CC BY
13
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Экспериментальная онкология
Результаты: У больных раком толстого кишечника установлено значимое увеличение концентрации галектина-1 и га-лектина-3 в плазме крови по сравнению со значениями соответствующих показателей у здоровых доноров. «По результатам проточной цитометрии, содержание CD4 T-bet Th1 -лимфоцитов, CD4 RORC2 ТИ17-лимфоци-тов в крови и секреция IL-17 in vitro у пациентов оказались ниже, чем в контрольной группе. При этом относительное количество CD4 FoxP3 Treg-клеток в крови и базальная секреция Treg-маркерного цитокина TGFpl in vitro, напротив, были повышены. Плазменная концентрация галек-тинов-1, 3 отрицательно коррелировала с содержанием Thl-лимфоцитов, ^^-лимфоцитов в крови и секрецией IL-17 лимфоцитами in vitro. С другой стороны, выявлены положительные ассоциации между уровнем галектинов 1 и 3 и содержанием CD4 FoxP3 Treg клеток в крови и секрецией TGFpl мононуклеарными лейкоцитами in vitro. Заключение: При раке толстого кишечника повышенный уровень галектинов 1 и 3 в крови сопряжен с количественным дефицитом и угнетением секреторной активности эффекторных Т-лимфоцитов, и, напротив, активацией иммуносупрессорных функций регуляторных Т-клеток. Полученные результаты указывают на негативную роль га-лектина-1 и галектина-3 в механизмах регуляции Т-клеточ-ного звена иммунного ответа при раке толстого кишечника. Работа поддержана грантом Президента РФ (МД-2788.2019.7).
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДА ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ ПРИ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНОМ ИССЛЕДОВАНИИ БЕЛКОВЫХ МАРКЁРОВ В ТКАНИ ЗДЛИДНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
Авторы: А.А. Башарина1, Е.А. Рукавишникова12, Е.А. Богуш13, Н.О. Вихлянцева1, А.Б. Равчеева1, С. Д. Коломийцев1, Т. А. Богуш1 Место работы: 1. ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2. МГУ им. М. В. Ломоносова, Москва; 3. ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовскийуниверситет), Москва
Эл. почта: Tatbogush@mail.ru
Цель: Аналитическая валидация ранее разработанного авторами иммунофлуоресцентного метода с использованием проточной цитометрии для изучения опухолевых маркёров в ткани солидных новообразований. Материалы и методы:Валидация метода проведена при количественной оценке экспрессии белка ßIII -тубулина (TUBB3) в суспензиях клеток немелкоклеточного рака легкого, полученных из хирургических образцов опухоли. Для иммунофлуоресцентного окрашивания использовали первичные моноклональные антитела к TUBB3 (ab7751) и вторичные антитела, конъюгированные с красителем DyLight650 (ab98729). Измерение флуоресценции проводили на проточном цитометре Navios (Beckman Coulter).
Уровень экспрессии ТиВВЗ (%) — количество специфически флуоресцирующих клеток относительно контроля (инкубация клеток только с вторичными антителами). Вычисление проводили с помощью критерия Колмогорова-Смирнова. Все эксперименты выполнены одним исследователем на одном и том же оборудовании.
Результаты: Проведен анализ двух валидационных параметров: сходимости результатов и временной стабильности иммунофлуоресцентной окраски.
Сходимость — это оценка воспроизводимости результатов, полученных при многократном анализе одного и того же образца в одинаковых условиях. Оценка сходимости проведена на трёх образцах опухолей разных больных при трёх повторных измерениях экспрессии ТиВВЗ в каждом образце в двух повторах опыта с интервалом 24 ч. Измерение флуоресценции проведено в течение 1 ч после окрашивания. Для статистического анализа полученных результатов использован коэффициент вариации (СУ, %), рассчитанный как отношение среднеквадратического отклонения уровня ТиВВЗ к его среднему значению. Для всех образцов опухолей коэффициенты вариации и их средние значения не превысили 20 %, что, согласно рекомендациям по аналитической валидации методов, позволяет считать результаты метода сходимыми. Оценка временной стабильности окраски проведена на трёх образцах опухолей при трёх повторных измерениях уровня ТиВВЗ в каждом образце в одном повторе опыта: сразу после завершения окрашивания (в течение 1 ч), а также через 6 и 24 ч. Для статистического анализа полученных данных использован коэффициент вариации (СУ,%) между начальным уровнем экспрессии ТиВВЗ (в течение 1 ч после завершения окрашивания) и последующими временными точками анализа — 6 и 24 ч.
Средние коэффициенты вариации уровня экспрессии ТиВВЗ в опухолевых клетках через 6 и 24 ч после завершения окрашивания относительно исходных показателей (в течение 1 ч после окрашивания) составили 7,6 % и 9,1 %, соответственно. При таких коэффициентах вариации им-мунофлуоресцентная окраска является стабильной. Заключение: Показана сходимость и временная стабильность результатов количественной оценки экспрессии ТиВВЗ в ткани солидных опухолей при использовании разработанного авторами метода иммунофлуоресцентного окрашивания,ассоциированного с проточной ци-тометрией.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том / vol. 10 №3s1 • 2020
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
