CC BY
43
Глюкозамина гидрохлорид в терапии синдрома недержания мочи у соболей
B.Е. Соболев, к.в.н., НИИ ГПЭЧ ФМБА России;
C.И. Жданов, аспирант, Санкт-Петербургская ГАВМ
Поиск современных фармакологических средств эффективной терапии синдрома недер-
жания мочи (СНМ) у пушных зверей является одной из актуальных задач современного звероводства. В наших исследованиях в период с 2009 по 2011 гг. по результатам патологоанатомического вскрытия больных животных у 28,1%
самцов и 41,6% самок соболей был выявлен катаральный или геморрагический цистит. Используемые в звероводческом хозяйстве средства терапии для лечения СНМ включали только местную обработку кожи области живота антисептическими препаратами. В зарубежных публикациях [2—7] отмечается положительный терапевтический эффект применения препаратов, содержащих гликозаминогликаны для лечения воспалительных заболеваний мочевыводящей системы человека и животных.
Цель настоящей работы — проведение исследований терапевтической эффективности препарата, содержащего глюкозамина хлорид у соболей, больных синдромом недержания мочи.
Материалы и методы. Исследования проводили в июле — сентябре 2010 г. в звероводческом хозяйстве на территории Ленинградской области. Методом случайной выборки были сформированы 4 группы животных по три соболя в каждой — два самца и одна самка. Животных содержали в индивидуальных бескаркасных клетках из металлической сетки — типовых сараях-шедах. В I—III гр. были включены особи, имеющие клинические признаки синдрома недержания мочи; в IV гр. — не имеющие клинических признаков заболевания. Животным I и
II гр. ежедневно однократно в течение 60 дней с кормом давали глюкозамина гидрохлорид в дозах 12,5 и 25 мг/кг веса тела. Животные III и
IV гр. препарат не получали. В период наблюдений периодически проводили отбор проб мочи животных всех групп и учёт суточного диуреза. Образцы мочи у зверей всех групп получали с помощью разработанного нами устройства для сбора экскрементов [1].
В соответствии с технологическим циклом хозяйства в октябре 2010 г. произвели убой всех животных, провели патологоанатомическое вскрытие и отобрали материал для гистологического исследования.
Для гистологического исследования мочевые пузыри животных всех групп фиксировали в жидкости Карнуа. Гистологические срезы мочевого пузыря толщиной 5—7 мкм получали на роторном микротоме Slee Cut 5062. Срезы мочевого пузыря окрашивали гематоксилин-эозином. Изучали гистологические срезы с помощью микроскопа Zeiss Axio Observer A1; микрофотографии получали при помощи устройства захвата изображения Pixera Penguin 150 CL. Морфометрические измерения в срезах мочевого пузыря проводили с помощью программы «Видеотест-размер 5.0».
Статистическая обработка полученных данных выполнена в программе GraphPad Prizm 5.0 для Windows XP. Нормальность распределения выборки проверяли с помощью теста Шапиро-Уилка. Полученные данные оценивали методами описательной статистики, с определением сред-
них значений и стандартного отклонения в формате М+s. Статистическую значимость различий показателей сравниваемых групп определяли методом однофакторного дисперсионного анализа (one way ANOVA). Различия сравниваемых показателей считали статистически значимыми при уровне р<0,05.
Результаты и обсуждение. В результате периодических наблюдений за уровнем суточного диуреза у соболей установлено, что больные животные I—III гр. по сравнению с контрольной
IV гр. выделяли значительно меньший объём мочи. В то же время было отмечено, что соболи
I и II гр., получавшие препарат, выделяли больший объём мочи по сравнению с животными без лечения. Различия являются статистически значимыми (р<0,001) для животных I—III гр. по сравнению со здоровыми животными IV гр. (рис. 1). Средние значения суточного диуреза у животных I гр. составляли 67,91 ± 17,15 мл;
II гр. — 51,72+21,00; III — 31,28+21,29; IV — 134,0+34,85 мл.
По уровням рН мочи у здоровых и больных СНМ животных I—III гр. статистически значимых отличий не выявлено. У больных животных I—III гр. значения рН мочи в среднем составили 6,7+ 0,54, в контрольной — 6,79+0,34.
