisiae Y-503 [11]; S. cerevisiae DAW-3a, потомок линии штамма Y-503 [12]; S. oviformis М-12х [13]. В данной работе использовалась среднеминерализо-ванная, пресная, бесцветная, без запаха, со слабощелочной реакцией среды вода из скважин № 26 (координаты 42°58'34" с. ш. и 47°30'08" в. д.) и 36 (координаты 42°58'31" с. ш. и 47°30'08" в. д.), расположенных на территории г. Махачкалы (Республика Дагестан). Критерием для их отбора служили минерализация и отсутствие радиоактивности. Культивирование осуществляли в чашках Петри при температуре 30 °С; pH 4,5 в течение 10 и 20 сут. Для выращивания гигантских колоний использовались питательные среды: YPD-агар (дрожжевой экстракт - 0,5 % (BD, США), пептон - 0,5 % (BD, США), глюкоза (D-глюкоза) - 2,0 % (Merk, Германия), агар-агар -2,5 % (Difco, Нидерланды)) и PD-агар, содержащий все перечисленные выше компоненты, кроме дрожжевого экстракта. Эти варианты служили контролем. Модифицированные варианты сред готовили на основе PD-агара и геотермальной воды различной концентрации из скважин № 36 и 26. Морфологию клеток (величина, формы, способ вегетативного размножения) изучали с помощью светового микроскопа при увеличении х 600. Основными критериями для определения морфологического типа колоний служили размер, форма, поверхность, профиль, цвет и консистенция. Окраску клеток проводили с использованием карболового фуксина Циля для обнаружения в протоплазме метахроматина, раствора судана (Судан III) - для окрашивания липидов, раствора Люголя - для выявления гликогена. В работе применялись приборы: инкубатор микробиологический BINDERBF 115 (Германия), бокс ламинарный ВЛ-12 1000 (Россия), микроскоп CX21 (Olympus, Япония), цифровая фотокамера Canon Pover Shot A 640 (Япония), автоклав Tuttnauer 2540 (Израиль), весы аналитические DV215CD (Ohaus Discovery, Швейцария), шкаф сушильный SNOL 67/350 (Utenos, Литва), pH-метр «Анион-4100» («Анион», Россия).

Статистическую обработку результатов проводили методом малой выборки с вычислением средних арифметических значений и среднестатистических ошибок.

Эксперименты

Среды YPD- и PD-агар; геотермальная вода из скважин № 26 и 36; гигантские колонии штаммов S. cerevisiae Y-503, DAW-За, S. oviformis М-12х (10 сут).

В работах [1, 4] нами была использована наиболее приемлемая концентрация геотермальной воды в составе жидкой среды культивирования дрожжей. Для твердых сред YPD- и PD-агар в результате серии экспериментов подобраны оптимальные варианты, содержащие геотермальную и дистиллированную воду в соотношении 1:1 (скважина № 36) и 2:1 (скважина № 26) (табл. 1).

Морфометрический анализ показал, что формы клеток исследуемых штаммов дрожжей при культивировании на контрольных вариантах твердых сред обладали характерной особенностью (рис. 1).

Известно, что форма полиплоидных дрожжевых клеток благодаря организации цитоскелета близка к эллиптической. Установлено, что в среде YPD форма клеток тетраплоидного штамма Y-503 в основном овальная и яйцевидная, в меньшем количестве - овально-округлая и удлиненная; клетки штамма М-12х - округлые, небольшое количество - округло-овальные и удлиненные; штамма DAW-3a - округлые (рис. 1а).

