Вирусинактивация плазмы Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

ВИРУСИНАКТИВАЦИЯ ПЛАЗМЫ

Е.Б. Жибурт, Н.Г. Филина, М.Н. Губанова УДК 615.382-014.2

Национальный медико-хирургический Центр им. Н.И. Пирогова, Красноярский краевой центр крови №1, Ставропольская областная станция переливания крови

Проблема повышения безопасности трансфузий плазмы путем инактивации патогенов весьма актуальна. В настоящее время для практического использования в некоторых странах лицензированы лишь методы обработки одной дозы плазмы метиленовым синим и обработки пула плазмы методом «растворитель/детергент» в промышленных условиях. Современных производств препаратов крови в России пока нет. Поэтому подробно рассмотрен метод обработки одной дозы плазмы метиленовым синим, применение которого в России уже началось. Представлены технологические аспекты выполнения вирусинактивации, данные о степени воздействия на различные типы вирусов, отсутствии повреждения белков плазмы, использовании этой процедуры в мировой практике.

Ключевые слова: вирусинактивация плазмы, безопасность трансфузий, метиленовый синий.

Введение

Заражение вирусными инфекциями реципиентов компонентов донорской крови остается серьезнейшей проблемой современной медицины.

Из трех компонентов крови (эритроциты, тромбоциты, плазма) в России чаще всего переливают плазму.

Принципиальными недостатками существующих методов профилактики передачи вирусов при переливании плазмы (отбор доноров, лабораторное обследование, карантинизация, удаление лейкоцитов) являются:

а) возможность ошибки оператора и возможность пропустить инфекцию (ВИЧ, вирусные гепатиты В и С) в клинически бессимптомный период «серологического окна»;

б) ограниченный спектр перечисленных выше тестируемых вирусов, фактически допускающий передачу герпесвирусов, Т-лимфотропного вируса человека (НТ1У), вируса Западного Нила (Ш№У), вирусов других гепатитов, парвовируса В19 и т.д., включая вирусы, неизвестные современной науке [1].

Указанных выше недостатков лишены методы ви-русинактивации.

Методы вирусинактивации плазмы

Предложено несколько методов инактивации или элиминации вирусов из одной дозы плазмы:

1) облучение видимым светом плазмы, обработанной метиленовым синим [20];

2) облучение ультрафиолетом плазмы, обработанной псораленом [17];

3) облучение ультрафиолетом плазмы, обработанной рибофлавином [9];

4) прогревание плазмы [14];

5) нанофильтрация [6].

Кроме того, разработаны методы для противовирус-

VIRAL INACTIVATION OF PLASMA PRODUCTS

Е.B. Zhiburt, N.G. Filina, M.N. Gubanova

Further improvement of plasma transfusions safety by inactivation of pathogens is needed. At the moment in some countries the only approved industrial methods are treatment of one plasma dose with methylene blue and pool treatment by "solvent/detergent" approach. There are no modern facilities for blood products manufacture in Russia. Therefore, we described in detail the method of one plasma dose treatment with methylene blue that is already used in Russia. Technological aspects of viral inactivation are discussed as well as data on their impact on different types of viruses and plasma proteins.

ной обработки пулов плазмы, применяющиеся на заводах по производству препаратов плазмы:

1) обработка методом «растворитель/детергент»

[29];

2) пастеризация [7].

Поиск вируцидных агентов проводится постоянно, причем метиленовый синий выступает в качестве стандартного метода. Так, в частности, в центре крови Хоккайдо (Япония) с использованием в качестве модельных вирусов бактериофага М13 и вируса везикулярного стоматита оценили антивирусный эффект фотообработки плазмы в присутствии других фотосенсибилизаторов - тетрасульфоната фталоцианина алюминия (ALPcS4) и мероцианина 540 (МС540). Инактивация вируса везикулярного стоматита у исследуемых агентов составила 43%, тогда как у метиленового синего 4,7 к^10 или 99,998% [3].

