CC BY
65
использованием коммерческих библиотек масс-спектров: NIST, Designer Drugs 2011. Обнаружение 8-оксихинолина в результате проведения скрининга мочи позволяет предположить употребление синтетических каннабимиметиков PB-22 и/или PB-22F.
Для определения маркеров PB-22 и PB-22F может быть использована модифицированная методика определения основного метаболита ТГК в моче [2].
Модификация метода заключалась во введении дополнительных регистрируемых групп характеристических ионов для маркеров PB-22 и PB-22F. Общие данные для модифицированного метода ГХ-МС приведены в таблице 1.
На Рис. 2 и Рис. 3 представлены фрагменты ионных профилей, полученных при исследовании мочи лиц, употреблявших марихуану и каннабимиметики PB-22 и PB-22F.
Как показала практика применения модифицированного метода, в ряде случаев при подтверждении предварительных положительных результатов иммуно-анализа на наличие марихуаны (каннабиноидов), помимо тетрагидроканнабиноловой кислоты, в виде метиловых эфиров выявлялись и маркеры каннабимиметиков PB-22 и/или PB-22F (метиловые эфиры 1-пентил-1Н-индол-3-карбоновой и/или 1-(5-фторпентил)-1Н-индол-3-карбо-новой кислоты), что свидетельствует о комбинированном приеме синтетических каннабимиметиков и растительных каннабиноидов.
Оба рассматриваемых метода имеют стадию гидролиза, позволяющую разрушить конъюгаты целевых аналитов, этап ЖЖЭ с применением доступных и широко применяемых в судебно-химических исследованиях и хи-
Таблица 1
Интервалы регистрации ионов, характеристические ионы, интенсивности ионов и времена удерживания аналитов для модифицированного метода ГХ-МС
Соединение Интервал регистрации, мин m/z и интенсивности регистрируемых ионов Время удерживания, мин Индекс удерживания (RI)
PB-22 маркер, метил- 7,8 - 8,4 188 245 (72) 214 (36) 7,99 2211
PB-22F маркер, метил- 8,4 - 10,0 188 263 (56) 232 (37) 8,51 2261
ТГКВ кислота*, диметил- 10,0 -11,20 285 329 (74) 344 (49) 10,62 2573
Дельта-8-ТГК кислота**, диме-тил- 11,2- 13,0 316 245 (152) 12,36 2763
ТГК кислота, ди-метил- 313 357 (80) 372 (49) 12,44 2779
* 11-нор-дельта-9-тетрагидроканнабиварин-9-карбоновая кислота; ** 11-нор-дельта-8-тетрагидроканнабинол-9-карбоновая кислота - внутренний стандарт.
мико-токсикологическом анализе растворителей, а также стадию дериватизации извлечения для последующего ГХ-МС исследования.
Выводы:
Предложен вариант определения основных метаболитов каннабимиметиков РВ-22 и PB-22F: 8-оксихинолина, 1-пентил-1Н-индол-3-карбоновой и 1-(5-фторпентил)-1Н-индол-3-карбоновой кислот с применением скрининга мочи на наркотические и лекарственные вещества и модифицированного метода определения каннабиноидов в моче. Сочетание обоих методов может быть использовано для целей судебно-химического и химико-токсикологического анализа.
Литература:
1. Катаев С.С., Зеленина Н.Б., Дворская О.Н. Идентификация маркеров каннабимиметиков РВ-22 и PB-22F в моче методом ГХ-МС//Бутлеровские сообщения, 2013. - Т. 34. -№4.-С. 116-122.
2. Катаев С.С., Зеленина Н.Б., Мелентьев А.Б., Залесова В.А., Курдина Л.Н. Обнаружение каннабиноидов в моче // Суд.-мед. экспертиза, 2005. -№2.-С. 35-38.
3. Grigoryev A., Kavanagh P., MelnikA. The detection of the urinary metabolites of 3-[(adamantan-l-yl)carbonyl]-l-pentylindole (AB-001), a novel cannabimimetic, by gas chromatography-mass spectrometry // Drug Test Analysis, 2012. - Vol. 4.-№6.-P. 519-524.