Таблица 1 / Table 1

Состав сред для культивирования дрожжей / The composition of media for the cultivation of yeast

Вариант Среда Состав среды Концентрация компонентов

К1 УPD-агар, дистиллированная вода (контроль:) Дрожжевой экстракт (У), пептон (Р), Д-глюкоза (D), дистиллированная вода У - 0,5 % Р - 0,5 % D - 2,0 %

К2 PD-агар, дистиллированная вода (контроль2) Пептон (Р), Д-глюкоза (Б), дистиллированная вода Р - 0,5 % D - 2,0 %

О1 PD-агар, геотермальная вода (скважина № 36) (опыт!) Пептон (Р) Д-глюкоза (Б), геотермальная вода (№ 36), Мб,5С150 80435 (НСОз15 ) № 97 Т560 рН 7,4 Р - 0,5 % D - 2,0 % № 36 - без разбавления

О2 PD-агар, геотермальная вода (скважина № 36) (опыт2) Пептон (Р), Д-глюкоза (D), геотермальная вода (№ 36) Р - 0,5 % D - 2,0 % № 36 - разбавление 1:1

О3 PD-агар, геотермальная вода (скважина № 26) (опытз) Пептон (Р), Д-глюкоза (Б), геотермальная вода (№ 26), М5,280446С1 29 НС0з25 № 98 Т540рН 7,7 Р - 0,5 % D - 2,0 % № 26 - без разбавления

О4 PD-агар, геотермальная вода (скважина № 26) (опьпч) Пептон (Р), Д-глюкоза (Б), геотермальная вода (№ 26) Р - 0,5 % D - 2,0 % № 26 - разбавление 2:1

Y-503 M-12x DAW-3a

6/b

Рис. 1. Морфологические параметры клеток штаммов S. cerevisiae Y-503 и DAW-3a, S. oviformis М-12х при выращивании в контрольных твердых средах: а - YPD-агар (Ki); б - PD-агар (К2) / Fig. 1. Morphological parameters of cells of strains S. cerevisiae Y-503 and DAW-3a, S. oviformis M-12x when grown on control solid media: a - YPD-agar (K1); b - PD-agar (K2)

ISSN 1026-2237 BULLETINOFHIGHEREDUCATIONALINSTITUTIONS. NORTHCAUCASUSREGION. NATURAL SCIENCE. 2024. No. 1

В контрольной среде PD появились клетки Y-503 округлой формы; наблюдались преимущественно овальные клетки М-12х; DAW-3a отличался округлой формой (рис. 1б). Обнаружено, что морфологические параметры клеток дрожжей тесно связаны с их функциональным состоянием. Так, в условиях культивирования на твердых средах с использованием геотермальной воды дрожжи испытывали определенный стресс. Происходили специфические изменения формы клеток штамма S. cerevisiae Y-503 - характерна не только удлиненная форма в отличие от штамма DAW-3a, но и увеличение их количества (рис. 2).

Рис. 2. Морфологические параметры клеток S. cerevisiae Y-503 и DAW-За, S. oviformis М-12х при выращивании в опытных средах PD-агар с использованием геотермальной воды: а - скважина № 36, без разбавления; б - скважина № 36, разбавление 1:1; в - скважина № 26, без разбавления; г - скважина № 26, разбавление 2:1 / Fig. 2. Morphological parameters of S. cerevisiae Y-503 and DAW-3a, S. oviformis M-12x cells grown on experimental PD-agar media using geothermal water: a - well No. 36, without dilution; b - well No. 36, dilution 1:1; c - well No. 26, without dilution; d - well No. 26, dilution 2:1

В данных условиях клетки М-12х имели как округлую, так и овальную форму. Для клеток гаплоидного штамма DAW-3a характерна округлая форма независимо от среды. Важным параметром, который влияет на репродуктивный потенциал дрожжей и регулируется различными факторами, является размер клеток (табл. 2).

Показано, что оптимальной для роста дрожжей являлась среда YPD, при этом в популяции тетраплоидного штамма Y-503 средний размер клеток был несколько больше клеток штамма М-12х и значительно превышал показатели DAW-3a. При культивировании на средах PD с использованием геотермальной воды наблюдалось незначительное уменьшение средних размеров клеток, при этом отмечается разнообразие размеров клеток штамма Y-503 и достаточная однородность клеток - штаммов М-12х и DAW-3a. Во всех вариантах выявлено накопление запасных питательных веществ (включения гликогена и метахроматина, имеющего вид компактной массы; вкрапления липидных гранул) и почкующиеся клетки в небольшом количестве (до 1,5 %).

