CC BY
31
Ш Вирусологические характеристики субклинических инфекций, вызванных вирусами гепатитов В и С, у живущих в Азербайджане лиц из групп с высоким риском парентерального инфицирования
М.К. Мамедов1 (m.mamedov@inbox.ru), А.Э. Дадашева2, М.И. Михайлов3
Ш Национальный центр онкологии, г. Баку
Республиканский центр по борьбе со СПИДом, г. Баку 3ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМИ, Московская область
Резюме
Авторы исследовали полученные у лиц из групп с высоким риском паpентеpальноrо инфицирования (ГВРПИ) вирусами гепатита В (ВГВ) и гепатита С (ВГС) сыворотки крови, содержащие HBsAg и анти-HCV. Они определили частоту присутствия в этих сыворотках различных генетических вариантов и генотипов ВГВ, а также частоту выявления в них РHК ВГС и разных генотипов ВГС. Было отмечено, что данные вирусологические показатели у лиц из ГВРПИ не имели существенных отличий от аналогичных показателей у здоровых лиц, инфицированных этими вирусами. В то же время у этих лиц, инфицированных ВГС, по сравнению с инфицированными здоровыми лицами отмечались более низкая частота спонтанной элиминации вируса и более высокая вирусная нагрузка.
Ключевые слова: вирус гепатита В, вирус гепатита С, группы с высоким риском парентерального инфицирования
Virological Characteristics of Subclinic Infections Caused with Hepatitis B and C Viruses among Persons from Groups with High Risk of Parenteral Contamination Lived in Azerbaijan
M.K. Mamedov1 (m.mamedov@inbox.ru), A.E. Dadasheva2, M.I. Mikhailov3
1 The National Center of Oncology, Baku
2 Republican AIDS Centre, Baku
3 M.P. Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitis of the Russian Academy of Medical Sciences, Moscow Region Abstract
The authors examinated blood serums contained HBsAg and anti-HCV obtained at persons from groups with high risk of parenteral contamination (GHRC) with hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV). In these serums it were determinated frequencies of existing of different genetical variants and genotypes of HBV and frequency of HCV RNA detection and different HCV genotypes. It was demonstrated that above mentioned virological parameters at persons from GHRC were not substantial distinctions from healthy persons infected with same viruses. At the same time, at these persons infected with HCV, in comparison with infected healthy persons, lower frequency of virus spontaneous elimination and higher viral load were noted. Key words: hepatitis B virus, hepatitis C virus, high risk of parenteral contamination
Введение
Как известно, в современных условиях, когда в медицине широко используются разнообразные инвазивные лечебно-диагностические технологии и потребление инъекционных наркотиков приобрело глобальные масштабы, распространение инфекций, вызванных вирусами гепатита В (ВГВ) и гепатита С (ВГС), происходит в основном за счет парентерального механизма инфицирования [1, 3].
Соответственно наибольшее эпидемиологическое значение в качестве потенциальных источников сохранения и распространения ВГВ и ВГС в настоящее время имеют инфицированные этими вирусами лица, относящиеся к группам с вы-
соким риском парентерального инфицирования (ГВРПИ) [2]. Поэтому информация об интенсивности циркуляции ВГВ и ВГС среди лиц из различных ГВРПИ служит ценным дополнением к общей характеристике региональной эпидемиологической ситуации в отношении этих инфекций [9].
Учитывая ограниченность сведений о распро-стpаненности гепатитов В и Г среди проживающих в Азербайджане лиц из различных ГВРПИ, мы серологически обследовали контингенты лиц, относящихся к пяти различным ГВРПИ, установили частоту выявления у них серологических маpкеpов инфицирования ВГВ (HBsAg) и ВГС (анти-И^) и сравнили эти показатели с аналогичными, ранее
определенными у группы практически здоровых жителей Баку, однократно сдавших кровь в качестве безвозмездных доноров [5, 7]. Располагая сыворотками крови потенциальных доноров, в которых были выявлены серологические маркеры инфицирования ВГВ и ВГС, и имея возможность более детально исследовать ВГВ и ВГС, обнаруженные у лиц из ГВРПИ и у доноров крови, мы поставили перед собой цель определить основные вирусологические характеристики популяций ВГВ и ВГС, циркулирующих на территории Азербайджана.
