CC BY
74
© А.Л. Гукасян, А.В. Удалов, 2004 УДК 340.6..614.61-091.6
А.Л. Гукасян, А.В. Удалов УСТАНОВЛЕНИЕ ДАВНОСТИ ЗАХОРОНЕНИЙ В НЕКОТОРЫХ ВИДАХ ПОЧВ
Бюро судебно-медицинской экспертизы (начальник - к.м.н. Н.П. Варшавец) Департамента здравоохранения Краснодарского края.
Разработан новый метод оценки давности захоронения по результатам анализа кислоторастворимой фракции мышечной ткани методом градиентной микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Экспериментально изучена зависимость площадей пиков компонентов кислоторастворимой фракции от сроков захоронения в двух типах почв при различной влажности.
Ключевые слова: давность захоронения трупа, кислоторастворимая фракция, ВЭЖХ.
A.L. Gukasjan, A.V. Udalov THE DETERMINATION OF DATES OF BURIAL IN SOME TYPES OF SOILS
Krasnodar
A new method of estimation of dates of burial by the results of the analysis of acid-soluble fraction of a muscular tissue by a gradient micro-column high-performance liquid chromatography (HPLC) was developed. The dependence of areas of peaks of components of acid-soluble fraction upon dates of burial in two types of soils for various moistures was experimentally investigated. Key words: dates of burial, acid-soluble fraction, HPLC.
Проблема диагностики давности захоронения трупов в криминальных случаях продолжает оставаться одной из сложных проблем в судебно-медицинской практике.
Имеется значительное количество наблюдений, посвященных определению давности захоронения трупа по виду и состоянию костных останков. Однако описанные в литературе методы применимы в первую очередь для оценки длительных (свыше года) сроков [3, 4, 7, 8]. Имеются ссылки на возможность использования морфологических методов для определения давности наступления смерти, которые косвенным образом могут быть использованы и в случаях оценки давности захоронения [5, 6].
Анализ литературы показывает, что для объективной оценки давности захоронения, особенно в криминальных случаях, имеются немногочисленные сведения, а конкретные методики и методологические подходы к решению данной задачи остаются в стадии их разрешения [1,2].
Целью нашего исследования является установление закономерностей изменения кислотнорастворимых фракций (КРФ) белка мягких тканей трупов в условиях гниения при захоронениях в выщелоченном малогумусном мощном черноземе и дерново-карбонатных почвах. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Изучить динамику изменения концентраций компонентов кислоторастворимой фракции (ККРФ) в сроки от начала захоронения образцов мышечной ткани до их полного гниения (11 месяцев), с интервалом исследования каждые 2 недели;
2. Установить отличия в хроматографических характеристиках компонентов кислоторастворимых фракций в образцах, захороненных в различных типах почв (выщелоченный малогумусный мощный чернозем и дерновокарбонатная) при различной влажности;
3. Выявить на основе полученных данных закономерности посмертного изменения концентраций КРФ мышцы, решая при этом вопрос о возможности и целесообразности применения метода для установления давности захоронения.
Для эксперимента были изъяты не травмированные мышцы из области таза 20 трупов. Смерть на дому во всех случаях наступала либо скоропостижно, либо внезапно, при условии отсутствие этилового алкоголя. Время от наступления смерти до захоронения мышцы - в пределах 13-15 часов. Эксперименты производили при хранении мышеч-
ной ткани в деревянных ящиках размерами 80x50x50 см, заполненных почвой. Для захоронения использовался выщелоченный малогумусный мощный чернозем из окрестностей г. Краснодара и дерново-карбонатная почва из района г. Новороссийска.
Из десяти ящиков с каждым типом почвы в пяти поддерживали влажность из расчета 1 литр воды на 40 кг грунта. Таким образом, были получены 4 вида условий захоронения. С интервалами в 14 дней изымали пробы мышечной ткани для анализа кислотнорастворимой фракции. Эксперимент проводили в течение 46 недель до практически полного разложения образцов мышечной ткани. Всего было проведено 460 хроматографических анализов.
Подготовка образцов выполнялась по методике Тумановой НА. и заключалась в замораживании 2 г ткани в жидком азоте, растирании ее в ступке и последовательном настаивании с 0,6 н и 0,3 н растворами хлорной кислоты [9].
Для оценки процессов биохимических изменений была использована разработанная нами методика хроматографического исследования. Полученные растворы КРФ анализировали методом ВЭЖХ на микроколоночном жидкостном хроматографе "Милихром А02".
