CC BY
9
Российский
онкологический
конгресс
Экспериментальная онкология
Материалы и методы: В исследование включены 56 пациентов (35 женщин и 21 мужчина) с пигментными образованиями кожи (n = 44) и с изменениями ногтевого ложа (n = 12). Средний возраст пациентов составлял 48 ± 3,1 год. Всем пациентам выполнялась СИА-скопия на доопераци-онном этапе. Данные фиксировалось в табличном формате с последующим гистологическим исследованием операционного (биопсийного) материала. В процессе СИА-скопии с последующей компьютерной обработкой аппарат для СИА-скопии формирует изображения, которые называются СИА-сканы распределения общего меланина в новообразовании, дермального меланина, СИА-скан гемоглобина, СИА-скан коллагена. Получаемые в ходе исследования изображения дают ценную для дифференциальной диагностики информацию о наличии и распределении пигментированных структур и коллагена в разных слоях кожи на глубине до 2 мм. Результаты: При анализе заключений патоморфологи-ческого исследования получены следующие результаты, которые напрямую коррелируют с выявленными особенностями СИА-сканов:22 — меланомы кожи, 8 — меланом кожи in situ, 14 — диспластических невуса, 6 — подногтевых меланомы, 6 — онихомикоза, паронихии. При СИА-скопии пигментного образования кожи (меланома in situ): СИА-скан
1 — атипичная ассиметричная пигментная нерегулярная сеть, нерегулярные бесструктурные участки в пределах новообразования, край новообразования по типу «изъеденного молью».
СИА-скан 2 — неравномерная пигментация, асимметрично расположенный участок черной окраски. СИА-скан 3 — ас-симетричные очаги зеленого цвета. Дермальный меланина ассиметрично распределен. СИА-скан 4 — ассиметричного расположенные очаги белого цвета, окруженные интенсивного окрашенными участками красно-розового оттенка. Кровеносные сосуды вытесняются из папиллярного слоя дермы. СИА-скан 5 — бесцветные бесструктурные участки в местах локализации дермального меланина. В свою очередь диспластические невусы не имеют характерного распределения дермального меланина, как это при СИА-скане 3.
При СИА-скопии подногтевых образований (подногтевая меланома): СИА-скан 1 — атипичная пигментные неравномерные разной толщины полоски, коричневый фон, нерегулярные бесструктурные участки в пределах новообразования, ширина полосы линий у дистального ногтевого валика больше, чем у проксимального валика. СИА-скан
2 — неравномерная пигментация, асимметрично расположенные непараллельные полоски черной окраски. СИА-скан
3 — диффузно расположенные в пределах новообразования продольный очаг зеленого, синего цветов. Асимметрично расположенный отдельный полихромный очаг.
Цвет в очагах варьирует от зеленого до бирюзового, синего и центрально расположенного — фиолетового оттенков. Ассиметрия дермального меланина. СИА-скан 4 — редкие нерегулярные бесструктурные участки — сосуды вытиснутые опухолью, светло-розовый оттенок в пределах ново-
образования. СИА-скан 5 — бесцветные бесструктурные участки в местах локализации меланина, очаг неправильных очертаний более светлого оттенка. Заключение: 1. Приведенный опыт СИА-скопии в диагностике подногтевых образований открывает новые возможности в связи с тем, что СИА-сканы с подногтевой пластиной и нативная картина не отличаются по диагностической ценности. 2. Весьма значима СИА-скопия при постановке такого сложного диагноза как меланома in situ, который требует незамедлительного хирургического лечения, и диспластического невуса кожи, в случае которого допустимо наблюдение. 3. Продемонстрированный клинический опыт показывает высокую прогностическую значимость СИА-скопии в дифференциальной диагностике подногтевых злокачественных образований с доброкачественной и инфекционной природой поражения ногтевого ложа. 4. Внедрение СИА-скопии имеет большое будущее в качестве скрининга, выявления опухолей кожи и меланомы.
ГАЛЕКТИНЫ-1, 3 КАК ФАКТОРЫ ДИЗРЕГУЛЯЦИИ Т-КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ РАКЕ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА
Авторы: В. С. Полетика1, Ю. В. Колобовникова1, О. И. Уразова1, О.А. Васильева1, А.И. Дмитриева2, К.И. Янкович2, В.В. Новицкий1 Место работы: 1. ФГБОУ ВО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Томск; 2. Областное государственное автономное учреждение здравоохранения «Томский областной онкологический диспансер», Томск
Эл. почта: vpoletika@yandex.ru
Цель: Установить особенности субпопуляционного состава и цитокин-секреторной активности Т-лимфоцитов крови (Th1, Th17 и Treg) во взаимосвязи с концентрацией галектина-1 и галектина-3 в плазме крови у больных раком толстого кишечника.
