43https://doi.org/10.29296/2618723X-2020-02-01
Вариабельность биохимических показателей крови и установление референсных интервалов в доклинических исследованиях.
Сообщение 1: кролики
Н.Г. Войтенко, кандидат биологических наук, руководитель лаборатории биохимии и гематологии,
ORCID 0000-0002-3164-4971; М.Н. Макарова, доктор медицинских наук, директор, ORCID 0000-0003-3176-6386; М.А. Ковалева, кандидат биологических наук, ст. научный сотрудник, руководитель научно-методической группы, ORCID 0000-0002-0740-9357
НПО «Дом фармации»,
188663, Россия, Ленинградская обл., Всеволожский район, г.п. Кузьмоловский, ул. Заводская, д. 3, к. 245
Е-mail: voytenko.ng@doclinika.ru
Резюме. Данные биохимического анализа являются опорными при проведении большей части доклинических исследований. Установление и пересмотр референсных интервалов (РИ) биохимических показателей в отношении всех используемых видов лабораторных животных является важной задачей каждого испытательного центра. В Российской Федерации кролики широко используются для проведения различных исследований, например, при изучении общих токсических свойств оригинальных препаратов или препаратов пролонгированного действия, исследовании специфической активности препаратов, используемых для терапии органов зрения и опорно-двигательной системы и т.д. Несмотря на достаточную изученность вида в целом, данные о РИ биохимических показателей, представленные в российских периодических изданиях, ограничены. В нашем испытательном центре имеется банк данных таких показателей, которые определялись в исследованиях токсичности при многократном введении, что позволило провести ретроспективный анализ и пересмотреть имеющиеся РИ. Для расчета были использованы данные наблюдений, полученные в период с января 2018 по декабрь 2019 г. Определение биохимических показателей в данный период проводили на одном оборудовании с использованием одинаковых методик. Ретроспективный анализ данных был выполнен по 13 биохимическим показателям сыворотки крови кроликов 3 пород - новозеландские, шиншилла, белый великан. Выборка составила 127 самок и 127 самцов, возраст животных в исследованиях составлял 16-25 нед. (масса тела животных - 3-5 кг).
В статье представлены РИ для креатинина, мочевины, аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы (ЩФ), холестерина (ХС), триглицеридов (ТГ), общего белка, альбумина, глобулина, глюкозы, общего билирубина и отношения альбумин/глобулины. Обоснована необходимость создания в каждом испытательном центре внутрила-бораторных баз данных РИ. Рассчитана межиндивидуальная вариабельность по указанным биохимическим показателям. Наибольшая межиндивидуальная вариабельность (>30%) установлена для таких показателей, как ЩФ, ТГ, ХС и общий билирубин. Использование именно ретроспективного анализа данных позволяет реализовать принципы 3к$ и получать более корректные данные на большей выборке лабораторных животных. Анализ полученных нами РИ в сравнении с литературными данными в целом показал их сопоставимость, что можно считать дополнительным подтверждением удовлетворительности установленных нами внутрилабораторных норм.
Ключевые слова: референсные интервалы биохимических показателей, нормальные значения биохимических показателей, новозеландские шиншилла,белый великан.
