CC BY
5
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
139
Эритропоэтин (ЭПО) способен усиливать терапевтический потенциал МСК [3]. Однако механизмы, ведущие к увеличению терапевтического потенциала МСК, предо-бработанных ЭПО исследованы недостаточно. Целью работы — оценка влияния ЭПО на аутофагию в МСК.
МСК получены из костного мозга больных ишемиче-ской болезнью сердца. Принадлежность к «истинным» МСК верифицирована фенотипированием, дифферен-цировкой в соединительнотканном направление. МСК 4-го пассажа культивировали в питательной среде ДМЕМ, с добавлением 2 мМ L-глутамина, 5 мМ HEPES-буфера, 10% ЭТС, антибиотика и 33,4 МЕ/мл ЭПО (Рекормон, Швейцария) до 3-го пассажа. Аутофагию оценивали иммуноцитохимическим способом с использованием моноклональных антител к LC3B (Abcam, США) и DAPI (BD, США), флуоресценцию анализировали на микроскопе Axio Observer Z1.
Показано, что культивирование МСК с ЭПО способствует увеличению аутофагии в 2,7 раза по сравнению с контролем на том же сроке культивирования.
Таким образом, одним из механизмов усиления терапевтического потенциала МСК ЭПО является активация аутофагии, что наделяет клетки способностью противостоять неблагоприятным факторам микроокружения.
Литература:
1. Александрушкина Н.А., Данилова Н.В., Григорьева О.А и др.
Клеточные технологии в биологии и медицине. 2019. № 1.
С. 42-47.
2. Lu D., Jiang Y., Deng W. et al. Cell Transplant. 2019. V. 28. N 4.
P. 645-652.
3. Lin H., Ling Y., Pan J, Gong H. Biochem. Biophys. Res. Commun.
2019. V. 517. N 4. P. 575-580.
ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК IN VITRO
А.П. Лыков1, 2, М.А. Суровцева1,
Н.А. Бондаренко1, И.И. Ким1, Ю.С. Гаврилова1,
Н.П. Бгатова1, О.В. Повещенко1
1 НИИКЭЛ-филиал ИЦиГ СО РАН, Новосибирск, Россия
2 ФГБУ НИИТ Минздрава России, Новосибирск, Россия
e-mail: aplvkov2@mail.ru
Ключевые слова: эритропоэтин, мезенхимные стволовые клетки, фенотип, клеточный цикл, пролиферация, миграция.
Мезенхимные стволовые/стромальные клетки (МСК) способны стимулировать репаративные/регенератив-ные процессы, как в норме, так и при патологических процессах. Терапевтический потенциал МСК в отдельности и при сочетании их с другими биологически активными молекулами, в том числе и эритропоэтин (ЭПО), показан как на экспериментальных моделях у животных, так и клинических исследованиях на человеке [1-3]. Однако возраст, хронические воспалительные процессы в организме существенно влияют на функциональные свойства клеток, что диктует необходимость «лечения» стволовых клеток перед их использованием как терапевтического агента. ЭПО проявляет цитопротективное действие на различные клетки организма. Цель исследования — оценка влияния различных сроков экспозиции МСК с ЭПО in vitro на функциональный потенциал клеток.
M^ выделены из костного мозга больных ишемиче-ской болезнью сердца. M^ 4-го пассажа инкубировали с ЭПО (33,4 ME/мл, Рекормон, Швейцария) в течение 1, 72 часов, 1 и 4 недель. Оценивали экспрессию молекул адгезии, рецепторов к ЭПО (ЭПОР), ко-экспрессию ЭПОР с общей бета-цепью цитокинов, апоптоз/некроз, клеточный цикл, пролиферацию, миграцию.
Характер изменения экспрессии молекул адгезии на клеточной мембране M^ зависел от времени экспозиции с ЭПО и количества пассажей. ^атковременная экспозиция MQK с ЭПО (1 или 72 часа) существенно не влияла на пролиферацию клеток. При длительном культивировании M^ с ЭПО отмечено снижение апоптоза/ некроза, уменьшения доли клеток в G0G1 фазе клеточного цикла, увеличению пролиферативного и миграционного потенциала и продукции ЭПО. Предобработка MQK ЭПО способствовала возрастанию устойчивости клеток к окислительному стрессу, гипергликемии и их сочетанию. По данным электронной микроскопии предобработка M^ ЭПО способствовала увеличению объемной плотности мембран гранулярного эндоплазматического ретикулума на 47%.
Таким образом, предобработка M^ эритропоэтином стимулирует изменения функциональной активности клеток.
Литература:
1. Borow K.M., Yaroshinsky A., Greenberg B., Perin E.C. Cir. Res.
2019. V. 125. N 3. P. 265-281.
2. Kot M., Musial-Wysocka A., Lasota M. et al. Acta Biochim. Pol.
2019. V. 66. N 4. P. 499-507.
3. Li J.P., Wang D.W., Song Q.H. Genet. Mol. Res. 2015. V. 14.
N 4. P. 19005-19015.
ИНДУЦИРОВАННЫЕ ПЛЮРИПОТЕНТНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ КАК ИСТОЧНИК ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КЛЕТОК ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА ЧЕЛОВЕКА
И.В. Лядова1, Т.А. Ненашева1, О.Н. Шевелева1, Е.В. Григорьева2, С.П. Медведев2
1 ФГБНУ Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия
2 ФГБНУ ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
e-mail: ivlyadova@mail.ru
Ключевые слова: Макрофаги, индуцированные плюрипо-тентные стволовые клетки, дифференцировка клеток, генетическая модификация клеток.
Одним из актуальных направлений регенеративной медицины является регенеративная медицина иммунной системы, направленная на восстановление функционирования иммунных клеток. Среди других клеток иммунной системы, интерес представляют клетки врожденного иммунитета, в частности — макрофаги (МФ). МФ играют важную роль в поддержании гомеостаза организма, в формировании защитного иммунитета, а их дисфункция является существенным фактором патогенеза многих заболеваний, в связи с чем МФ рассматриваются как перспективная мишень и потенциальный источник клеточной терапии. В последние годы большой интерес вызывают МФ (иМФ), дифференцированные из индуцированных плюрипотент-ных стволовых клеток человека (иПСК). Генерация иМФ из иПСК: а) моделирует дифференцировку тканевых резидентных МФ в эмбриогенезе; б) позволяет получать генетически модифицированные МФ; в) позволяет получать
Гены & ^етки XVII, №3, 2022