Таблица 2 / Table 2

Размеры клеток дрожжей S. cerevisiae Y-503 и DAW-3а, S. oviformis М-12х в зависимости от состава среды культивирования, мкм / The size of yeast cells S. cerevisiae Y-503 and DAW-3a, S. oviformis M-12x depending on the composition of cultivation medium, mkm

Штамм

Среда Y-503 М-12х DAW-3a

Размер клетки

YPD-агар (контроль^ 7x5+0,4; 6x6+0,4; 5x5+0,4;

6x5+0,4; 5x5+0,4; 4x4+0,4

8x4+0,4 8x4+0,4

PD-агар (контроле) 7x5+0,4; 7x5+0,4; 5x5+0,4;

5x5+0,3; 5x3+0,3; 4x4+0,3;

8x4+0,4 4x4+0,3; 3x3+0,3

8x4+0,3

PD-агар, скв. № 36 (опыл) 7x5+0,4; 5x5+0,4; 4x4+0,4;

6x4+0,4; 4x3+0,4 3x+0,3

4x3+0,4;

7x3+0,4

PD-агар, скв. № 36: 7x5+0,4; 7x5+0,4; 4x4+0,4;

разбавление 1:1 (опыт2) 5x5+0,3; 5x4+0,4 3x3+0,3

3x3+0,3;

9x4+0,4

PD-агар, скв. № 26: 7x5+0,4; 6x5+0,4; 4x4+0,4;

разбавление 2:1 (опытз) 5x5+0,4; 5x4+0,4; 3x3+0,3

4x3+0,3 4x4+0,4

PD-агар, скв. № 26: 6x6+0,4; 5x5+0,4; 4x4+0,4;

разбавление 2:1 (опьпч) 5x4+0,3; 5x4+0,4; 3x3+0,3

3x3+0,3; 4x4+0,4

9x4+0,4

Одновременно с морфологическими изменениями клеток наблюдались изменения параметров гигантских колоний исследуемых штаммов. В результате сравнительного анализа параметров колоний, выращенных на контрольных средах, установлено, что для них характерна округлая форма (кроме DAW-3a на среде PD) (рис. 3).

Во всех вариантах обнаружена радиально исчерченная поверхность; плоский, с выпуклым центром профиль; светло-бежевый цвет и пастообразная, мажущаяся структура. Исключение составляли размеры колоний. Примечательно, что на данные параметры повлияли состав среды культивирования и плоидность штаммов. Размеры колоний полиплоида У-503 в 1,43 раза превышали показатели М-12х и DAW-3a на среде PD; на среде YPD - в 1,43 и 1,34 раза соответственно. Наличие дрожжевого экстракта в составе контрольной среды культивирования YPD (в отличие от среды PD) также повлияло на увеличение размеров колоний: У-503 - в 1,44, М-12х - в 1,26 и DAW-3a -в 1,54 раза, что подтверждает исключительную сбалансированность среды YPD.

ISSN 1026-2237 BULLETIN OF HIGHER EDUCATIONAL INSTITUTIONS. NORTH CAUCASUS REGION. NATURAL SCIENCE. 2024. No. 1

a/a б/b

Рис. 3. Изменение размеров гигантских колоний S. cerevisiae Y-503, DAW-3a и S. oviformis М-12х (10 сут)

в зависимости от состава контрольных сред культивирования: а - YPD-агар (Ki); б - PD-агар (К2) / Fig. 3. Change in the size of giant colonies of S. cerevisiae Y-503, DAW-3a and S. oviformis M-12x (10 days) depending on the composition of the control culture media: a - YPD-agar (Ki); b - PD-agar (K2)

Рассмотрены морфологические особенности гигантских колоний дрожжей, выращенных на обедненных средах PD с геотермальной водой из скважин № 36 и 26 (рис. 4).

