CC BY
39"BicHUK стоматологи", № 2, 2017
As is evident from foregoing, the canine deviation from the occlusal plane examined is different even in symmetrical teeth: on the right -1.9 - 2.32 mm, on the left - 2.1 - 2.5 mm, which can lead to a disruption of the aesthetics of the face and function. N. V. Kalinina [4] takes up the position that natural impression is produced when the upper central incisors and canines are on the same level. Correct formation of the occlusal plane and the construction of dentition in complete removable prostheses, correspondingly to the level of this plane, increase both the aesthetic and functional characteristics of the chewing apparatus.
Conclusions. The results of our research give the right to draw the following conclusions:
a) when constructing the occlusal plane of the bite - block in the frontal region by the method of N. I. Larin inaccuracies take place due to the fact that it is tilted upward from the plane formed at the level of the pupillary line, an average of 5.2° on the right and 5.9° on the left;
b) at the level of the canines, when they are staged depending on the Estedent teeth size, the deviations are 1.9 - 2.5 mm.
The data obtained necessitate the necessity to improve the method of occlusal plane formation according to N. I. Larin for its accuracy increase, which is the result of our further research and presentations.
REFERENCES
1. Bevz G. P. Bevz V. G. Geometrija [Geometry]. Kyi'v.: Vezha; 2008:190-192.
2. Bradis V. M. Chetyrehznachnye matematicheskie tablicy [Four-digit mathematical tables]. Moskva.: Prosveshhenie; 1992:55-58.
3. Gubskaja A. N. Opredelenie central'noj okkljuzii pri protezirovanii bezzubyh cheljustej [Definition of Central occlusion in prosthetics of toothless jaws]: Abstract of a candidate's thesis of medical sciences. Kiev; 1954:10.
4. Kalinina N. V., Zagorskij V. A. Protezirovanie pri polnoj potere zubov - 2-e izdanie, pererabotano i dopolneno [Prosthesis with complete loss of teeth - 2nd edition, revised and enlarged]. M.: Medicina; 1990:109.
5. Larin N. I. Refined methods of formation of the occlusal plane by using the apparatus for prosthetics of toothless jaws. Stomatologija. 1960;3:54-57.
6. Sadykov M.I., Komleva T.N., Melenberg T.V., Komlev S.S., Shelemetev S.V. Sposob poluchenija proteticheskoj ploskosti na tomogramme bezzubyh cheljustej [A method of obtaining prosthetic plane on the tomogram of the edentulous jaw] Patent 2272568. Russian Federation, IPC (2006. 01) AND 61 IN 6/14. / applicants and patent owners - they are the same (RU).- No. 2004124084/14; it is 06.08.2004; published 27.03.2006.
7. Shumskij A.V., Jurchenko S.Ju Sposob postroenija proteticheskoj ploskosti [Method of constructing prosthetic plane]Patent 2360644. Russian Federation, IPC (2006. 01) AND 61 19/04., A. 11/00 61 And 61 In
5/103.: the applicant and holder of patent No. 2008122533/14; stated 06.06.2008; published 10.07.2009.
8. Evdokimov A. I. Rukovodstvo po ortopedicheskoj stomatologii [Manual of prosthodontics]. M.: Medicina;1974:273:295- 297.
The article acted 24.04.17
УДК 675.001.5+616.314-089.843
Е. И. Семенов, к. мед. н.,
B. В. Лепский, к. мед. н., Т. Г. Вербицкая, к. биол.н.
C. А. Шнайдер, д. мед. н.
Государственное учреждение «Институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Национальной академии медицинских наук Украины»
ВЛИЯНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ФАКТОРА НА ДОЛГОСРОЧНОСТЬ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ДЕНТАЛЬНЫХ ИМПЛАНТАТОВ
Исследован полиморфизм генов ММР1 1607 тъО, ММР9 Л-82020, Т1МР С536Ту 22 пациентов более 5 лет пользующихся ортопедическими конструкциями с опорой на дентальные импланта-ты и не предъявляющих жалоб на их эффективность. Частота нормальных гомозигот гена ММР1 1607 insG была обнаружена у 2 пациентов или у 9,1 % от общего количества осмотренных, гетерозиготные мутации были выявлены у 18 пациентов (81,8 %), полная мутация наблюдалась у 2 пациентов (9,1 %). Частота нормальных гомозигот ММР9 A-8202G была обнаружена у 6 пациентов (27,3 %), гетерозиготные мутации у 10 пациентов (45,6 %), гомозиготная мутация у 6 пациентов (27,3 %). Гетерозиготная мутации гена TIMPC536T была обнаружена у 2 пациентов (9,1 %), у остальных пациентов полиморфизм гена отсутствовал. Ключевые слова: полиморфизм генов, дентальные имплантаты.