В настоящее время для практического использования в некоторых странах лицензированы лишь методы обработки одной дозы плазмы метиленовым синим и обработки пула плазмы методом «растворитель/детергент» в промышленных условиях. Современных производств препаратов крови в России пока нет. Поэтому целесообразно подробнее рассмотреть метод обработки одной дозы плазмы метиленовым синим, применение которого в России уже началось.

Принцип метода вирусинактивации с метиленовым синим

Метиленовая синь - фенотиазиновый краситель. Красители этого класса способны внедряться в структуру нуклеиновых кислот вирусов и тесно связываться с остатками гуанозина ДНК/РНК [4].

После фотоактивации с длиной волн около 590 нм краситель окисляет кислород до синглетного кислорода, химически повреждающего генетический материал

вируса [12]. Тем самым процесс репликации вируса, а, стало быть, и заражение реципиента становится невозможным [28].

Описание технологии

В клинической практике используется система вирусинактивации плазмы «Макотроник» (за рубежом - «Терафлекс», "THERAFLEX MB PLASMA") компании "Макофарма" (Macopharma, Франция)1 (рис.1).

Процедура обработки представляет последовательность несложных манипуляций:

- присоединение контейнера с плазмой к пластиковой системе для вирусинактивации (рис. 2);

- фильтрационное удаление лейкоцитов из плазмы (рис. 3);

- добавление к плазме метиленового синего;

- облучение видимым светом в аппарате «Мако-троник»;

- фильтрационное удаление из плазмы метиленового синего;

- переливание плазмы пациенту или замораживание плазмы для хранения.

Рис.1. Общий вид установки «Макотроник»

Рис. 2. Стерильное соединение контейнера с плазмой и системы для вирусинактивации

- стандартный режим инактивации;

- автоматическую регистрацию освещенности, энергии, температуры и времени;

- контроль и оценку эффективности освещения;

- автоматическое создание наклеек со штрих-кодом и возможностью перекрестного визуального контроля.

- возможен вариант с применением радиоэтикеток (RFID) и передачей информации по беспроводной технологии.

Составные части расходной системы

1. Лейкофильтр «PLAS4» - для удаления лейкоцитов из плазмы.

2. Таблетка метиленового синего, интегрированная в замкнутую систему.

3. Контейнер для иллюминации.

4. Фильтр «Блюфлекс» («В1иеАех») для удаления ме-тиленовой сини из обработанной плазмы.

5. Контейнер для хранения плазмы при температуре менее - 30 °С.

Осветительное устройство "Макотроник"

Осветительное устройство "Макотроник" обеспечивает качество процесса иллюминации и отслеживание каждой дозы обработанной плазмы.

Управляемый компьютером процесс обеспечивает:

- простоту и удобство применения с минимальным участием оператора (рис. 4);

- доступ пользователей и руководителей через пароль;

1 Система инактивации вирусов в плазме крови MACOTRONIC с принадлежностями производства компании MACOPHARMA S.A. (Франция). Регистрационное удостоверение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития ФС №2006-822 от 30 мая 2006 г., Сертификат соответствия ГОСТ Р №РОСС FR.ИМ02.В13949 от 09.06.06.

Варианты комплектации

Комплекты расходного материала «Макотроник» поставляются в виде:

- полностью замкнутой системы для применения от забора донорской крови до хранения компонентов крови,

- системы для вирусинактивации для любого контейнера с дозой плазмы.

Качество и безопасность

Система «Макотроник» разработана на основе опыта широко известного и всемерно используемого метода лечения, обеспечивающего оптимальную безопасность.

Метиленовый синий включен в реестр Европейской Фармакопеи (4-е издание за 2002 год) и Фармакопеи США (ХХУ-2002).

Свыше 3,4 миллионов единиц плазмы, обработанной метиленовым синим, были успешно перелиты в Европе и Азии.

Количество метиленового синего, используемого в процессе «Макотроник» (0,085 мг на одну единицу плазмы) значительно ниже, чем клиническая доза, применяемая при лечении метгемоглобинемии (до 7 мг/кг) [21] и гипотензии, индуцированной высоким уровнем оксида азота (1 мг/кг) [27, 32].

