CC BY
4
Результаты обнаружения шигелл Зонне и их антнгенов в искусственно зараженных пробах воды
Концентрация шигелл в мл воды =
Концент- § 1
рация микробов- Метод об- ¡X О* ц
загрязни- наруже- л s
тел en в ния г о 3 о" 3 о о о о * о. я
2 S о о 2 н H ь- 3 1- H s =: з- о
о со СО - S О) - to ЬгГ 3
300 млн. БМ — + + + _ _ _
РТАЦШ + + + + + + — — -
30 млн. БМ — + + + + — — — — —
РТАЦШ + + + + ■+ + + — —
3 млн. БМ — + + + + — — — — -
РТАЦШ + + + + + -1- + — —
300 тыс. БМ — + + + + — — — — —
РТАЦШ + + + + + + +
Конт- БМ — + + + + _ _ — —
роль РТАЦШ + + + + + + + — —
Примечание- + положительный, — отрицательный результаты, БМ — бактериологический метод.
ных результатов не было получено, что указывает на высокую специфичность реакции.
С помощью РТАЦШ производили также выявление дизентерийного антигена шигелл Зонне в искусственно зараженной воде. Результаты сравнивали с данными бактериологического метода. Исследовали кипяченую водопроводную воду, зараженную одновременно шигеллами Зонне и микробами-загрязнителями (смесь кишечных палочек 0124 и Olli) в различных концентрациях (см. таблицу). Было исследовано по 10 проб каждой концентрации объемом 250 мл. Анализ воды проводили с помощью бактериологического метода и РТАЦШ через сутки после заражения. Воду высевали на среду Плоскирева и Левина с левомицетином, в дальнейшем ее исследовали по общепринятой схеме. После высева пробы воды подвергали кипячению на водяной бане в течение 30 мин, затем исследовали в РТАЦШ, согласно приведенной выше методике.
Как видно из таблицы, при наибольшей концентрации микробов-загрязнителей (300 млн. микробных тел в 1 мл) шигеллы высевались
только из проб воды, содержащих 3-Ю5 и более микробных тел в 1 мл (в 90 % случаев). С уменьшением концентрации микробов-загрязнителей чувствительность бактериологического метода несколько возрастает, однако выделить шигеллы Зонне удается только при их концентрации не менее 100 тыс. микробных тел в 1 мл воды (в 90— 100% проб), что, по-видимому, связано с частичной гибелью шигелл в течение суток. Эффективность же индикации с помощью РТАЦШ была высокой.независимо от концентрации микробов-загрязнителей. Она позволяла выявить антигены шигелл Зонне во всех пробах воды в концентрации 10—25 тыс. микробных клеток в 1 мл в минимально короткие сроки (5—6 ч) без необходимости выделения возбудителя в чистой культуре или его подращивания на элективных питательных средах. Такую разницу между бактериологическим методом и РТАЦШ (Р<0,001) можно объяснить тем, что иммунологическая реакция позволяет выявлять не только живые целостные микробные клетки, но и погибшие и даже их антигенные фрагменты. Последнее обстоятельство имеет важное значение и при ретроспективной оценке эпидемической ситуации, когда выделить возбудителей дизентерии уже практически невозможно.
Полученные результаты по исследованию проб искусственно зараженной воды свидетельствуют о возможности использования разработанной реакции в целях ускоренного обнаружения шигелл и их антигенов в воде.
Литература
1. Влодавец В. В. — В кн.: Проблемы санитарной микробиологии окружающей среды. М., 1977, с. 5—13.
2. Григорьева Л. В. — В кн.: Санитарно-бактериологиче-ское и вирусологическое исследование воды. Киев, 1981, с. 37—57.
3. Ковалев Г. К. — Гиг. и сан., 1982, № 9, с. 67—71.
4. Покровский В. И.. Блюгер А. Ф., Солодовников 10. П., Новицкий И. И. Дизентерия (шигеллезы). Рига, 1979.
5. Сичинский Л. А., Никитин В. М. — Здравоохранение (Кишинев), 1984, № 2, с. 20—22.