Материалы и методы: В исследование были включены 26 пациентов с диагнозом рака толстого кишечника проходивших лечение в ОГАУЗ «Томский областной онкологический диспансер». В группу контроля вошли 17 здоровых доноров. Материалом исследования служила цельная периферическая кровь, плазма крови и супернатанты суспензионной культуры мононуклеарныхлейкоцитов. Иммунофенотипирование лимфоцитов осуществляли методом проточной цитофлуориметрии с использованием моноклональных антител, меченых флуоресцентными метками (PerCP-Cy5.5, Alexa Fluor 488, PE, APC; BD Biosciences, США; RnD Systems, США). Содержание галектина-1 и га-лектина-3 (в плазме крови) и IFNy, IL-17A и TGFp1 (в супер-натантах культуры мононуклеарных лейкоцитов in vitro) измеряли методом иммуноферментного анализа. Статистический анализ проводили с использованием программы Statistica 12.0. Различия считали достоверными при р < 0,05.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том / vol. 10 № 3s1 • 2020
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Экспериментальная онкология
Результаты: У больных раком толстого кишечника установлено значимое увеличение концентрации галектина-1 и га-лектина-3 в плазме крови по сравнению со значениями соответствующих показателей у здоровых доноров. «По результатам проточной цитометрии, содержание CD4 T-bet Th1 -лимфоцитов, CD4 RORC2 ТИ17-лимфоци-тов в крови и секреция IL-17 in vitro у пациентов оказались ниже, чем в контрольной группе. При этом относительное количество CD4 FoxP3 Treg-клеток в крови и базальная секреция Treg-маркерного цитокина TGFpl in vitro, напротив, были повышены. Плазменная концентрация галек-тинов-1, 3 отрицательно коррелировала с содержанием Thl-лимфоцитов, ^^-лимфоцитов в крови и секрецией IL-17 лимфоцитами in vitro. С другой стороны, выявлены положительные ассоциации между уровнем галектинов 1 и 3 и содержанием CD4 FoxP3 Treg клеток в крови и секрецией TGFpl мононуклеарными лейкоцитами in vitro. Заключение: При раке толстого кишечника повышенный уровень галектинов 1 и 3 в крови сопряжен с количественным дефицитом и угнетением секреторной активности эффекторных Т-лимфоцитов, и, напротив, активацией иммуносупрессорных функций регуляторных Т-клеток. Полученные результаты указывают на негативную роль га-лектина-1 и галектина-3 в механизмах регуляции Т-клеточ-ного звена иммунного ответа при раке толстого кишечника. Работа поддержана грантом Президента РФ (МД-2788.2019.7).
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДА ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ ПРИ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНТНОМ ИССЛЕДОВАНИИ БЕЛКОВЫХ МАРКЁРОВ В ТКАНИ ЗДЛИДНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
Авторы: А.А. Башарина1, Е.А. Рукавишникова12, Е.А. Богуш13, Н.О. Вихлянцева1, А.Б. Равчеева1, С. Д. Коломийцев1, Т. А. Богуш1 Место работы: 1. ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2. МГУ им. М. В. Ломоносова, Москва; 3. ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовскийуниверситет), Москва
Эл. почта: Tatbogush@mail.ru
Цель: Аналитическая валидация ранее разработанного авторами иммунофлуоресцентного метода с использованием проточной цитометрии для изучения опухолевых маркёров в ткани солидных новообразований. Материалы и методы:Валидация метода проведена при количественной оценке экспрессии белка ßIII -тубулина (TUBB3) в суспензиях клеток немелкоклеточного рака легкого, полученных из хирургических образцов опухоли. Для иммунофлуоресцентного окрашивания использовали первичные моноклональные антитела к TUBB3 (ab7751) и вторичные антитела, конъюгированные с красителем DyLight650 (ab98729). Измерение флуоресценции проводили на проточном цитометре Navios (Beckman Coulter).
Уровень экспрессии ТиВВЗ (%) — количество специфически флуоресцирующих клеток относительно контроля (инкубация клеток только с вторичными антителами). Вычисление проводили с помощью критерия Колмогорова-Смирнова. Все эксперименты выполнены одним исследователем на одном и том же оборудовании.
Результаты: Проведен анализ двух валидационных параметров: сходимости результатов и временной стабильности иммунофлуоресцентной окраски.
Сходимость — это оценка воспроизводимости результатов, полученных при многократном анализе одного и того же образца в одинаковых условиях. Оценка сходимости проведена на трёх образцах опухолей разных больных при трёх повторных измерениях экспрессии ТиВВЗ в каждом образце в двух повторах опыта с интервалом 24 ч. Измерение флуоресценции проведено в течение 1 ч после окрашивания. Для статистического анализа полученных результатов использован коэффициент вариации (СУ, %), рассчитанный как отношение среднеквадратического отклонения уровня ТиВВЗ к его среднему значению. Для всех образцов опухолей коэффициенты вариации и их средние значения не превысили 20 %, что, согласно рекомендациям по аналитической валидации методов, позволяет считать результаты метода сходимыми. Оценка временной стабильности окраски проведена на трёх образцах опухолей при трёх повторных измерениях уровня ТиВВЗ в каждом образце в одном повторе опыта: сразу после завершения окрашивания (в течение 1 ч), а также через 6 и 24 ч. Для статистического анализа полученных данных использован коэффициент вариации (СУ,%) между начальным уровнем экспрессии ТиВВЗ (в течение 1 ч после завершения окрашивания) и последующими временными точками анализа — 6 и 24 ч.
Средние коэффициенты вариации уровня экспрессии ТиВВЗ в опухолевых клетках через 6 и 24 ч после завершения окрашивания относительно исходных показателей (в течение 1 ч после окрашивания) составили 7,6 % и 9,1 %, соответственно. При таких коэффициентах вариации им-мунофлуоресцентная окраска является стабильной. Заключение: Показана сходимость и временная стабильность результатов количественной оценки экспрессии ТиВВЗ в ткани солидных опухолей при использовании разработанного авторами метода иммунофлуоресцентного окрашивания,ассоциированного с проточной ци-тометрией.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том / vol. 10 №3s1 • 2020
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
