CC BY
64
УДК:619:616.62-002-021.6:599.323.45
С.И. Жданов, аспирант В.Е. Соболев, кандидат ветеринарных наук Санкт-Петербургская Государственная Академия Ветеринарной Медицины(СПбГАВМ)
ЗАЩИТНЫЕ СВОЙСТВА ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ К ПОВРЕЖДАЮЩЕМУ ДЕЙСТВИЮ УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЦИСТИТЕ
В условиях экспериментального цистита у крыс изучен защитный эффект внутреннего применения комплексного препарата гликозаминогликанов в дозе 12 мг к повреждающему действию уксусной кислоты. Прием препарата гликозаминогликанов в течение 14 дней приводит к увеличению содержания мукополисахаридов в слизистой оболочке мочевого пузыря. У животных, получавших препарат гликозаминогликанов, действие повреждающего фактора на слизистую оболочку мочевого пузыря выражено в значительно меньшей степени по сравнению с контролем.
Ключевые слова: гликозаминогликаны, цистит, крысы.
Введение
Сравнительно недавно на поверхности слизистой оболочки мочевого пузыря у человека, крупного рогатого скота и некоторых видов животных обнаружен тонкий слой мукополисахаридов
(гликозаминогликанов) [3,4,5,8,9]. В ряде
исследований [6,7,11] установлено, что слой гликозаминогликанов обеспечивает защиту слизистой оболочки мочевого пузыря от агрессивных
компонентов мочи и тем самым предупреждает развитие в нем воспалител,ного процесса. Выявлен положительный терапевтический эффект применения различных лекарственных форм на основе гликозаминогликанов при лечении циститов человека и некоторых видов животных [10,12]. В этой связи изучение влияния гликозаминогликанов на
морфологию мочевого пузыря в условиях экспериментал,ного цистита является актуал,ным звеном изучения патогенеза воспалител,ного процесса в мочевом пузыре.
Методика исследования
В настоящем исследовании изучалос, влияние перорал,ного приема комплексного препарата гликозаминогликанов на морфологию мочевого пузыря в условиях экспериментал,ного цистита. Моделирование цистита производилос, у белых лабораторных крыс. Опытные и контрольные группы формировались с соблюдением принципа параналогов. Были сформированы 3 группы животных по 3 особи в каждой группе.
В течение 14 дней до начала эксперимента крысы 1 и 2 групп с питьевой водой получали 12 мг комплексного препарата, содержащего 4 мг сул,фата хондроитина и 8 мг глюкозамина гидрохлорида. Животные 3 группы препарат не получали. В дальнейшем у крыс 1 и 2 групп воспалительный процесс мочевого пузыря вызывали инъекцией через брюшную стенку в полость мочевого пузыря 0,5 мл 9% водного раствора уксусной кислоты. Раствор вводили дважды с интервалом 7 дней. С цел,ю лучшего выявления мочевого пузыря за 15 минут до введения раствора кислоты животным 1 и 2 групп внутримышечно инъецировали 1 мг фуросемида. 92
Cystitis in domestic animals often treated with exogenous glycosaminoglycans such as heparin, chondroitine sulphate, or the N-acethyl glycosamine (Furinaid®, TRM). The mechanism of action is presumed to be due to a coating of the bladder surface to replace the normally present chondroitine sulphate and glycosamine lost as a result of the disease. The study used to experimental damage of the bladder in rats, with an injection 9%vinegar acid. As a result was revealed a protective effect of glycosaminoglicans for chemical cystitis. Identification glycosaminoglicans in bladder mucous was observed with using methods of hystochemical analysis.
Key words glycosaminoglycans, cystitis, rats.
Животным 3 группы в мочевой пузырь вводили стерильный 0,9% раствор натрия хлорида в дозе 0,5 мл.
