CC BY
147
УДК 576. 89.42: 579. 834. 114 (571.1/5)(1-21)
ВИДОВОЙ СОСТАВ СПИРОХЕТ BORRELIA BURGDORFERI SENSU LATO, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ПОПУЛЯЦИИ КЛЕЩЕЙ IXODES PERSULCATUS НА ТЕРРИТОРИИ НОВОСИБИРСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА
Анатолий Борисович БЕКЛЕМИШЕВ, Александр Владимирович РЯБЧЕНКО, Алексей Львович МАМАЕВ
ФГБУ НИИ биохимии СО РАМН 630117, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2
Цель работы - определить зараженность клещей I. persulcatus, отловленных в рекреационной зоне Новосибирска в весенние периоды с 2003 по 2008 г., спирохетами B. burgdorferi s. l. Материалы и методы. Обнаружение в клещах и генотипирование боррелий проводили методами ПЦР и анализа полиморфизма длин рест-риктных фрагментов ампликонов межгенной области rrf-rrl. Результаты. Обследовано 1259 особей взрослых клещей. Зараженность клещей боррелиями в период с 2003 по 2008 г. колебалась в пределах от 20,1 ± 2,3 до 31,7 ± 6,0 %. В клещах обнаружены спирохеты двух видов: B. afzelii и B. garinii. Доля спирохет B. afzelii являлась относительно постоянной, тогда как в случае вида B. garinii, включающего геномные группы NT29 и 20047T, прослеживается возрастание доли боррелий группы 20047T. Выявлены особи клещей, инфицированные, предположительно, спирохетами B. japonica.
Ключевые слова: клещ Ixodes persulcatus, зараженность, ПЦР, вид, Borrelia burgdorferi sensu lato.
Лайм-боррелиоз (синонимы: иксодовый клещевой боррелиоз, болезнь Лайма) - одно из самых распространенных природно-очаговых заболеваний в России, возбудителем которого являются спирохеты комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato (s. l.), относящиеся к роду Borrelia, входящему в семейство Spirochaetaceae. В настоящее время охарактеризовано 18 видов спирохет, входящих в состав комплекса B. burgdorferi s. l., из которых только три (B. burgdorferi s. s, B. garinii и B. afzelii) являются патогенными для человека [8, 19]. Все эти виды боррелий были обнаружены на европейской территории России [1, 3, 17]. На территории Европы были выделены из биоптатов кожи пациентов и описаны новые относительно патогенные для человека виды: B. spielmanii [18, 21], B. lusitaniae и B. valaisiana [12, 13, 19]. Долгое время считалось, что в России циркулируют только два генотипа — B. garinii и В. afzelii с явным преобладанием первого [1, 17]. Однако уже в 2001 г. появились работы, свидетельствующие о циркуляции на европейской части России спирохет вида B. burgdorferi s. s. [3, 11]. Описан также случай обнаружения спирохет B. miyamotoi от пациентов на террито-
рии Ленинградской области [6]. На территории Сибири и, в частности, Новосибирской области найдено только два патогенных вида боррелий: B. garinii (группы 20047Т и NT29) и B. afzelii [2, 9, 14, 15]. Однако в 2007 г. в Омской области в популяции клещей Dermacentor reticulates обнаружена ДНК, которая имела высокую степень сходства по межгенному спейсеру rrfA-rrlB с ДНК вида B. spielmani [4].
Выявление новых видов боррелий на территориях, где ранее их не обнаруживали, может быть обусловлено как увеличением числа исследований в этом направлении с использованием новых более совершенных методов анализа, так и возможным распространением видов боррелий вследствие миграций млекопитающих и птиц. Чтобы ответить на эти вопросы, необходимы обширные систематические исследования зараженности иксодовых клещей.
Целью настоящей работы явилось исследование зараженности клещей I. persulcatus, отловленных в рекреационной зоне Новосибирского научного центра (ННЦ) в весенние периоды с 2003 по 2008 г., спирохетами B. burgdorferi s. l. и определение их видового состава.
Беклемишев А.Б. - д.б.н., проф., зав. лабораторией, e-mail: beklem@soramn.ru Рябченко А.В. - к.б.н., старший научный сотрудник, e-mail: masterbio@soramn.ru Мамаев А.Л. - научный сотрудник, e-mail: alexeymamaev@inbox.ru
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Сбор клещей. Клещей Ixodes persulcatus (Schulze) отлавливали флаговым методом в лесопарковой зоне ННЦ в апреле-мае с 2003 по 2008 г. Всего было отловлено и проанализировано 1259 имаго обоих полов. ДНК выделяли только из живых особей клещей.