Материалы и методы
Объектом изучения служили сыворотки крови, полученные при серологическом исследовании 3219 лиц из пяти разных ГВРПИ и 1541 практически здорового жителя Баку, в которых были выявлены HBsAg или анти-HCV.
Сыворотки, в которых выявлялись HBsAg, были повторно серологически исследованы на наличие в них HBeAg, анти-HBe и анти-HBc. Эти исследования были проведены с помощью соответствующих тест-систем иммуноферментного метода («Диагностические системы», г. Нижний Новгород).
Кроме того, все HBsAg-позитивные сыворотки для определения генотипа присутствовавшего в них ВГВ были исследованы с помощью иммуноферментной тест-системы HBV genotype ELISA (Япония) на основе моноклональных антител к эпитопам рге^2-антигена, соответствующим генотипам ВГВ от A до F.
Сыворотки, содержащие анти-HCV, исследовали с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) на основе коммерческих наборов с видо-специфическими праймерами, позволяющими выявлять РНК ВГС. На основании полученных результатов определили частоту выявления РНК ВГС в серопозитивных сыворотках крови лиц из-ГВРПИ и здоровых лиц.
Генотипную принадлежность содержащихся в сыворотках вирусов определяли с помощью ПЦР («АмплиСенс® Н^-генотип^»), используя типоспе-цифические праймеры, маркирующие четыре основных генотипа ВГС - от 1 до 4.
Концентрацию вирусной РНК в сыворотках определяли с помощью ПЦР, используя коммерческие наборы праймеров (Am^liSens bio-technologies) для определения уровня вирусной РНК в крови.
Результаты исследований математически обрабатывали непараметрическим методом с использованием критерия х-квадрат для таблиц сопря-
женности 2 х 2 при помощи компьютерной программы Statistica 6.0.
Результаты и обсуждение
В общей сложности на наличие HBsAg и анти-Н^ было исследовано 3219 сывороток крови лиц из ГВРПИ и 1541 сыворотка крови здоровых жителей Баку. Результаты представлены в таблице 1.
В первую очередь путем сопоставления результатов определения в одних и тех же HBsAg-позитивных сыворотках других антигенных (HBeAg) и антительных (анти-НВе и анти-НВс) маркеров инфицирования ВГВ определили процентную долю сывороток, содержащих «дикий» и мутант-ные варианты ВГВ. При этом «диким» считали вариант ВГВ, экспрессирующий все основные антигены - HBsAg, HBeAg и HBcAg, а мутантными вариантами считали вирусы, не экспрессирующие один из этих антигенов и не индуцирующие продукцию соответствующих антител.
Далее мы проанализировали результаты исследования указанных выше HBsAg-позитивных сывороток на генотипную принадлежность содержащегося в них ВГВ. Судя по этим результатам, присутствующие во всех исследованных сыворотках вирусы относились только к двум генотипам - А и D.
Использовав эти подходы, были установлены генетические варианты ВГВ и его генотипов в сыворотках лиц из ГВРПИ и доноров крови (табл. 2).
Сравнивая соотношения частоты обнаружения этих вариантов ВГВ в сыворотках лиц из ГВРПИ и доноров крови, мы пришли к двум выводам. Во-первых, частота выявления «дикого» и указанных двух мутантных вариантов ВГВ в сыворотках крови лиц из ГВРПИ не имела статистически устойчивого отличия от частоты выявления этих же вариантов вируса в сыворотках доноров крови. Во-вторых, среди населения Азербайджана, наряду с доминирующим по частоте выявления «диким» типом ВГВ, циркулируют и мутантные (HBeAg-и HBcAg-негативные) варианты этого вируса.
Сравнение показателей позволило прийти к заключению, что по соотношению частоты выявления ВГВ генотипов А и D лица из ГВРПИ не имели существенного отличия от доноров крови. Данный факт свидетельствовал о том, что популяция ВГВ, циркулирующего в Азербайджане, представлена доминирующим в этом регионе генотипом D и менее распространенным генотипом А.
Популяционно-вирусологическая характеристика ГС-инфекции, выявленной у лиц из ГВРПИ
Таблица 1.