Для цитирования: Войтенко Н.Г., Макарова М.Н., Ковалева М.А. Вариабельность биохимических показателей крови и установление референсных интервалов в доклинических исследованиях. Сообщение 2: кролики. Лабораторные животные для научных исследований. 2020; 2: 3-10. https://doi.org/10.29296/2618723X-2020-02-01
Variability of blood biochemical parameters and establishment of reference intervals in preclinical studies. Part 2: rabbit
N.G. Voitenko, M.N. Makarova, M.A. Kovaleva Scientific-Production Organisation «Home of Pharmacy» 188663, Russia, Leningrad oblast, Vsevolozhskiy district, Kuzmolovskiy t.s., Zavodskaya st. 3-245
E-mail: voytenko.ng@doclinika.ru
Summary. The data of the biochemical analysis are the reference for most of the preclinical studies. The establishment and revision of reference ranges of biochemical indicators for all types of used laboratory animals is an important task for each testing center. In the Russian Federation, rabbits are widely used for various studies, for example, the study of the general toxic properties of original drugs, or long-acting drugs, the study of the specific activity of drugs used for the treatment of the visual organs and the musculoskeletal system, etc. Despite the sufficient study of the species as a whole, Russian periodicals present a limited amount
3
of data on the reference intervals of biochemical indicators. Our test center has accumulated a data bank of such indicators that were determined in multiple-dose toxicity studies, which allowed us to conduct a retrospective analysis and review the available reference intervals. The calculation was based on observation data obtained in the period from January 2018 to December 2019. The determination of biochemical parameters in this period of time was carried out on the same equipment using the same methods. A retrospective analysis of the data was performed on 13 biochemical parameters of blood serum of three breeds of rabbits - New Zealand, chinchilla, white giant. The sample consisted of 127 females and 127 males, the age of the animals in the studies was 16-25 weeks (the weight of the animals was 3-5 kg). The article presents reference intervals for creatinine, urea, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, cholesterol, triglycerides, total protein, albumin, globulin, glucose, total bilirubin, and the albumin/globulin ratio. The necessity of creating intra-laboratory databases of reference intervals in each test center is justified. Interindividual variability was calculated for the specified biochemical parameters. The greatest inter-individual variability (more than 30%) was found for such indicators as alkaline phosphatase, triglycerides, cholesterol and total bilirubin. The use of retrospective data analysis allows us to implement the principles of 3Rs and get more correct data on a larger sample of laboratory animals. The analysis of the reference intervals obtained by us in comparison with the literature data, in general, showed their comparability, which can be considered as an additional confirmation of the satisfaction of the established intra-laboratory standards.parameters has to be taken into account when planning of study.
Reference ranges of data base including creatinine, urea, AST, ALT, alkaline phosphatase, cholesterol, triglycerides, total protein, albumin, glucose and total bilirubin and its' inter-individual variance were identified. It was determined that alkaline phosphatase, triglycerides, glucose and total bilirubin have greatest inert-individual variance (more than 30%).
Key words: reference intervals of biochemical indicators, normal values of biochemical indicators, new Zealand rabbit, chinchilla,
white giant.
For citation: Voitenko N.G., Makarova M.N., Kovaleva M.A. Variability of blood biochemical parameters and establishment of reference intervals in preclinical studies. Part 2: rabbit. Laboratory Animals for Science. 2020; 2: 3-10. https://doi.org/10.29296/2618723X-2020-02-01
Введение
Во всем мире стратегия развития сферы доклинических исследований (ДКИ) нацелена на постепенное снижение числа экспериментов на животных и их замену альтернативными методами. In silico методы активно разрабатываются и предлагаются для внедрения. Однако в настоящее время полная замена лабораторных животных на альтернативные методы невозможна. Попытка ва-лидации таких методов показывает низкую транс-ляционность полученных результатов в клиническую практику.
Кролик является необходимой тест-системой при изучении инновационных лекарственных препаратов, в исследованиях по изучению общих и специфических видов токсичности, фармакологической активности лекарственных препаратов без предварительного разрушения. По данным Understanding Animal Research в Англии (2018) для проведения доклинических исследований (ДКИ) было использовано 11 159 кроликов, данная цифра несопоставима с количеством мышей и крыс, используемых в ДКИ, но в 2 раза больше, чем количество морских свинок [1]. Анатомия данного вида животных позволяет моделировать различные патологии опорно-двигательного аппарата, например, остеоартроз [2, 3], а биохимический профиль и особенности метаболизма делают данный вид животных приоритетным для моделирования атеросклероза [4]. Размер данного вида лабора-
торных животных позволяет проводить исследования, дизайн которых предусматривает забор большого объема биоматериала (кровь, моча и т.д.), эти преимущества перед мышами и крысами делают кролика незаменимой тест-системой для проведения исследований по оценке фармакоки-нетических показателей [5].
Несмотря на изученность данного вида животных в отношении гематологических и биохимических показателей, очевидна необходимость регулярного пересмотра «нормальных значений» и создания баз данных референсных интервалов (РИ) с течением времени, что связано с пересмотром процессов содержания лабораторных животных, использованием новых аналитических методов. С целью реализации принципов ЗЯб наиболее рационально проводить ретроспективный анализ, который позволяет включать большое количество животных [6-8]. В нашей статье представлены РИ для основных биохимических показателей, оцениваемых в ДКИ, общей токсичности, охарактеризованы статистические выбросы (СВ) для этих показателей.
