CC BY
82
_МЕЖДУНАРОДНЫЙ НАУЧНЫЙ ЖУРНАЛ «СИМВОЛ НАУКИ» №4/2016 ISSN 2410-700Х_
2. Асанов А. Ю., Скляров В. Я. Перспективы использования водоемов
комплексного назначения Пензенской области в целях аквакультуры // Труды КубГау. № 56. 2015. - С. 6168.
3. Козлов В. И., Иванова Ю. С. Эколого-рыбохозяйственная оценка озера Сенеж // Рыбное хозяйство. -2013. - № 1. - С. 18-25.
© Асанов А. Ю., Сенкевич В.А., Лысенков Е.В., 2016
УДК: 579.62
Гаврилин Кирилл Владимирович
доктор биол. наук, профессор ФГБОУ ВО МГУТУ им. КГ. Разумовского (ПКУ), г. Москва, РФ
E-mail: k.gavrilin@yandex.ru Ридигер Анна Валерьевна канд. биол.наук, доцент ФГБОУ ВО МГУТУ им. КГ. Разумовского (ПКУ), г. Москва, РФ
E-mail: annaridiger@yandex.ru Пономарев Андрей Константинович канд. биол. наук, доцент ФГБОУ ВО МГУТУ им. КГ. Разумовского (ПКУ), г. Москва, РФ
E-mail: ponomarev777@inbox.ru
УСТАНОВЛЕНИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ МПК IN VITRO И ЭФФЕКТИВНЫМИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИМИ ДОЗАМИ ФТОРХИНОЛОНОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ БАКТЕРИОЗОВ РЫБ
Аннотация
Проведены исследования взаимосвязи между минимальными подавляющими концентрациями ципрофлоксацина in vitro и дозами оказывающими терапевтический эффект при лечении экспериментального аэромоноза Cyprinus carpio. Установлено, что дозы оказывающие терапевтический эффект составляют 2 МПК.
Ключевые слова
Бактериальные болезни рыб, ципрофлоксацин, минимальная подавляющая концентрация
Одним из важнейших параметров, оцениваемых при внедрении и применении антибактериального химиотерапевтического средства является количественная взаимосвязь между МПК, определяемыми in vitro и ожидаемыми терапевтическими дозами in vivo. Во первых они позволяют на основании экспериментов, определить предварительные терапевтические концентрации, необходимые для разработки прототипа лекарственной формы и методики проведения экспериментов по определению оптимальной терапевтической дозы препарата. Во вторых эти данные необходимы для коррекции дозировок препаратов с учетом динамики антибиотикорезистентности. Например, устойчивость основных бактериальных патогенов рыб к широко применяемому в отечественном рыбоводстве ципрофлоксацину медленно возрастает [9, с. 87; 10, с. 92]. Так по состоянию на 2006 год число резистентных к нему штаммов аэромонад составляло 9,5% [3, с. 92], а в 2014 году 10,8% [5, с. 14]. В третьих минимизация доз (на основании определения МПК этиологических агентов при каждом конкретном заболевании) антибиотиков не только экономически целесообразно, но и снижает
_МЕЖДУНАРОДНЫЙ НАУЧНЫЙ ЖУРНАЛ «СИМВОЛ НАУКИ» №4/2016 ISSN 2410-700Х_
отрицательные последствия излишнего их применения, на которые указывает ряд авторов [1, с. 30] [2, с. 45][6, с. 138]. Данные исследования особенно актуальны, по отношению к ципрофлоксацину, из группы фторхинолонов. Так как на сегодняшний момент на его основе производятся наиболее широко применяемые в аквакультуре РФ и эффективные антибактериальные препараты [4, с. 15][8, с. 16].
Для теоретического определения терапевтических доз фторхинолонов для человека рекомендуют использовать 2 - 4 МПК [7, с.83]. Для рыб такие данные отсутствуют. С целью решения этого теоретически и практически важного вопроса мы провели ряд экспериментов. Карпов средней массой 140 ± 20 г заражали различными вирулентными культурами аэромонад (индуцированная вирулентность) с разным уровнем чувствительности к ципрофлоксацину (с различным МПК колебавшимся, в зависимости от штамма от 3,5 до 6,5 мкг/мл), случайным образом делили на группы (по 6 экз.) и рассаживали в отдельные аквариумы. Искусственную модель аэромоноза создавали путем внутрибрюшинного введения рыбам 10 млн. микробных тел на особь.
