CC BY
115
/TrFb
iУ-, :•. •..
r j
■ .. .
Рис. 1. Собственная люминесценция гепатоцита. Об. 40х, гомал 5х.
- * -.' 1 г -f ; « Jkt
- * * rfrr fe.ï"1^ : ' ' ■
Рис. 2. Отрицательный результат РИФ
гепатоцита с антикроличьей ЛС. Прямое окрашивание. Об 40х, гомал 5х.
Рис. 3. Гомогенно-диффузный тип свечения гепатоцита при положительном результате РИФ. Прямое окрашивание. Об 40х, гомал 5х.
Рис. 4. Контурный тип свечения клеток буккального эпителия при положительной РИФ. Прямое окрашивание. Об. 40х, гомал 5х
Рис. 5. Гомогенно-диффузный тип свечения клетки буккального эпителия. Положительный результат РИФ. Прямое окрашивание. Об. 40х, гомал 5х.
Рис. 6. Гранулярный тип свечения клетки буккального эпителия. Положительный результат РИФ. Прямое окрашивание. Об. 40х, гомал 5х.
отдельные элементы разрушенных клеток и др.), которые наслаивались на клетки и могли имитировать специфическое свечение.
Исследования показали, что при положительном результате РИФ клеткам печени свойственна лишь диффузная ярко зеленая люминесценция всей поверхности, на фоне которой ядро не различается (рис.3). У большинства клеток буккального эпителия наблюдалась ярко-зеленая люминесценция по контуру мембран в виде сверкающего непрерывного или прерывистого ободка и свечение цитоплазмы серовато-зеленого цвета, незначительно превосходящее по интенсивности уровень аутолюминес-ценции (рис.4). Однако, даже в одном и том же препарате или в поле зрения, отмечались клетки с более или менее выраженной гомогенной люминесценцией всей поверхности (рис.5) и свечением в виде множественных гранул на фоне тусклой цитоплазмы (рис.6).
Учитывая особенности люминесценции клеток, мы сочли возможным выделить 3 типа их специфического свечения: контурный, гранулярный и гомогенно-диффузный. Различия в свечении клеток зависят, по-видимому, от неравномерного распределения в них видоспецифи-ческих антигенов, которые собраны в глыбки различных размеров и формы.
Таким образом, наибольшая яркость свечения клеток, обработанных гомологичными люминесцирующими сыворотками, наблюдалась при микроскопии препаратов в фосфатном буфере с рН 8,0. При положительных результатах РИФ клетки буккального эпителия обладали тремя типами свечения: контурным, гранулярным и гомогенно-диффузным, а гепатоциты - лишь гомогенно-диффузным.
© Н.Н. Михайлова, 2013 УДК 340.6
Н.Н. Михайлова
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРИБОРА «SERA QUANT» ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА И СПЕРМЫ В СЛЕДАХ НА ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВАХ
ГБУЗ ТО «Областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (начальник - В.В. Мазуркевич)
Практически все доказательные методы, с помощью которых решается вопрос о присутствии крови в пятнах на предметах-носителях, основаны на выявлении гемоглобина и его производных [3]. Наиболее распространенным методом определения крови является метод тонкослойной хроматографии, который требует проведения второго этапа - установления вида найденной крови, что требует дополнительных затрат и времени.
К тому же, при исследовании микроследов этим методом не всегда достаточно количества материала для проведения дальнейших этапов исследования [1], а при необходимости и проведения повторной экспертизы.
Методы, позволяющие устанавливать наличие спермы в объектах, основаны на обнаружении сперматозоидов. Однако в ряде случаев резко снижается возможность обнаружения сперматозоидов на предметах-носителях,
например, пятна подвергшиеся уничтожению, воздействию химических и физических факторов, отсутствие сперматозоидов, связанное с заболеванием лица, совершившего преступление [2]. Поэтому также актуальным остается поиск доказательных диагностических методов, основанных не на морфологическом обнаружении сперматозоидов, а на компонентах спермальной жидкости.
Впервые в России в Бюро судебно-медицинской экспертизы г. Тюмени апробирован прибор « SeraQuant». За 5 лет было проведено 2140 исследований по установлению крови человека и 1600 случаев по установлению проста-тоспецифического антигена.