При микроскопическом исследовании осадка мочи у больных соболей в отличие от здоровых животных наиболее часто обнаруживали единичные кристаллы или конгломераты кристаллов цистина, цилиндроиды и элементы слизи (рис. 2). Органические элементы осадка (клетки крови, переходного эпителия мочевого пузыря и цилиндроиды) встречались в моче как больных, так и здоровых животных в пределах не более 0—3 элемента в поле зрения микроскопа (х20).
К моменту завершения исследований в каждой группе, за исключением IV гр., произошёл падёж одного животного. Применение препарата глюкозамина гидрохлорида в I и II гр. в течение всего периода наблюдений не привело к исчезновению клинических признаков недержания мочи.
У соболей I—III гр. до начала применения препарата была измерена площадь области повреждения мочой меха и кожи. В I гр. она составила 14,6+2,5 см2; во II — 16,0+2,6 см2; в
III — 16,7+3,0 см2. По завершении исследований у соболей I гр. площадь области повреждения кожи и меха равнялась 25,0+4,3 см2; у животных II гр. — 28,3+7,0 см2; III — 36,0+4,6 см2. Таким образом, показано, что у животных всех групп в течение 60 дней произошло увеличение дефектной площади кожи и меха. Однако у соболей I гр. площадь зоны повреждения существенно меньше, чем у животных III гр., не принимавших препарат гликозаминогликанов. Различия статистически значимы для р<0,01.
go
Суточный диурез соболей, больных СНМ (мл)
Рис. 1 - I -Б1; ІІ-В2; ІІІ—В-3 - больные животные, группы; ІУ-Н — контрольная группа
Рис. 2 — Кристаллы цистина в осадке мочи соболей ІІІ группы (Х20)
Рис. 3 — Срез мочевого пузыря соболя, І группа: Х10; гематоксилин-эозин; 1 — эпителий;
2 — собственная пластинка; 3 — подслизистая основа; 4 — мышечный слой
Рис. 4 — Срез мочевого пузыря соболя, ІІ группа: Х10; гематоксилин-эозин; 1 — эпителий 2 — собственная пластинка; 3 — подслизистая основа; 4 — мышечный слой
Рис. 5 - Срез мочевого пузыря соболя, III группа:
Х10; гематоксилин-эозин; 1 - эпителий;
2 - собственная пластинка; 3 - подслизистая основа; 4 - мышечный слой
При изучении обзорных гистологических срезов мочевого пузыря у животных 1—111 гр. признаков воспалительного процесса в нём не выявлено (рис. 3—6).
Методами количественной морфометрии мочевого пузыря выявлен ряд отличий у животных
Рис. 6 - Срез мочевого пузыря соболя, IV группа:
Х10; гематоксилин-эозин; 1 - эпителий;
2 - собственная пластинка; 3 - подслизистая основа; 4 - мышечный слой
опытных и контрольной групп, которые, однако, имеют неоднозначный характер (табл.).
Данные, представленные в таблице, показывают отличие большинства показателей мочевого пузыря соболей 1—111 гр. от показателей животных контрольной группы с высоким уровнем
Морфометрические показатели мочевого пузыря соболей
Группа I II III IV
Гистометрические показатели
Толщина слизистой оболочки, мкм: Толщина собственной пластинки, мкм: Толщина подслизистой основы, мкм: Толщина мышечной оболочки, мкм: 59,8±10,2**oo 20,0±4,8* 75,9±39,3**oo 1720±355,3*o 71,3±13,7**oo 17,1±4,4* 63,2±9,3**oo 838,9±157,1**oo 89,0±21,1* 18,5±4,5* 137,2±46,9 1331±233,2 145,6±34,0 30,3±5,9 136,2±17,7 1486±270,6
Цитометрические показатели
Объём ядер эпителиоцитов, мкм3 Объём эпителиоцита, мкм3 ЯЦО 139,2±78,6** 361,3±190,8** 0,56±0,14 88,7±53,8**oo 286,8±161,4** 0,54±0,2 177,0±117,3** 467,2±279,4** 0,64±0,16** 721,9±470,3 2123±1553 0,51±0,18
Примечание: ЯЦО — ядерно-цитоплазматическое отношение; * — р<0,05; ** — р<0,01 по сравнению с IV гр.; ° — р<0,05; °° — р<0,01 по сравнению с III гр.
статистической значимости. У больных животных толщина слизистой оболочки и её собственной пластинки существенно ниже, чем у здоровых.