Материалы и методы
Для ретроспективного анализа использовали данные, полученные в нашем центре, в рамках текущих ДКИ лекарственных препаратов в период с января 2018 по декабрь 2019 г. В исследованиях были использованы кролики пород новозеланд-
ские, шиншилла и белый великан. В массив данных включили животных интактных групп из 12 исследований. В сформированном массиве находились данные, полученные от 127 самцов и 127 самок кроликов. Были использованы небеременные и нерожавшие самки. На основании этого массива данных была рассчитана межиндивидуальная вариабельность (CVG). Также данные лабораторных животных (n=37: 23 самца и 14 самок) были использованы для расчета внутрииндивиду-альной вариабельности (CVI) исследуемых показателей. Дизайн ДКИ, данные которых были использованы для расчета РИ, предусматривал двукратное измерение биохимических параметров у одного и того же животного. Были проанализированы биохимические показатели кроликов породы новозеландские, шиншилла, белый великан, возраст животных 16-25 нед, масса тела - 3-5 кг. Все ДКИ были одобрены биоэтической комиссией НПО «Дом Фармации». На протяжении с января 2018 по декабрь 2019 г. в период адаптации и последующих экспериментов животные содержались в одинаковых стандартных условиях вивария. Кроликов содержали в индивидуальных боксах с реечным полом без подстила, с зоной для отдыха (сплошной пол), снабженных автоматической ниппельной системой поения. Кормление животных проводили в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях. Исследование было выполнено с соблюдением принципов Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов и других научных целей (Страсбург, 1986) в соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики.
Определение биохимических показателей для всех животных проводили в равных условиях с использованием принятых в нашем испытательном центре аналитических методов. В сыворотке крови этих животных на автоматическом биохимическом анализаторе Rendom Access A-25 (Biosystems S.A. Испания) были измерены следующие показатели: креатинин, мочевина, аланина-минотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфе-раза (АСТ), щелочная фосфатаза (ЩФ), холестерин (ХС), триглицериды (ТГ), общий белок, альбумин, глюкоза и общий билирубин. Для определения концентрации общего билирубина использовали набор реактивов Вектор-Бест (Россия), для остальных аналитов - наборы BioSystems S.A. (Испания). Также были рассчитаны значения глобулинов в сыворотке крови и отношение альбумин/глобулины (A/G).
Статистическую обработку результатов осуществляли в программе Statistica.10: СВ по методу Тьюки, вид распределения определяли по критерию Шапиро-Уилка, сравнение животных разного пола — по и-критерию Манна-Уитни и ^ри-терию Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Для устранения влияния аномальных значений из массива данных были исключены СВ, которые определяли отдельно для каждого показателя и пола животных по методу Тьюки; для этого из дальнейшей работы были исключены данные, лежащие за пределами интервала 1-го и 3-го квартилей (соответственно 01 и 0_3). Межквартильный интервал ¡0Я определяли как 03-0,1. Верхний и нижний пределы рассчитывали следующим образом:
Q-15XIQR и Q +l,5xIQR
[9]
После исключения СВ массивы данных были проанализированы на предмет соответствия действующим в центре РИ, которые были рассчитаны ранее с применением классического подхода, но на ограниченной выборке животных (n=20: 10 самцов, 10 самок). Данные о доле СВ по каждому показателю и выходящих за пределы РИ значений представлены в табл. 1.
Наиболее частые СВ при анализе сыворотки крови кроликов отмечали в отношении глюкозы (у самцов), а также при анализе расчетного показателя A/G (4,7 и 8,7% у самцов и самок соответственно).
При сравнении действующих РИ, полученных на малой выборке (10 самцов и 10 самок) и РИ, проанализированных ретроспективно на выборке (127 самцов и 127 самок), наибольшие отличия были отмечены для ХС и общего билирубина в сыворотке крови самцов (у 10,3 и 15,7% соответственно), а также для расчетных показателей - глобулинов (у 10,4% самцов и 14,2% самок) и A/G (у 14% самцов). В соответствии с рекомендациями [3] выход за пределы РИ >10% вновь полученных результатов свидетельствует о необходимости пересмотра этого РИ.