Спустя 8 часов с момента начала эксперимента и далее ежедневно проводили учет клинических симптомов у крыс всех четырех групп. Животные 1 и 2 групп продолжали получать препарат с комплексом гликозаминогликанов в указанной дозе 12 мг до завершения исследований. Через 10 дней после повторного введения раствора в мочевой пузырь крысам 3 группы в мочевой пузыр, введен раствор кислоты в дозе аналогичной для крыс 1 и 2 групп. Спустя 48 часов проведена эвтаназия крыс всех групп. Проведено вскрытие брюшной полости и отбор мочевых пузырей с фиксацией их тканей в 10% нейтральном формалине для гистологического исследования. Г истологические срезы стенки мочевых пузырей крыс толщиной 5-7 мкм готовилис, на санном микротоме, окрашивали гематоксилин-эозином. Для выявления «кислых» мукополисахаридов гистологические срезы окрашивали по Хейлу, «нейтральные»
мукополисахариды определяли в ШИК - реакции.
Морфометрический анализ структур мочевого пузыря на срезах проводили с испол,зованием окуляр-микрометра МОВ 1-16. Объем ядер и цитоплазмы клеток эпителия мочевого пузыря вычислялся по формуле, предложенной В.В. Малашко
П
[2]: V=~ X АВ2; где V - Объем; А - Большой
6
диаметр клетки; В - малый диаметр клетки» р =3,14. Вычисление ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) клеток в относительных цифрах проводилось
Vz-Vk
по формуле: ЯЦО= ------------- [2]; где Vz - объем
Vz
цитоплазмы; Vk - объем ядра клетки. Удельную площадь клеток переходного эпителия мочевого пузыря определяли методом линейного интегрирования по A. Rosival [1]. Статистическая обработка цифрового материала выполнена в компьютерной программе Biostat 2007.
Результаты исследований
При вскрытии брюшной полости у одной крысы в 1 группе выявлены признаки слипчивого воспалительного процесса и как следствие образование спайки серозной оболочки мочевого пузыря с кишечником. Вероятно, это явилось следствием попадания в брюшную полость некоторого количества раствора кислоты при цистоцентезе.
При изучении обзорных гистологических срезов стенки мочевого пузыря у крыс всех групп выявлены признаки воспалительного процесса, характерные для цистита. В частности, это проявляется интенсивной лейкоцитарной инфильтрацией в подслизистой основе мочевых пузырей крыс всех групп. Слизистая оболочка переходного эпителия мочевого пузыря у крыс 1 и 2 групп представлена 3-6 слоями клеток, на поверхности эпителиальных клеток присутствует тонкий слой слизи. Слизистая оболочка мочевого пузыря крыс 3 группы разрушена, присутствует только базальный слой клеток, поверхностный слой слизи отсутствует. Клетки переходного эпителия мочевого пузыря крыс 1 группы содержат большие округлой формы ядра, отчетливо просматриваются ядрышки, кариоплазма с участками просветления.
Рисунок 1 - 0к.10; Об. 10. Окраска по Хейлу Группа №1 Слизистая мочевого пузыря
Рисунок 3 - Ок. 10; Об. 10. Окраска по Хейлу Группа №3 Слизистая мочевого пузыря
Морфометрические измерения в срезах мочевого пузыря у животных опытных и контрольной группы выявили определенные различия по ряду показателей.
Эпителиоциты мочевого пузыря крыс 2 группы содержат гомогенное ядро без участков просветления кариоплазмы и видимых ядрышек, цитоплазма клеток интенсивно окрашивается красителями.
Гистохимическим окрашиванием срезов по Хейлу выявлено присутствие «кислых» мукополисахаридов (гликозаминогликанов) в слизистой оболочке мочевого пузыря крыс 1 и 2 групп. Наиболее яркая реакция отмечается в слизистой оболочке мочевого пузыря крыс 2 группы (рис.2). В срезах мочевого пузыря 3 группы при окрашивании методом Хейла качественной реакции на гликозаминогликаны не наблюдали. ШИК-реакция на нейтральные полисахариды слизистой оболочки мочевого пузыря крыс 1-3 групп была положительной. Наибольшая интенсивность окрашивания отмечена в срезах мочевого пузыря, полученных от животных 2 группы (рис. 4). Таким образом, по результатам
гистохимического исследования мочевого пузыря на гликозаминогликаны имеются основания
предполагать, что у крыс опытных групп наряду с гистологической картиной цистита, наблюдаются признаки активизации регенеративных процессов в мочевом пузыре, вязанные с накоплением глико-аминогликанов в сли-истой оболочке.
