CC BY
23«Эколого-генетические основы современных агротехнологий». СПб, 27-29 апреля 2016 г.
173
phosphate, different pH values and temperatures. These changes are caused by modification variability in the form of phenocopies. According to the data gene-for-gene relationship is only a partial case of cereals and their phytopathogens interactions. Possible practical consequences of the obtained data and conclusions are under discussion.
УДК 574.472
УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ПРИМАНОК ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ АСКОМИЦЕТОВ (ASCOMYCOTA, HYPOCREALES) ИЗ ПОЧВ
М.В. Тюрин, В.Ю. Крюков, О.Г. Томилова, О.Н. Ярославцева, Н.А. Крюкова, В.В. Глупов
Институт систематики и экологии животных СО РАН, Новосибирск, Россия, maktolt@mal.ru
Использование личинок Galleria mellonella, парализованных ядом Habrobracon hebetor, повышает чувствительность метода ловушек для выделения энтомопатогенных грибов из почв более чем в 190 раз. Модифицированный метод позволяет изолировать грибы из почвы с очень низкими концентрациями конидий (20-30 конидий / r. почвы). Метод успешно опробован для микологического анализа почв из разных регионов: от лесотундры до степей.
Ключевые слова: аскомицеты, патогены, метод приманок, почва, яды животных, Habrobracon hebetor, Galleria mellonella.
Энтомопатогенные аскомицеты - важнейшие компоненты наземных биоценозов, образующие симбиоти-ческие связи с растениями, регулирующие численность членистоногих, а также активно применяемые в технологиях производства органической сельскохозяйственной продукции [Lacey et al., 2015]. В настоящие время используются различные методы выделения энтомопатогенных аскомицетов из почв. Один из самых распространенных и наименее трудоемких является метод приманок или байт-метод [Zimmermann, 1986]. Однако, одно из ограничений данного метода связано с разным уровнем восприимчивости насекомых-приманок к определенным видам грибов [Sheepmaker, Butt, 2010]. Ранее нами было установлено, что поражение личинок G. mellonella ядом эктопа-разитоида Habrobracon hebetor (лабораторная популяция) приводит к резкому (5000-кратному) повышению восприимчивости огневки к энтомопатогенным грибам [Kryukov et al., 2013], что связано с сильным ингибированием иммунитета насекомых под действием яда [Kryukova et al., 2011, 2015]. На основании этого был модифицирован метод приманок для выделения из почвы энтомопатогенных аскомицетов.
При использовании в качестве приманок личинок огневки G. mellonella, парализованных ядом паразитоида H. hebetor, удалось повысить чувствительность данного метода в 193 раза. Так, при использовании парализованных личинок полулетальная доза (LC50) для развития микоза B. bassiana составила всего 28 конидий/грамм почвы, тогда как при использовании интактных личинок полулетальная доза составила 5434 конидий/грамм почвы. Метод
успешно применен при микологическом анализе почв из различных природных зон - от лесотундр до степей. Для подавляющего большинства исследуемых образцов (n=17) отмечено статистически достоверное увеличение доли личинок с развившимся микозом после парализации ядом (F = 65.6, p = 0.000001) при этом грибы р. Metarhizium и Cordyceps были изолированы только из парализованных гусениц.
Следует отметить, что из трупов, парализованных ядом, выделялись преимущественно энтомопатогенные грибы (Beauveria и Metarhizium), хотя в ряде случаев отмечался поверхностный рост сапротрофных грибов (Fusarium, Penicillium, Aspergillus, Trichoderma, Mucor). В лабораторных опытах с использованием энтомопато-генных грибов с различной специализацией (Beauveria bassiana, Lecanicillium muscarium, Metarhizium pemphigi, Cordyceps militaris), а также сапротрофов (Fusarium, Penicillium, Aspergillus, Scopulariopsis) было показано, что мумификация парализованных ядом личинок происходит только при инфицировании энтомопатогенными грибами, но не сапротрофами. После инокуляции сапротрофами наблюдается лишь поверхностный рост грибов.