С этой целью РИ для полученных результатов в зависимости от вида их распределения рассчитывали как среднее ± 1,96 х стандартное отклонение (Хср±1,96 SD) — для нормального распределения и как промежуток 2,5-97,5 процентили (pr) — для ненормального распределения. Вид распределения определяли по критерию Шапиро-Уилка. Дополнительно проводили сравнение между животными разного пола методами непараметриче-
Таблица 1
Доли статистических выбросов и отклонений от действующих референсных интервалов
Биохимический показатель Самцы Самки
СБ, % Выход за пределы действующих РИ, % СВ,% Выход за пределы действующих РИ, %
Креатинин 4,7 0,0 2,4 0,0
Мочевина 0,0 7,1 0,8 6,3
ACT 3,9 0,0 3,9 0,8
АЛТ зд 0,0 2,4 4,8
ЩФ 1,6 0,0 1,6 5,6
ХС 0,8 10,3 2,4 0,8
ТГ 2,4 2,4 2,4 5,6
Общий белок 0,0 7,9 0,8 5,6
Альбумин 1,6 2,4 0,8 2,Л
Глобулины 1,6 10,4 0,0 14,2
A/G 4,7 14,0 8,7 8,6
Глюкоза 8,7 0,9 3,9 0,0
Общий билирубин 0,0 15.7 4.7 4,1
скои статистики для ненормального распределения (U-критерий Манна-Уитни) и методами параметрической статистики для нормально распределенных данных (t-критерий Стьюдента).
При использовании параметрической статистики выявлено, что концентрация креатинина и мочевины в крови самок статистически значимо выше, чем у самцов. В человеческой популяции концентрация креатинина выше у мужчин, чем у женщин, т.е. наблюдается противоположенная тенденция по сравнению с данными для лабораторных животных [4, 5]. Установлено, что концентрация ХС в крови самок статистически значимо выше по сравнению с самцами. Также отмечено, что в сыворотке крови самок статистически значимо выше концентрации общего белка, глобулинов и соотношение A/G. Описанные тенденции, как правило, связаны с особенностями метаболизма каждого вида, в том числе с эстральными циклами. Полученные данные представлены в табл. 2.
Кролик является хорошо изученной тест-системой. Для данного вида лабораторных животных достаточно полно изучены биохимические показа-
тели крови. В табл. 3 представлены диапазоны значений, а также средние значения и стандартное отклонение (M±SD) основных биохимических показателей крови, полученной от кроликов разных пород. Представленные значения были переведены в единицы измерения, принятые в нашем испытательном центре.
При сравнении значений РИ, полученных в нашем испытательном центре, с литературными данными показано, что в целом диапазоны РИ схожи. Тем не менее встречаются некоторые отличия, например, в литературных данных описаны более высокие значения для следующих показателей: креатинин, АСТ, ТГ, глобулин, общий билирубин и глюкоза. При этом РИ для показателя ЩФ описаны более низкие значения. Данные отличия могут быть обусловлены множеством факторов - породой кроликов, возрастом, условиями их содержания, сезонов, в которые были получены данные, а также применяемыми аналитическими методами. В статье D.M. Black et al. представлен РИ по показателю глюкоза, который составляет 6,221,8 ммоль/л для самцов и 6,9-20,0 - для самок.
