CC BY
53
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЙ ЭФФЕКТ АПТАМЕРОВ
Т.Н. Замай12, А.Г. Савицкая1, О.С. Замай12,
И.Т. Решетнева1, О.В. Перьянова1, Г.М. Дмитриева3,
Т.Г. Остапова4
1ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздравсоцразвития России; 2Сибирский федеральный университет, г. Красноярск; Управления Роспотребнадзора по Красноярскому краю; 4ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Красноярском крае», г. Красноярск
В последнее время все большее распространение получают сальмонеллы, резистентные ко многим современным антибиотикам и дезинфицирующим средствам. Для преодоления полирезистентности бактерий ведутся разработки новых антимикробных препаратов на основе нанотехнологий. Выявлено, что антимикробной активностью обладают углеродные нанотрубки и фуллерены, оксиды металлов и др. Но эти наночастицы могут вызывать воспаление и окислительный стресс, кроме того, обладают генотосичностью и подавляют иммунную систему, поэтому использование таких препаратов, имеет достаточно большие ограничения. Большой интерес проявляется к новым технологиям, дающим возможность получать эффективные средства диагностики и терапии на основе искусственных антител (аптамеров), отличающихся высокой специфично -стью по отношению к своей мишени и малой имму-ногенностью.
Цель работы — исследование антибактериального эффекта аптамеров.
Селекцию аптамеров к сальмонеллам осуществляли с помощью технологии SELEX. Исследование аффинности пула аптамеров к сальмонеллам проводили на проточном цитометре Beckman Coulter Cytomics FC 500. Для исследования антибактериального эффекта аптамеров использовали суточные культуры Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium. В опытные пробы Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium добавляли аптамеры в конечной концентрации 1 мкМ и 15 мкМ и библиотеку одноцепочечных ДНК в конечной концентрации 1 мкМ. Все пробы инкубировали в течение 30 минут, после чего по 100 мкл суспензии из контрольных (Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium) и опытных проб (Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium с аптамерами и Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium с библиотекой) высевали на питательный агар в трех повторностях. Подсчет колоний осуществляли через 24 часа культивирования бактерий при 37°С.
Проведенные исследования показали, что апта-меры к Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium обладают способностью подавлять рост данных микроорганизмов.
О РЕЗУЛЬТАТАХ ПОДТВЕРЖДЕНИЯ КАЧЕСТВА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
М.В. Зароченцев, В.В. Мордвинова, Э.Ф. Опочинский
ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва
В рамках осуществления внешнего контроля качества (ВКК) микробиологических исследований в 2009-2011 гг. ФБУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора (Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных заболе-
ваний II-IV групп патогенности в Центральном Федеральном округе Российской Федерации) были организованы и проведены 3 раунда ВКК в форме испытаний контрольных материалов. Участникам были предложены 342 контрольных образца, из них 268 образцов для идентификации, микроорганизмов II-IV группы патогенности и 74 образца для определения возбудителей паразитарных заболеваний (Enterobacteriaceae, Campylobacter, Bacillus, Proteus, Pseudomonas, Staphylococcus, Legionella, Listeria, Brucella, Fransiella, личинки и яйца нематод, цестод, трематод, цисты простейших, сыворотки крови).
При анализе результатов ВКК было установлено, что возникали сложности при идентификации таких микроорганизмов как Salmonella, Yersinia, Pseudomonas, Acinetobacter, Bacillus cereus, Hafnia. При дифференциальной диагностики микроорганизмов рода Enterobacter, не все лаборатории провели окончательную видовую идендифика-цию Enterobacter aerogenes и Enterobacter cloacae, ограничившись выделением Enterobacter sakazakii. В ряде случаев тест-штаммы микроорганизмов Campylobacter jejuni и Escherichia coli не были восстановлены и не дали роста на питательных средах.
Не была проведена дифференциальная диагностика личинок Strongyloides stercoralis, яиц нематод Askaris lumbricoides и цист Lamblia intestinalis, возникли сложности при исследовании сывороток крови на наличие (отсутствие) антител к антигенам Toxocara и Echinococcus granulosus.