Культуры аэромонад выращивали на Standard method agar, и смывали стерильным физиологическим раствором. Плотность суспензии устанавливали по стандарту мутности (Государственный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича, Россия). Перед использованием для каждой культуры проводили 4 пассажа добиваясь возникновения характерной клинической картины острой формы аэромоноза и гибели не менее 30 - 50% подопытных рыб. Количество жизнеспособных бактериальных клеток в используемой для заражения суспензии контролировали путём высева ряда десятикратных разведений на поверхность Standard method agar.
Температура воды во время экспериментов составляла 22° С. Всего использовали четыре штамма, соответственно провели четыре серии опытов. Характеристики использованных для создания экспериментального аэромоноза штаммов приведены в таблице 1.
Таблица 1
Биологические свойства аэромонад, использовавшихся для создания экспериментальной модели
аэромоноза
Вид Параметр A. caviae A. caviae A. schubertii A. hydrophila
Источник выделения Вода Cyprinus carpio печень Xiphophorus helleri печень Astronotus ocellatus печень
МПК, мкг/мл 6,25 4,5 3,8 3,5
ДНК-аза при выделении, мм 4,0 3,5 3,8 4,1
ДНК-аза после 4-го пассажа, мм 4,5 4,8 4,8 4,6
Гибель, % при 1 -ом пассаже 0 0 0 0
Гибель, % при 4-ом пассаже 30 40 30 50
В первом аквариуме рыб оставляли без лечения. Они служили контрольной группой и демонстрировали развитие экспериментальной инфекции при данных условиях. Во второй аквариум вносили ципрофлоксацина гидрохлорид в дозе, необходимой для создания МПК по отношению к использованному для заражения штамму. В третий и четвертый аквариум вносили дозы для создания двух и четырехкратной МПК. Биодоступность ципрофлоксацина условно принимали за 100 %.
Длительность лечения составляла пять суток, после чего рыб еще пять суток содержали в чистой воде. В день учета результатов проводили контроль стерильности крови. Остаточная септицемия представляется весьма опасной, так как фактически мы наблюдаем некую точку развития инфекционного процесса. В случае резкого снижения антиинфекционного иммунитета, например за счет ухудшения гидрохимического режима, возможна повторная вспышка заболевания. Результаты лечения представлены в таблице 2.
МЕЖДУНАРОДНЫЙ НАУЧНЫЙ ЖУРНАЛ «СИМВОЛ НАУКИ» №4/2016 ISSN 2410-700Х_
Таблица 2
Терапевтическая эффективность различных доз ципрофлоксацина
Учитываемые параметры Группы
Контроль | МПК | 2 х МПК | 4 х МПК
A. caviae 6,25 мкг/мл
С клинической картиной, через 48 часов после заражения, экз. 6 6 6 6
Гибель в течение опыта, экз. 3 2 0 0
С клинической картиной при учете опыта 3 0 0 0
Стерильность крови на момент учета опыта, КОЕ/мл крови 985,0±31,3 85,0±9,3 0,0 0,0
A. caviae 4,5 мкг/мл
С клинической картиной, через 48 часов после заражения, экз. 6 6 6 6
Гибель в течение опыта, экз. 2 1 0 0
С клинической картиной при учете опыта 4 0 0 0
Стерильность крови на момент учета опыта, КОЕ/мл крови 860,0±29,0 140,0±12,8 0,0 0,0
A. schubertii 3,8 мкг/мл
С клинической картиной, через 48 часов после заражения, экз. 6 6 6 6
Гибель в течение опыта, экз. 3 1 0 0
С клинической картиной при учете опыта 3 0 0 0
Стерильность крови на момент учета опыта, КОЕ/мл крови 350,0±18,7 68,0±8,2 0,0 0,0
A. hydrophila 3,5 мкг/мл
С клинической картиной, через 48 часов после заражения, экз. 6 6 6 5
Гибель в течение опыта, экз. 4 0 0 0
С клинической картиной при учете опыта 2 1 0 0
Стерильность крови на момент учета опыта, КОЕ/мл крови 1240,0±35,2 46,0±6,8 0,0 0,0
Результаты экспериментов показали, что дозы ципрофлоксацина на уровне МПК приводят к клиническому выздоровлению рыб, но в их крови, еще минимум пять дней (срок наблюдения), присутствуют аэромонады в достаточно больших количествах. Дозы на уровне двух МПК и более приводят к выздоровлению рыб и элиминации возбудителей. Следовательно, минимальную терапевтическую дозу следует рассчитывать как 2 х МПК. При этом следует учитывать, что биодоступность фторхинолонов для рыб при помещении их в растворы действующих веществ близка к 100 %. При пероральном введении препаратов около 70%. Следовательно, при исследовании лекарственных форм предназначенных для проведения лечебного кормления, необходимо делать поправку на биодоступность субстанции действующего вещества.