Таблица 2
Референсные интервалы биохимических показателей крови кроликов
Самцы Самки
Показатель Способ РИ Способ РИ
расчета расчета
Креатинин, мкмоль/л X(±1,96SD (V 70,4-130,4 (100,4) X±1,96SD <V 69,7-155,8 (112,8)*
Мочевина, ммоль/л X ±1,96SD (xj 2,93-8,28 (5,60) X±1,96SD ftv 3,37-8,91 (6,14)*
ACT, Ед/л 2,5-97,5 pr (50 pr) 14-40 (25) 2,5-97,5 pr (50 pr) 13-37 (24)
АЛТ, Ед/л 2,5-97,5 pr (50 pr) 20-80 (44) 2,5-97,5 pr (50 pr) 22-77 (45)
ЩФ, Ед/л 2,5-97,5 pr (50 pr) 36-224 (116) 2,5-97,5 pr (50 pr) 34-262 (118)
ХС, ммоль/л 2,5-97,5 pr (50 pr) 0,28-1,91 (0,85) 2,5-97,5 pr (50 pr) 0,53-2,33 (1,27)*
ТГ, ммоль/л 2,5-97,5 pr (50 pr) 0,29-1,48 (0,67) 2,5-97,5 pr (50 pr) 0,25-1,20 (0,64)
Общий белок, г/л X ±1,965D i <*J 44-67 (55) X ±1,96SD P(Xcp) 45-68 (57)*
Альбумин, г/л Xcptl,96SD *J 37-55 (46) 2,5-97,5 pr (50 pr) 36-56 (47)
Глобулины, г/л X ±1,96SD 2,3-16,0 (9,2) X ±1,96SD (XJ 1,7-18,9 (10,3)*
A/G 2,5-97,5 pr (50 pr) 2,6-11.8 (4.9) 2,5-97,5 pr (50 pr) 2,2-10,8 (4,3)*
Глюкоза, ммоль/л X ±1,965D I <*J 5,61-8,78 (7,20) 2,5-97,5 pr (50 pr) 5,90-9,42 (7,23)
Общий билирубин, мкмоль/л 2,5-97,5 pr (50 pr) 0.61-3,37 (1,77) 2,5-97,5 pr (50 pr) 0,75-2,80 (1,65)
Примечание: для данных с нормальных распределением в скобках указано среднее значение, для данных, не подчиняющихся нормальному распределению, в скобках указана медиа на; *-отличия от самцов статистически значимы при р<0,05.
2020 LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE №2
Значения биохимических показателей кролика
Таблица 3,
Показатель
Самцы
Самки
Без учета пола
Креатинин, мкмоль/л
Мочевина, ммоль/л ACT. Ед/л
АЛТ, Ед/л
ЩФ, Ед/л ХС, ммоль/л
ТГ, ммоль/л
Общий белок, г/л
Альбумин, г/л
Глобулины, г/л
A/G
Глюноза, ммоль/л
60-140 [II]1 17,7-70 [12]fi
X
7-49 [12]а 40-164 [12]6 X
0,2-2,3 [12]s X
54-72 [12]а
27-43 [II]1 34-49 [12]а
14-34 [12]й
1-2,9 [12]а
3,83-10,8 [11] 6,2-21,8 [12]а
Общий билирубин, мкмоль/л 1,7-6,8 [12]ь
60-140 [ll]v 17,7-70 [12]в 106±17, [14]п
9,2±1,7 [14]"
8-47 [12]S 46±17,6 [14]"
43-149 [12]s 12±5,3[14]"
X
0,6-2,6 [12]4 0,78±0,2 [14]р
X
0,6±0,2 [U]" 51-74 [12]*
23-35 [11]* 32-47 112?
16-33 [12]S
1.1-2,7 [12]fi
4,9-8,3 [11]' 6,9-20,0 [12]s 6,8±1,1 [14]15
1,7-6,8 [12]*
44-220 [10]*
20-120 [10]*
25-65 [10]*
10-86 [10]* 0,3-2,6 [10]*
0,6-2,3 [10]*
50-75 [10]* 68-71 [13] x
27-50 [10]* 33-35 [13]>
15-27 [10]* 35,5-36,4 [13]
X
4,1-8,2 [10]* 3,4-8,5 [10]*
Примечание; * - количество животных не указано; " - выборка 80-90 животных; * - выборка более представлены.
- малая выборка {до 30 животных); 230-240 животных; X - данные не
Следует отметить, что эти данные характерны для породы калифорнийских кроликов.
Представленные данные еще раз подтверждают необходимость создания в каждом испытательном центре внутрилабораторных баз данных РИ для каждого вида животных. Ретроспективный анализ позволяет оценивать большие выборки с полным соблюдением принципов ЗЯб. Для расчета РИ следует использовать значения тех или иных показателей, которые были получены от интактных (клинически здоровых животных), содержащихся в равных условиях с использованием одинаковых аналитических методов.