У соболей, получавших препарат, толщина слизистой оболочки существенно ниже, чем у особей III гр. без лечения препаратом. Под-слизистая основа мочевого пузыря у соболей, получавших препарат, по сравнению со здоровыми животными и с животными III гр. имеет меньшие размеры. У соболей I и II гр. толщина мышечной оболочки отличается существенно, причём у животных I гр. она имеет больший размер по сравнению с аналогичным показателем I и IV гр. Следует отметить, что по толщине мышечной оболочки у здоровых животных и больных животных без лечения препаратом не выявлено изменений.
Наиболее характерные отличия наблюдаются у животных сравниваемых групп по цитоме-трическим и кариометрическим показателям переходного эпителия слизистой оболочки мочевого пузыря. У больных животных I—III гр. объём клеток и ядер переходного эпителия значительно меньше по сравнению со здоровыми животными (р<0,001). Значения показателя ЯЦО, отражающего объёмное или процентное выражение цитоплазмы в клетке эпителия мочевого пузыря, существенно отличаются от показателей контрольной группы только у животных III гр.
В полученных результатах наиболее объяснимым изменением в анализируемых показателях является, на наш взгляд, снижение толщины слизистой оболочки и меньший объём клеток и ядер переходного эпителия у животных I—III гр. по сравнению с контрольными показателями. Рассматривая эти факты совместно, можно предположить повышенный уровень эксфолиации поверхностного слоя эпителиоцитов слизистой мочевого пузыря, которые, как известно, имеют большие размеры. Клетки же базального и промежуточного слоёв слизистой оболочки близки к сферической форме и имеют относительно небольшие размеры.
Выводы. В проведённых исследованиях приём животными, больными СНМ, препарата, содержащего глюкозамина гидрохлорид, в течение 60 дней не приводит к устранению симптомокомплекса синдрома. Однако объём суточного диуреза у принимавших препарат животных статистически значимо отличается от показателей животных без лечения. Площадь области повреждения меха и кожи у соболей, принимавших препарат, к завершению исследований существенно меньше, чем у животных без лечения.
Изучение гистологических срезов мочевого пузыря у животных опытных групп показало, что признаки воспалительного процесса отсутствуют. Этот факт может свидетельствовать о реализации патофизиологических механизмов синдрома недержания мочи, не связанных с воспалительным процессом в мочевом пузыре. Низкий клинический эффект применения препаратов гликозаминогликанов объясняется отсутствием физиологической необходимости в аккумуляции этих соединений слизистой оболочкой мочевого пузыря.
Литература
1. Пат. 108915 Российская Федерация, МПК А 01К 23/00 (2006.01).Устройство для сбора экскрементов животных в клеточном звероводстве / Соболев В.Е., Соболева А.В., Жданов С.И., Жданова И.А.; заявитель и правообладатель ФГБОУ ВПО СПб ветеринар. акад. 2011115201/13; заявл. 18.04.11; опубл. 10.10.11, бюл. № 28. 3 с.: ил.
2. Bhavanandan V.P. Glycosaminoglycans and Glycoproteins of Animal Bladder // Journal Connect Tissue 2001. Vol. 33; № 3. P. 245-252.
3. Damiano R., Cicione A. The role of sodium hyaluronate and sodium chondroitine sulfate in the management of bladder disease // Ther Adv Urol. 2011. 3 (5). P. 223-232.
4. Gunn-Moore D.A., Shenoya C.M. Oral glucosamine and the management of feline idiopathic cystitis // Journal of Feline Medicine & Surgery Vol. 6. Issue 4. August 2004. P. 219-225.
5. Lee D.G., Cho J.J., Park H.K., Kim D.K., Kim J.I., Chang S.G., Lee S.J. Preventive effects of hyaluronic acid on Escherichia coli-induced urinary tract infection in rat // Urology. 2010. Apr. 75 (4). P. 949-954.
6. Mathers M.J., Lazica D.A., Roth S. Non-bacterial cystitis: principles, diagnostics and etiogenic therapy options // Aktuelle Urol. 2010. Nov. 41 (6). P. 361-368.
7. Panchaphanpong J., Asawakarn T., Pusoonthornthum R. Effects of oral administration of N-acetyl-d-glucosamine on plasma and urine concentrations of glycosaminoglycans in cats with idiopathic cystitis // Am J Vet Res. 2011. Jun. 72 (6). P. 843-850.