© Семенов Е. И., Лепский В. В., Вербицкая Т. Г., Шнайдер С. А., 2017.
"BícnuK стоматол oziï", № 2, 2017
С. I. Семенов, В. В. Лепський, Т. Г. Вербицька, С. А. Шнайдер
Державна установа «1нститут стоматологи та щелепно-лицево1 xipypriï Нацюнально1 академи медичних наук Украши»
ВПЛИВ ГЕНЕТИЧНОГО ФАКТОРА
НА ДОВГОСТРОКОВ1СТЬ ФУНКЦ1ОНУВАННЯ ДЕНТАЛЬНИХ 1МПЛАНТАТ1В
Досл1джено пол1морф1зм гетв ММР1 1607 insG, MMP9 A-8202G, TIMP C536T у 22 пац1ент1в 6i-льше 5 poKie користуються ортопедичними конструкщями з опорою на дентальн iMmaH-тати i не пред'являють скарг на ïx ефектив-тсть. Частота нормальних гомозигот гена ММР1 1607 insG була виявлена у 2 пaцieнтiв або у 9,1 % eid загальног K^Ko^i оглянутих, гете-розиготн мутацИ' були виявлен у 18 пaцieнтiв (81,8 %), повна мутащя спoстеpiгaлaся у 2 пащ-eнтiв (9,1 %). Частота нормальних гомозигот ММР9 A-8202G була виявлена у 6 пaцieнтiв (27,3 %), гетерозиготн мутацИ' у 10 пaцieнтiв (45,6 %), гомозиготна мутащя у 6 пaцieнтiв (27,3 %). Гетерозиготна мутащя гена TIMPC536T була виявлена у 2 пaцieнтiв (9,1 %), у решти пащен-тiв пoлiмopфiзм гена був вiдсутнiй. Ключовi слова: пoлiмopфiзм гетв, дентальн iм-плантати.
E. I. Semenov, V. V. Lepskij, T. G. Verbickaja, S. A. Shnajder
State Establishment "The Institute of Stomatology and Maxillo-Facial Surgery National Academy of Medical Science of Ukraine"
THE INFLUENCE OF GENETIC FACTOR IN THE LONG TERM FUNCTIONING DENTAL IMPLANTS
ABSTRACT
We investigated the polymorphism of genes ММР1 1607 insG, MMP9 A-8202G, TIMP C536T, 22 patients more than 5 years use orthopedic structures based on dental implants and making no complaints about their effectiveness. The frequency of normal homozygous gene ММР1 1607 insG was discovered in 2 patients, or 9.1 percent of the total number examined, heterozygous mutations were detected in 18 patients (81,8 %), the full mutation was observed in 2 patients (9.1 per cent). The frequency of normal homozygotes ММР9 A-8202G was discovered in 6 patients (27,3 %), heterozygous mutations in 10 patients (45,6 %), a homozygous mutation was found
in 6 patients (27,3 %). Heterozygous mutations of the gene TIMPC536T was detected in 2 patients (9.1 %), the remaining patients gene polymorphism was absent.
Key words: gene polymorphism, dental implants.
В последнее время появилось большое количество публикаций о роли генетических факторов, которые не вызывают заболеваний, однако способны ухудшить течение воспалительных процессов и могут повлиять на обменные процессы в костной ткани [1, 4]. Это в свою очередь может привести к дезинтеграции имплантатов [2, 3]. Alvim-Pereira при анализе генов, полиморфизм которых может влиять на остеинтеграцию имплантатов , выделил три группы по их функциональному значению. [5].
1. Факторы, которые влияют на течение воспалительного процесса, а также интенсивность иммунного ответа организма. К ним относятся: интерлейкин - 1 альфа, интерлейкин - 1 бета, интерлейкин - 2, интерлейкин - 6, фактор некроза опухоли - альфа, CD14 и трансформирующий фактор роста бета - 1.
2. Факторы, которые регулируют формирование кости - остеопротегерин, рецептор витамина D, костный морфогенетический протеин.
3.Факторы которые определяют интенсивность коллагенолизиса. К ним относятся: мат-риксная протеиназа - 1 (ММР1), матриксная ме-таллопротеиназа - 9 (ММР9), Т1МР-ген, коди-рущий фермент ингибитора металлопротеиназ.