Выявление HBsAg и анти-HCV в сыворотках крови лиц из ГВРПИ и практически здоровых жителей г. Баку
Выявлены У лиц из ГВРПИ (n = 3219) У здоpовых лиц (n = 1541) P
HBsAg 173 (5,4 ± 0,4%) 45 (2,9 ± 0,4%) < 0,01
Анти-HCV 1104 (34,3 ± 0,8%) 61 (4,0 ± 0,5%) < 0,0001
Таблица 2.
Генетические варианты и генотипы ВГВ, выявленные в HBsAg-позитивных сыворотках ^ови лиц из ГВРПИ и доноров^ови
Лица, у которых взяты сыворотки Число сывороток Генетические варианты ВГВ Генотипы ВГВ
«дикий» HBeAg(-) HBcAg(-) A D
Лица из ГВРПИ 173 129/74,6% 32/18,5% 12/6,9% 17/9,8% 156/90,2%
Доноpы фови 45 36/80,0% 7/15,5% 2/4,4% 4/8,9% 41/91,1%
Всего 218 165/75,7% 39/17,9% 14/6,4% 21/9,6% 197/90,4%
и доноров крови, ограничилась определением ге-нотипной принадлежности ВГС, предположительно содержащегося в сыворотках этих лиц, в которых ранее были выявлены анти-НСУ
Первоначально сыворотки были исследованы на наличие в них РНК ВГС. Оказалось, что вирусная РНК присутствовала в 1076 (97,5 ± 0,5%) серопозитивных сыворотках лиц из ГВРПИ и лишь в 47 (77,0 ± 5,3%) серопозитивных сыворотках доноров крови. Это указывало на то, что 2,5% сывороток лиц из ГВРПИ и 23% сывороток здоровых лиц, в которых имелись анти-НСЧ но отсутствовала РНК ВГС, принадлежали реконвалесцентам острого гепатита С (ОГС), а выявленные в них анти-Н^ имели анамнестическое происхождение - их присутствие свидетельствовало о ранее перенесенной острой ГС-инфекции, которая к моменту исследования завершилась элиминацией ВГС и спонтанным выздоровлением.
В этой связи отметим: частота выявления таких случаев у доноров крови хорошо согласуется с имеющимися в литературе данными о том, что средняя частота спонтанного выздоровления больных ОГС колеблется от 20 до 30% [10, 11]. В то же время аналогичный показатель у лиц из ГВРПИ оказался почти в 10 раз ниже, чем у доноров крови.
Приняв во внимание, что различие между этими показателями сохраняло статистически устойчивый характер (Р < 0,001), мы пришли к заключению: более низкая частота спонтанного выздоровления этих лиц и более высокая частота хронизации острой инфекции, вызванной ВГС, могут составлять одну из особенностей течения гепатита С у лиц из ГВРПИ.
Данное соображение побудило нас сравнить интенсивность репродукции ВГС у инфицированных
им лиц из ГВРПИ и у практически здоровых лиц. Из 1076 сывороток лиц из ГВРПИ, содержащих вирусную РНК, с помощью таблицы случайных чисел были отобраны 100 сывороток. Эти сыворотки и 61 сыворотка доноров крови, содержащая РНК ВГС, были повторно исследованы для определения в них уровня вирусной нагрузки (ВН).
В зависимости от уровня ВН все сыворотки были разделены на две группы - с высокой ВН (500 тыс. копий/мл и выше) и с низкой ВН (менее 500 тыс. копий/мл), - и определено соотношение между процентной долей таких сывороток, полученных у лиц из ГВРПИ и у доноров крови. Величина этого соотношения представлена в таблице 3.
Как следует из таблицы, доля сывороток с высокой ВН, полученных у лиц из ГВРПИ, была в два раза выше, чем у доноров крови (Р < 0,001). Этот факт позволил сделать вывод, что гепатит С у лиц из ГВРПИ чаще протекал с более высокой ВН, нежели у доноров крови (практически здоровых лиц).
И наконец, отобранные 100 сывороток лиц из ГВРПИ и 61 сыворотка доноров крови были вновь исследованы для определения генотипной принадлежности присутствующего в них ВГС. Исследование показало, что во всех сыворотках ВГС относился к одному из трех генотипов - 1, 2 или 3. Эти генотипы ВГС обнаружились в 71 (71%), 9 (9%) и 20 (20%) сыворотках лиц из ГВРПИ и в 44 (72,1%), 5 (8,2%) и 12 (19,7%) сыворотках доноров крови соответственно. Попарно сравнив данные величины, мы пришли к выводу, что генотипный состав популяции ВГС, циркулирующего среди живущих в Азербайджане лиц из ГВРПИ, не имел существенного отличия от такового у практически здоровых жителей Баку, рассматриваемых в качестве контрольной группы.
