CC BY
0УДК 616-71:616-097
УСТАНОВЛЕНИЕ НАЛИЧИЯ СПЕРМЫ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПОМОЩЬЮ ТЕСТ-ПОЛОСКИ PSA SEMIQUANT
МАРЖАН НУРКЕНОВНА МЫРЗАХАНОВА
профессор НАО «Кокшетауского университета им. Ш. Уалиханова», кандидат медицинских наук, ассоциированный профессор Кокшетау, Казахстан
КОРЧАЖНИКОВА ГАЛИНА ИВАНОВНА
судебно-медицинский эксперт Института судебных экспертиз по Акмолинской области
Кокшетау, Казахстан
ИБРАЕВА ЖУПАР БЕЙСЕКОВНА
руководитель экспертно-контрольного отдела Института судебных экспертиз по
Акмолинской области Кокшетау, Казахстан
АЗАЛИЯ АЗАМАТОВНА МУХАМЕДИНА
студент НАО «Кокшетауского университета им. Ш. Уалиханова». Научный руководитель - Маржан Мырзаханова. Кокшетау, Казахстан
ЦУАЩЫЗЫ АРУНА
студент НАО «Кокшетауского университета им. Ш. Уалиханова». Научный руководитель - Маржан Мырзаханова. Кокшетау, Казахстан
Аннотация: Иммунохроматографические тест-полоски для доказательной идентификации жидкостей организма, для судебно-медицинской экспертизы представляет интерес, таких как кровь, сперма и слюна. Обычно судебно-медицинские образцы имеют небольшое количество. В практике сохранения ограниченных образцов было бы идеально иметь возможность восстановить генетический материал, нанесенный на эти тестовые мембраны. Данное исследование было направлено на то, чтобы определить, с помощью тест-полосок наличие спермы, а также оценить качество восстановленной ДНК. Обнаружение PSA как маркера семенной жидкости, даже возможно при отсутствии сперматозоидов. Более высокая надежность обнаружения PSA в вагинальных мазках с высокой стабильностью на положительные результаты теста. Рекомендуется рассмотреть возможность использования обработанных тест-полосок для анализа профиля ДНК, чтобы сохранить доказательства.
Ключевые слова: иммунохроматографический тест, тест-полоска с боковым потоком, сперма.
В уголовных расследованиях точное определение жидкостей и тканей в организме играет ключевую роль, позволяя установить связь между донором, типом клеток и характером деятельности. В данном обзоре мы начинаем с описания судебно-медицинского контекста идентификации жидкостей тела и тканей, сосредотачиваясь на методах и оценках их присутствия. Затем рассматриваем техники обнаружения жидкостей организма на месте происшествия и в лаборатории, а также основные методы анализа, включая использование маркеров.
В этом обзоре современных методов выявления биологических жидкостей, связанных с сексуальными преступлениями, мы рассмотрели разнообразные подходы, используемые в настоящее время, с особым упором на исследование простатического специфического
антигена (PSA) и его связь с семенем. Определение жидкостей в организме играет важную роль в уголовных расследованиях, предполагая правильное применение полученных результатов. Следовательно, дальнейшие исследования и разработки в этой области являются необходимостью.
Тест PSA Seratec Semiquant широко используется в судебно-медицинской практике для дополнительной оценки и обнаружения антигена, специфичного для предстательной железы (PSA), в биологических пробах.
Количественное измерение уровня PSA в образце может быть использовано для оценки времени с момента эякуляции, что имеет значение для установления хронологии событий. Обнаружение наличия PSA также может дополнительно подтвердить факт эякуляции, что важно для различных судебных вопросов. Результаты теста могут служить дополнительной информацией для экспертов и судей при принятии обоснованных решений на основе научных данных. Применение этого теста при расследовании сексуальных преступлений позволяет выявить следы семенной жидкости на одежде или других материалах, что является важным для диагностики таких преступлений.
Необходимо отметить, что использование таких тестов в судебной практике должно соответствовать законодательству и нормам, а результаты следует анализировать с учетом конкретного контекста уголовного дела. Исследование спермы в судебно-медицинской практике часто используется для определения наличия или отсутствия сперматозоидов при расследовании преступлений, связанных с насилием, что может представлять важные доказательства в уголовном процессе.