Деструкция тканей поддерживающего аппарата зуба происходит вследствие деградации компонентов экстрацеллюлярного матрикса и приводит к необратимой потере соединительной ткани периодонта и альвеолярной кости. Важную роль в данном патологическом процессе играют матриксные металлопротеиназы (ММР). MMP -цинкзависимые эндопептидазы, выделяемые, в основном, полиморфноядерными лейкоцитами в активной фазе периодонтита и ответственные за деградацию матрикса [6.]
Ген ММР1 кодирует фермент коллагеназу, которая расщепляет белки межклеточного мат-рикса в процессе эмбриогенеза, ремоделирова-ния тканей, метастазирования, воспалительных процессов. Матриксная металлопротеиназа (ММР-1) осуществляет первичную деградацию молекул коллагена I, II и III типа , основных компонентов интерстициальной стромы. Для ММР-1 известно 2 генных варианта - 1G и 2G в позиции 1607. Промотор гена ММР-1 в варианте «2G» имеет дополнительный пункт связывания фактора транскрипции Ets. При этом не меняется первичная структура и активность белкового
"Bicник стоматологИ", Ж 2, 2017
продукта, однако существенно изменяется продукция мРНК и специфического белка. В связи с этим, у носителей «гиперактивных» промотор-ных вариантов различных генов может проявляться предрасположенность к различным заболеваниям. При варианте 2G уровень продукции коллагеназы I повышен, поэтому происходит усиленное расщепление белков межклеточного матрикса.
Ген ММР9 кодирует фермент коллагеназу (желатиназу В), влияющую на состояние соединительной ткани внеклеточного матрикса и отвечающую за их синтез и деградацию. ММР-9 является основной желатиназой при хроническом периодонтите в десневой ткани, зубном налете, слюне и десневой жидкости [7].
Активность различных ММР регулируется на нескольких уровнях (транскрипционная, посттранскрипционная и посттрансляционная), а также эндогенными индуцируемыми ингибиторами, тканевыми ингибиторами металлопротеи-наз (ТИМП) [8]. TIMPs, семейство белков, регулирующих деградацию матрицы как ингибиро-ванием протеиназы, так и блокированием автокаталитической активации ММР [9]. TIMP-1 представляет собой 30 кДа гликопротеин, который синтезируется и секретируется большинством клеток соединительной ткани, а также макрофагами. Ингибиторы ткани металлопротеиназ связываются с матриксными металлопротеина-зами и необратимо ингибируют их ферментативную активность. Измененная экспрессия Т1МР проявляется во многих болезненных процессах и влияет на обработку внеклеточного матрикса [10].
С точки зрения влияния полиморфизма генов на остеоинтеграцию дентальных импланта-тов, существенный интерес представляет изучение генного полиморфизма у пациентов длительное время успешно пользующихся ортопедическими конструкциями с опорой на дентальные имплантаты.
Цель работы. Изучить полиморфизм генов, которые кодируют матриксную металлопротеи-назу (ММР) 1 -го типа в локусе 1607 insG и 9 типа в локусе A-8202G, а также ингибитор протеиназы Т1МР1 в локусе С536Т.
Материалы и методы. С этой целью мы обследовали 22 пациента (18 мужчин, 4 - женщины), которые успешно пользуются ортопедическими конструкциями с опорой на дентальные имплантаты более 5 лет. Жалоб на функциональную эффективность ортопедической конструкции пациенты не предъявляют.
Выделение ДНК из клеток эпителия проводили по модифицированной методике ^е!ех P.
Sean Walsh, David A. Metzger, and Russell Higuchi [11].
Аппликатор с соскобом эпителиальных клеток обрезали и помещали в эппендорф на 1,5 мл с 2ООмкл 5 % раствора Chelex 1ОО в стерильной дистиллированной воде (Chelex в натриевой форме, 100—200 меш, Bio-Rad). Перед добавлением смолу перемешивали до гомогенного состояния пипеткой с широким отверстием и отбирали аликвоту непосредственно во время перемешивания. Инкубировали при 560С З0 мин с постоянным перемешиванием на термошейкере. Затем инкубацию проводили при 960С в течение 8 мин, периодически встряхивая. После инкубации центрифугировали (на центрифуге Eppendorf Centrifuge 5424) при 12 000 g З мин. Концентрацию и чистоту препарата ДНК определяли на спектрофотометре (Nanophotometr, Implen) , отобрав аликвоту 5 мкл непосредственно из пробирки с раствором ДНК. Для ПЦР отбирали 5мкл супернатанта.
