CC BY
4учреждения «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» им. академика ГА. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган. Контактные телефоны: (3522) 50-64-17 - домашний телефон, (3522) 41-42-44 - рабочий телефон. E-mail: varstn@ mail.ru.
УДК: 577.152:611.62:616.6:619 В.Е. Соболев
(Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины)
ВЛИЯНИЕ ЭКЗОГЕННЫХ
ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ НА МОРФОЛОГИЮ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ КРЫС В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЦИСТИТА
Ключевые слова: экзогенный, гликозаминогликаны, морфология мочевого пузыря, цистит
Введение
Гликозаминогликановый слой на поверхности мочевого пузыря изучен у человека, крупного рогатого скота и некоторых видов животных [3,4,5,8,9]. В ряде исследований [6,7,11] установлено, что этой слой обеспечивает защиту слизистой оболочки мочевого пузыря от агрессивных компартментов мочи и тем самым предупреждает развитие в нем воспалительных реакций. Выявлен положительный терапевтический эффект применения различных лекарственных форм на основе глико-заминогликанов при лечении циститов человека и животных [10,12]. В этой связи изучение влияния гликозаминогликанов на морфологию мочевого пузыря в условиях воспалительного процесса представляет несомненный интерес.
Материалы и методы
В настоящем исследовании изучалось влияние перорального приема комплексного препарата гликозаминогликанов на морфологию мочевого пузыря в условиях экспериментального цистита. В качестве биологической модели использовались белые лабораторные крысы в возрасте 1 года. Опытные и контрольные группы формировались с соблюдением принципа пар-аналогов по полу и весовым кондициям. Животные были разделены на 3 группы по 3 особи в каждой. Вес животных перед постановкой эксперимента составил: первая группа 309±39,88 г; вторая группа 285,66±23,46 г; третья группа 305,33±29,02г.
В течение 14 дней до начала эксперимента крысы 1 и 2 групп с водой получали 12 мг комплексного препарата, содержащего сульфат хондроитина и глюкоза-
мин. Животные 3 группы препарат не получали. В дальнейшем у крыс 1 и 2 групп воспалительный процесс мочевого пузыря вызывали путем трансабдоминального введения в полость мочевого пузыря 9% водного раствора уксусной кислоты. Раствор вводили дважды с интервалом 7 дней. С целью лучшего выявления мочевого пузыря за 15 минут до введения раствора кислоты животным 1 и 2 групп внутримышечно инъецировали 1 мг фуросемида. Животным 3 группы в мочевой пузырь вводили стерильный 0,9% раствор натрия хлорида.
Спустя 8 часов с момента начала эксперимента и далее ежедневно проводили учет клинических симптомов у крыс всех групп. Животным 1 и 2 групп продолжали давать препарат с комплексом гликозами-ногликанов в указанной дозе 12 мг до завершения исследований. Через 10 дней после повторного введения раствора в мочевой пузырь крысам 3 группы в мочевой пузырь введен раствор кислоты в дозе аналогичной для крыс 1 и 2 групп. Спустя 48 часов проведена эвтаназия крыс всех групп. Проведено вскрытие брюшной полости и отбор мочевых пузырей с фиксацией их тканей в 10% нейтральном формалине для гистологического исследования. Гистологические срезы стенки мочевых пузырей крыс толщиной 5 - 7 мкм готовились на санном микротоме. От каждого мочевого пузыря получали 3 серии срезов с окраской гематоксилин-эозином, окрашиванием по Хейлу, и ШИК - реакцией.
Морфометрический анализ структур мочевого пузыря на срезах проводили с использованием Окуляр-микрометра МОВ 1-16 на микроскопе Биолам Р11.
Рис.1. Мочевой пузырь, область спаечного процесса
Объем ядер и плазмы клеток переходного эпителия мочевого пузыря вычислялся по формуле, предложенной В.В. Ма-лашко [2]: V= Ц6 * АВ2; где V - Объем; А - Большой диаметр клетки; В - малый диаметр клетки» ^ = 3,14. Вычисление ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) клеток в относительных цифрах проводилось по формуле: ЯЦО= Vz-Vk/Vz [2]; где Vz - объем цитоплазмы; Vk - объем ядра клетки. Удельную площадь клеток переходного эпителия мочевого пузыря определяли методом линейного интегрирования по A. Rosival [1]. Статистическая обработка цифрового материала выполнена при помощи компьютерной программы Biostat 2007 для MS Windows XP.
Результаты исследований
При вскрытии брюшной полости у двух крыс 1 группы выявлены признаки спаечного процесса мочевого пузыря с кишечником. (Рисунок 1) Развитие подобных изменений, по-видимому, явилось следствием попадания в брюшную полость некоторого количества раствора кислоты при ци-стоцентезе.
