CC BY
86
УДК 615,322:613,29:54.062
Л.Н. ИБРАГИМОВА, Э.Б. КАРТБАЕВА, М.К.ДАУРБАЕВА, Э.Н. КАПСАЛЯМОВА, З.Б. САКИПОВА
Казахский Национальный Медицинский Университет им. С.Д. Асфендиярова
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В СТОЛОНАХ CISTANCHE SALSA
Резюме: В статье представлены материалы по разработке и валидации методики количественного определения биологически активных веществ в столонах Cistanchesalsa. Изучены валидационные характеристики аналитической методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье Cistanchesalsa с помощью УФ-спектрофотометрического метода.Результаты валидации показали, что методика удовлетворяет условиям тестов на робастность, правильность, характеризуются линейной зависимостью в исследуемой аналитической области, корректной точностью и сходимостью полученных результатов.
Ключевые слова: столоны Cistanchesalsa, валидация аналитической методики, УФ-спектрофотометрия, биологические активные вещества, сумма флавоноидов.
К числу ценных растений паразитов относится Цистанхе солончаковая (Cistanchesalsa), активность, которой обусловлена содержанием полифенольных соединений, обладающих антиоксидантной активностью, а также полисахаридов, иридоидов и других биологически активных веществ. Проведены исследования в области стандартизации исследуемого растения [1-3]. Целью исследования является разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье Cistanchesalsa. Материалы. В эксперименте использовали измельченные высушенные столоны CistancheSalsa, используемые в методике стандартные образцы соответствуют фармакопейным требованиям. Метод. Определение проводят методом абсорбционной спектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой областях [4].
Испытуемый раствор (а). 1.00 г измельченного в порошок сырья (355) [1] и 30 мл 70 % спирта, нагревают в колбе с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 1 ч. Горячий экстрагент фильтруют и охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора тем же растворителем до 100 мл.
Испытуемый раствор (Ь) готовят непосредственно перед использованием.
Испытуемый раствор (Ь). 2 г алюминия хлорида растворяют 85 мл 95 % спирта и доводят тем же растворителем до 100 мл.
Испытуемый раствор (с). К 1.0 мл испытуемого раствора (а) прибавляют 2 мл испытуемого раствора (Ь) и доводят объем раствора 95 % спиртом до 25 мл. Компенсационный раствор. К 1.0 мл испытуемого раствора (а) прибавляют 1 каплю кислоты уксусной разбавленной и доводят объем раствора 95 % спиртом до 25 мл.
Раствор сравнения (а). 0.0500 г СО ГФ РК рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135 °С в течение 3 ч и охлажденного в эксикаторе, и 85 мл 95 % спирта нагревают на водяной бане до растворения, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора тем же растворителем до 100 мл Раствор сравнения (Ь). К 1.0 мл раствора сравнения (а) прибавляют 2 мл испытуемого раствора (Ь) и доводят объем раствора 95 % спиртом до 25 мл. Измеряют оптическую плотность [1] испытуемого раствора (с) и раствор сравнения (Ь) через 40 мин после приготовления растворов при длине волны 409 нм, используя компенсационный раствор. Результаты и обсуждение. Нами было установлено, что ультрафиолетовый спектр суммы флавоноидов содержит две полосы поглощения (Атах1= (257 ± 2) нм, Лтах2= (357 ± 2) нм) (рисунок 1).
300 325 350 Wavelefigth(nm) Рисунок 1 - Спектры испытуемого раствора
Предельная неопределенность методик анализа (max ДД5) составляет 3,2 %, критическое значение остаточного стандартного отклонения (RSD0) - 1,69 %. Валидацию исследуемой аналитической методики количественного определения биологически активных веществ проводили по следующим характеристикам: робастность, линейность, правильность, точность, сходимость в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Республики Казахстан [1]. Линейность исследовали в пределах диапазона применения аналитической методики по девяти независимым концентрациям, в интервале 80-120 % от номинального содержания активных веществ. Линейная
Linear Reg
зависимость характеризуется уравнением регрессии y = bx + a, которое имеет следующий вид y = 1,00613x-1,2778, коэффициент корреляции R составляет 0,99802 при стандартном отклонении БРне превышающем 1,0. На рисунке 2 представлено графическое изображение линейной зависимости методик в нормализованных координатах. Расчеты параметров линейности проведены методом наименьших квадратов с помощью электронной программы MicrocalOridin. На основании полученных данных можно утверждать о линейной зависимости аналитической методики, выполняемой по всем критериям соответствия в указанном диапазоне применения аналитической методики.
n Template
¡=
о?