Аллельные варианты генов MMP1 (-1607insG),MMP9(A-8202G), ТМР(С5З6Т) оценивали методом аллель специфичной полиме-разной цепной реакции (ПЦР). Амплификацию исследуемых участков генов проводили параллельно в двух эппендорфах для нормального и мутантного варианта гена в 20 мкл буферного раствора (НПФ «Литех»,Россия) , 100 нм каждого oлигонyклеотидного праймера, 100-150нг ДНК .
Амплификацию проводили на приборе CFX96 (Bio-Rad), Начальная денатурация-95°С в течение 5мин. ПЦР в течение З5 циклов: денатурация при 95°С в течение 10сек, отжиг при температуре 64°С в течение З0сек и элонгация при 72°С - 40сек, окончательная элонгация З минуты при 72°C. Фракционирование продуктов амплификации проводили в горизонтальном 2 % ага-розном геле, приготовленном на однократном трис-боратном буфере (1хТВЕ), при напряжении 100В в течение 45 минут. Маркер молекулярного веса - ДНК pUC19: Msp1..
Агарозный гель окрашивали бромистым этидием и визуализировали в проходящем ультрафиолетовом свете. Наличие фрагмента в норме или мутации указывает на присутствие аллеля. При гетерозиготе фрагменты присутствуют одновременно в нормальном и мутантном вариантах.
Результаты исследований и их обсуждение. Результаты изучения полиморфизма генов, влияющих на состояние межклеточного матрик-са, представлены в таблице.
У исследованных пациентов выявлено наличие полиморфизма генов ММР1
"BicHUK стоматологИ", № 2, 2017
1607 insG и ММР9А-8202^ связанного с повышенной секрецией данных металлопротеиназ.
Таблица 1
Распределение генотипов ММР-1, ММР-9,TIMP1 у пациентов с ортопедическими конструкциями с опорой на дентальные имплантаты
Частота нормальных гомозигот гена ММР1 1607 insG была обнаружена у 2 пациентов или у 9,1 % от общего количества осмотренных, гетерозиготные мутации были выявлены у 18 пациентов (81,8 %), полная мутация наблюдалась у 2 пациентов (9,1 %).
Частота нормальных гомозигот ММР9 А-8202G была обнаружена у 6 пациентов (27,3 %), гетерозиготные мутации у 10 пациентов (45,6 %), гомозиготная мутация у 6 пациентов (27,3 %).
У гена Т1МР1 С536Т гетерерозиготный полиморфизм выявлен у 2 пациентов (9,1 %), у остальных пациентов полиморфизм гена отсутствовал.
На основании проведенных исследований можно сделать вывод, что полиморфизм генов ММР11607 insG и ММР9 A-8202G не оказывает существенного влияния на долгосрочность функционирования дентальных имплантатов. Наличие в обследуемой группе 2-х пациентов с гетерозиготным полиморфизмом гена Т1МР1 С536Т и отсутствием пациентов с полной мутацией указывает, что в отличие от генов ММР1 1607 и ММР9 A-8202G ген Т1МР1С536Т значительно реже подвергается мутации. В свою очередь наличие большого количества гетерозиготных и гомозиготных мутаций генов ММР11607, ММР9A-8202G указывает на то, что полиморфизм этих генов, в некоторой степени, компенсируется редко подвергающимся мутации геном Т1МР1 С536Т в своем влиянии на ферментную систему межклеточного матрикса, нарушения в которой могут повлиять на остеоинтеграцию дентальных имплантатов.
Список литературы
1. Анализ ассоциации аллелей гена COL1A1 с развитием остеопороза / М. В. Москаленко, М. В. Асеев, И. Е. Зазерсная [и др.] //Генетика. - 2002. -Т.38, № 12. - С. 1699-1703.
2. Куц П. В. Прогнозування та профшактика ускладнень при дентальнш шплантаци (клгшко-експериментальне дослвдження): автореферат дисер-таци на здобуття наукового ступеня д. мед. наук: спец. 14.01.22 «Стоматолопя» / П. В. Куц. - Кшв, 2013. - 35 с.
3. Лепский В. В. Профилактика разных осложнений при ортопедическом лечении включенных дефектов зубных рядов / В. В. Лепский, О. В. Деньга, Т. Г. Вербицкая, О. А. Макаренко // Вкник стоматологи.
- 2012. - №1. - С. 53-57.
4. Куц П. В. Генетична д1агностика у сучаснш дентальнш шплантологи / П. В. Куц, В. £. Досенко, В. П. Неспрядько // Новини стоматологи. - 2012. -№4. - С. 76-80.