Для подтверждения наличия семенной плазмы могут использоваться серологические методы с применением антител. Например, методы иммунодиффузии и иммуноэлектрофореза с применением высокотитрового античеловеческого преципитина спермы уже давно применяются, однако в настоящее время методом выбора считается набор для иммунохроматографии[1]. Простатический специфический антиген (ПСА) является одним из старейших маркеров семенной плазмы [2], и набор SERATEC® PSA Semiquant (Seratec, Геттинген, Германия), реагирующий на разбавленную в 1 миллион раз сперму, часто используется в качестве высокочувствительного набора [3].
Однако стоит отметить, что простатический специфический антиген (ПСА) также выражается в периуретральных железах женщин [4-6], особенно при использовании противозачаточных препаратов, и возможно получение положительного результата теста на ПСА без полового акта[7]. Это подчеркивает необходимость осторожности при оценке ПСА в отсутствие спермы. В отличие от этого, семиногелин, происходящий из семенных пузырьков, является спермоспецифическим антигеном, который не обнаруживается у женщин [8], что делает его надежным методом для определения наличия семенной плазмы. Коммерчески доступный набор RSIDTM-SEMEN (Independent Forensics, Ломбард, Иллинойс, США) также содержит антитела против семиногелина[9].
Было проведено множество исследований по идентификации спермы с использованием метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (от-ПЦР) [10-12]. В частности, гены SEMG1 и PRM2 выявлены как эффективные мишени с высокой специфичностью [13]. Поскольку ген PRM2 экспрессируется непосредственно в сперматозоидах, он не будет обнаружен в сперме у мужчин с азооспермией.
Обычно в ходе судебно-биологической экспертизы следы спермы представлены в виде засохших пятен, которые могут быть обнаружены на различных поверхностях: одежде, постельном белье, кусочках ткани, а также в виде мазков на предметных стеклах и тампонах, собранных из влагалища, полости рта или заднего прохода. Задача эксперта заключается в выявлении спермы на этих предметах и последующем определении ее групповых факторов, а также в вынесении экспертного мнения относительно вероятности того, что данная сперма принадлежит определенному человеку или нескольким лицам.
Существует широкий спектр методов для обнаружения спермы, включая ориентировочные и доказательные. Ориентировочные методы, такие как реакция с соком клубня картофеля, микрокристаллические реакции, анализ пятен под ультрафиолетовым светом, определение кислой фосфатазы и другие, позволяют быстро обнаружить сперму на широкой поверхности, но не обеспечивают эксперту право категорически заключить о ее присутствии, предоставляя лишь предположительные данные. В судебно-биологической экспертизе предпочтение отдается доказательным методам, таким как морфологический, хроматографический, электрофоретический и использование диагностической антиспермальной сыворотки (АСС), которые чаще применяются для определения наличия спермы с большей уверенностью.
Среди методов обнаружения сперматозоидов наиболее распространенным и надежным остается метод морфологии. В сперматозоиде выделяются три основные части: головка, шейка и хвостик. Состав семенной жидкости включает простатический сок, производимый предстательной железой, выделение семенных пузырьков, а также секреты бульбоуретральных желез Литтера и Купера [14].
Согласно судебно-биологическим исследованиям, метод морфологии для определения наличия спермы применялся во всех случаях, и из них 80% исследований заканчивались отрицательным результатом. Это обусловлено как отсутствием или низким содержанием сперматозоидов в материале, так и увеличенным числом аномалий спермы, таких как азооспермия, олигоспермия (обычно менее 15 миллионов сперматозоидов на миллилитр) и аспермия, которая характеризуется отсутствием эякуляции или выделения семенной жидкости. Кроме того, воздействие микробной флоры и других разрушающих факторов в окружающей среде может также препятствовать обнаружению спермы. Учитывая все перечисленные факторы, внедрение в практику судебно-биологических лабораторий иммунохроматографического теста "SERATEC PSA SEMIQUANT" имеет большое значение, поскольку это повышает качество экспертизы и эффективность выводов экспертов [15].
При отрицательном результате, когда целые сперматозоиды не обнаружены, исследование может продолжаться при помощи:
Иммунохроматографические методы просты в применении, существенно сокращают время исследования, обладают высокой специфичностью и особенно полезны в случае отрицательных результатов морфологического анализа. Они основаны на обнаружении компонентов семенной жидкости. Применение этих методов значительно расширяет возможности по обнаружению спермы с использованием тест-пластинок, которые явно указывают на положительные или отрицательные результаты. Идентификация групповой принадлежности спермы на основе реакции агглютинации помогает установить возможного донора спермы.