Изучение обзорных гистологических срезов стенки мочевого пузыря у крыс всех групп выявило признаки, характерные для цистита. В частности, это подтверждается повышенным содержанием лейкоцитов в подслизистой основе мочевых пузырей крыс всех групп. Слизистая оболочка переходного эпителия мочевого пузыря у крыс 1 и 2 групп представлена 3-6 слоями клеток, с присутствием слизи. Слизистая оболочка мочевого пузыря крыс 3 группы разрушена, присутствует только базаль-ный слой клеток, поверхностный слой слизи отсутствует. Клетки переходного эпителия мочевого пузыря крыс 1 группы содержат большие округлой формы ядра, отчетливо визуализируются ядрышки, кариоплазма с участками просветления. Эпи-телиоциты мочевого пузыря крыс 2 группы содержат гомогенное ядро без участков просветления кариоплазмы и видимых ядрышек, цитоплазма клеток интенсивно окрашивается красителями.
Гистохимическим окрашиванием срезов по Хейлу выявлено присутствие кислых му-кополисахаридов в анализируемых срезах мочевого пузыря крыс 1 и 2 групп. Наиболее яркая реакция отмечается в слизистой оболочке мочевого пузыря крыс 2 группы. На срезах мочевого пузыря животных 3 группы кислые мукополисахариды присутствовали в значительно меньшей степени.
ШИК-реакция на полисахариды в сре-
Рис. 2. Ок.10; Об.10. Окраска по Хейлу. Группа 1. Слизистая мочевого пузыря
Рис. 3. Ок.10; Об.10. Окраска по Хейлу. Группа 2 Слизистая мочевого пузыря
. ~ 7
* . V,* щ
5 V1: > 'Ъ^Ч'Чйь' Л У
Ж* т ,
- — г , ___ • ' у' » ' * ' :» - рГ '
' Г''
' ^ с" .
Рис. 4. Ок. 10; Об. 10. Окраска по Хейлу. Группа 3. Слизистая мочевого пузыря
зах мочевого пузыря крыс 1-3 групп была положительной. Наибольшая интенсивность окрашивания отмечена на срезах мочевого пузыря, полученных от животных 2 группы.
Морфометрический анализ срезов стенки мочевого пузыря у животных опытных и контрольной группы выявил определенные различия по ряду анализируемых показателей.
Из представленной таблицы видно, что степень повреждения структур мочевого пузыря значительно выше в контрольной группе крыс, не получавших препарат гли-козаминогликанов. Морфометрические показатели мочевых пузырей животных всех групп наряду с результатами гистохимического анализа срезов позволяют заключить о присутствии воспалительной реакции. У крыс опытных групп наряду с признаками цистита установлены также фак-
Рис. 5. Ок. 10; Об. 10. ШИК- реакция. Группа 2. Слизистая мочевого пузыря
торы, указывающие на активизацию регенеративных процессов и накопление глико-заминогликанов в слизистой оболочке мочевого пузыря. Такими факторами являются интенсивная гистохимическая реакция при окрашивании срезов методом Хейла, изменение объема и ЯЦО клеток переходного эпителия мочевого пузыря животных опытных групп. У крыс контрольной группы после введения кислоты в мочевой пузырь воспалительная реакция развивалась значительно быстрее, чем в опытных группах. Характер повреждений слизистой мочевого пузыря у этих животных отличался большей интенсивностью, вплоть до разрушения слизистой оболочки.
Выводы
Применение препарата гликозамино-гликанов оказывает защитный эффект на слизистую оболочку мочевого пузыря крыс против повреждающего действия ук-
Таблица 1
Морфометрический анализ мочевого пузыря
Показатели Группа 1 Группа 2 Группа 3
Толщина слизистой оболочки, мм: 0,022±0,003 0,032±0,007** 0,023±0,006
Толщина подслизи-стой основы, мм: 0,019±0,004 0,018±0,003 0,026±0,005**
Толщина мышечной оболочки, мм: 0,363±0,044* 0,406±0,045 0,410±0,022
Объем ядер клеток переходного эпителия, мкм3: 252,579±48,840*** 146,474±81,508*** 48,274±30,975
Объем цитоплазмы клеток переходного эпителия, мкм3: 893,872±458,479*** 389,835±208,962** 234,722±193,357
ЯЦО1 клеток эпителия 0,673±0,134*** 0,599±0,168*** 0,292±0,092
Удельная площадь клеток переходного эпителия, мм2/мм2 6,755±2,146 6,997±2,135 -
ЯЦО - Ядерно-цитоплазматическое отношение; ***- р<0,001; **-р<0,01;*- р<0,05
сусной кислоты.
Прием препарата гликозаминогликанов приводит к увеличению их содержания в слизистой оболочке мочевого пузыря.