5. Alvim-Pereira F. The сиггей Knowledge of Genetis Susceptibility Influencing Dental Implant Outcomes / F. Alvim-Pereira, C. Alvim-Pereira, P. Trevilatto.
- 2011. - P. 347-367.
6. Соловьева, Н. И. Матриксные металлопротеи-назы и их биологические функции / Н. И. Соловьева // Биоорганическая химия. - 1998. - № 24. - C. 217-226.
7. Maesco, G. Levels of metalloproteinase-2 and -9 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 in gingival crevicular fluid of patients with periodontitis, gingivitis, and healthy gingival / G. Maesco, M. Bravo, F. Bascones // Quintessence Int. - 2007. - № 38. - P. 247252.
8. Periodontal pathogenesis / P.M. Preshaw, J.J. Taylor, M.G. Newman [et al.]. Carranza's Clinical Periodon-tology. 2012;11:285-293.
9. Shibata Y. Antisense oligonucleotide of tissue inhibitor of metalloproteinase-1 induces the plasminogen activator activity in periodontal ligament cells / Y. Shibata, H. Takiguchi, Y. Abiko // J. Periodontal - 1999 -№70. - Р. 1158-1165.
10. Ravi P. Gingival crevicular fluid levels of Matrix Metalloproteinase-1 (MMP-1) and Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 (TIMP-1) in periodontal health and disease / P. Popat. Ravi. R. Parita // Popat Singapore Dental Journal. - 2014. -№ 35. - P. 59-64.
11. Chelex 100 as a Medium for Simple Extraction of DNA for PCR-Based Typing from Forensic Materi-al.BioTechniques. - 2013. - №3(54), March, -P. 134-139.
REFERENCES
1. Moskalenko M. V., Aseev M. V., Zazersnaja I.
E. [i dr.]. Analysis of Association of COL1A1 gene alleles with the development of osteoporosis. Genetika. 2002;12(38):1699-1703.
2. Kuc P. V. Prognozuvannja ta profilaktyka uskladnen' pry dental'nij implantacii' (kliniko-eksperymental'ne doslidzhennja). [Prediction and prevention of complications in dental implantation (clinical and experimental study).] Abstract of a doctoral thesis of medical sciences. Kyi'v;2013:35.
Ген, полиморфизм Аллели Количество пациентов, n (%)
ММР1 1607 insG 1G/1G 2(9,1)
1G/2G 18(81,8)
2G/2G 2(9,1)
MMP9 A-8202G A/A 6(27,3)
A/G 10(81,8)
G/G 6(27,3)
TIMP1 C536T C/C 20(90,9)
"BicHUK стоматологи", № 2, 2017
3. Lepskij V. V., Den'ga O. V., Verbickaja T. G., Makarenko O. A. Prevention different complications in orthopedic treatment of dentition defects. Visnyk stomatologii'. 2012;1:53-57.
4. Kuc P. V., Dosenko V. Je., Nesprjad'ko V. P. Genetic diagnosis in modern dental implantology. Novyny stomatologii'. 2012;4:76-80.
5. Alvim-Pereira F., Alvim-Pereira C., Trevilatto P. The current Knowledge of Genetis Susceptibility Influencing Dental Implant Outcomes. 2011:347-367.
6. Solov'eva, N. I. Matrix metalloproteinases and their biological function. Bioorganicheskaja himija. 1998;24:217-226.
7. Maesco G., Bravo M., Bascones F. Levels of metalloproteinase-2 and -9 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 in gingival crevicular fluid of patients with periodontitis, gingivitis, and healthy gingival. Quintessence Int. 2007;38:247-252.
8. Preshaw P.M., Taylor J.J., Newman M.G., Takei H., Klokkevold P.R., Carranza F.M. Periodontal pathogenesis. Carranza's Clinical Periodontology. 2012;11:285-293.
9. Shibata Y., Takiguchi H., Abiko Y. Antisense oligonucleotide of tissue inhibitor of metalloproteinase-1 induces the plasminogen activator activity in periodontal ligament cells. J. Periodontal. 1999;70:1158-1165.
10. Ravi P. Popat. Parita R. Gingival crevicular fluid levels of Matrix Metalloproteinase-1 (MMP-1) and Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 (TIMP-1) in periodontal health and disease. Popat Singapore Dental Journal. 2014;35:59-64.
11. Chelex 100 as a Medium for Simple Extraction of DNA for PCR-Based Typing from Forensic Material. BioTechniques. 2013;3(54), March:134-139.
Поступила 22.05.17