Рисунок 2 - 0к.10; 0б.10. Окраска по Хейлу Группа №2 Слизистая мочевого пузыря
Рисунок 4 - Ок. 10; Об. 10. ШИК-реакция Группа №2 Слизистая мочевого пузыря
Таблица 1 - Морфометрический анализ мочевого пузыря
Показатели Группа 1 Г руппа 2 Г руппа 3
Толщина слизистой оболочки, мм: 0,022±0,003 0,032±0,007** 0,023±0,006
Толщина подслизистой основы, мм: 0,019±0,004 0,018±0,003 0,026±0,005**
Толщина мышечной оболочки, мм: 0,363±0,044* 0,406±0,045 0,410±0,022
Объем ядер эпителиоцитов, мкм3: 252,579±48,840*** 146,474±81,508*** 48,274±30,975
Объем цитоплазмы эпителиоцитов, мкм3: 893,872±458,479*** 389,835±208,962** 234,722±193,357
ЯЦО1 клеток эпителия 0,673±0,134*** 0,599±0,168*** 0,292±0,092
Удельная площадь эпителиоцитов, мм2/мм2 6,755±2,146 6,997±2,135 -
ЯЦО1 - Ядерно-цитоплазматическое отношение; ***- р<0,001; **-р<0,01;*- р<0,05
Данные таблицы 1 демонстрируют статистически достоверные отличия морфометрии мочевого пу-ыря у животных контрольной и опытных групп с высоким уровнем значимости. У крыс, получавших препарат глико-аминогликанов, -начительно увеличены объем ядер и цитоплазмы эпителиоцитов, а также ЯЦО клеток эпителия мочевого пу-ыря в сравнении с животными контрольной группы.
Выводы
У животных, получавших препарат
глико-аминогликанов, методами гистохимического исследования выявлено присутствие «кислых» мукополисахаридов в сли-истой оболочке мочевого пузыря. Повреждение слизистой оболочки мочевого пу-ыря у крыс, получавших препарат, менее выражены, чем в контрольной группе, что подтверждается и-учением об-орных
гистологических сре-ов и данными количественной морфометрии мочевого пузыря. Таким образом, в условиях проведенного эксперимента прием комплексного препарата глико-аминогликанов в до-е 12 мг защищает слизистую оболочку мочевого пузыря крыс от повреждающего действия раствора уксусной кислоты.
Литература
1. Гуцол, А.А., Кондратьев Б.Ю. Практическая
морфометрия органов и тканей: Для врачей
патологоанатомов / А. А. Гуцол, Б.Ю. Кондратьев -Томск: Изд-во Том. ун-та, 1988. - 136 с.
2. Малашко, В.В. Гистологические и морфометрические методы исследования / В.В. Малашко - Белорус. С.-х. акад. - Горки, 1993. -24 с.
3. Grist, M. Identification of a mucin layer in the urinary bladder / M. Grist, J. Chakraborty - Urology, 1994, 44. - P. 26-33.
4. Hurst, R.E. Functional and structural characteristics of the glycosaminoglycans of the bladder luminal surface / R.E. Hurst, SW. Rhodes, P.B. Adamson, C.L. Parsons, J.B. Roy - J. Urol. 1987, 138. - P. 433-437.
5. Hurst, R.E. Identification of proteoglycans present at high density on bovine and human bladder luminal surface / R.E. Hurst, R. Zebrowski - J. Urol. 1994, 152. -P. 1641-1645.
6. Hurst, R.E., Roy J.B, Parsons C.L: The role of glycosaminoglycans in normal bladder physiology and the pathophysiology of interstitial cystitis. In Interstitial
Cystitis Edited by: Sant GR. Philadelphia, Lippincott-Raven; 1997, P.93-100.