Выделение суммарного препарата ДНК из клещей. ДНК из живых клещей выделяли методом [10]. Препараты ДНК хранили при -20 оС.
Обнаружение ДНК спирохет B. burgdorferi s. l. в суммарных препаратах ДНК клещей и их генотипирование. Обнаружение ДНК бор-релий и их генотипирование осуществляли с помощью ПЦР и анализа полиморфизма длин рестриктных фрагментов (ПДРФ) межгенной области по методике [16] с некоторыми модификациями [9]. В реакционную смесь объемом 50 мкл вносили по 2-5 мкл препарата ДНК, выделенного из клеща. Температура отжига праймеров с ДНК составляла 64 °С, суммарное количество циклов ПЦР - 40. Для определения ложноотрицательных результатов ПЦР, обусловленных присутствием в некоторых препаратах исследуемой ДНК ингибиторов Taq-полиме-разы, реакцию проводили в присутствии ДНК внутреннего контроля с дополнительной парой соответствующих ей праймеров [9]. Продукты ПЦР анализировали в 6-8 % полиакриламидном геле (ПААГ). Размеры ампликонов, синтезируемых на ДНК внутреннего контроля, составляли 150 пар нуклеотидов (п. н.). ПЦР проводили на амплификаторе «Терцик» («ДНК-технология», Россия). В работе использовались ферменты компании «Сибэнзим» (Россия).
Доля позитивных клещей и доля индивидуального вида от общего количества генотипиро-ванных образцов определялась как p ± SD по
формулам: p = P х 100 % и SD = . Ip (100-p) , n v n
где р — среднее арифметическое, SD - стандартное отклонение, Р - количество позитивных особей в выборке, n - величина выборки.
Электрофорез ДНК проводили в 6 и 16 % ПААГ, в качестве маркерной ДНК использовали ДНК плазмиды pUC19, гидролизованной рестриктазой MspI (размеры рестриктов: 501, 489, 404, 331, 242, 190, 147, 111, 110, 67, 34 х 2, 26 п. н.)
РЕЗУЛЬТАТЫ
Обнаружение и генотипирование геномных ДНК боррелий, выделенных из клещей, осуществлялись в два последовательных этапа,
включающих выявление межгенной области генов 5S и 23 S рРНК (rrf-rrl) методом ПЦР с использованием праймеров, специфичных для спирохет комплекса B. burgdorferi s. l., и последующий анализ полиморфизма длин рестрикт-ных фрагментов, полученных гидролизом амп-ликонов межгенной области rrf-rrl рестриктазой Tru9I (изошизомер MseI). На первом этапе амп-лифицировали фрагмент межгенной области rrf-rrl, длина которого составляет в зависимости от вида 250-270 п. н. В качестве положительного контроля в ПЦР использовали геномную ДНК B. burgdorferi s. s. эталонного штамма В31, размер ампликона межгенной области rrf-rrl которого составляет 250 п. н. В каждую реакционную смесь вносили ДНК внутреннего контроля с дополнительной парой соответствующих ей праймеров, размер ампликона с которой составляет 150 п. н. На рис. 1 представлены результаты типичного анализа продуктов ПЦР на присутствие в них ампликонов межгенной области боррелий. По наличию ампликонов размером 250-270 п. н. судили о присутствии ДНК бор-релий в образцах суммарных препаратов ДНК клещей, т. е. о наличии возбудителя в клеще.
На втором этапе полученные ампликоны межгенной области гидролизовали рестриктазой Tru9I. Представителям каждого вида и геномной группы спирохет B. burgdorferi s. l. свойственен определенный набор отличающихся по размерам рестриктных фрагментов ампликона межгенной области rrf-rrl [16], которые легко можно разделять электрофорезом в 16 % ПААГ. Таким образом, по результатам электрофорети-ческого анализа полученных рестриктов можно судить о видовой принадлежности боррелий, содержащихся в исследуемом клеще. На рис. 2 представлен один из результатов генотипирова-ния межгенной области rrf-rrl боррелий.