Основываясь на разрешении метиленового синего для клинического применения в дозе 100 мг/кг/день, раз-

Рис. 3. Фильтрационная элиминация лейкоцитов из плазмы

рабатываются методы лечения вирусных инфекций, основанные на фотохимическом воздействии на продукты крови пациента [25].

Не имеется сообщений о побочных эффектах, вызванных применением плазмы, обработанной метиле-новым синим.

Все части системы «Макотроник» относятся к Классу III Знака ЕС и изготовлены в соответствии со Стандартами Качества ИСО 9001.

Удаление метиленового синего с помощью фильтра «Блюфлекс»

Фильтр «Блюфлекс» прост и удобен в применении и поставляется встроенным в систему «Макотроник».

«Блюфлекс» снижает концентрацию метиленового синего и ее производных в обработанной плазме более, чем на 1 log.

Прошедшая через «Блюфлекс» плазма приобретает естественный цвет.

Качество фильтра элиминации метиленового синего имеет важное значение для сохранности белков плазмы. Если другие модели фильтров в определенной степени повреждали белки плазмы, то у «Блюфлекс» повреждающее действие отсутствует [13]. Данное качество «Блюфлекс» является составной частью обеспечения качества системы «Макотроник» в целом.

Инактивация вирусов

Для получения разрешения уполномоченного органа (Еврокомиссия в Евросоюзе, FDA в США и т.д.) на практическое использование технологии инактивации и удаления вирусов должно быть четко показано, что применяемые процессы способны удалить или инак-тивировать широкий спектр вирусов.

Обычно валидационные исследования включают не менее трех типов вирусов, выбранных так, чтобы отразить различные свойства патогена.

Всемирная организация здравоохранения обращает особое внимание на неэффективность использования геномных тестов для валидации вируси-нактивации. Поскольку генамплификация не может дифференцировать вирус, который пережил этап инактивации от инактивированного вируса. Для того, чтобы исследовать инактивированный продукт, должно быть доказано соответствие тестов поставленной задаче [16].

Рис. 4. Процесс вирусинактивации управляется компьютером

Доказана максимальная (среди всех известных методов) степень инактивации вирусов метиленовым синим и видимым светом - как в отношении оболочеч-ных вирусов [19] (табл. 1), так и безоболочечных вирусов [23] (табл. 2).

Состояние белков плазмы

В середине 1990-х было показано, что обработка МС в концентрации 300 мкг/л и двустороннее облучение в режиме 50000 люкс в течение часа в среднем приводит к потере 25% биологической активности факторов свертывания (функция ФVШ - 29%; фибриногена - 39%, ФХШ - 16% и фактора Виллебранда (ФВ) - 18%. При этом снижение активности ФВ менее (p<0,05) значительно по сравнению с ФVШ, а мультимерная структура ФВ не повреждается [5].

Отмечается некоторое (30%) снижение функциональной активности фибриногена, приводящее к небольшому изменению индексов полимеризации фибрина [11].

Табл. 1. Чувствительность оболочечных вирусов после обработки «Макотроник»

Вирус Семейство Величина сокращения (log10)

ВИЧ-1 Ретро >4,90

Вирус Западного Нила Флави >5,75

BVDV (модель для HCV) Флави >5,4

Холеры свиней Флави >5,92

Вирус псевдооспы коров Герпес >5,48

Герпес обыкновенный Герпес >5,50

Бычий герпес Герпес >8,11

Семлики форест Тога >7,00

Синдбис Тога >9,73

Инфлюэнца Ортомиксо 5,1

Вирус гепатита В (утиный) Гепадна >3

Везикулярного стоматита Рабдо >4,89

Табл. 2. Чувствительность безоболочечных вирусов после обработки «Макотроник»

Вирус Семейство Величина

сокращения (log10)

Аденовирус Адено =4

Кальцивирус(модель для HEV) Калици >3,9

SV 40 Папова >4

Парвовирус B19 Парво >5

Подобные изменения содержания факторов свертывания наблюдаются в плазме, приготовленной из крови на второй день после заготовки крови (то есть после ночного хранения) [8].