Для гистохимического анализа срезов мочевого пузыря на гликозаминоглика-ны установлена информативность применения ШИК - реакции и окраски по Хейлу.
SUMMARY
Cystitis on the domestic animals is often treated with exogenous glycosaminoglycans such as heparin, chondroitine sulphate, or the N-acethyl glycosamine (Furinaid®, TRM). The mechanism of action is presumed to be due to a coating of the bladder surface to replace the normally present chondroitine sulphate and glycosamine lost as a result of the disease. This study used experimental damage of the bladder at rats, with an injection vinegar acid. As a result was revealed a protective effect of glycosaminoglicans for chemical cystitis. Was observed best hystochemical determination of glycosaminoglicans in bladder mucous with using a special methods.
Литература
Гуцол А.А., Кондратьев Б.Ю. Практическая мор-фометрия органов и тканей: Для врачей патологоанатомов.- Томск: Изд-во Том. ун-та, 1988.- 136с. Малашко В.В. Гистологические и морфоме-трические методы исследования/ Белорус. С.-х. акад. - Горки, 1993.- 24 с.
Grist M, Chakraborty J: Identification of a mucin layer in the urinary bladder. Urology 1994, 44, P.26-33.
Hurst RE, Rhodes SW Adamson PB, Parsons CL, Roy JB: Functional and structural characteristics of the glycosaminoglycans of the bladder luminal surface. J Urol 1987, 138, P.433-437. Hurst RE, Zebrowski R: Identification of proteoglycans present at high density on bovine and human bladder luminal surface. J Urol 1994, 152, P.1641-1645.
Hurst RE, Roy JB, Parsons CL: The role of glycos-aminoglycans in normal bladder physiology and the pathophysiology of interstitial cystitis. In Interstitial Cystitis Edited by: Sant GR. Philadelphia, Lippincott-Raven; 1997, P.93-100. Kimberly D Kyker, Jean Coffman and Robert E Hurst. Exogenous glycosaminoglycans coat damaged bladder surfaces in experimentally damaged mouse bladder. BMC Urology 2005, 5:4 doi:10.1186/1471-2490-5-4
Merete Holm-Bentzen, Thorkil Ammitzboll , Tage
Hald. Glycosaminoglycans on the surface of the human urothelium: A preliminary report Neurourol-ogy and Urodynamics .1986, 5 :6 , P.519 - 523
9. Nickel JC, Cornish J: Ultrastructural study of an antibody-stabilized bladder surface: a new perspective on the elusive glycosaminoglycan layer. World J Urol 1994, 12, P.11-14.
10. Parsons CL, Housley T, Schmidt JD, Lebow D: Treatment of interstitial cystitis with intravesical heparin. Br J Urol 1994, 73, P.504-507.
11. Parsons CL, Stauffer C, and Schmidt JD. Bladder-surface glycosaminoglycans: an efficient mechanism of environmental adaptation. Science, Vol 208, Issue 4444, P. 605-607
12. Steinhoff G, Ittah B, Rowan S: The efficacy of chon-droitin sulfate 0.2% in treating interstitial cystitis. Can J Urol 2002, 9, P.1454-1458.
13. Theoharides TC, Vakali S, Kempuraj D, Sant R. A retrospective open label study of CystoProtek in Painful Bladder Syndrome/Interstitial Cystitis (PBS/IC) Proceedings NIDDK International Symposium: Frontiers in Painful Bladder Syndrome and Interstitial Cystitis (October 24-27, 2006; Bethesda, MD).
14. Theoharides TC, Sant GR. A pilot open label study of CystoProtek in Interstitial Cystitis. International Journal of Immunopathology and Pharmacology, vol. 18, P. 183-188, 2005.
Контактная информации об авторах для переписки
Соболев Владислав Евгеньевич, ассистент кафедры внутренних болезней животных СПбГАВМ, кандидат ветеринарных наук. Тел. раб. (812) 388-17-18, тел. дом. (812) 554-1622, тел. моб. +79117152470. 194017, Санкт-Петербург, ул. Рашетова, д. 13., корпус 2, кв. 98. Е-шаП Ш: [email protected].
1.
УДК: 619:616.98:578.825.1
Е.А. Чичерина, Ш.К. Куляшбекова, А.В. Борисов, Е.В. Курненкова, М.И. Шульпин
(ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»), г. Владимир, Россия)
ПРОЯВЛЕНИЕ ПАТОГЕННЫХ СВОЙСТВ ШТАММА MD5 ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА У ЦЫПЛЯТ
Ключевые слова: болезнь Марека, цыплята, патогенность
Введение тогенности: от слабопатогенных до высо-
Штаммы вируса болезни Марека копатогенных изолятов. Данное свойство (ВБМ) сильно различаются по степени па- легло в основу классификации штаммов