^ 100
80 90 100 110 120
X axis title
Рисунок 2 - Диаграмма линейности аналитической методики
Метрологические значения методики показали, что относительная ошибка среднего результата определения составляет 0,306, практический критерий Стьюдента не превышает табулированного значения,следовательно гипотеза |ц| +х|| г 0 может быть отвергнута, что позволяет считать результаты исследования свободными от систематической ошибки. Рассматривая параметры правильности, наблюдаем, что исследуемые методики не имеют значимой систематической погрешности, поскольку величина б незначимо отличается от нуля. На основании полученных результатов можно утверждать, что изучаемая методика отвечает всем критериям критических значений метрологических характеристик.
Проведены исследования внутрилабораторной точностиизучаемой аналитической методики, которые подтвердили воспроизводимость методики разными аналитиками в разные дни на разном оборудовании внутри одной лаборатории.
Приготовленные растворы были изучены на робастность и доказана их стабильность в течение 4 ч.
Исследования показали, что для достоверного определения анализируемого вещества
растворэкстрагента необходимо подвергать фильтрации в горячем виде и только затем охлаждать. В методике неопределенность пробоподготовки (Д5Р) составляет 0,99 %, неопределенность конечной аналитической операции (Д=До) - 0,7 %, полная неопределенность (ДД5) - 1,21. Соотношение ДД5<тах Дд5=3,2 % выполняется. Это позволяет сделать вывод, чтометодика будет давать воспроизводимые результаты и в других контрольных лабораториях [4]. Выводы. Изучены валидационные характеристики аналитической методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье Cistanchesalsa с помощью спектрофотометрического метода.
Результаты валидации показали, что методика удовлетворяет условиям тестов на робастность, правильность, характеризуются линейной зависимостью в исследуемой аналитической области, корректной точностью и сходимостью полученных результатов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 З.Б. Сакипова, У.М. Датхаев, Э.Н. Капсалямова, К.К. Кожанова, Э.Б. Картбаева Разработка состава, стандартизация и определение безопасности новой биологической активной добавки из CistancheSalsa // Материалы работы апробированы на XVII Международной научной конференции «ОНКОЛОГИЯ - XXI ВЕК», Испания. - 2013. - С. 232-236
2 Э.Б. Картбаева Фармацевтическая разработка новых лекарственных средств из отечественного лекарственного растительного сырья CistancheSalsa // Республиканской научно-практической конференции с международным участием «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ДОКАЗАТЕЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ И ЛЕКАРСТВЕННОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ». - Караганды: 2013. -С.181-182.
3 Э.Б. Картбаева Стандартизация биологической активной добавки из CistancheSalsa и определение ее безопасности // Научно - практической конференции «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОБРАЗОВАНИЯ, НАУКИ И ПРОИЗВОДСТВА В ФАРМАЦИИ», - Ташкент:-2013. - С. 42-44.
4 Государственная фармакопея Республики Казахстан. т. 1. I издание.