Однако повреждение факторов свертывания во многом связано с действием лейкоцитов, контаминиру-ющих плазму. Поэтому особое внимание при разработке обсуждаемого метода уделяли устранению побочного действия балластных лейкоцитов. При удалении лейкоцитов после обработки метиленовым синим устраняется и их неблагоприятиное влияние на состояние факторов свертывания [31].

Китайские военные медики изучали иммунологические и биохимические изменения в плазме, облученной видимым светом (40000 люкс) при комнатной температуре в течение 1 часа в присутствии 1 мкмоль/л метиленового синего. Изменений активности факторов свертывания не зарегистрировано, за исключением некоторого снижения фактора VIII, протромбинового времени и АЧТВ (лейкодеплеция до обработки не проводилась). Не менялись характеристики альбумина, глюкозы, минерально-солевого состава и рН. С использованием различных технологий электрофореза и иммунохимии в обработанной плазме не обнаружено неоантигенов. Электрофоретическая подпижность составляющих плазмы после обработки не меняется [34].

В Университете Эссен (Германия) три различных пула плазмы, состоящих из шести доз плазмы, разделили на шесть частей, каждую из которых обрабатывали индивидуально. Образцы для контроля состояния системы свертывания крови отбирали на пяти этапах: до обработки (А); после фильтрации плазмы через PLAS4 (В); после растворения метиленового синего (С); после облучения Ф); после фильтрационной элиминации метиленового синего (Е). Результаты исследования представлены в таблице 3.

В процессе вирусинактивации лишь этап облучения влияет на активность факторов свертывания. Наиболее лабилен фактор VIII, в меньшей степени - фибриноген и фактор X. Тем не менее, изменение содержания этих факторов не выходит за физиологические границы [22, 30].

Протеомный анализ методом двумерного электрофореза с последующей масс-спектрометрией показал, что избыточная обработка плазмы метиленовым синим в высокой концентрации (50 мкмоль) с продолжительным облучением (3 часа) приводит к комплексному повреж-

дению большинства белков плазмы, в частности: гамма-цепи фибриногена, транстиретина и аполипопротеина A-I. Тогда как воздействие, применяющееся в аппарате для обработки донорской плазмы (концентрация МС 1 мкмоль и легкое облучение в дозе 180 Дж/см2) лишь незначительно и очень ограниченно влияет на белки плазмы. Элиминация метиленового синего после обработки не ведет к каким-либо повреждениям белков. [10].

Преимущества методики работы с единичной дозой донорской плазмы

Работа с единичной дозой плазмы, приготовленной из крови одного донора, обладает рядом преимуществ:

1. Отсутствует риск перекрестного заражения, возникающий при объединении нескольких доз плазмы различных доноров.

2. Обработка на месте - методика доступна любой медицинской организации, получающей или применяющей донорскую плазму (рис. 5).

3. Возможность применения как для свежезаготов-ленной, так и для и свежезамороженной плазмы (СЗП).

4. Возможность получения вирусинактивированных криопреципитата и криосупернатантной плазмы [18, 24].

5. Возможность выбора донора-мужчины (для профилактики передачи антилейкоцитарных антител - причины связанного с трансфузией острого поражения легких) [33].

6. Возможность выбора плазмы группы АВ (для профилактики переливания иммунных анти-А и анти-В-антител).

7. Доказанное максимальное (по сравнению с другими методами) снижение риска передачи известных либо неизвестных возбудителей вирусных заболеваний.

Рис. 5. Общий вид лаборатории вирусинактивации плазмы в центре крови г. Льеж (Бельгия)

Табл. 3. Состояние факторов свертывания плазмы на этапах вирусинактивации плазмы метиленовым синим (обозначения этапов см. в тексте)