Таким образом, усовершенствованный метод позволяет изолировать грибы при их низкой численности (20-30 конидий/грамм почвы) в том числе в сухих стациях (степи), где выделение грибов общепринятыми методами является довольно трудоёмким процессом. Кроме того, полученные данные подтверждают гипотезу о необходимости стресса у насекомых для успешного развития энтомопатогенных аскомицетов.
Библиографический список (References)
Lacey L.A., Grzywacz D., Shapiro-Ilan D.I., Frutos R., Brownbridge M., oxygen species and encapsulation in the haemolymph ofGalleria mellonella
Goettel M.S. Insect pathogens as biological control agents: Back to the larvae // J. Insect Physiol. 2011. V. 57. N 6. P. 796-800.
future // J. Invertebr. Pathol. 2015. V. 132. P. 1-41. Scheepmaker J.W.A., Butt T.M. Natural and released inoculum levels of
Kryukov V.Yu., Kryukova N.A., Glupov V.V. Susceptibility of Galleria entomopathogenic fungal biocontrol agents in soil in relation to risk
mellonella larvae to anamorphic entomopathogenic ascomycetes under assessment and in accordance with EU regulations // Biocontr. Sci. Tech.
envenomation and parasitization by Habrobracon hebetor // Russ. J. Ecol., 2010. V. 20. N 5. P. 503-552.
2013, V. 44, N . 1, P. 89-92. Zimmermann G. The Galleria bait method for detection of entomopathogenic
Kryukova N.A., Dubovskiy I.M., Chertkova E.A., Vorontsova Ya.L., fungi in soil // J. Appl. Entomol. 1986. V. 102. P. 213-215. Slepneva I.A., Glupov V.V. The effect of Habrobracon hebetor venom on the activity of the prophenoloxidase system, the generation of reactive
174
Вестник защиты растений 3(89) - 2016. Материалы международной конференции
Plant Protection News, 2016, 3(89), p. 173-174
IMPROVEMENT OF BAIT METHOD FOR ISOLATION OF ENTOMOPATHOGENIC
A SCOMYCETES (ASCOMYCOTA, HYPOCREALES) FROM SOIL M.V. Tyurin, V.Yu. Kryukov, O.G. Tomilova, O.N. Yaroslavtseva, N.A. Kryukova, V.V. Glupov
Institute of Systematics and Ecology of Animals SB RAS, maktolt@mail.ru
Using of Galleria mellonella larvae envenomated with ectoparasitoid Habrobracon hebetor strong increases the test-sensitivity of bait method to isolation of entomopathogenic fungi from soil. The modified method allows to isolate fungi from soil with very low concentrations (20-30 conidia/g. of soil). The method successfully tested for mycological analysis of soils from different regions: from forest-tundra to the steppes.
УДК. 632.937
ФАУНА, ТРОФИЧЕСКИЕ СВЯЗИ И РАСПРОСТРАНЕНИЕ ГАЛЛИЦ (DIPTERA, CECIDOMYIIDAE), РАЗВИВАЮЩИХСЯ В КОЛОНИЯХ КЛЕЩЕЙ (ACARIÑA)
З.А. Федотова
Всероссийский НИИ защиты растений, Санкт-Петербург, Пушкин, Россия, zoya-fedotova@mail.ru
В мире известно 70 видов хищных галлиц 7 родов из 3 надтриб, развивающихся в колониях клещей: Arthrocnodax Rubsaamen (47 видов), Lestodiplosis Kieffer (6), Feltiella Rübsaamen (10), Silvestriola Kieffer, 1912 (3), Trisopsis Kieffer, 1912 (2). Добычей галлиц являются клещи из семейств Acaridae (4 вида), Eryophyidae (48), Pyroglyphidae (1), Tarsonemidae (1), Tenuipalpidae (1), Tetranychidae (10).
Ключевые слова: галлицы-хищники, пищевая специализация, клещи, gallmidges, mitepredators, Acaridae, Eryophyidae, Pyroglyphidae, Tenuipalpidae, Tarsonemidae.