Таблица 3.
Соотношение числа содеpжащих РHК ВГС сывоpоток крови с высокой и низкой виpусной на^узкой, полученных у лиц из ГВРПИ и доноpов ^ови
Контингенты лиц, у которых получены сыворотки Число сывороток, содержащих РНК ВГС:
всего с высокой ВН с низкой ВН
ГВРПИ 100 73 (73,0 ± 4,4%) 27 (27,0 ± 4,4%)
Доноpы фови 61 23 (37,7 ± 6,2%) 38 (62,3 ± 6,2%)
Итак, несмотря на то что у лиц из разных ГВРПИ чаще, чем у практически здоровых лиц из контрольной группы, выявлялись серологические маркеры гепатитов В и С, в нашем наблюдении у лиц из ГВРПИ не было обнаружено каких-либо существенных отличий в отношении основных популяционно-вирусологических характеристик выявленных у них ВГВ и ВГС.
Вместе с тем при общей оценке результатов, полученных в нашем наблюдении, мы обратили внимание на две отмеченные выше особенности развития гепатита С у лиц из ГВРПИ: 1) более низкую частоту спонтанной элиминации ВГС и, соответственно, более высокую частоту хронизации острой инфекции и 2) относительно более высокую, нежели у других лиц, концентрацию вирусной РНК в крови.
Трактуя причины этих особенностей течения гепатита С у лиц, относящихся к ГВРПИ, мы полагали, что в их основе, скорее всего, лежала свойственная представителям большинства ГВРПИ иммунокомпрометация, препятствующая формированию полноценного иммунного ответа, способного обеспечивать освобождение организма от вируса и тем самым предотвращать хронизацию острой ГС-инфекции [8].
В заключение отметим, что эти особенности, отражающие специфику развития гепатита С, не только дополняют ранее определенные нами патогенетические характеристики у лиц из ГВРПИ [6], но также свидетельствуют о более высокой степени эпидемиологической опасности этих лиц, поскольку, будучи инфицированными ВГС, они дольше остаются источниками инфекции, а наличие у них более высокого уровня виремии повышает их потенциал в качестве распространителей инфекции [4].
Выводы
1. Частота выявления разных генетических вариантов и генотипов ВГВ и генотипов ВГС у лиц, живущих в Азербайджане и относящихся к разным ГВРПИ, и у доноров крови (жители Баку) сопоставима.
2. Отличительными вирусологическими особенностями, характеризующими процесс естественной эволюции гепатита С у лиц из разных ГВРПИ, стали более низкая частота спонтанного выздоровления и соответственно - более высокая частота хронизации острой инфекции, а также относительно более высокая вирусная нагрузка. ш
Литература
i
Дадашева А.Э., Мамедов М.К., Кадырова А.А. Роль инъекционной наркомании в распространении трансфузионных вирусных инфекций // Биомедицина. 2008. № 2. С. 9 - 13.
Дадашева А.Э., Мамедов М.К., Михайлов М.И. О двух типах групп с высоким риском инфицирования вирусами гепатитов В и С: эпидемиологическое и клиническое значение // В мире вирусных гепатитов. 2011. № 1. С. 12 - 14.
Мамедов М.К., Дадашева А.Э. Прогресс в медицине как фактор, невольно способствовавший глобальному распространению вирусов гепатитов В и С // Медицинские новости (Минск). 2011. № 9. С. 45 - 49.
Мамедов М.К., Дадашева А.Э. Оценка потенциальной эпидемиологической опасности различных групп с высоким риском инфицирования вирусами гепатитов В и С // Биомедицина. 2011. № 4. С. 3 - 11.
Мамедов М.К., Дадашева А.Э., Михайлов М.И. Субклинические инфекции, вызванные вирусами гепатитов В и С, среди лиц из разных групп с высоким риском парентерального инфицирования этими вирусами // Вестник службы крови России. 2011. № 4. С. 34 - 36.