Показатель Границы Ед. изм. A B C D E

1. Общие тесты

ПТИ_80-130 %_106 ± 1,25 103 ± 2,83 102 ± 2,87 96 ± 1,89 98 ± 2,36

МНО 1,0 ± 0,05 1,0 ± 0,05 1,0 ± 0,05 1,1 ± 0,05 1,0 ± 0,00

АЧТВ_30-60_сек_31 ± 0,47 32 ± 0,47 33 ± 0,94 35 ± 0,00 35 ± 0,47

Тромбиновое время_14-21_(С£К_21 ± 0,82 21 ± 0,47 21 ± 0,82 24 ± 0,82 24 ± 1,25

2. Факторы свертывания

Фибриноген_1,8-3,5 г/л_2,7 ± 0,33 2,6 ± 0,19 2,5 ± 0,19 2,2 ± 0,24 2,2 ± 0,22

Фактор II_70-130 %_107 ± 5,91 103 ± 1,25 102 ± 1,25 99 ± 3,30 101 ± 4,64

Фактор V_65-150 %_112 ± 4,32 113 ± 6,38 110 ± 9,43 105 ± 6,48 106 ± 7,07

Фактор VIII:C_0,50-2,00 МЕ/мл 1,41 ± 0,05 1,38 ± 0,05 1,32 ± 0,10 1,11 ± 0,10 1,10 ± 0,13

Фактор IX_0,70-1,30 МЕ/мл 0,98 ± 0,04 1,07 ± 0,04 1,05 ± 0,05 1,00 ± 0,08 0,99 ± 0,09

Фактор X_70-130 %_117 ± 6,18 112 ± 7,12 105 ± 5,72 99 ± 2,87 102 ± 9,81

Фактор XI_50-130 %_100 ± 1,25 103 ± 3,77 101 ± 7,72 93 ± 5,79 97 ± 8,96

3. Ингибиторы

Антитромбин III_0,80-1,30 МЕ/мл 0,99 ± 0,03 0,97 ± 0,00 0,96 ± 0,00 0,97 ± 0,02 0,97 ± 0,01

Протеин C_70-150 %_115 ± 2,87 115 ± 4,55 113 ± 2,87 109 ± 4,32 111 ± 6,65

Протеин S_70-140 %_77 ± 4,55 86 ± 5,56 87 ± 2,16 81 ± 7,41 85 ± 8,83

4. Фибринолиз

Ингибитор плазмина 80-120 %_103 ± 2,94 103 ± 2,83 101 ± 1,63 95 ± 5,31 97 ± 1,25

Альфа-1-антитрипсин 0,70-1,50 Ед/мл 0,96 ± 0,08 1,04 ± 0,07 1,02 ± 0,07 0,95 ± 0,10 0,88 ± 0,07

5. Комплемент

CH50 70-100 % 116 ± 7,76 120 ± 10,80 128 ± 11,52 110 ± 13,02 118 ± 17,17

6. Активация

TAT 1-4,1 мкг/л 3,7 ± 1,25 2,6 ± 0,78 2,5 ± 0,41 3,0 ± 1,21 2,7 ± 0,54

Фактор XIIa_<3,0_нг/мл 1,0 ± 0,00 1,2 ± 0,33 1,0 ± 0,00 1,0 ± 0,00 1,0 ± 0,00

D-димер_64-246 мкг /л 145 ± 24,34 125 ± 18,78 128 ± 12,66 129 ± 9,88 126 ± 8,18

ПТИ - протромбиновый индекс, МНО - международное нормализованное отношение, АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время ТВ - тромбиновое время, CH50 - 50% гемолитическая единица комплемента, ТАТ - комплекс тромбин-антитромбин

Внедрение метода в мировой практике и России

Метод обработки одной дозы плазмы метиленовым синим одобрен Всемирной организацией здравоохранения [16].

С 2003 года процедура вирусинактивации плазмы предусмотрена одним из наиболее авторитетных нормативных документов службы крови - рекомендованное Советом Европы «Руководство по приготовлению, использованию и гарантии качества компонентов крови» [15]2.

Тем самым созданы правовые условия для внедрения передовых технологий в практику российской службы крови и здравоохранения в целом.

Существуют три типа внедрения вирусинактивации одной дозы плазмы метиленовым синим:

1. Все дозы плазмы для переливания в стране (Бельгия).

2. Все дозы плазмы в стране, предназначенные для переливания детям до 16 лет (Великобритания) [25].