Рис. 4. Гигантские колонии S. cerevisiae Y-503, DAW-3a и S. oviformis М-12х (10 сут) при выращивании на опытных средах PD-агар с использованием геотермальной воды: Oi - скважина № 36, без разбавления; О2 - скважина № 36, разбавление 1:1; О3 - скважина № 26, без разбавления; О4 - скважина № 26, разбавление 2:1 / Fig. 4. Giant colonies of S. cerevisiae Y-503, DAW-3a and S. oviformis M-i2x (10 days) when grown on experimental PD-agar media using geothermal water: Oi - well No. 36, without dilution;

O2 - well No. 36, dilution 1:1; O3 - well No. 26, without dilution; O4 - well No. 26, dilution 2:1

Для всех колоний характерна округлая форма, кроме овальной формы М-12х в опытах Oi и О4; радиально исчерченная поверхность; плоский, с выпуклым центром профиль; светло-бежевый цвет с легким розовым оттенком в центре и пастообразная структура. Обнаружено уменьшение всех колоний на средах с неразбавленными геотермальными водами, при этом наименьшими размерами отличались варианты на среде с водой из скважины № 36. Очевидно, это объясняется более высокой минерализацией и наличием органических компонентов, способных в

определенной концентрации негативно влиять на метаболизм дрожжей. Однако разбавление воды в соотношении 1: 1 приводило к обратному результату - размеры колоний превосходили аналогичные показатели варианта среды с неразбавленной водой из скважины № 36 в 1,49 (Y-503), 1,29 (М-12х), 1,53 (DAW-3a) раза и варианта с разбавленной водой из скважины № 26 -в 1,44 (Y-503), 1,06 (М-12х), 1,06 (DAW-3a) раза.

Результаты исследований показали, что использование в среде культивирования дрожжей разбавленной воды из скважины № 36 наиболее эффективно. Вероятно, содержащиеся в геотермальной воде органические вещества, в том числе пуриновые и пиримидиновые основания, принимающие непосредственное участие в образовании витаминов, и минеральные компоненты, играющие важную роль в поддержании и регуляции многих процессов жизнедеятельности [4], в данном варианте среды оказывают значительное влияние на метаболизм дрожжей.

Среда PD; геотермальная вода из скважины № 36; гигантские колонии штаммов S. œrevisiae Y-503 и S. oviformis М-12х (20 сут).

В результате изучения морфологических параметров штаммов S. cerevisiae Y-503 и S. oviformis М-12х, выращенных на средах PD - контрольной и с геотермальной водой из скважины № 36, обнаружено, что во всех вариантах клетки имели в основном округло-овальную и удлиненную форму, зернистую цитоплазму, почкование до 1 ,0 %. Однако размеры клеток отличались: в опыте1 (геотермальная вода) средние размеры клеток S. cerevisiae Y-503 составляли 6x4, 5x3, S. oviformis М-12х - 5x3, 4x3 мкм; в опыте2 (геотермальная вода, разбавление 1:1) - 7x5, 7x3 (Y-503), 7x4, 5x3 (М-12х); в контроле - 6x4, 6x3 (Y-503), 5x4, 5x3 (М-12х) мкм. Для исследуемых колоний (рис. 5) характерна округлая и округло-овальная форма; плоский, с выпуклым центром профиль; темно-бежевый цвет с более светлым и волнистым краем; пастообразная структура; ра-диально исчерченная поверхность. Колонии S. cerevisiae Y-503 (опьш) и S. oviformis М-12х (кон-троль2) отличались формой в виде цветка с радиально исчерченными лепестками. Обнаружено изменение размера колоний в зависимости от содержания в среде культивирования геотермальной воды: в варианте геотермальная / дистиллированная вода данный показатель превышает контроль в 1,3 (Y-503, М-12х) раза; в варианте с геотермальной водой - в 1,6 (Y-503) и 1,4 (М-12х) раза.