Спектрофотометрический детектор данного прибора дает возможность проводить анализ при длинах волн от 190 до 360 нм. Экспериментальным путем по результатам хроматографирования КРФ образцов с разной степенью аутолиза были подобраны оптимальные условия анализа. Колонка диаметром 2 мм и длиной 75 мм с сорбентом Silasorb SPH C18 (размер частиц 5 мкм), элюент - смесь 0,02 М раствора фосфата аммония и метанола. Состав элюента программировался от 10 до 80% метанола за 9 мин, расход элюента - 200 мкл/мин. Детектирование при 220 нм.
Из многочисленных пиков компонентов кислотнорастворимой фракции (ККРФ) нами были выбраны наиболее устойчивые, характерные, присутствующие на всех хроматограммах. Выбранные пики имели время удерживания 3,7±0,1; 4,1±0,1; 4,6±0,2; 5,0±0,1; 6,0±0,1 мин. Величины времен удерживания колебались в пределах 2 - 5%, что является достаточной воспроизводимостью для сравнительного анализа хроматограмм. Соответствующие компоненты были условно названы нами ККРФ-1, ККРФ-2, ККРФ-3, ККРФ-4, ККРФ-5 (рис.1). Из хроматограммы видно, что рабочая длина волны детектора 220 нм обеспечивает значительно большую чувствительность, чем использо-
Рис. 1. Хроматограмма кислоторастворимой фракции мышечной ткани в градиентном режиме.
ванная в работе [9] длина волны 254 нм. Пики с временем удерживания до 3 минут не принимались во внимания, так как они накладывались на артефактные пики хроматографической системы. На хроматограммах регистрирова-
лись также пики с другими временами удерживания, но каких-либо закономерностей в их появлении установлено не было. Точная идентификация обнаруживаемых ККРФ является весьма сложной задачей, требующей длительных исследований с применением препаративной жидкостной хроматографии, ИК-спектроскопии, масс-спектрометрии. Решение этой проблемы будет предметом дальнейших исследований.
Площади пиков, измеренные программой обработки хроматограмм "Мультихром" в условных единицах, сводили в таблицы программы Excel. Рассчитывали средние значений площадей пиков каждого КРФ, выделенного из пяти проб, находящихся в одинаковых условиях захоронения и анализировали зависимость полученных результатов от сроков захоронения, типа почвы и влажности.
Обработка результатов показала, что пики ККРФ-3 (время удерживания - 4,6 мин) отличаются наименьшей площадью, и неудовлетворительной воспроизводимостью для параллельных проб, поэтому они непригодны для поиска каких либо закономерностей и в дальнейшем не рассматриваются. Динамика изменения площадей пиков остальных компонентов в зависимости от типа и влажности почвы в графическом виде представлена на рис.2.
Сроки захоронения, недели
Сроки захоронения, недели
Сроки захоронения, недели ' 'Сухой чернозем; Влажный чернозем; -
Сроки захоронения, недели Сухая карбонатная почва; — — Влажная карбонатная почва
Рис. 2. Зависимость площадей пиков компонентов кислоторастворимой фракции мышечной ткани
от сроков для различных условий захоронения.
Во всех случаях наблюдается общая закономерность: площадь пика ККРФ в течение некоторого времени возрастает до максимума, а затем снижается до нуля. Вероятно, при гниении происходят два процесса - образование ККРФ из нерастворимых в разбавленной кислоте веществ и их распад на более простые молекулы, которые не удерживаются на хроматографической колонке, либо не обнаруживаются спектрофотометрическим детектором из-за потери хромофорных функциональных групп. Этот факт затрудняет возможность определения давности захоронения только по площади одного пика без привлечения дополнительной информации, т.к. одному значению площади соответствуют два значения срока захоронения. Поэтому для достоверной оценки срока необходимо учитывать площади всех пиков. Например, при анализе мышцы из трупа, эксгумированного из дерново-карбонатной почвы в районе Новороссийска, находившегося во влажной почве, зарегистрирован пик ККРФ-1 с площадью 8,4 ед. По графику определяем, что этой площади соответствуют сроки захоронения 4 и 10 недель. В таком случае уточняем срок захоронения по остальным графикам, для которых разница площадей пиков для 4-х и 10-тинедель составляет 0,5 - 0,8 ед. Такой подход дает возможность объективной оценки срока захоронения.