6. Kohl И7. — Ost. Ärzteztg., 1972, Bd 27, S. 241—246.
7. Viana F. C., Moreira E. C., Barbosa M. — Arg. Esc. Vet. (Minas Gérais), 1975, vol. 27, p. 119—122.
Поступила 05.06.85
УДК 614.718-07-092.9:612.6
Н. Н. Костродымов
УСКОРЕННЫЙ МЕТОД ИЗУЧЕНИЯ ПОЛОВОГО ПОВЕДЕНИЯ БЕЛЫХ КРЫС-САМЦОВ В ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
ЦОЛИУВ, Москва
Одним из важных вопросов при гигиеническом регламентировании загрязнителей воздушной среды является совершенствование методов, позволяющих выявлять наиболее ранние неблагоприятные изменения в организме экспериментальных животных.
Нами было показано, что цнтронеллол в субтоксических концентрациях вызывает изменение сексуальной активности (СА) и ряда показателей поведенческих реакций белых крыс обоего пола [2]. Указанные изменения мы связывали с воздействием цитронеллола на центральный от-
дел обонятельного анализатора, входящего в состав лнмбической системы мозга, которая является центром эмоций и регулятором СА [5]. При дальнейшем изучении механизма этого воздействия мы убедились, что получивший распространение метод изучения СА животных [3] является весьма трудоемким. Данный метод предусматривает определение следующих показателей: латентного периода интромиссий (время от момента подсадки самки к самцу до первой садки самца на самку, находящуюся в стадии эструса); числа садок до эякуляции (учитывается несколько видов садок); рефрактерного периода (период покоя между эякуляцией и последующей серией садок); числа серий эякуляций до полного полового истощения, под которым понимают такое состояние самца, когда в течение 30 мин он не предпринимает попыток к спариванию. Экспериментальные животные должны находиться под наблюдением в течение 1—2 ч.
Данный метод определения СА крыс-самцов предполагает использование стереотипной сексуально направленной реакции самцов — садки самцов на самку в стадии эструса. Назовем ее СА типа С (садки). Известно, что СА регулируется 2 механизмами: механизмом, повышающим уровень СА, и механизмом, регулирующим осуществление самого спаривания и извержение семени [6—8]. Тогда становится очевидным, что в данном методе для оценки состояния первого механизма используется один показатель (латентный период интромиссий), в то время как для оценки второго — все остальные. Следовательно, в проведенных до настоящего времени исследованиях в основном оценивалась целостность второго механизма, регулирующего СА, а состояние первого механизма, его взаимоотношение со вторым в условиях воздействия вредных факторов и их сравнительная биологическая значимость изучены недостаточно.
С целью повышения информативности, упрощения существующего метода изучения СА крыс-самцов мы предлагаем модификацию метода, которая заключается в дополнительном использовании второй стереотипной сексуально направленной реакции белых крыс-самцов — обнюхивания ими генитальной области самок в стадии эструса, которая до настоящего времени для этих целей не использовалась. Назовем ее СА типа О (обнюхивание). Биологический смысл этой реакции заключается в том, что крысы относятся к макросматикам и орган обоняния у них играет первостепенную роль в сексуальном поведении. Поиск партнера ведется с помощью обоняния. Самка в стадии эструса выделяет специальные вещества — телергоны, которые воспринимаются самцами в качестве сексуального сигнала. Таким образом, СА типа О является первым необходимым звеном полового поведения белых крыс-самцов и позволяет оценить состояние механизма, повышающего уровень СА. Для оценки СА ти-
па О можно использовать следующие показатели: латентный период обнюхивания (ЛПО), количество обнюхиваний (КО), длительность обнюхиваний (ДО). Для оценки СА типа С считаем возможным ограничиться следующими показателями: латентным периодом садки (ЛПС) и количеством садок (КС). Используя одновременно показатели СА, основанные на 2 стереотипных сакуально направленных реакциях, исследователь может изучить состояние двух механизмов, регулирующих СА, их взаимоотношение при воздействии неблагоприятных факторов окружающей среды и биологическую значимость этих изменений. Следовательно, предлагаемая модификация существующего метода позволяет более полно оценить СА экспериментальных животных.