Мамедов М.К., Дадашева А.Э., Михайлов М.И. Патогенетическая характеристика гепатитов В и С у лиц из групп с высоким риском парентерального инфицирования // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2012. № 1. С. 55 - 58.
7. Мамедов М.К., Дадашева А.Э., Таги-заде Р.К., Михайлов М.И. Показатели распространенности инфекций, вызванных вирусами гепатитов В и С, среди здорового взрослого населения Азербайджана // Мир вирусных гепатитов. 2007. № 5. С. 10 - 12.
8. Михайлов М.И., Дадашева А.Э., Мамедов М.К. Иммунокомпрометация лиц из групп с высоким риском парентерального инфицирования вирусами гепатитов В и С: причины и патогенетическое значение // Журнал инфектологии (СПб.). 2012. № 1. С. 19 - 22.
9. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г. Парентеральные вирусные гепатиты. - М.: ГОУ ВУНМЦ, 2003. - 349 с.
10. Ющук Н.Д., Климова Е.А. Гепатит С / Инфекционные болезни: Национальное руководство. - М.: Гэотар-Медиа, 2009. С. 650 - 664.
2.
3.
5.
6.
References
1. Dadasheva A.E., Mamedov M.K., Kadyrova A.A. Rol infekcionnoj napkomanii v rasprostranenii transfuzionnyh virusnyh infekcij // Biomedicina. 2008. № 2. P. 9 - 13.
2. Dadasheva A.E., Mamedov M.K., Mihajlov M.I. O dvuh tipah grupp s vysokim riskom inficirovanija virusami gepatitov B i C: epidemiologicheskoe i klinicheskoe znachenie // V mipe virusnyh gepatitov. 2011. № 1. P 12 - 14.
3. Mamedov M.K., Dadasheva A.E. Progress v medicine kak faktor, nevol'no sposobstvovavshij global'nomu rasprostranenija virusov gepatitov B i C // Medicin-skie novosti (Minsk). 2011. №. 9. P. 45 - 49.
4. Mamedov M.K., Dadasheva A.E. Ocenka potencial'noj jepidemiologicheskoj opasnosti razlichnyh grupp s vysokim riskom inficirovanija virusami gepatitov B i C // Biomedicina. 2011. № 4. P. 3- 11.
5. Mamedov M.K., Dadasheva A.E., Mikhajlov M.I. Subklinicheskie infekcii, vyzvannye virusami gepatitov B i C, sredi lic iz raznyh grupp s vysokim riskom parentepal'nogo inficirovanija jetimi virusami // Vestnik sluzhby krovi Rossii. 2011. № 4. P. 34 - 36.
6. Mamedov M.K., Dadasheva A.E., Mikhajlov M.I. Patogeneticheskaja harakteristika gepatitov B i C u lic iz grupp s vysokim riskom parenteral'nogo inficirovanija // Epidemiologija i Vakcinoprofilaktika. 2012. № 1. P. 55 - 58.
7. Mamedov M.K., Dadasheva A.E., Tagi-zade R.K., Mikhajlov M.I. Pokazateli rasprostranennosti infekcij, vyzvannyh virusami gepatitov B i C, sredi zdorovogo vzroslogo naselenija Azerbajdzhana // Mir virusnyh gepatitov. 2007. № 5. P. 10 - 12.
8. Mikhajlov M.I., Dadasheva A.E., Mamedov M.K. Immunokomprometacija lic iz grupp s vysokim riskom parenteral'nogo inficirovanija virusami gepatitov B i C: prichiny i patogeneticheskoe znachenie // Zhurnal infektologii (SPb.). 2012. № 1. P. 19 - 22.
9. Shahgil'djan I.V., Mikhajlov M.I., Onishchenko G.G. Parenteral'nye virusnye gepatity. - M.: GOU VUHMC, 2003. - 349 p.
10. Jushchuk H.D., Klimova E.A. Gepatit C / Infekcionnye bolezni: Nacional'noe rukovodstvo. - M.: Geotar-Media, 2009. P 650 - 664.
11. Katz L., Tur-Kaspa R. The natural history of hepatitis C virus infection / Hepatitis C virus / Eds. P. Karayiannis, J. Main, H. Thomas. - London: International Medical Press, 2009. P. 41 - 43.