4. Grigoryev A., Melnik A., Savchuk S., Simonov A., Rozhanets V. Gas and liquid chromatography-mass spectrometry studies on the metabolism of the synthetic phenylacetylindole cannabimimetic JWH-250, the psychoactive component of smoking mixtures // J. Chromatogr. BAnalyt. Technol. Biomed.LifeSci., 2011. - Vol. 879. -№25. - P. 2519-2526.
5. Kavanagh P., Grigoryev A., Melnik A., Simonov A. The identification of the urinary metabolites of 3-(4-methoxybenzoyl)-l-pentylindole (RCS-4), anovelcannabimimetic, bygaschromatography-massspectrometry//J. Analyt. Toxicol., 2012. - Vol. 36. —№5.—P. 303-311.
6. Moosmann В., Kneisel S., Girreser U., Brecht V., Westphal F., Auwarter V. Separation and structural characterization of the synthetic cannabinoids JWH-412 and l-[(5-fluoropentyl)-lH-indol-3yl]-(4-methylnaphthalen-l-yl)methanone using GC-MS, NMR analysis and a flashchromatographysystem/ZForensicSciencelnternational, 2012. - Vol. 220. -№1-3. - P. 17-22.
7. Shevyrin V., Melkozerov V., Nevero A., Eltsov O., Morzherin Y., Shafran Y. Identification and analytical properties of new synthetic cannabimimetics bearing 2,2,3,3-tetramethylcyclopropanecarbonyl moiety // Forensic Science International, 2013. - Vol. 226. - № 1-3. -P. 62-73.
8. Sobolevsky T., Prasolov I., Rodchenkov G. Detection of JWH-018 metabolites in smoking mixture post-administration urine // Forensic Science International, 2010. - Vol. 200. -№1-3. -P.141-147.
9. Uchiyama N., Kawamura M., Kikura-Hanajiri R., Goda Y. URB-754: a new class of designer drug and 12 synthetic cannabinoids detected in illegalproducts/ZForensicSciencelnternational, 2013. - Vol. 227. -№ 1-3. -P.21-32.
10. Zuba D., Byrska B. Analysis of the prevalence and coexistence of synthetic cannabinoids in "herbal high "products in Poland // Forensic Toxicol., 2013. - Vol. 31. -№ 1. -P.21-30.
© Д.С. Сопин, Н.В. Захарченко, 2013 УДК 340.67.615.273.2: 543.42.062
Д.С. Сопин, Н.В. Захарченко ВАРИАНТ ОБНАРУЖЕНИЯ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ ПРЕПАРАТА «СОРБИФЕР ДУРУЛЕС»
Северо-Казахстанский Филиал Республиканского Государственного Казенного Предприятия «Центр Судебно-медицинской экспертизы» МЗ Республики Казахстан (директор - М.А. Картов)
Содержание ионов железа в органах, тканях и моче «Сорбифер Дурулес» - антианемический препарат,
человека в "норме", мг/100г сырой массы: печень 10,1-31,0; содержащий в 1 таблетке 320 мг железа сульфата (II) и 60 мг
почки 4,8-19,0; сердце 4,0-17,0; легкие 13,9-33,5; селезенка аскорбиновой кислоты [1]. Минимальная летальная доза
12,8-61,0; вещество головного мозга 3,7-6,1; кровь 23,2- сульфата железа (II) для взрослых составляет примерно 30
60,0; моча 1,0-30,0 [6]. г, но для ребенка опасность может представлять и 1 г. [11].
Концентрация аскорбиновой кислоты в плазме в норме составляет приблизительно 0,10-0,20 мг/100 мл [4]. Минимальная токсическая доза в крови 90,0 - 230,0 мг/100г [1, 13].
Оборудование.
Спектрофотометр Specord 205 с программным обеспечением WinASPECT v. 2.2.0.0, полуавтоматические пипетки-дозаторы.
Материалы и методы исследования.
Все используемые растворители и реактивы градации ч.д.а.
Забор и хранение биологических образцов осуществляется согласно инструкции [9, 14].
Результаты исследования и их обсуждения.
Исследование на ионы железа. Пробоподготовку биологических объектов проводили методом минерализации, использовали подход, приведенный в источнике [5].