Иммунохроматографический метод по установлению наличия гемоглобина человека и простатоспецифического антигена человека с помощью прибора SeraQuant и тест кассет, позволяет устанавливать наличие крови и спермы в следах на вещественных доказательствах подвергшихся воздействию физических и химических факторов, а также в ничтожно малых следах, а в случае обнаружения спермы и при различных заболеваниях (олиго-, азооспермии). При проведении такого исследования одномоментно определяется искомый компонент и его принадлежность человеку.
Исследование является объективным, наглядным с количественным определением искомых факторов, результаты сохраняются в базе данных.
Иммунохроматография с использованием тест-кассет Seratec и прибора « SeraQuant» позволяет определять наличие крови и ее вид одновременно, тем самым сокращая сроки проведения экспертиз, а также экономить материал для дальнейших исследований, в том числе и генетических. SERATEC HemDirect иммунохроматографический экспресс-тест. Принцип действия основан на двух высокоспецифичных антителах против гемоглобина человека [4] (Рис. 1).
Тест SERATEC PSA Semiquant был первоначально разработан как полуколичественный экспресс-тест для обнаружения ПСА в крови при проведении ранней диагностики рака простаты. Для обнаружения семенной жидкости он используется как качественный тест. Действующими составляющими теста являются два монокло-нальных мышиных антитела против ПСА (Рис. 1).
Прибор SeraQuant является инструментом для количественной оценки ПСА, гемоглобина, а теперь еще и амилазы слюны человека в судебной биологии. SeraQuant улучшает качественные аналитические результаты этих испытаний, обеспечивая объективный количественный и автоматически документальный результат.
Показания к использованию иммунохроматогра-фического метода с использованием тест-кассет Seratec и прибора « SeraQuant»:
1. Отрицательный результат исследования на наличие крови с использованием метода тонкослойной хроматографии, когда такой результат может быть обусловлен влиянием на пятна различных физических и химических факторов.
2. Необходимость исследовать небольшое количество материала, так как метод позволяет одномоментно устанавливать как наличие крови, так и ее вид.
3. Отрицательный результат при цитологическом исследовании на наличие спермы.
4. Оформление необходимых иллюстраций, прилагаемых к заключению эксперта и создания архива (Рис. 2).
5. Необходимость ускорить проведение экспертизы.
Seratec HemDirect Seratec PSA Semiquant
Рис. 1. Положительные результаты тестов
Рис. 2. Архивирование данных
Противопоказания:
Не применим для обнаружения ПСА в прямой кишке трупов мужского пола. Метод был протестирован на 20 трупах, в большинстве случаев, в прямой кишке которых находили PSA, но повторное исследование цитологическим методом не подтверждало наличие сперматозоидов в объектах. Это связано с тем, что прямая кишка и простата находятся в непосредственной близости друг от друга, и их стенки плотно соприкасаются между собой, у трупа происходит пропотевание сока семенной жидкости в прямую кишку. А сперматозоиды из-за своих значительных размеров не могут проникнуть через стенку кишечника. Поэтому для обнаружения спермы в мазках, приготовленных из тампонов с содержимым прямой кишки трупов мужского пола, необходимо именно цитологическое исследование.
Материально-техническое обеспечение метода:
1. Прибор SeraQuant фирмы SERATEC. Принцип работы прибора - вычисление концентрации исследуемого вещества на основе анализа интенсивности образующихся полос.
2. Программное обеспечение: SeraQuant Software — многофункциональная программа для работы с прибором.
3. Для установления наличия гемоглобина человека: тест-кассеты «SERATEC HemDirect», стандартный буфер из комплекта поставки.
4. Для установления наличия PSA: тест-кассеты SERATEC® PSA Semiquant, стандартный буфер из комплекта поставки.
Тесты Seratec HemDirect и Seratec PSA Semiquant имеют высокую специфичность, вероятность ложноположи-тельного ответа практически нулевая. Чувствительность, т.е. минимальная определяемая концентрация антигена, соответствуют международным значениям, характеризующим искомый показатель.
Оценка результатов:
Программное обеспечение поставляется совместно с прибором. Перед использованием новых серий тестов необходимо провести калибровку прибора, калибровки также поставляются с новыми сериями кассет.
Распознавание:
• автоматическое распознавание участков поверхности, необходимых для вычисления (проявленных полос).