PSA Semiquant - это экспресс-тест на основе иммунохроматографии для быстрого полуколичественного обнаружения простатического специфического антигена (PSA) в качестве маркера семенной жидкости в судебно-биологических исследованиях. Он использует два моноклональных человеческих антитела к PSA. Этот экспресс-тест позволяет быстро подтвердить наличие следов спермы человека в рамках судебно-биологической экспертизы
Цель данного исследования заключается в выявлении наличия спермы с использованием тест-пластинки, содержащей антитела к простатическому специфическому антигену (PSA), при различных патологических состояниях спермы, таких как олигоспермия, азооспермия и аспермия.
Уникальной особенностью данного исследования является обнаружение простатического специфического антигена (PSA) в качестве маркера семенной жидкости, даже в случае отсутствия сперматозоидов. Более надежное выявление PSA в вагинальных мазках с высокой степенью стабильности к положительным результатам теста также является значимым выводом исследования.
[16].
Исследование было проведено в институте судебных экспертиз Акмолинской области, который является одним из центров судебных экспертиз, подчиненных Министерству Юстиции Республики Казахстан. Оно охватывало анализ различных биологических жидкостей, таких как слюна, кровь и сперма. Однако для более подробного изучения были выбраны образцы, поступившие на судебно-биологическое исследование в связи с случаями изнасилования. Исследование проводилось двумя основными методами, с целью сравнения их эффективности и точности результатов.
Морфологический метод, основанный на микроскопическом анализе, является наиболее предпочтительным для обнаружения сперматозоидов. Для этой цели применялся метод Корен-Стокиса, который включает использование аммиачного раствора эритрозина.
Изнасилования представляют собой одну из наиболее суровых форм насилия, с которыми сталкиваются женщины по всему миру. Из-за своей уязвимости и социального статуса, женщины часто становятся основной целью для преступников, желающих унизить и контролировать [17].
Английские эксперты утверждают, что набор для анализа PSA продемонстрировал более высокую чувствительность по сравнению с набором RSID-Semen. Это делает тест PSA более надежным и экономичным в использовании на местах преступлений.
В результате проведенного исследования пришли к выводу, что коммерчески доступные иммунохроматографические тесты на обнаружение PSA оказались более чувствительными по сравнению с Nanotrap Sg в данном исследовании. Количество положительных результатов на обнаружение PSA превысило количество результатов на обнаружение семеногелина на 12,6% (22 образца). Тесты на обнаружение PSA с однократным и двукратным замораживанием и размораживанием разведенной семенной жидкости продемонстрировали отличные результаты. Полученные данные были четкими и ясными, в отличие от тестов на обнаружение семеногелина.
Таким образом, применение теста PSA SEMIQUANT является надежным методом для определения присутствия спермы.
В рамках данного исследования мы обратились к другим научным публикациям о тест-пластинках PSA из разных стран. Подтверждено, что американские ученые признали тест SERATEC (PSA) одним из наиболее чувствительных. Для определения наличия спермы обычно используют микроскопическую визуализацию сперматозоидов или анализы наличия семенных маркеров, таких как кислая фосфатаза (АК) или простатспецифический антиген (ПСА). Мы рассмотрели набор для быстрой идентификации пятен, предназначенный для обнаружения спермы (RSID™-Semen). Этот иммунохроматографический тест-полоска с боковым потоком использует два моноклональных антитела против человеческого семеногелина для определения его присутствия. Согласно исследованию авторов Д. Олда и др., RSID™-Semen оказался более чувствительным к некоторым образцам судебно-медицинских доказательств, содержащим смеси вагинальных выделений и спермы, чем любой из коммерчески доступных тестов на основе ПСА или тестов, измеряющих активность АР, которые были проведены параллельно[17].
При отрицательных результатах морфологического исследования применение теста PSA SEMIQUANT дало положительные результаты при диагностике азооспермии.
1. Li, R. Precipitation-based assays. In Forensic Biology; CRC Press: Boca Raton, FL, USA, 2008. Sensabaugh, G.F. Isolation and characterization of a semen-specific protein from human seminal plasma: A potential new marker for semen identification. J. Forensic Sci. 1978, 23, 106-115. [CrossRef]
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ:
2. Hochmeister, M.N.; Budowle, B.; Rudin, O.; Gehrig, C.; Borer, U.; Thali, M.; Dirnhofer, R. Evaluation of prostate-specific antigen (PSA) membrane test assays for the forensic identification of seminal fluid. J. Forensic Sci. 1999, 44, 1057-1060. [CrossRef] [PubMed]
3. Pollen, J.F.; Dreillinger, A. Immunohistochemical identification of prostatic acid phosphatase and prostate-specific antigen in female periurethral glands. Urology 1984, 5, 303-304.