Качественный анализ. Реакция с ферроцианидом калия. По 0,1 мл минерализатов раздельно добавляли в пробирки, к образцам добавляли по 0,1 мл 2М соляной кислоты и по 0,05 мл раствора ферроцианида калия с концентрацией 10 г/л и интенсивно перемешивали в течение 5 секунд. При наличии ионов железа (III) в концентрации более 10 мг/л наблюдают осадок синего цвета. Чувствительность реакции - 10 мг/л [11].
Реакция с роданидом калия. В пробирки раздельно помещали по 10 мл минерализатов, вносили по 3 мг кристаллов персульфата аммония и по 0,2 мл роданида калия (50 г роданида калия растворяют в 50 мл деиони-зированной воды). Содержимое пробирок перемешивали в течение 10 секунд. При наличии ионов железа (III) в концентрации более 2 мг/л наблюдают ярко-красное окрашивание. Чувствительность реакции - 0,05 мг/л [2].
Количественный анализ. В мерные колбы вместимостью 50 мл отбирали по 0,5 мл минерализатов и доводили объемы до метки деионизированной водой. Затем добавляли по 1 мл соляной кислоты (р=1,12 г/мл), по 3 мг кристаллов персульфата аммония, перемешивали и добавляли по 1 мл роданида калия (50 г роданида калия растворяли в 50 мл деионизированной воды). После перемешивания сразу же измеряли оптическую плотность на спектрофотометре, в кюветах с толщиной слоя 1,000 см по отношению к деионизированной воде, в которую добавлены те же реактивы. Аналогично исследовали серию стандартных растворов. Для построения калибровочного графика использовали серию растворов с массовой концентрацией ионов железа (III) 0,0; 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; мг/л. Максимум поглощения спектрофотметрируемого растворов наблюдали в интервале длин волн 490 - 500 нм. Массовую концентрацию ионов железа находили по калибровочному графику. Калибровочный график устанавливали методом абсолютной градуировки.
Уравнение градуировочного графика вида у=А+Вх. Коэффициент детерминации считали приемлемым в интервале 0,9800-0,9999. За окончательный результат
принимали среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 20%. Относительное стандартное отклонение (при Р=0,95) не более 20%. Предел обнаружения - 0,05 мг/л.
При получении значений оптических плотностей и концентраций, выходящих за предел градуировочного графика, использовали меньшие объемы минерализатов, либо проводили разбавление минерализатов в больших объемах деионизированной воды.
Массовую концентрацию ионов железа (мг в 100 г) вычисляли по формуле:
Cx х V х V2 х100 X —-
(1)
Где X - количество ионов железа в 100 г биологического объекта, мг/100 г;
Сх - концентрация ионов железа по градуировочному
графику, мг/мл;
V - объем минерализата, полученного при разрушении
биологического объекта, мл;
VI - объем минерализата, взятого для определения, мл;
У2 - общий объем фотометрируемого раствора, мл;
т - навеска тканей органов, г;
100 - переводной коэффициент [2, 3, 4].
Исследование на аскорбиновую кислоту. Изолирование осуществляли дистиллированной водой с последующей экстракцией диэтиловым эфиром, выход аскорбиновой кислоты составил 70-74% [7, 8].
Идентификацию аскорбиновой кислоты проводили методом тонкослойной хроматографии [12]. Оптимальные системы растворителей: бензол - 96% этанол (8:2), ориентировочное значение Rf = 0,30 и н-бутанол
- ледяная уксусная кислота - дистиллированная вода (4:1:2), ориентировочное значение Rf = 0,50. Детектирование аскорбиновой кислоты проводили следующими способами: после нагревания пластинки 120°С (5 минут) последующее облучение в УФ-свете при 365 нм - голубая флюоресценция (чувствительность - 3 мкг в пятне); с 10% спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислотой и последующим нагреванием пластинки 5 минут при 80°С
- синего цвета пятно (чувствительность - 3 мкг в пятне); с 0,02% раствором прочного голубого в 70% этаноле, затем 10% раствором гидроксида натрия - розового цвета пятно (чувствительность - 2,5 мкг в пятне) [7].