а/а б/b в/с

S. oviformis М-12х

Рис. 5. Изменение размеров гигантских колоний S. cerevisiae Y-503 и S. oviformis М-12х (20 сут) в зависимости от состава сред культивирования: а - контроле (PD-агар); б - опыт: (PD-агар + геотермальная вода); в - опыт2 (PD-агар + геотермальная вода, разбавление 1:1) / Fig. 5. Change in the size of giant colonies of S. cerevisiae Y-503 and S. oviformis M-12x (20 days) depending on the composition of cultivation media: a - control (PD-agar); b - experimenti (PD-agar + geothermal water); c - experiment2 (PD-agar + geothermal water, dilution 1: 1)

Таким образом, установлено, что геотермальная вода в составе твердой среды культивирования оказывает влияние на культурально-морфологические свойства клеток и, соответственно, на формирование параметров гигантских колоний дрожжей. В результате наших исследований разработана модифицированная питательная среда для выращивания дрожжей, содержащая в качестве дополнительного источника минеральных и органических соединений геотермальную воду из скважины № 36 Махачкалинского месторождения. Предложенный состав среды представляет интерес для дальнейшего использования ее в микробиологических исследованиях. Получен патент [14].

Список источников

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1. Абрамов Ш.А., Котенко С.Ц., Эфендиева Д.А., Халилова Э.А., Исламмагомедова Э.А., Даунова С.М. Новая питательная среда для выращивания дрожжей // Прикладная биохимия и микробиология. 1995. Т. 31, № 2. С. 232-233.

2. Пат. 2188232 РФ. МПК C12N 1/18, C12R 1/85. Штамм дрожжей Saccharomyces oviformis Y-2635 для производства прессованных хлебопекарных дрожжей / Абрамов Ш.А., Котенко С.Ц., Исламова Ф.И., Халилова Э.А., Исламмагомедова Э.А. Заявл. 21.05.2001. Опубл. 27.08.2002.

3. Пат. 2495936 РФ. МПК C12P 7/06. Способ получения этанола / Халилова Э.А., Котенко С.Ц., Исламмагомедова Э.А., Аливердиева Д.А. Заявл. 24.06.2012. Опубл. 20.10.2013.

4. Islammagomedova E.A., Khalilova E.A., Kotenko S. Ts. Using geothermal waters of Dagestan in scientific and biotechnological processes // Arid Ecosystems. 2016. Vol. 6 (2). P. 124-129. Doi: 10.1134/S2079096116020062.

5. Ruusuvuori P., Lin J., Scott A., Tan Z., Sorsa S., Kallio A., Nykter M., Yli-Harja O., Shmulevich I., Dudley A. Quantitative analysis of colony morphology in yeast // Biotechniques. 2014. Vol. 56 (1). P. 18-27. Doi: 10.2144/000114123.

6. Reis V.R., Antonangelo A.T.B.F., Bassi A.P.G., Colombi D., Ceccato-Antonini S. Bioethanol strains of Saccharomyces cerevisiae characterized by microsatellite and stress resistance // Brazilian J. of Microbiology. 2017. Vol. 48 (2). P. 268-274. Doi: org/10.1016/j.bjm.2016.09.017.

7. Viana N.C., Portugal C., Cruz S.H. Morphophysiological and molecular characterization of wild yeast isolates from industrial ethanol process // African J. of Microbiology Research. 2017. Vol. 11 (37). P. 1422-1430. Doi: 10.5897/AJMR2017.8691.

8. Zadrag-Tecza R., Kwolek-Mirek M., Alabrudziska M., Skoneczna A. Cell size influences the reproductive potential and total lifespan of the Saccharomyces cerevisiae yeast as revealed by the analysis of polyploid strains // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018. Vol. 2018. Р. 1-17. Doi: 10.1155/2018/1898421.