В целом, количество удовлетворительно решенных контрольных заданий составило в 2009 г. — 77 (92%), в 2010 г. — 120 (96%), в 2011 г. — 125 (94%). Удельный вес правильно проведенной идентификации бактериальных культур составил 93-96%, идентификации возбудителей паразитарных заболеваний — 94%.
По итогам ВКК в лабораториях проведены корректирующие мероприятия по установлению и ликвидации причин неудовлетворительных результатов с последующими повторными исследованиями контрольных образцов.
Таким образом, результаты ВКК 2009-2011 гг. подтверждают достаточно высокий уровень качества микробиологических исследований, выполняемых в лабораториях центров гигиены и эпидемиологии в субъектах Российской Федерации.
ВЕДУЩАЯ МИКРОФЛОРА В ПАТОЛОГИИ И НОРМЕ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ
С.Г. Захарова
МБУЗ «Эжвинская городская поликлиника», г. Сыктывкар
Известно, что во влагалище здоровой женщины присутствует большое количество бактерий, причем практически все из них, за исключением лакто- и би-фидобактерий, могут принимать участие в возникновении воспаления. Однако ведущую роль играют представители коккобациллярной флоры, которые при определенных условиях могут стать вирулентными, а именно: энтеробактерии (кишечная палочка, клебсиелла), кокковая флора (стафилококки, стрептококки гр. В), коринебактерии. Генитальный тракт в репродуктивном периоде колонизирован комплексной микрофлорой. Исследования влагалищной микрофлоры у здоровых женщин свидетельствуют о том, что у 87-100% женщин обнаруживают аэроб-
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
ные микроорганизмы. Из них чаще встречают лакто-бактерии (45—88%), стрептококки (53—68%), энтерококки (27—32%), коагулазонегативные стафилококки (34—92%). В женских половых органах встречаются гемолитические и негемолитические стрептококки. В определенных условиях эти микроорганизмы могут стать возбудителями инфекционных процессов. Наибольшее значение имеют стрептококки группы В. Эти микроорганизмы рассматриваются как нормальная микрофлора влагалища у здоровых беременных женщин. Следует отметить, что у беременных носительство обнаруживается чаще, чем у небеременных: у 20,4 и 9,4% соответственно. Участились случаи их выделения при эндометрите, при раневой инфекции, и других воспалительных заболеваниях женских половых органов.
По данным нашей лаборатории за период с 2009 по 2011 гг. повысилась роль в-гемолитических стрептококков (серогруппа В) — 3,7—6,9% и грибов рода Candida (Candida albicans) — 7,6—9,4% в патологии женских половых органов у женщин фертильного возраста. Такие показатели свидетельствуют о неблагоприятном прогнозе для женщин детородного возраста с воспалительными заболеваниями, в некоторой степени объясняя низкий процент здоровых женщин, планирующих беременность.
Таким образом, воспалительные заболевания инфекционного генеза составляют значительную часть гинекологической патологии. Тем самым настало время серьезно отнестись к реальному факту существования инфекций у женщин фертильного возраста, стремиться к их профилактике, ранней диагностике, адекватной терапии и снижению риска возникновения тяжелых осложнений.
ЛОКАЛИЗАЦИЯ, ВИДОВОЙ СОСТАВ И АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ У ПАЦИЕНТОВ ОТДЕЛЕНИЙ РЕАНИМАЦИИ
Ю.А. Захарова1, О.С. Федотова2, А.М. Николаева3
'ГБОУ Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития; 2ФГБУЗ Пермский клинический центр ФМБА России; 3НПО Микроген Минздравсоцразвития, Москва (филиал НПО Биомед, Пермь)
Работа выполнена на базе ОРИТ хирургического, соматического, акушерского и педиатрического профилей. Изучен видовой состав и уровень анти-биотикорезистентности грамотрицательных микроорганизмов, выделенных из локусов 34 пациентов в возрасте от 2 суток до 76 лет с признаками гнойно-септических инфекций (ГСИ). Идентификация микроорганизмов проводилась, согласно усовершенствованным методикам, защищенным патентами РФ, уровень чувствительности к антибиотикам — методом серийных разведений с определением МПК в микропланшетах (BioMerieux, France) к 12 препаратам: ампициллину, амоксиклаву, цефуроксиму, це-фотаксиму, цефтриаксону, цефтазидиму, цефепиму, имипенему, меропенему, гентамицину, амикацину, ципрофлоксацину.