Количественное определение аскорбиновой кислоты проводили фотометрическим методом, предложенным в работе [8].
Выводы:
Предложен метод идентификации и количественного определения компонентов, входящих в препарат «Сорбифер Дурулес». Данный метод отличается селективностью, имеет высокую чувствительность и может быть рекомендован к использованию в судебно-медицинских химических лабораториях.
Литература:
1. Аскорбиновая кислота: [Электронный ресурс] // Электронные справочники ВИДАЛЬ, 2012. URL: http://www.vidal.ru/poisk_ preparatov/ascorbic-acid~32534.htm. (Дата обращения: 14.02.2013).
2. Вода питьевая (методы анализа). Сборник. -М.: Государственный комитет по стандартам, 1984. - 239 с.
3. ГОСТ26928-86Продукты пищевые. Метод определения железа.
4. ГОСТ27395-87Почвы. Метод определения подвижных соединений двух- и трехвалентного железа по Веригиной-Аринушкиной.
5. КрылоеаА.Н. Исследование биологическогоматериала на «металлические»яды дробнымметодом. -М.:Медицина, 1975. - 101 с.
6. Макаренко Т. Ф., Вознесенская Т. В., Меницкая В. И. // Суд.-мед. эксперт. - 2001. -№5.-С. 50.
7. Мужановский Э. Б., Фартушный А. Ф., Сухин А. П., Седов А. И. // Суд.-мед. эксперт. - 1992. —№1. — С. 24-28.
8. Мужановский Э. Б., Фартушный А. Ф., Сухин А. П., Седов А. И. Определение в трупном материале лекарственных средств, применяемых для прерывания беременности // Суд.-мед. эксперт. - 1994. -№2.-С. 43-48.
9. Приказ министра здравоохранения Республики Казахстан от 20 мая 2010 года № 368 «Обутверждении Инструкции по организации и производству судебно-медицинской экспертизы».
Vj х m
10. СорбиферДурулес: [Электронныйресурс]//Электронные справочникиВИДАЛЬ, 2012. URL: http://www.vidal.ru/poisk_preparatov/ sorbifer-durules.htm. (Датаобращения: 14.02.2013).
11. Фланаган Р.Дж. и соавт. Основы аналитической токсикологии. -Женева: ВОЗ, 1997. - С. 137-142.
12. Хроматография в тонких слоях. Под ред. Э. Шталя, перевод с немецкого М.И. Яновского, под ред. К.В. Чмутова. - М.:Мир, 1965. - С. 246-247.
13.AnnalsoflnternalMedicine. Vol. 82, Pg. 810, 1975.
14. ArchivesoflnternalMedicine. Vol. 145, Pg. 950, 1985.
© А.А. Халиков, А.В. Орловская, Р.Б. Чернова, 2013 УДК 340.6
А.А. Халиков, А.В. Орловская, Р.Б. Чернова
САХАРНЫЙ ДИАБЕТ, КАК ОДНА ИЗ ПРИЧИН СМЕРТИ В МОЛОДОМ ВОЗРАСТЕ
Кафедра судебной медицины (зав. кафедрой - доц. А.А. Халиков) ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет»
Последние годы во всех развитых странах отмечается значительный рост заболеваемости сахарным диабетом. От него страдает около 4% населения планеты. В России заболеваемость сахарным диабетом составляет 2-2,5%.
Широкое распространение заболевания во многом обусловлено изменением образа жизни (малоподвижность - гипокинезия), особенностями питания (избыточное потребление животных жиров, рафинированных углеводов), изменениями иммунной системы человека и увеличением числа генетических мутаций [4]. Сахарный диабет приводит к ранней инвалидизации и смертности, которые обусловлены в первую очередь макро- и микроангиопати-ческими осложнениями: атеросклерозом и ИБС, нефропа-тией, ретинопатией, нейропатией и остеоартропатией - до 80% больных СД умирают от проявлений диабетической ангиопатии [3]. Необходимо заметить, что в этих случаях чаще всего отмечается внезапная смерть, при которой труп подлежит обязательному судебно-медицинскому исследованию. По данным некоторых авторов, смертность среди больных сахарным диабетом в 2 раза выше в сравнении с группой умерших, не страдающих данным заболеванием [2]. При этом сахарный диабет в посмертном диагнозе (в качестве основного или комбинированного заболевания) встречается крайне редко. Очевидно, что среди судебно-медицинских экспертов наблюдается недооценка сахарного диабета как основной причины смерти [1].