9. Zhu Y.O., Sherlock G., Petrov D.A. Whole Genome Analysis of 132 Clinical Saccharomyces cerevisiae Strains Reveals Extensive Ploidy Variation // G3: Genes|Genomes|Genetics. 2016. Vol. X. Р. 1-13. Doi: 10.1534/g3.116.029397.

10. Исламмагомедова Э.А., Халилова Э.А., Гасанов Р.З., Абакарова А.А., Аливердиева Д.А. Устойчивость дрожжей Saccharomyces cerevisiae к экстремальным условиям // Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион. Естеств. науки. 2021. № 2. С. 113-118. Doi: 10.18522/1026-2237-2021-2-113-118.

11. А.с. 1284998 СССР. МПК 02N 1/18. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae Y-503, используемый в производстве хлебобулочных изделий / Абрамов Ш.А., Котенко С.Ц., Далгатова Б.И., Маммаев А.Т., Пейсахова Д.С. Заявл. 09.04.1985. Опубл. 23.01.1987.

12. Аливердиева Д.А., Мамаев Д.В., Лагутина Л.С. Транспорт сукцината в клетки Saccharomyces cerevisiae после продолжительной холодовой преинкубации // Прикладная биохимия и микробиология. 2009. Т. 45, № 5. С. 577-585. Doi: 10.1134/S0003683809050111.

13. А.с. 1104149 СССР. МПК d2G 1/02, d2G 1/06, d2N 1/16. Штамм дрожжей Saccharomyces oviformis Махачкалинская 12х, используемый для производства шампанских виноматериалов и столовых вин / Абрамов Ш.А., Котенко С.Ц., Макуев А.-С.М., Власова О.К., Нахшунов Р.И. Заявл. 21.03.1983. Опубл. 23.07.1984.

14. Пат. 2804446 РФ. МПК 02Q 1/00. Питательная среда для культивирования дрожжей Saccharomyces / Халилова Э.А., Исламмагомедова Э.А., Абакарова А.А., Аливердиева Д.А. Заявл. 19.12.2022. Опубл. 29.09.2023.

References

1. Abramov Sh.A., Kotenko S.Ts., Efendieva D.A., Khalilova E.A., Islammagomedova E.A., Daunova S.M. New Nutrient Medium for Yeast Growth. Prikladnaya biokhimiya i mikrobiologiya = Applied Biochemistry and Microbiology. 1995;31(2):232-233. (In Russ.).

ISSN 1026-2237 BULLETIN OF HIGHER EDUCATIONAL INSTITUTIONS. NORTH CAUCASUS REGION. NATURAL SCIENCE. 2024. No. 1

2. Abramov Sh.A., Kotenko S.Ts., Islamova F.I., Khalilova E.A., Islammagomedova E.A. Yeast strain Sac-charomyces oviformis Y-2635 for the production of pressed baker's yeast. Certificate 2188232 RF. MPK C12N 1/18, C12R 1:85. Appl. 05.21.2001. Publ. 08.27.2002. (In Russ.).

3. Khalilova E.A., Kotenko S.Ts., Islammagomedova E.A., Aliverdieva D.A. Method for producing ethanol. Certificate 2495936 RF. MPK C12P 7/06. Appl. 06.24.2012. Publ. 10.20.2013. (In Russ.).

4. Islammagomedova E.A., Khalilova E.A., Kotenko S.Ts. Using geothermal waters of Dagestan in scientific and biotechnological processes. Arid Ecosystems. 2016;6(2):124-129, doi: 10.1134/S2079096116020062.

5. Ruusuvuori P., Lin J., Scott A., Tan Z., Sorsa S., Kallio A., Nykter M., Yli-Harja O., Shmulevich I., Dudley A. Quantitative analysis of colony morphology in yeast. Biotechniques. 2014;56(1):18-27, doi: 10.2144/000114123.