В ходе исследований от больных ОРИТ было выделено 48 штаммов, представителей Enterobacte-riaceae sp., Pseudomonadaceae sp., Acinetobacter spp., Stenotrophomonas spр. В 13 случаях (38,2+8,3%) инфекция носила ассоциативный характер. Преи-
мущественным местом локализации микроорганизмов явились дыхательные пути (трахея, легкие, плевра, ротовая полость) откуда было выделено 64,6+8,2% изолятов. Второе ранговое место заняли уропатогены (14,6+6,0%), третье — штаммы из брюшной полости и раневых секретов (по 6,3+4,2%). Видовой состав микрофлоры включал A. baumanii (29,2+6,6%), P. aeruginosa (18,8+5,6%), S. maltophilia (18,8+5,6%), E. coli (12,5+4,8%), K. terrigena (10,4+4,4%), С. freundii (4,1+2,9%), P. vulgaris (4,1+2,9%), P. mirabilis (2,1+2,1%). В целом устойчивость штаммов к ампициллину составила 85,4%, цефуроксиму — 83,3%, цефотаксиму — 79,2%, цефтриаксону — 68,8%, цефепиму — 60,4%, цефтазидиму — 50,0%, амоксиклаву — 41,7%, гентамицину — 39,6%, амикацину — 31,3%, имипенему и меропенему — по 27,1%, ципрофлоксацину — 16,7%. Высокочувствительными ко всем 12 препаратам были 14,6% тестируемых штаммов. Исключительной устойчивостью (к 9 и более препаратам) характеризовались 2 штамма C. freundii, 4 штамма K. terrigena, 9 штаммов S. maltophilia и 4 штамма P. аeruginosa (39,6%).
Таким образом, штаммы грамотрицательных микроорганизмов, выделенные от пациентов ОРИТ и преимущественно представленные A. baumanii, P. aeruginosa, S. maltophilia в 64,6+8,2% случаях колонизируют нижние и верхние отделы дыхательных путей пациентов ОРИТ и имеют высокий уровень антибиотикорезистентности.
КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВНУТРИУТРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ В БЕЛГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ
Л.О. Землянская1, Т.Н. Пономаренко2, Е.Е. Оглезнева2, О.А. Землянский2
1МУЗ Городская клиническая больница г. Белгорода; 2ФГАОУ ВПО Белгородский государственный национальный исследовательский университет
Внутриутробное инфицирование плода на современном этапе является одной из наиболее важных проблем акушерства и перинатологии. Частота его колеблется от 6 до 53%, достигая 70% среди недоношенных детей. В последнее время резко возросла роль хламидий, микоплазм и уреаплазм.
Анализ заболеваемости новорожденных внутриутробными инфекциями, проведенный в динамике за 13 лет показал, что эпидемический процесс внутриутробных инфекций в Белгородской области характеризуется тенденцией к росту. Внутриутробные инфекции регистрируются среди новорожденных на всех административных территориях области, причем уровни заболеваемости не зависят от плотности населения.
Внутригодовая динамика заболеваемости новорожденных внутриутробными инфекциями характеризовалась возникновением заболеваний новорожденных в течение всего года. Однако в отдельные годы заболеваемость новорожденных превысила среднемесячное количество случаев в зимне-весенние месяцы. Коэффициент сезонности составил 62,8%, а индекс сезонности 1,6.
Проведенный анализ заболеваемости внутриутробными инфекциями по нозологическим формам позволил установить, что в структуре заболеваний пневмонии доминировали и составляли 70% с ко-