2 Россия более десяти лет является членом Совета Европы [2]. Более того, Россия обладает статусом главного плательщика Совета Европы То есть цитируемое Руководство не только является документом прямого действия в России (как и в других государствах - членах Совета Европы), но и готовится на деньги российских налогоплательщиков.

3. В инициативном порядка в качестве дополнительного метода повышения безопасности трансфузионной терапии (Франция, Испания, Италия, Швеция, Бразилия, Греция, Австрия и т.д.).

Различная ведомственная и региональная принадлежность организаций службы крови России предполагает внедрение технологии инактивации по третьему типу - в передовых центрах крови и клиниках. Первый опыт внедрения технологии вирусинактивации одной дозы плазмы метиленовым синим в России (Ставрополь, Краснодар, Киров, Сургут и т.д.) показал как высокую клиническую эффективность этой технологии, так и ее соответствие социальным ожиданиям.

Литература

1. Жибурт Е.Б., Губанова М.Н., Шестаков Е.А., Максимов В.А. «Новые» гемо-

трансмиссивные инфекции и их профилактика// Трнасфузиология.- 2006.- Т.7, №4.- С.56-67

2. Федеральный закон Российской Федерации от 23 февраля 1996 г. № 19-ФЗ "О

присоединении России к Уставу Совета Европы"

3. Abe H., Wagner S.J. Analysis of viral DNA, protein and envelope damage after

methylene blue, phthalocyanine derivative or merocyanine 540 photosensitization// Photochem. Photobiol.- 1995.- Vol. 61, №4.- P. 402-409

4. Allain J.P., Bianco C., Blajchman M.A. et al. Protecting the blood supply from

emerging pathogens: the role of pathogen inactivation// Transfus. Med. Rev.- 2005.-Vol.19, №2.- P.110-126

5. Aznar J.A., Molina R., Montoro J.M. Factor Vlll/von Willebrand factor complex in

methylene blue-treated fresh plasma// Transfusion.- 1999.- Vol. 39, №7.- P 748-750

6. Burnouf T., Radosevich M., El-Ekiaby M., et al. Nanofiltration of single plasma

donations: feasibility study// Vox Sang.- 2003.- Vol.84.- P.111-119

7. Burnouf-Radosevich M., Burnouf T., Huart J.J. A pasteurized therapeutic plas-

ma// Infusionsther Transfusionsmed.- 1992.- Vol.19.- P.91-94

8. Cardigan R., Lawrie A.S., Mackie I.J., Williamson L.M. The quality of fresh-froz-

en plasma produced from whole blood stored at 4°C overnight// Transfusion.- 2005.-Vol. 45, №8.- P, 1342-1348

9. Corbin F. Pathogen inactivation of blood components: current status and introduction

of an approach using riboflavin as a photosensitizer// Int. J. Hematol.- 2002.- Vol.76, (Suppl 2).- P.253-257

10. Crettaz D., Sensebe L., Vu DH. et al. Proteomics of methylene blue photo-treated plasma before and after removal of the dye by an absorbent filter// Proteomics.-2004.- Vol.4, №3.- P.881—891

11. Depasse F., Sensebe L., Seghatchian J. et al. The influence of methylene blue light treatment and methylene blue removal filter on fibrinogen activity states and fibrin polymerisation indices// Transfus. Apher. Sci - 2005.- Vol.33, №1.- P.63-69

12. Floyd R.A., Schneider J.E., Dittmer D.P. Methylene blue photoinactivation of RNA viruses// Antiviral Res.- 2004.- Vol.61, №3.- P.141-151

13. Garwood M., Cardigan R.A., Drummond O. et al., The effect of methylene blue photoinactivation and methylene blue removal on the quality of fresh-frozen plasma// Transfusion.- 2003.- Vol.43, №9.- P.1238-1247

14. Goubran H.A., Burnouf T., Radosevich M. Virucidal heat-treatment of single plasma units: a potential approach for developing countries // Haemophilia.- 2000.-Vol.6.- P.597-604

15. Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components. Recommendation № R(95)15/ 12th edition, Council of Europe, 2006.- 268 p.