Судя по картине электрофореза, представленной на рис. 2, семь исследуемых образцов (дорожки 2, 4, 7, 10-13) содержат геномную ДНК спирохет, относящихся к виду B. garinii (геномная группа 20047T); один образец (дорожка 3) - предположительно B. japonica; один исследуемый образец (дорожка 6) содержит смесь геномных ДНК спирохет B. garinii (геномные группы NT29 и 20047T); один образец (дорожка 8) - B. afzelii; один исследуемый образец (дорожка 9) содержит смесь геномных ДНК спирохет B. garinii (геномная группа 20047T) и, вероятно, B. japonica.
Данным методом нами были проанализированы клещи, отловленные в весенние периоды 2003, 2005, 2006 и 2008 гг. Результаты по гено-
п.н. -260
150
Рис. 1. Электрофореграмма продуктов амплификации межгенной области rrf-rrl, полученных методом ПЦР на образцах ДНК, выделенных из клещей. Электрофорез ДНК проводили в 6 % ПААГ. Дорожки: 1 — отрицательный контроль; 2 — маркерная ДНК (pBR 322, гидролизованная рестриктазой AluI); 3—14 — продукты ПЦР, полученные на препаратах ДНК, выделенных из клещей; 15 — продукт ПЦР, полученный на геномной ДНК B. burgdorferi s. s. штамм B31 (положительный контроль). Ампликоны размером 150 п. н., наблюдаемые на всех дорожках, являются продуктами ПЦР, полученными на ДНК внутреннего контроля
Рис. 2. Электрофореграмма гидролизованных рестриктазой Тги91 ампликонов межгенной области гг—гг, полученных методом ПЦР на препаратах анализируемых образцов ДНК иксодовых клещей. Электрофорез проводили в пластинах 16 % полиакриламидного геля. Дорожки: 1, 14 — маркеры молекулярных масс ДНК (ДНК рВЯ322, гидролизованная рестриктазой НаеШ); 2—13 — продукты гидролиза рестриктазой Тги91 ампликонов межгенной области гг[-гг1 исследуемых образцов ДНК иксодовых клещей
Зараженность взрослых клещей I. persulcatus, отловленных в рекреационной зоне ННЦ в весенние периоды времени 2003-2008 гг., различными видами спирохет комплекса Borrelia burgdorferi s. l.
Год Количество клещей Количество ПЦР-позитивных клещей, % Количество генотипированных ПЦР-позитивных образцов ДНК из клещей
Всего B. garinii NT29 B. garinii 20047Т B. afzelii Смесь видов B.afzelii и B.garinii
2003* 116 31,7 ± 6,0 37 10 14 3 10
2005 306 21,2 ± 2,3 64 8 31 15 10
2006 590 26,1 ± 1,8 154 13 97 20 24
2008 303 20,1 ± 2,3 61 6 53 2 -
X 1315 22,2 ± 1,0 316 37 11,7 ± 1,8 % 195 61,7 ± 2,7 % 40 12,7 ± 1,9 % 44 13,9 ± 1,9 %
Примечание: * - результаты по определению зараженности клещей боррелиями и их генотипированию были получены с помощью анализа ДНК культур спирохет, полученных посевом содержимого кишечника исследуемых клещей на селективную среду ВБК-2 с последующим культивированием боррелий в течение 2 недель [5]; Ъ - суммарные данные за весь наблюдаемый период.
типированию в 2003 г. были получены методом культивирования боррелий. Суммарные результаты исследований за эти годы представлены в таблице.
В результате проделанной работы из патогенных для человека видов спирохет B. burgdorferi s. l., выявленных в различных регионах России, в рекреационной зоне ННЦ мы обнаружили только два: B. garinii (группы NT29 и 20047T) и B. afzelii. В 2006 и 2008 гг. на территории ННЦ были впервые обнаружены особи клещей I. persulcatus, зараженные спирохетами, которые по данным анализа ПДРФ межгенной области rrf-rrl соответствовали виду B. japonica (6 и 5 клещей, соответственно). Препараты ДНК, содержащие геномные ДНК, предположительно, спирохет вида B. japonica, в основном были представлены смесью с образцами геномных ДНК других видов боррелий и при подсчете доли позитивных клещей отдельно не учитывались. Спирохеты вида B. burgdorferi s. s. не были обнаружены ни в одном из проанализированных клещей на всем протяжении исследований.