Из этого следует что, закономерности, установленные для человека действительны и для рыб. По всей видимости, мы имеем дело с неким фундаментальным свойством данной группы антибактериальных соединений. Поэтому при проведении исследований антибактериальной активности и корректировки доз препаратов на основе ципрофлоксацина in vitro для расчета ожидаемой терапевтической дозы целесообразно использовали выявленные закономерности.
Список использованной литературы:
1. Бычкова Л.И., Юхименко Л.Н. Бактериальная геморрагическая септицемия карпа (БГС) в пресноводной аквакультуре (причины возникновенияи меры борьбы). Рыбоводство и рыбное хозяйство. 2013. № 12. С. 3035.
2. Бычкова Л.И., Юхименко Л.Н. Экологический подход к эпизоотологии бактериальных болезней рыб. Рыбоводство и рыбное хозяйство. 2013. № 8. с. 45-50.
3. Гаврилин К.В. Уровень чувствительности возбудителей бактериальных болезней рыб к антибактериальным препаратам. Ветеринарная патология. 2008. №3. С. 91-94.
4. Гаврилин К.В., Воробьев Н.А. Эффективность Антибака 100 при аэромонозе карпов. Ветеринария. 2013. №3. С. 15-16.
МЕЖДУНАРОДНЫЙ НАУЧНЫЙ ЖУРНАЛ «СИМВОЛ НАУКИ» №4/2016 ISSN 2410-700Х
5. Гаврилин К.В. Результаты мониторинга антибиотикорезистентности основных групп ихтиопатогенных бактерий за 2014 год. Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. 2014. №4. С. 1415.
6. Бородин А.Л., Горбунов А.В., Никифоров-Никишин А.Л. Изменения микроэлементного состава хрусталика рыб в процессе развития катаракты // Вопросы рыболовства. 2007. Т. 8. № 1-29. С. 138-141.
7. Падейская Е.Н., Яковлев В.П. Антимикробные препараты группы фторхинолонов в клинической практике. М.: Логата, 1998. 284 с.
8. Поляков Г.Д., Титаренко А.Г., Круглов С.Н., Гаврилин К.В. Опыт борьбы с болезнями рыб в Ростовской области. Ветеринария. 2006. №3. С. 16-18.
9. Гамыгин Е.А., Багров А.М., Бородин А.Л., Ридигер А.В. Расширение сырьевой базы кормопроизводства для рыб // Рыбное хозяйство. 2013. № 4. С. 87-88.
10.Бородин А.Л., Горбунов А.В., Никифоров-Никишин А.Л. Изменение элементного состава хрусталика рыб под влиянием тяжелых металлов // Рыбное хозяйство. 2007. № 2. С. 92-93.
© Гаврилин К.В., Ридигер А.В., Пономарев А.К., 2016
УДК: 574.64
Гаврилин Кирилл Владимирович
доктор биол. наук, профессор ФГБОУ ВО МГУТУ им. КГ. Разумовского (ПКУ), г. Москва, РФ
E-mail: k.gavrilin@yandex.ru Ридигер Анна Валерьевна канд. биол.наук, доцент ФГБОУ ВО МГУТУ им. КГ. Разумовского (ПКУ), г. Москва, РФ
E-mail: annaridiger@yandex.ru Пономарев Андрей Константинович канд. биол.наук, доцент ФГБОУ ВО МГУТУ им. КГ. Разумовского (ПКУ), г. Москва, РФ
E-mail: ponomarev777@inbox.ru
ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ АКРИДИНОВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ, ПРИМЕНЯЕМЫХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РЫБ
Аннотация
Проедены исследования острой токсичности акрифлавина и этакридина лактата для рыб, на примере: Danio rerio, Paracheirodon innesi и Carassius auratus. Усредненные показатели ЛД50 для акрифлавина составил 21,3 мг/л, а для этакридина лактата - 25,0 мг/л. Терапевтические индексы - 4,26 и 5,0, соответственно.
Ключевые слова
Акрифлавин, Этакридина лактат, Акридиновые красители, лечение рыб, острая токсичность
Целый ряд акридиновых красителей используют в медицинской и ветеринарной практике. Например, акрихин применяют в качестве противомалярийного, а этакридина лактат антисептического средств [4, с. 900, 953]. При этом установлено, что биологическая активность препаратов группы акридина значительно шире. Они обладают еще и антипаразитарной, противовирусной и противоопухолевой активностью.
Достаточно широкое распространение некоторые акридиновые красители получили и в аквакультуре. Их используют для терапии и профилактики различных инвазий, а так же при диагностике генетических нарушений у рыб [5, с. 26; 8, с. 87]. В инкубационных цехах форелевых хозяйств ими обрабатывают икру в