6. Reis V.R., Antonangelo A.T.B.F., Bassi A.P.G., Colombi D., Ceccato-Antonini S. Bioethanol strains of Saccharomyces cerevisiae characterized by microsatellite and stress resistance. Braz. J. Microbiol. 2017;48(2):268-274, doi: org/10.1016/j.bjm.2016.09.017.

7. Viana N.C., Portugal C., Cruz S.H. Morphophysiological and molecular characterization of wild yeast isolates from industrial ethanol process. African Journal of Microbiology Research. 2017;11(37):1422-1430, doi: 10.5897/AJMR2017.8691.

8. Zadrag-Tecza R., Kwolek-Mirek M., Alabrudzinska M., Skoneczna A. Cell size influences the reproductive potential and total lifespan of the Saccharomyces cerevisiae yeast as revealed by the analysis of polyploid strains. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018;2018:1-17, doi: 10.1155/2018/1898421.

9. Zhu Y.O., Sherlock G., Petrov D.A. Whole Genome Analysis of 132 Clinical Saccharomyces cerevisiae Strains Reveals Extensive Ploidy Variation. G3: Genes\Genomes\Genetics. 2016;X:1-13, doi: 10.1534/g3.116.029397.

10. Islammagomedova E.A., Khalilova E.A., Gasanov R.Z., Abakarova A.A., Aliverdieva D.A. Resistance of the yeast Saccharomyces cerevisiae to extreme conditions. Izv. vuzov. Sev.-Kavk. region. Estestv. nauki = Bulletin of Higher Educational Institutions. North Caucasus Region. Natural Science. 2021;(2):113-118, doi: 10.18522/1026-2237-2021-2-113-118. (In Russ.).

11. Abramov Sh.A., Kotenko S.Ts., Dalgatova B.I., Mammaev A.T., Peisakhova D.S. The strain of yeast of Saccharomyces cerevisiae Y-503, used in the production of bakery products. Certificate 1284998 SSSR. MPK C12N 1/18. Appl. 04.09.1985. Publ. 01.23.1987. (In Russ.).

12. Aliverdieva D.A., Mamaev D.V., Lagutina L.S. Transport of succinate into Saccharomyces cerevisiae cells after prolonged cold preincubation. Prikladnaya biokhimiya i mikrobiologiya = Applied Biochemistry and Microbiology. 2009;45(5):577-585, doi: 10.1134/S0003683809050111. (In Russ.).

13. Abramov Sh.A., Kotenko S.Ts., Makuev A.-S.M., Vlasova O.K., Nakhshunov R.I. Yeast strain Saccharomyces oviformis Makhachkala 12x, used for the production of sparkling wine materials and table wines. Certificate 1104149 SSSR. MPK C12G 1/02, C12G 1/06, C12N 1/16. Appl. 03.21.1983. Publ. 07.23.1984. (In Russ.).

14. Khalilova E.A., Islammagomedova E.A., Abakarova A.A., Aliverdieva D.A. Nutrient medium for cultivating the yeast Saccharomyces. Certificate 2804446 RF. MPK C12Q 1/100. Appl. 12.19.2022. Publ. 09.29.2023. (In Russ.).

Информация об авторах

Э.А. Исламмагомедова - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории биохимии и биотехнологии.

Э.А. Халилова - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории биохимии и биотехнологии.

А.А. Абакарова - старший лаборант лаборатории биохимии и биотехнологии. Information about the authors

E.A. Islammagomedova - Candidate of Science (Biology), Senior Researcher of Laboratory of Biochemistry and Biotechnology.

E.A. Khalilova - Candidate of Science (Biology), Senior Researcher of Laboratory of Biochemistry and Biotechnology.

A.A. Abakarova - Senior Assistant of Laboratory of Biochemistry and Biotechnology.

Статья поступила в редакцию 07.09.2023; одобрена после рецензирования 14.10.2023; принята к публикации 19.02.2024. The article was submitted 07.09.2023; approved after reviewing 14.10.2023; accepted for publication 19.02.2024.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.