ОБСУЖДЕНИЕ
В настоящей работе осуществлялся мониторинг зараженности клещей I. persulcatus спирохетами B. burgdorferi s. l. в период с 2003 по 2008 г. Этот вид иксодовых клещей являлся абсолютно доминирующим на территории рекреационной зоны ННЦ в эти годы. Как можно видеть из таблицы, зараженность иксодовых клещей, населявших рекреационную зону ННЦ, является величиной непостоянной и может изменяться год от года (от 20,1 ± 2,3 % в 2008 г. до 31,7 ± 6,0 % в 2003 г.). В среднем зараженность
клещей за весь наблюдаемый период составила 22,2 ± 1,0 %. Полученные нами данные согласуются с результатами ранее проведенных исследований на территории Новосибирской области, где были зафиксированы колебания зараженности от 14,0 ± 5,4 % в 1999 г. до 38,0 ± 4,0 % в 2001 г. [9, 14, 15].
На основе анализа зараженности взрослых клещей I. persulcatus различными видами спирохет комплекса Borrelia burgdorferi s. l. можно определить долю каждого вида (см. таблицу) от всей суммы протипированных образцов ДНК (316 образцов). Эти данные отражают видовой состав спирохет B. burgdorferi s. l., циркулировавших в популяции клещей на территории ННЦ в весенние периоды 2003-2008 гг. Из всех патогенных видов комплекса B. burgdorferi s. l. подавляющее распространение получили спирохеты вида B. garinii, которые были обнаружены в 73,4 ± 2,5 % клещей, причем представители геномной группы 20047T - в 61,7 ± 2,7 % клещей, а группы NT29 - в 11,7 ± 1,8 % клещей. Спирохеты вида B. afzelii были найдены только в 12,7 ± 1,9 % клещей, 13,9 ± 1,9 % исследованных образцов ДНК клещей содержали геномные ДНК одновременно двух видов, B. garinii и B. afzelii.
Если проанализировать видовое распределение боррелий по каждому году и определить долю каждого вида от всей суммы протипи-рованных образцов ДНК, то можно составить гистограмму, которая отображает динамику видового состава боррелий в популяции клещей I. persulcatus (рис. 3).
Из данных по зараженности клещей (см. таблицу) видно, что доля вида B. afzelii в популяции клещей являлась относительно постоян-
8 Я 80-Е я
I 3 70-g 2 60
2003
2005 1 2006 Год исследования
2008
В. garinii NT29 Ж В. garinii 20047
Рис. 3. Доля видов комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, циркулировавших в популяции клещей Ixodes persulcatus (Shulze) в весенние периоды 2003—2008 гг. на территории Новосибирского научного центра. Mix — смесь видов B. afzelii и B. garinii
ной, т. е. никакой динамики не было, в связи с чем на рис. 3 данные не приводятся. В случае вида B. garinii (см. рис. 3) ежегодное соотношение между представителями геномных групп NT29 и 20047T в зараженных боррелиями клещах являлось непостоянным, и в период с 2003 по 2008 г. четко прослеживается возрастание в популяции клещей доли боррелий геномной группы 20047T. При относительно постоянной величине зараженности клещей 20-32 % это увеличение объясняется снижением доли геномной группы NT29. Кроме того, прирост также объясняется уменьшением доли микст-инфицированных клещей практически до нуля (2008 г.), что хорошо отражено на рис. 3. По-видимому, в микст-инфицированных клещах происходит вытеснение видом B. garinii группы 20047T как вида B. afzelii, так и вида B. garinii группы NT29, за счет чего падает доля микст-инфицированных клещей и увеличивается доля клещей, зараженных спирохетами геномной группы 20047T. В целом вид B. garinii на всем протяжении исследуемого периода времени являлся доминирующим видом спирохет комплекса B. burgdorferi s. l., циркулировавших в иксодовых клещах рекреационной зоны ННЦ. Учитывая тропизм спирохет вида B. garinii к нервной ткани [6, 19], можно ожидать, что на территории Новосибирской области у больных Лайм-боррелиозом будут преобладать невралгические формы болезни, что, несомненно, не-
обходимо учитывать при выборе рационального способа лечения.