Для каждого показателя были рассчитаны коэффициенты вариации (СУ=8Б/Хср.х100%), что в грубом приближении соответствует межиндивидуальной вариабельности (СУС) этих показателей в человеческой популяции. Следует отметить, что расчет коэффициентов вариации для человека был основан на значениях банка данных из большого ряда работ, появившихся в литературе за 1951-1998 гг. Для расчета межиндивидуальной вариабельности (СУС) показателей кроликов мы использовали данные 127 самцов и 127 самок, для расчета внутрииндиви-дуальной вариабельности (СУ1) - данные от 37 лабораторных животных. Сравнительные данные по 2 видам приведены в табл. 4.
Таблица 4,
Вариабельность биохимических показателей крови кроликов в сопоставлении со
справочными данными для людей [3]
Показатель СУС (кролини, собственные данные) CVG (человек, [3J) CVI {кролики, собственны еданные) CVI (человек, [3])
Креатинин 18,7 12,9 6,5 4,3
Мочевина 24,1 18,3 19,3 12,3
ACT 30,5 17,9 16Д 11,9
АЛТ 34,5 41,6 10,2 24,3
ЩФ 49,8 35,6 11,6 6,4
ХС 43,4 15,2 15,6 6,0
ТГ 43,5 37,2 20,4 21,0
Общий белок 10,5 4,0 8,9 2,7
Альбумин 10,6 4,2 7,1 3,1
Глюкоза 31,2 7,7 6,6 6,5
Общий билирубин 41,0 30,5 41,1 25,6
При анализе данных табл. 4 можно отметить сходную с человеком вариабельность по большинству исследованных показателей. Обращает на себя внимание обратная картина по вариабельности активности аминотрансфераз: у людей активность АЛТ изменяется в значительно более широком диапазоне, чем у кроликов, в то время как активность АСТ демонстрирует обратную тенденцию. При этом в абсолютных значениях активность аминотранс-фераз в крови кроликов сопоставима с таковой у человека (до 41 Ед/л). Межиндивидуальная вариабельность активности ЩФ, концентрации ТГ, общего билирубина и особенно ХС, общего белка, альбумина и глюкозы в крови кроликов значительно выше, чем у человека.
Внутрииндивидуальная вариабельность концентрации ХС, общего белка, альбумина и билирубина также значительно превышает соответствующие показатели у людей. Предположительно это может быть связано как с видовыми особенностями метаболизма (для ХС и альбумина), так и с методическими особенностями измерения (для общего белка и билирубина). Последнее предположение создает предпосылки для обязательного проведения вали-дации, применяемых в испытательном центре биохимических методик.
Заключение
Представленные результаты подтверждают необходимость и актуальность создания и периодического пересмотра РИ для каждого вида лабораторных животных, используемых для проведения ДКИ в испытательном центре. Недопустимо руководствоваться только литературными данными, поскольку даже в случае сравнения РИ по показателям, полученным на одной породе лабораторных животных, могут наблюдаться отличия, связанные с особенностями содержания лабораторных животных, применяемыми аналитическими методами и прочими условиями.
Использование именно ретроспективного анализа данных позволяет реализовать принципы ЗЯб и получать более корректные данные на большей выборке лабораторных животных. Анализ полученных нами РИ в сравнении с литературными данными показал сопоставимость полученных значений РИ, что можно считать дополнительным подтверждением удовлетворительности полученных РИ.
Сравнительный анализ межиндивидуальной и внутрииндивидуальной вариабельно-стей биохимических показателей крови кролика и человека демонстрирует необходимость
2020 LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE №2
использования достаточного количества наблюдений, обязательной адаптации и валидации методики для каждого вида животных. Наличие видовых различий необходимо учитывать при рассмотрении результатов ДКИ.
Благодарности
Работа выполнена без спонсорской поддержки.
Вклад авторов
Войтенко Н.Г. - идея, планирование, разработка дизайна, сбор и систематизация материала, написание, редактирование текста.
Макарова М.Н. - идея, разработка дизайна.
Ковалева М.А. - анализ и интерпретация результатов, написание, редактирование текста.
Authors' œntributions
Natalya.G. Voitenko - idea, planning, design development, collection and systématisation of material, writing and revising the text.
Marina N. Makarova - idea, design development.
Mariya A. Kovaleva - analysis and interpretation of results, writing and revising the text
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interest
The authors declare no conflict of interest.