16. Guidelines for viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products// WHO Expert Committee on Biological Standardization.- Geneva, 2001.- 72 p.

17. Hambleton J., Wages D., Radu-Radulescu L., et al. Pharmacokinetic study of FFP photochemically treated with amotosalen (S-59) and UV light compared to FFP in healthy volunteers anticoagulated with warfarin// Transfusion.- 2002.- Vol.42.-P.1302-1307

18. Hornsey V.S., Young D.A., Docherty A. Cryoprecipitate prepared from plasma treated with methylene blue plus light: increasing the fibrinogen concentration// Transfus. Med.- 2004.- Vol.14, №5.- P.369-374

19. Knuever-Hopf J., Vogt I., Mohr H. The influence of photodynamic treatment on the genome and the infectivity of parvovirus B19// Transfusion Clin. Biol.- 2001.-Vol.8, Suppl 1.- P.141

20. Lambrecht B., Mohr H., Knuver-Hopf J., Schmitt H. Photoinactivation of viruses in human fresh plasma by phenothiazine dyes in combination with visible light// Vox Sang.- 1991.- Vol.60.- P.207-213

21. Marinella M.A. When brown and blue make red: a case of acquired methemoglobinemia// Heart Lung.- 2006.- Vol.35, №3.- P.205-206

22. Muller N., Reichenberg S. Preservation of plasma quality after methylene blue treatment// Transfus. Med. Hemother.- 2005.- Vol. 89, Suppl. 1.- P.64

23. Muller-Breitkreutz K., Mohr H. Hepatitis C and human immunodeficiency virus RNA degradation by methylene blue/light treatment of human plasma// J. Med. Virol.- 1998.- Vol.56, №3.- P.239-245

24. O'Shaughnessy D.F., Atterbury C., Bolton Maggs P. et al. Guidelines for the use of fresh-frozen plasma, cryoprecipitate and cryosupernatant// Br. J. Haematol.-2004.- Vol.126, №1.- P.11-28

25. Pamphilon D. Viral inactivation of fresh frozen plasma// Br. J. Haematol.- 2006.-Vol.109, №4.- P.680-693

26. Papin J.F., Floyd R.A., Dittmer D.P. Methylene blue photoinactivation abolishes West Nile virus infectivity in vivo// Antiviral. Res.- 2005.- Vol.68, №2.- P.84-87

27. Peer G., Itzhakov E., Wollman Y. et al. Methylene blue, a nitric oxide inhibitor, prevents haemodialysis hypotension// Nephrology Dialysis Transplantation.- 2001.-Vol.16, №7.- P. 1436-1441

28. Pelletier J.P., Transue S., Snyder E.L. Pathogen inactivation techniques// Best Pract. Res. Clin. Haematol.- 2006.- Vol.19, №1.- P.205-242

29. Piet M.P., Chin S., Prince A.M. et al. The use of tri(n-butyl)phosphate detergent mixtures to inactivate hepatitis viruses and human immunodeficiency virus in plasma and plasma's subsequent fractionation // Transfusion.- 1990.- Vol.30.- P.591-598

30. Reichenberg S., Muller N. Quality of Theraflex MB-plasma during storage and treatment// Vox Sang.- 2005.- Vol. 89, Suppl. 1.- P. 137

31. Riggert J., Humpe A., Legler T.J. et al. Filtration of methylene blue-photooxi-dized plasma: influence on coagulation and cellular contamination// Transfusion.-2001.- Vol. 41, №1.- P, 82-86

32. Shanmugam G. Vasoplegic syndrome - the role of methylene blue// Eur. J. Cardiot-horac. Surg.- 2005.- Vol.28, №5.- P.705-710

33. Seghatchian J. What is happening? Are the current acceptance criteria for therapeutic plasma adequate?// Transfus. Apheresis. Sci.- 2004.- Vol.31, №1.- P.67-79

34. Zhou X.P., Xu J.B., Sun P. The effect of methylene blue/photochemical method for virus inactivation on plasma components// Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi.-2003.- Vol.11, №3.- P.305-307