Спирохеты вида B. burgdorferi s. s., выявляемые на территории Европы, в том числе и в европейской части России, на территории ННЦ обнаружены не были. Можно полагать, что процесс распространения боррелий по Евразии, осуществляемый млекопитающими и птицами, протекает сравнительно медленно. Для подтверждения полученных в настоящей работе данных об обнаружении спирохет, которые, судя по результатам анализа межгенной области rrf-rrl методом ПДРФ, можно отнести к виду B. japonica, требуются дополнительные исследования, в частности, секвенирование межгенной области rrf-rrl либо генов иммунодоминантных белков (OspC, OspA и других). Принято считать, что спирохеты вида B. japonica не патогенны для человека. Однако в литературе появились данные о тяжелых поражениях сердечно-сосудистой системы у пациентов Приморского края, инфицированных спирохетами B. japonica [7]. Поэтому данный вид боррелий следует рассматривать в качестве потенциального источника болезни и учитывать при проведении эпидемиологических исследований.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В весенние периоды с 2003 по 2008 г. в популяции иксодовых клещей, населяющих рекреационную зону ННЦ, циркулировали только два вида боррелий: B. afzelii и B. garinii (геномные группы NT29 и 20047T), со значительным преобладанием последнего. Спирохеты вида B. burgdorferi s. s. в исследованных иксодовых клещах обнаружены не были. Выявлены особи, инфицированные, предположительно, спирохетами B. japonica. Однако для более строгого доказательства обнаружения спирохет B. japonica в клещах потребуется дополнительный молекулярно-генетический анализ ДНК этого вида боррелий. Учитывая достаточно высокий уровень зараженности взрослых особей таежного клеща спирохетами B. burgdorferi s. l. (22,2 ± 1,0 %), можно прогнозировать высокий риск заражения возбудителями Лайм-боррели-оза лиц, подвергшихся нападению иксодовых клещей в Новосибирской области. В заключение следует добавить, что в последние 3-4 года в пригороде Академгородка появился вид иксодовых клещей I. pavlovskyi, который таксоно-мически, морфологически и экологически близок I. persulcatus и практически сравнялся по численности с последним. Принимая во внимание высокую эпидемиологическую значимость
Лайм-боррелиоза для населения, исследование зараженности клещей I. pavlovskyi спирохетами группы B. burgdorferi s. l. представляет несомненный интерес.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Горелова Н.Б., Коренберг Э.И., Ковалевский Ю.В. и др. Изоляция боррелий от клещей Ixodes trianguliceps (Ixodidae) и возможное значение этого вида в эпизоотологии иксодовых клещевых боррелиозов // Паразитология. 1996. 30. (1). 1318.
2. Коренберг Э.И., Нефедова В.В., Фадеева И. А., Горелова Н.Б. Основные итоги генотипи-рования боррелий в России // Бюл. сиб. мед. 2006. (Прил. 1). 87-92.
3. Масузава Т., Наумов Р.Л., Кудекен М., Хари-тоненков И.Г. Обнаружение Borrelia burgdorferi sensu stricto в Московской области, Россия // Мед. паразитол. паразитарные болезни. 2001. (2). 52.
4. Рудакова С.А., Коломеец А.Н., Самойлен-ко И.Е. и др. Экспресс-индикация трансмиссивных патогенов как основа дифференцированного подхода к профилактике инфекций, передающихся иксодовыми клещами // Бюл. СО РАМН. 2007. 126. 116-119.
5. Рябченко А.В., Ивлева И.Н., Беклемишев А.Б. Комплексная оценка зараженности клещей Ixodes persulcatus, распространенных в рекреационной зоне Новосибирского научного центра, спирохетами Borrelia burgdorferi s.l. // Журн. инфекц. па-тол. 2004. 11. (3-4). 107-110.
6. Скрипченко Н.В., Балинова А.А. Клинико-лабораторные особенности иксодового клещевого боррелиоза, вызванного Borrelia miyamotoi, у детей // Журн. инфектологии. 2010. 2. (2). 35-39.
7. Черникова А.А., Гордеец А.В., Терновой В.А. и др. Проявления иксодового клещевого боррели-оза в зависимости от генотипа боррелий в Приморском крае // Тихоокеанский мед. журн. 2009. (4). 26-28.
8. Baranton G., De Martino S.J. Borrelia burgdorferi sensu lato diversity and its influence on pathogenicity in human // Curr. Probl. Dermatol. 2009. 37. 1-17.
9. Beklemishev A.B., Dobrotvorsky A.K., Piterina A.V. et al. Detection and typing of Borrelia burgdorferi sensu lato genospecies in Ixodes persulcatus ticks in West Siberia, Russia // FEMS Microbiol. Lett. 2003. 227. 157-161.
10. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocya-nate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem. 1987. 162. 156-159.
11. Горелова Н.Б., Коренберг Э.И., Postic D. и др. Первая изоляция Borrelia burgdorferi sensu stricto в России // Журн. микробиол. эпидемиол. иммунобиол. 2001. (4). 10-12.
12. Hengge U.R., Tannapfel A., Tyring S.K. et al. Lyme borreliosis // Lancet. Infect. Dis. 2003. 3. 489-500.
13. Hofmann H. Lyme borreliosis. Cutaneous manifestation // Hautarzt. 2005. 56. 783-796.
14. Livanova N.N., Morozova O.V., Morozov I.V. et al. Characterization of Borrelia burgdorferi sensu lato from Novosibirsk region (West Siberia, Russia) based on direct PCR // Eur. J. Epidemiol. 2003. 18. 1155-1158.
15. Morozova O.V., Dobrotvorsky A.K., Livano-va N.N. et al. PCR detection of Borrelia burgdorferi sensu lato, tick-borne encephalitis virus, and the human granulocytic ehrlichiosis agent in Ixodes persul-catus ticks from Western Siberia, Russia // J. Clin. Microbiol. 2002. 40. 3802-3804.
16. Postic D., Assous M.V., Grimont P.A.D., Baranton G. Diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato evidenced by restriction fragment length polymorphism of rrf(5S)-rrl(23S) intergenic spaser amlicons // Int. J. Syst. Bacteriol. 1994. 44. 743752.
17. Postic D., Korenberg E., Gorelova N. et al. Borrelia burgdorferi sensu lato in Russia and neighbouring countries: high incidence of mixed isolates // Res. Microbiol. 1997. 148. 691-702.
18. Richter D., Postic D., Sertour N. et al. Delineation of Borrelia burgdorferi sensu lato species by multilocus sequence analysis and confirmation of the delineation of B.spielmanii sp. nov. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2006. 56. 873-881.
19. Stanek G., Reiter M. The expanding Lyme Borrelia complex - clinical significance of genomic species? // Clin. Microbiol. Infect. 2011. 17. (4). 487-493.
20. Steere A.C. Lyme borreliosis in 2005, 30 years after initial observations in Lyme Connecticut // Wien. Klin. Wochenschr. 2006. 118. 625-633.
21. Wang G., van Dam A., Schwartz I., Dankert J. Phenotypic and genetic characterization of novel Borrelia burgdorferi sensu lato isolate from a patient with Lyme borreliosis // J. Clin. Microbiol. 1999. 37. 9. 3025-3028.
SPECIES OF BORRELIA BURGDORFERI SENSU LATO SPIROCHETES, CIRCULATING IN IXODES PERSULCATUS TICKS POPULATION AT THE TERRITORY OF NOVOSIBIRSK SCIENTIFIC CENTER
Anatoly Borisovich BEKLEMISHEV, Aleksander Vladimirovich RYABCHENKO, Aleksey L'vovich MAMAEV
FSBI Research Institute for Biochemistry SB RAMS 630117, Novosibirsk, Timakov str., 2
The aim of the study - to determine the infection rate by spirochetes B. burgdorferi sl of I. persulcatus ticks, collected in the recreational zone of Novosibirsk in the spring periods from 2003 to 2008. Material and methods. Detection and genotyping borrelia in ticks was performed by PCR and by analysis of restriction fragments length polymorphism of amplicons from rrf-rrl intergenic region. Results. A total of 1259 individuals of adult ticks were analyzed. The infection rate of ticks by borrelia in the period from 2003 to 2008 ranged from 20.1 ± 2.3 to 31.7 ± 6.0 %. Two species of spirochetes were found in ticks: B. afzelii and B. garinii. The proportion of B. afzelii spirochetes was relatively constant, whereas in the case of B. garinii species, consisting of NT29 and 20047T genomic groups, observed increase in the proportion of Borrelia 20047T group. It was identified individual ticks infected presumably with B. japonica spirochetes.
Key words: Ixodes persulcatus, infection rate, PCR, species, Borrelia burgdorferi sensu lato.
Beklemishev A.B. - doctor of biological sciences, professor, head of the laboratory, e-mail: beklem@soramn.ru Ryabchenko A.V. - candidate of biological sciences, senior researcher, e-mail: masterbio@soramn.ru Mamaev A.L. - researcher, e-mail: alexeymamaev@inbox.ru