7. Kyker K.D, Coffman J., Hurst R.E. Exogenous glycosaminoglycans coat damaged bladder surfaces in experimentally damaged mouse bladder. BMC Urology 2005, 5:4 doi: 10. 1186/1471-2490-5-4.
8. Merete Holm-Bentzen, Ammitzboll T, Hald T. Glycosaminoglycans on the surface of the human urothelium: A preliminary report Neurourology and Urodynamics .1986, 5:6. - P. 519 - 523
9. Nickel J.C, Cornish J: Ultrastructural study of an antibody-stabilized bladder surface: a new perspective on the elusive glycosaminoglycan layer. World J. Urol. 1994, 12. - P. 11-14.
10. Parsons C.L, Housley T, Schmidt J.D, Lebow D: Treatment of interstitial cystitis with intravesical heparin. Br. J. Urol. 1994, 73. - P. 504-507.
11. Parsons C.L, Stauffer C, and Schmidt J.D.
Bladder-surface glycosaminoglycans: an efficient
mechanism of environmental adaptation. Science, Vol 208, Issue 4444. - P. 605-607.
12. Steinhoff G, Ittah B, Rowan S: The efficacy of chondroitin sulfate 0.2% in treating interstitial cystitis. Can. J. Urol. 2002, 9. - P. 1454-1458.
Вестник
ОрелГАу
№6(33)
декабрь 2011
Теоретический и научно-практический журнал. Основан в 2005 году
Учредитель и издатель: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Орловский государственный аграрный Университет»______________________________________________________________
Редакционный совет:
Парахин Н.В. (председатель) Амелин А.В. (зам. председателя) Астахов С.М.
Белкин Б.Л.
Блажнов А.А.
Буяров В.С.
Гуляева Т.И.
Гурин А.Г.
Дегтярев М.Г.
Зотиков В.И.
Иващук О.А.
Козлов А.С.
Кузнецов Ю.А.
Лобков В.Т.
Лысенко Н.Н.
Ляшук Р.Н.
Мамаев А.В.
Масалов В.Н.
Новикова Н.Е.
Павловская Н.Е.
Попова О.В.
Прока Н.И.
Савкин В.И.
Степанова Л.П.
Плыгун С.А. (ответств. секретар,) Золотухина О.А. (редактор)
Адрес редакции:
302019, г. Орел, ул. Генерала Родина, 69.
Тел.: +7 (4862) 45-40-37 Факс: +7 (4862) 45-40-64 E-mail: nichogau@yandex.ra Сайт журнала: http://ej.orelsau.ru
Свидетельство о регистрации ПИ №ФС77-21514 от 11.07.2005 г.
Специалист регионального методического центра по УДК: Служеникина А.М. Технический редактор: Мосина А.И.
Сдано в набор 2.12.2011 г. Подписано в печат, 13.12.2011 г. Формат 60x84/8. Бумага офсетная. Гарнитура Таймс.
Объём 13,8 усл. печ. л. Тираж 300 экз. Издател,ство Орел ГАУ, 302028, г. Орел, бул,вар Победы, 19. Лицензия ЛР №021325 от 23.02.1999 г.
Журнал рекомендован ВАК Минобрнауки России для публикаций научные работ, отражающих основное научное содержание кандидатских и докторских диссертаций
Содержание номера
Обращение губернатора Орловской области А.П. Козлова к участникам Международной конференции «Мясное животноводство в России: пути и
перспективы развития»............................................................... 2
Приветственное слово к участникам конференции ректора Орловскогу
государственного агуарногоуниверситета, академика РАСХНН.В. Парахина................ 3
Амерханов Х.А. О развитии мясного скотоводства в России............................. 5
Мирошников С.А., Тихонов А.А. Современное состояние и перспективы развития
производства говядины в России...................................................... 10
Демин Н.Я. Современное свиноводство России: проблемы и перспективы.................. 13
Альберс Г. Технологические платформы в мире......................................... 15
Егоров И.А., Буяров В.С. Развитие новых направлений в области селекции, кормления и
технологии бройлерного птицеводства................................................. 17
Ляшук Р.Н. Мясное скотоводство Орловской области: потенциал и пути его
реализации............................................................................24
Сеин Д.О., Масалов В.Н., Ильючик А.К. Состояние эндометрия у ремонтных свинок
после стимуляции половыми феромонами хряка.......................................... 27
Павловская Н.Е., Горькова И.В., Гагарина И.Н. ГнеушеваИ.А., Гагарина А.Ю.