4. Wernet, N.; Albrech, M.; Sesterhenn, I.; Goebbels, R.; Bonkhoff, H.; Seitz, G.; Inniger, R.; Remberger, K. The female prostate: Localization, morphology, immunohistochemical characteristics and significance. Eur. Urol. 1992, 22, 64-69. [CrossRef]
5. Breul, J.; Pickl, U.; Hartung, R. Prostate-specific antigen in urine. Eur. Urol. 1994, 26, 18-21. [CrossRef]
6. Mannello, F.; Condemi, L.; Cardinali, A.; Bianchi, G.; Gazzanelli, G. High concentration of prostate-specific antigen in urine of women receiving oral contraceptive. Clin. Chem. 1998, 44, 181-183. [CrossRef]
7. Lilja, H.; Abrahamsson, P.A.; Lundwall, A. Semenogelin, the predominant protein in human semen. Primary structure and identification of closely related proteins in the male accessory sex glands and on the spermatozoa. J. Biol. Chem. 1989, 264, 1894-1900.
8. Old, J.; Schweers, B.A.; Boonlayangoor, P.W.; Fischer, B.; Miller, K.W.P.; Reich, K. Developmental Validation of RSIDTM-Semen: A Lateral Flow Immunochromatographic Strip Test for the Forensic Detection of Human Semen. J. Forensic Sci. 2012, 57, 489-499. [CrossRef] [PubMed]
9. Juusola, J.; Ballantyne, J. Messenger ENA profiling: A prototype method to supplant conventional methods for body fluid identification. Forensic Sci. Int. 2003, 135, 85-96. [CrossRef]
10. Juusola, J.; Ballantyne, J. Multiplex mRNA profiling for the identification of body fluids. Forensic Sci. Int. 2005, 152, 1-12. [CrossRef] [PubMed]
11. Nussbaumer, C.; Gharehbaghi-Schnell, E.; Korschineck, I. Messenger RNA profiling: A novel method for body fluid identification by Real-Time PCR. Forensic Sci. Int. 2006, 157, 181-186. [CrossRef]
12. Sakurada, K.; Ikegaya, H.; Fukushima, H.; Akutsu, T.; Watanabe, K.; Yoshino, M. Evaluation of mRNA-based approach for identification of saliva and semen. Leg. Med. 2009, 11, 125-128. [CrossRef]
13. G. Zhumagulova, T. Zhakupova, V.Ossipov, G. Zhakenova (2018) Comparative analysis of immunochromatografhic membrane test's efficiency for the forensic detection of semen in cases of sexual assaults: Journal of Clinical Medicine of Kazakhstan,4(50), 6-14 https://doi.org/10.23950/1812-2892-JCMK-00603. [Electronic resource]: URL: https://www.clinmedkaz.org/article/comparative-analysis-of-immunochromatographic-membrane-tests-efficiency-for-the-forensic-detection-9031/2018/4pdf (Accessed: 11.10.2023)
14. Итбаева Ж.Ж., Зайнуллина Р.В.(2016) Методика установления наличия спермы с помощью тест-пластинки «Seratec PSA Semiquant» МЮ РК от 07.11.2016г. SERATEC PSA SEMIQUANT Инструкция по применению [Electronic resource]: https:// studylib. ru/doc/2306808/seratec-psa-semiquant-instrukciya-po-primeneniyu
15. Laux et al.(2011) Forensic detection of semen III. Detection of PSA using membrane based tests: sensitivity issues with regards to the presence of PSA in other body fluids. [Electronic resource]: http://mafs.net/pdf/forensicdetectionsemen3.pdf
16. Aine Laffan, MSc, Ian Sawyer and Barbara Daniel, all authors and affiliations (2010) Evaluation 16. of semen presumptive tests for use at crime scenes. Medicine, Science and the Law. Sage Journals,51(1). https://doi.org/10.1258/msl.2010.010040. [Electronic resource] :https://journals.sagepub.com/doi/10.1258/msl.2010.010040
17. J. Conte, A. Ruddy, Lindsey Domonoski, A. Shanahan, N. Daley. C. McDevitt, G. Roca (2022) Recovery of DNA from SERATEC® immunochromatographic PSA and saliva test strips. Journal
Impact Factor: SJIF 2021 - 5.81 МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
2022 - 5.94 MEDICAL SCIENCES
of forensic sciences,1(6) Affiliations expand. PMID: 35182073. DOI: 10.1111/1556-4029.14999 [Electronic resource]: Online Library Wiley.com (Accessed: 17.10.2023)