Положение максимумов на рассматриваемых кривых колеблется в широких пределах - от 2 недель для ККРФ-2 (влажный выщелоченный малогумусный мощный черноземе) до 18 недель для ККРФ-5 (дерново-карбонатная почва), что говорит о разнообразии факторов, влияющих на
Литература
1. Алыбаева К.Н. Изменения показателей концентрации аминокислот как критерий определения давности наступления смерти при гнилостной трансформации трупа. -Дисс. докт. мед. наук, Бишкек, 1996.
2. Буромский И.В. Динамика распада нуклеиновым, кислот как критерии судебно-медицинского определения срока давности наступления смерти (экспериментальная апробация метода для экспертным целей). - Дисс. канд. мед. наук, М., 1980.
3. Гараж H.H. Определение давности захоронения по устойчивости зубов в альвеолам челюстей. / В кн. Судебно-медицинская экспертиза и криминалистика на службе следствия. Вып. 5. Ставрополь. 1967. С. 420 - 422.
4. Конев А.В. Экспертное значение динамики распада смешанных и губчатых костей для судебно-медицинского установления давности захоронения. -Дисс. канд. мед. наук, Киев, 1984.
5. Коровин АА.,ПиголкинЮ.И, Богомолов Д.В. и др. // Суд,- мед. эксперт.-2001.-№ 1. - С. 3-6.
6. Мазикова О.Б., Москаленко Л.М. Гистохимические изменения гортани в зависимости от давности наступления смерти. /Современные лабораторные методы судебно-медицинской экспертизы. М.1975г. С. 97.
7. Рубежанский А.Ф. и Очаковский В.С. Экспертное значение пупарий мух при исследовании эксгумированных костных останков. / Суд.-мед. эксперт. -1965, № 4. С. 37.
8. Рубежанский А.Ф. Комплексное судебно-медицинское определение давности захоронения трупа по костным останкам. /В кн. Судебно-медицинская экспертиза и криминалистика на службе следствия. Вып. 5. Ставрополь. 1967. С. 310 - 419.
9. Туманова НА Диагностика прижизненности травматизации мышечной ткани при экспертизе гнилостно измененного трупа. - Дисс. канд. мед. наук, М., 1983.
© Г.И. Авходиев, В.В. Берегов, 2004 УДК 547.262:611-018.6:616-001.17
Г.И. Авходиев, В.В. Берегов О ВОЗМОЖНОСТИ УСТАНОВЛЕНИЯ ПРИЖИЗНЕННОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ЭТАНОЛА В МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ ТРУПА, ПОДВЕРГШЕГОСЯ ВОЗДЕЙСТВИЮ ОТКРЫТОГО ПЛАМЕНИ
Кафедра судебной медицины (зав. кафедрой - профессор Г.И. Авходиев)
Читинской государственной медицинской академии
Изучено изменение содержания этанола и воды в мышечной ткани под действием открытого пламени в пост-морталыном периоде. Установлено, что при действии открытого пламени на ткани происходит падение концентрации этанола на 30,23%, а воды на 67,55%. Предлагается способ установления прижизненной концентрации этанола в мышечной ткани трупа, подвергшегося воздействию открытого пламени.
Ключевые слова: этанол, вода, действие открытого пламени.
концентрацию ККРФ. Из графиков видно, что влажность почвы значительно влияет на скорость аутолиза, и соответственно рост концентрации ККРФ. В большинстве случаев во влажной почве скорость образования ККРФ в мышце выше, чем в сухой, причем во влажной почве стадия образования значительно короче стадии распада, а в сухой их продолжительность близка, за исключением составляет ККРФ-5.
Зависимость динамики содержания ККРФ в мышечной ткани от типа почвы выражена в меньшей степени. В сухом выщелоченном малогумусном мощном черноземе наблюдаются боле высокие значения площадей пиков, что может быть вызвано большим количеством микроорганизмов по сравнению с дерново-карбонатной почвой.
Наши исследования показали, что посмертный распад мышечной ткани приводит к изменению состава кислоторастворимой фракции, причем концентрация наиболее характерных компонентов КРФ при гниении возрастает, проходит через максимум и убывает до нуля.
На параметры зависимости концентраций компонентов КРФ от сроков захоронения влияют влажность и тип почвы. Скорость образования и последующего распада ККРФ во влажной почве выше, чем в сухой, а в черноземе выше, чем в дерново-карбонатной почве.
Хроматографическое исследование компонентов кислоторастворимой фракции мышечной ткани является перспективным методом оценки степени аутолиза ткани, а, следовательно, и сроков давности криминального захоронения.