Технология создания биологически активных добавок для животноводства............. 29
Дедкова А.И., Сергеева Н.Н. Улучшение продуктивных качеств свиней ливенской
породы путём применения двухпородного скрещивания................................... 32
Белкин Б.Л., Кубасов В.А. Использование хотынецких природных цеолитов в
ветеринарии и птицеводстве.......................................................... 35
Полухина М.Г., Шендаков А.И. Тенденции и перспективы развития племенного
скотоводства в Орловской области.................................................... 39
Крюков В.И, Ляшук Р.Н, Цветинский С.А. Анализ аберраций хромосом у свиней и крупного рогатого скота: первые результаты цитогенетического мониторига
сельскохозяйственных животных Орловской области..................................... 44
Учасов Д.С., Ярован Н.И., Сеин О.Б., Ашихмин Д.С. Иммуно-биохимический статус и продуктивность поросят-сосунов и отъемышей при использовании пробиотика
«проваген».......................................................................... 49
Михеева Е.А. Интенсивность роста молодняка симментальского голштинизированного
скота в зависимости от уровня радиации.............................................. 51
Смагина Т.В., Клейменова Н.В. Влияние биологически активных веществ на убойные
показатели и качество мяса свиней................................................... 54
Абрамкова Н.В., Феофилова Ю.Б., Козлов А.С. Особенности роста телят при различных
уровнях цинка в рационах............................................................ 57
Родина Н.Д., Степанов Д.В. Продолжительность хозяйственного использования чернопестрых голштинизированных коров.................................................... 59
Малявко В.А., Малявко И.В., Гамко Л.Н., Масалов В.Н. Эффективность использования питательных веществ рациона коровами в первые 100 дней лактации с учётом их
авансированного кормления за 21 день до отёла....................................... 63
Москвина А.С., Максимов В.И., Верховский О.А. Морфофизиологические показатели
крови глубокостельных коров при вакцинации.......................................... 65
Тимохин О.В., Скребнева Е.Н., Лыков А.А., Рогожина Н.В., Скребнев С.А., Сахно Н.В. К диагностике дисфункции молочной железы у самок сельскохозяйственных
животных............................................................................ 68
Тамарова Р.В., Дряничева С.В. Генеалогическая структура и молочная продуктивность коров михайловского типа ярославской породы крупного рогатого
скота............................................................................... 71
Мамаев А.В., Лещуков К.А., Меркулова С.С. Использование акупунктурных методов
для регулирования качества молока коров разного возраста......................... 75
Ермишин А.С. Ранговая оценка по основным селекционным признакам импортного скота
в России............................................................................ 79
Безбородов П.Н. О заболеваниях сычуга крупного рогатого скота, не связаных с
проведением хирургической репозиции при лечении..................................... 82
Чеченок Н.Н. Динамика микроорганизмов в слизистой оболочке двенадцатиперстной
кишки ягнят в раннем постнатальном онтогенезе....................................... 87
Гамко Л.Н., Малявко В.А., Малявко И.В. Изменение живой массы коров под влиянием авансированного кормления их за 21 день до отёла и в первую фазу
лактации............................................................................ 89
Жданов С.И., Соболев В.Е. Защитные свойства гликозаминогликанов к повреждающему
действию уксусной кислоты при экспериментальном цистите............................. 92
Нигматулин Р.М. Молочность крольчих разных пород и факторы, влияющие на неё... 95
Подгорный В.М. Инвестиционная активность в региональном АПК: состояние,
стратегические приоритеты........................................................... 100
Ильдутов Е.А., Сюкрева Е.И. Энергоемкость производства продукции молочно-мясного скотоводства в хозяйствах Ульяновской области....................................... 104
© ФГБОУ ВПО Орел ГАУ, 2011