Список литературы
1. Animal Research Numbers in 2018. - URL.: http:// www.understandinganimalresearch.org.uk/news/ communications-media/animal-research-numbers-in-2018/, (дата обращения 13.04.2020 г).
2. Щелкунова Е.И., Воропаева А.А., Русова Т.В., Штопис И.С.В. Применение экспериментального моделирования при изучении патогенеза остеоартроза (обзор литературы) //сибирский научный медицинский журнал. - 2019. - Т. 39, № 2. - С. 27-39. [Shchelkunova E.I., Voropaeva A.A., Rusova T.V., Shtopis I.S.V. Primenenie eksperimental'nogo modelirovaniya pri izuchenii patogeneza osteoartroza (obzor literatury) //sibirskii nauchnyi meditsinskii zhurnal. - 2019. - Vol. 39, № 2. - P. 27-39. (In Russ.)].
3. Yoshioka M., Coutts R.D., Amiel D., Hacker S.A. Characterization of a model of osteoarthritis in the rabbit knee // Osteoarthritis Cartilage. - 1996. - Vol. 4(2). P. 87-98.
4. Dornas W.C., Oliveira T.T., Augusto L.E., Nagem T.J. Experimental atherosclerosis in rabbits // Arq Bras Cardiol.
- 2010. - Vol. 95(2). - P. 272-278. DOI: 10.1590/s0066-782x2010001200020
5. Xiao X., Pei L., Jiang L.-J., Lan W.-X., Xiao J.-Y., Jiang Y.-J., Wang Z.-Q. (2018) In Vivo Pharmacokinetic/ Pharmacodynamic Profiles of Danofloxacin in Rabbits Infected With Salmonella typhimurium After Oral Administration // Front. Pharmacol.- 2018. - Vol. 9. - P. 1-8 DOI: 10.3389/fphar.2018.0039.
6. Теория статистики: учебное пособие / Л.Г. Батракова. - М. : КНОРУС, 2016. - 528 с. [Teoriya statistiki: uchebnoe posobie / L.G. Batrakova. — M. : KNORUS, 2016. — 528 p. (In Russ.)].
7. ГОСТ Р53022-3 - 2008. Технологии лабораторные и клинические. Требования к качеству лабораторных исследований. Правила оценки клинической эффективности лабораторных тестов. - М., 2008. [GOST R53022-3
- 2008. Tekhnologii laboratornye i klinicheskie. Trebovaniya k kachestvu laboratornykh issledovanii. Pravila otsenki klinicheskoi effektivnosti laboratornykh testov. - M., 2008. (In Russ.)]
8. ГОСТ Р 53022.2-2008 Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 2. Оценка аналитической надежности методов исследования (точность, чувствительность, специфичность). [GOST R 53022.2-2008 Tekhnologii laboratornye klinicheskie. Trebovaniya k kachestvu klinicheskikh laboratornykh issledovanii. Chast' 2. Otsenka analiticheskoi nadezhnosti metodov issledovaniya (tochnost', chuvstvitel'nost', spetsifichnost'). (In Russ.)]
9. Clinical and Laboratory Standards Institute. Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. 3-rd Ed. -Wayne, PA, 2008.
10. Suckow M.A., Schroeder V., Douglas F.A. The Laboratory Rabbit 2nd Ediran, Edicbn Kindle. - 2012. 150 р.
11. Оzkan C., Kaya A., Akgil Y. Normal values of haematological and some biochemical parameters in serum and urine of New Zealand White rabbits // World Rabbit Sci.
- 2012. - Vol. 20. - P. 253-259 DOI:10.4995/wrs.2012.122.
12. Black D.M., Gilardi K.V.K., Hamilton L.P., Williams E., Williams D. F., Kelly P.A., Gardner I. Hematologic and biochemistry reference values for the endangered riparian brush rabbit (Sylvilagus Bachmani Riparius) // Journal of Wildlife Diseases. - 2009. - Vol. 45(2). - P. 491-496.
13. Миронова И.В., Черненков Е.Н., Черненков А.А. Показатели крови кроликов при включении в рацион пробиотической кормовой добавки Биогумитель // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2017. - №3 . - С. 212-215.
14. Kurtz D.M., Travlos G.S. The Clinical Chemistry of Laboratory Animals 3 Edition Edited. 2018.
2020 LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE №2