Л.Н. ИБРАГИМОВА, Э.Б. КАРТБАЕВА, М.К. ДАУРБАЕВА, Э.Н. КАПСАЛЯМОВА, З.Б. САКИПОВА
CISTANCHESALSA ЖЫЛАНБУТАЕЫНДАЕЫ БИОЛОГИЯЛЫ^ БЕЛСЕНД1 ЗАТТАРДЫ САНДЫ^ АНЫ^ТАУ ЭДЮНН,
ВАЛИДАЦИЯСЫ
ТYЙiн: Ма;алада Cistanche Salsa жыланбутагындагы биологиялы; белсендi заттарды санды; аны;тау эа^анщ валидациясыныц жэне оны жасау бойынша мэлiметтер керсеттген.Cistanche Salsa шикiзатындаFы флаваноидтар сомасын УК- спектрофотометриялы; э^стщ кемегiмен санды; аны;таудыц аналитикалы; эдктемеанщ валидациялы; сипаттамасы зерттелдi. Валидация нэтижелерi эдiстеме т^рактылы;, дурысты;, зерттелетiн аналитикалы; салага сызыктык; тэуелдiлiгiмен сипатталатынын, алынган нэтижелердщ уйлеамдЫпн жэне на;тылыгын керсеттi.
ТYЙiндi свздер:Cistanche salsa жыланбутагы, аналитикалы; эдктщ валидациясы, УК-спектрофотометрия, биологиялы; белсендi заттар, флаваноидтар сомасы.
L.N. IBRAGIMOVA, E.B. KARTBAYEVA, M. K. DAURBAYEVA, E.N. KAPSALYAMOVA, Z.B. SAKIPOVA
A VALIDATION OF THE QUANTITATIVE DETERMINATION METHOD OF BIOACTIVE SUBSTANCE IN CISTANCHESALSA'S STOLONS
Resume: In this article, materials for developing and validation of the quantitative determination method of bioactive substance in Cistanche Salsa's stolons are represented. This study sought to define a validation description of the quantitative determination of total flavonoids in Cistanche Salsa's substance by UV-spectro-photometry. Results of the validation are revealed the method of fulfilling requirements of tests as such robustness, propriety, characterizing by linear dependence for an investigated area, proper fidelity and convergence.
Flora of the Republic of Kazakhstan is an inexhaustible source of biologically active substances: more than 6,000 plant species , 667 of them - are endemic. Cistanchesalsa refers to the number of plant -parasitic saxaul , the value of which is due to the high content of ctolonah various biologically active substances , which in developed countries is widely used as a feedstock for the production of pharmacologically active compounds broad spectrum : increasing vitality , potency antioxidant activity. To date, there is an increase logging and exportation of raw materials in the Republic of China , it should be noted that in 2000 Cistanchesalsa was included in the Red Book of China [1-3].
Special scientific and practical interest plant Cistanchesalsa, growing in different regions of Kazakhstan. Kazakh National Medical University conducted research to develop new drugs from plant material Cistanchesalsa. The aim of the study was the development of the technology of liquid extract Tsistanhe in pilot conditions. Results and discussion . Developed technology tsistanhe extract liquid , made its optimization and technology transfer in terms of industrial development in the enterprise LLP " FitOleum " ( Issyk , developed industrial production regulations. Keywords: Cistanche Salsa's stolons, validation of the quantitative determination, UV-spectro-photometry, bioactive substance, total flavonoids.
УДК 615.272.4:612.014.462.6:542.934
А.К. БОШКАЕВА, З.Б. САКИПОВА, А.Г. КЕНЖЕБАЕВА
Казахский Национальный медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова
ПРОГНОЗИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕАКЦИОННОЙ СПОСОБНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА
Резюме: Создание и многообразие лекарственных средств требует индивидуального подхода к оцениванию экспериментальных исследований взаимодействий исходных веществ с химическими реагентами и прогнозированию фармакологического действия новых производных.
Воссоздание молекулярных систем, отвечающим этим взаимодействиям, и оптимизация с последующим конструированием химических соединений, основывается на теоретическом прогнозировании химических и биологических свойств новых синтезированных ацильных производных дигидрокверцетина с помощью метода молекулярного моделирования и определении биологического действия с помощью PASS прогноза.
Ключевые слова: производные дигидрокверцетина, прогнозирование биологической активности, определение реакционной способности.
Синтез химических соединений является одним из флавоноидов, на основе, которых можно получать
приоритетных направлений поиска и создания новых лекарственные средства с комплексом ценных свойств
потенциальных лекарственных средств. Большой интерес для лечения и профилактики различных заболеваний.
представляет биологически активная группа