В судебно-медицинской практике нередко приходиться сталкиваться со скоропостижной смертью молодых людей. При отсутствии признаков насильственной смерти и данных катамнеза это часто вызывает затруднения в постановке диагноза. Представляем вашему вниманию случай из практики ГБУЗ Бюро судебно-медицинской экспертизы Министерства здравоохранения Республики Башкортостан. В приемный покой одной их центральных районных больниц Республики машиной скорой медицинской помощи был доставлен гр-н Н. 20 лет. Из анамнеза, было известно, что приблизительно за 2 суток до момента поступления в больницу Н. жаловался на недомогание, слабость, подташнивание, головную боль. Накануне утром Н. заступил на дежурство, на работе жаловался на плохое самочувствие и попросил разрешения прилечь в бытовке, где через несколько часов был найден без сознания. При осмотре в больнице: состояние крайне тяжелое, кома, спонтанного дыхания нет, пульс от 42 до 62 в мин на сонных артериях, АД не определяется. Зрачки широкие, равны, корнеальные рефлексы не вызываются, глазные щели равны, фотореакции нет, общая гипотония, сухожильные
рефлексы с конечностей отсутствуют. Больной взят на ИВЛ, помещен в реанимационное отделение. Через 2 часа больной умер. Клинический диагноз: "Кома неясной этиологии, отравление наркотиками?" При проведении экспертизы трупа отмечалось выраженное полнокровие, признаки выраженного отека головного мозга и отека легких, резкое полнокровие пирамид почек при меньшем кровенаполнении их коркового вещества. Поджелудочная железа макроскопически не изменена, полнокровна. Для судебно-химического исследования были взяты части внутренних органов, кровь и моча трупа, - каких-либо ядовитых веществ, в том числе наркотических найдено не было. Были взяты кровь и моча трупа для определения концентрации глюкозы. Она составила соответственно: 30 ммоль/л и 2%. Проведен количественный анализ крови на креатинин и мочевину. Концентрация их соответственно составила: 390 и 30 ммоль/л. При гистологическом исследовании в поджелудочной железе обнаружены очаги жировой дистрофии паренхимы и стромы, фиброз стромы, микрокровоизлияния, атрофия островков Лангерганса с выраженным снижением их количества; а также грубые дистрофические изменения в почках, признаки расстройства кровообращения в виде венозного полнокровия, стазов, агрегации форменных элементов крови, отеков и микрокровоизлияний; отек легких, отек-набухание головного мозга. В печени, сердце и скелетных мышцах при окраске по Шабадашу, с предыдущей фиксацией кусочков в этиловом спирте, выявлена диффузная убыль гликогена. Сложилось мнение о возможности наступления смерти от сахарного диабета, осложнившегося гипергликемической комой. Случай был консультирован эндокринологами. Наше мнение было подтверждено. Был установлен следующий судебно-медицинский диагноз: основной - сахарный диабет - очаги жировой дистрофии паренхимы и стромы поджелудочной железы, фиброз стромы поджелудочной железы, микрокровоизлияния в поджелудочной железе, атрофия с выраженным снижением количества островков Лангерганса в поджелудочной железе, диффузная убыль гликогена во внутренних органах. Осложнение: гипергли-кемическая кома - высокая концентрация глюкозы в крови (30 ммоль/л), наличие глюкозы в моче в концентрации 2%, грубые дистрофические изменений в почках, расстройство кровообращения, отеки легких и головного мозга, клиника и данные анамнеза в представленной истории болезни.
Надеемся, что описанный нами случай может быть полезным в работе врачей, как морфологов, так и клиницистов.
Литература:
1. Николаев Б.С., А.Ф. Кинле А.Ф., Самаркина О.Ю. О возможности посмертной диагностики сахарного диабета в практике судебно-медицинского эксперта// Судебно-медицинская экспертиза, 2010. -№5.-С. 39-40.