Галлицы-хищники распространены на всех континентах, но только немногие из них применяются в биологической борьбе. Большинствовидов известны только по типовым местообитаниям, а виды клещей, которыми они питаются, не определены и часто приводятся только до семейства. Очень много видов галлиц, развивающихся в галлах растительных клещей, не описаны и указываются по кормовому растению и форме галла. Большинство видов хищных галлиц являются монофагами, в галлах растительных клещей Eriophyidae встречаются от пустынь до верхней границы пояса хвойного леса. Роды Feltiella и Tessarodiplosis- специфические по отношению к клещам.
Роды надтрибы Lestodiplosidi доминируют среди галлиц-хищников клещей: Arthrocnodax Rubsaamen (47 видов), 1895, Lestodiplosis Юейег, 1894 (6), Feltiella Rubsaamen, 1910 (1о), Silvestriola Skuhrava, 1997 (3), Trisopsis Кейег, 1988 (2).
Все представители космополитного рода Arthrocnodax развиваются в галлах растительных клещей Eriophyidae. Галлы войлочные, покрыты мелкими крепкими волосками, вызывают деформацию почки, верхушки побега или соцветия. Такие галлы в месте обнаружения не являются редкими, в массе поражают почти все растения специфического для клеща вида. Во всех случаях, когда мы находили галлы растительных клещей, в них присутствовали личинки галлиц. Очень редко личинки Arthrocnodax окукливаются в галлах, обычно перед окукливанием уходят в почву. Вероятно, это связано с трудностями продвижения куколки через густое опушение к поверхности галла. Из 49 видов рода Arthrocnodax 28 были описаны из Казахстана, где встречаются на растениях 17 семейств; и имаго 4-х видов, вывести не удалось. На сложноцветных было обнаружено 6 видов, на губоцветных 4, на розоцветных и крестоцветных -
по 3, на маревых и бобовых - по 2 [Федотова, 2000]. Вид растительного клеща-хозяина галлицы и галлицу-хищника можно определить по характерной форме галла. Например, в галлах Eriophyes vitis [Pagenstecher, 1857] на винограде (Vitis sp.) развивается A. vitis Rübsaamen, 1895; в галлах Phyllocoptes schlechtendali [Nalepa, 1891] на яблоне (Malus sp.) - A. mali Kieffer, 1926. Всего в Палеарктической области выявлено 40 видов Arthrocnodax, в Неарктической - 4, в Ориентальной - 2 и в Неотропической - 1, что свидетельствует об очень слабой изученности галлиц в целом. Принадлежность 2 видов к этому роду [Gagné at al., 2014] нуждается в уточнении.
Род Lestodiplosis наиболее массовый, включает 181 вид [Gagné etal., 2014], но только 6 видов галлиц развиваются в колониях клещей, в том числе A. tarsonemi Rübsaamen, 1895 на Tarsonemus sp. (Tarsonemidae) и A. woeldickii Contarini, 1839 на чучелах птиц, где охотится на других Acarina. Вид L. raphani [Barnes, 1929], питающийся на Acarina в запасах зерна, недавно перенесен в род Plutodiplosis Kieffer, 1912, принадлежащий надтрибе Lestodiplosidi, а не Aphidoletidi, как предполагалось ранее [Федотова, 2015]. Все виды палеарктические, кроме ориентального L. oomeni Harris, 1982, развивающегося на Calacarus carinatus (Eriophyidae). Многие виды Lestodiplosis, описанные из недеформированных цветков разных родов и семейств растений, вероятно, питаются клещами и трипсами.
Космополитный род Silvestriola включает 14 видов, среди которых космополитный S. cincta Felt 1907, связан с клещами, поражающими пчёл и карантинный вид -тутовую щитовку Pseudaula caspispentagona (Hemiptera: Diaspididae). Палеарктический S. tyrophagi Dombrovskaja 1940 питается амбарным удлиненным клещом - Tyrophagus noxius (Acaridae), предлагается для использования в