Рис. 4. Результаты иммунохроматографического исследования на ПСА
тографического исследования по обнаружению ПСА с регистрацией его количества можно дать обоснование такой ситуации. В Европе доказано, что при величине ПСА 4,0 нг/мл есть смысл назначать генетическое исследование. При проведении более 50 совместных с генетиками экспертиз нами установлено, что при имеющемся на данный момент в нашем распоряжении генетическом оборудовании эта величина равна 15,0 и более. Эффективность использования метода:
1. Возможность практического применения иммунохроматографического метода с объективной его оценкой, с использованием прибора « SeraQuant», позволяющего одномоментно устанавливать наличие и вид крови, значительно сокращая технологический процесс исследования и сохраняя большую часть объекта для дальнейшего исследования.
2. Полученные данные позволяют рекомендовать применение в экспертной практике иммунохроматогра-фического метода с использованием прибора « SeraQuant» для обнаружения спермы, даже при отсутствии в ней сперматозоидов. Ввиду простоты его использования, экономичности во времени и высокой доказательности этот метод может рассматриваться, как метод экспресс-диагностики и может быть применен в учреждениях судебно-медицинской экспертизы.
Литература:
1. БарсегянцЛ.О. Судебно-медицинскоеисследованиевещественныхдоказателъств./ М.:Медицина, 2005. -447 с.
2. Гладких A.C. Перспективные направления судебно-медицинских исследований волос и следов спермы. // Судебно-медицинская экспертиза, 1983. —N4.— 27-29 с.
3. Гуртовая C.B. // Сборник работ врачей судебно-медицинских экспертов биологов / подготовлен С. В. Гуртовой; РЦСМЭ МЗ РФ - М„ 2005. - 38 с.
4. http://www.seratec.com/
Рис. 3. Результаты иммунохроматографического исследования на гемоглобин человека
• предварительная интерполяция базисной кривой, полученной при съёмке пустой (белой) тест-кассеты.
• автоматический контроль помех (т.н. Dust-Factor): при превышении уровня загрязнения тест будет «забракован».
Результаты:
• Результат отображается в количестве параметра в ng/ml, если результат отрицательный, то величина будет указана как знак < 0,4 для ПСА и <4,0 для Hb (Рис. 3).
• дополнительно указывается интервал погрешности, величина которого зависит от самого результата.
Исследовать вытяжки можно непосредственно внося их в углубление кассеты и через 10 минут будет готов результат при исследовании на гемоглобин, а через 15 минут при исследовании на ПСА (Рис. 4). Также можно исследовать тест-кассеты, в лунки которых была внесена вытяжка более чем 10 минут назад, и тогда количественный результат будет зарегистрирован через 10 секунд. Для этого при проведении исследования в приборе выбирается соответствующая калибровка для так называемого «свежего» исследования или отсроченного.
Важно отметить, что выполняя генетические экспертизы, эксперты сталкиваются с ситуацией, когда биологи обнаружили единичные сперматозоиды, а ДНК не выделяется и не типируется. При проведении иммунохрома-
© С.С. Катаев, Н.Б. Зеленина, О.Н. Дворская, 2013 УДК 340.67:54.061:615.074
С.С. Катаев, Н.Б. Зеленина, О.Н. Дворская ОПРЕДЕЛЕНИЕ В МОЧЕ ОСНОВНЫХ МЕТАБОЛИТОВ КАННАБИМИМЕТИКОВ PB-22 и PB-22F МЕТОДОМ ГХ-МС
ГКУЗОТ «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» (начальник - к.м.н. В.Н. Коротун); ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия»
определенные трудности выявления злоупотребления данной группой веществ. При этом основной проблемой
В практике российских и зарубежных аналитических служб в последние годы все чаще встречаются новые синтетические каннабимиметики, что вызывает серьезные трудности их идентификации в связи с постоянным изменением и расширением их ассортимента на рынке потребителей психоактивных средств [6, 7, 9, 10].
Большое разнообразие синтетических каннабимиме-тиков и специфичность их поведения в организме создает
является вопрос идентификации метаболитов, которые в дальнейшем могут использоваться для целей химико-токсикологического и судебно-химического анализа [3, 4, 5, 8].
В данной работе нами приведены методы выявления основных метаболитов РВ-22 и PB-22F в моче с применением рутинных методов, включающих жидкость-жид-