Нами проведено исследование СА белых беспородных крыс-самцов, выполненное в 2 этапа. На первом зтапе изучалась СА интактных крыс, отрабатывались методические особенности изучения данной функции животных. На втором этапе изучалась СА в условиях 4-часовой запа-ховой нагрузки. Всего было использовано 63 половозрелых самца и 33 самки, находящиеся в стадии эструса. Для оценки СА самцов использовались ЛПО, КО, ДО, характеризующие состояние механизма, повышающего уровень СА и ЛПС, КС, характеризующие состояние механизма, регулирующего копулятивную активность и извержение семени. Исследование проводилось в дневное время. Оценка достоверности результатов осуществлялась с помощью непараметрических критериев.
На первом этапе интактные животные были распределены на 2 группы. Животные 1-й группы (10 крыс) находились под наблюдением 60 мин, 2-й (23 крысы)—5 мин. В 1-й группе СА типа О выявлена у 80 % животных, СА типа С — у 70 %. Обращает на себя внимание, что СА типа О у этих крыс начинается практически сразу после начала тестирования, что позволяет сократить период наблюдений до 5 мин. Во 2-й группе СА типа О выявлена у 83 % животных. У этих крыс ЛПО составил 33,1 ±10 с, КО — 7,7+0,6 усл. ед. (за 1 усл. ед. принято 1 обнюхивание), ДО — 38,9±6,1 с. Второй тип СА выявлен за изученный период наблюдения у 19 % животных, при этом ЛПС составил 158±64 с, а КС — у 4,7±0.6 усл. ед. (за 1 усл. ед. принята 1 садка). Животные, в ходе тестирования проявившие оба типа СА, имели более низкий ЛПО, более высокие значения КО и ДО в сравнении с животными, проявившими только СА типа О.
В этом эксперименте и во всех последующих СА типа О предшествовала СА типа С. Это позволяет утверждать, что СА типа О является пусковым механизмом СА типа С, отражает состояние механизма, повышающего уровень СА, связана с воздействием телергоиов самки на лимби-ческую систему мозга самца, в том числе на структуры, ответственные за копулятивную ак-
тивность. Эти представления совпадают с данными других авторов [1, 6, 8, 9], указывающих на наличие 2 механизмов, регулирующих СА животных. Следует отметить, что половое поведение самки во время изучения СА самцов нельзя считать пассивным и его необходимо учитывать при сексуальном тестировании самцов. В ходе изучения СА интактных животных выявлены особенности поведения крыс-самок, которые могут влиять на результаты исследований. Их поведение, как показал наш опыт, зависит от силы сексуальной нагрузки (количества самцов, тестированных с одной самкой, уровня СА каждого самца) и от типологических особенностей самой самки (прежде всего от уровня собственной СА). Одни самки при тестировании с первым самцом спокойно передвигаются по камере, но все время держатся в поле зрения самца. Затем от тестирования к тестированию их поведение меняется. Они начинают проявлять СА типа О и большую часть времени находятся перед самцом. Самка в ходе многократного тестирования возбуждается, начинает делать пробежки, провоцируя его на садки. При сексуальном насыщении она начинает избегать самца: принимает позы «калачика», стараясь не привлекать внимание самца, или «боксера», активно защищаясь от сексуальных притязаний самца. Другие самки могут проявлять разновидности описанных элементов поведения: уже в ходе первого тестирования принимать позу «калачика», «боксера», делать пробежки и т. д. Таким образом, поведение самки может влиять на изучаемые показатели СА самцов и его надо учитывать, подбирая самок со сходным половым поведением и дозируя сексуальную нагрузку на самку.
С целью стандартизации получаемых данных мы перед тестированием помещали самца на 1 мин в камеру (что ведет к угашению ориентировочно-исследовательской реакции), после чего туда помещали зстральную самку. Самка отбирается в эксперимент, если она в первом тестировании не избегает самца, принимает выраженную лордозную позу при садках самца и проявляет сексуальное расположение к самцу в виде саблевидного хвоста при СА типа О. Самка мс-жет быть повторно использована при тестировании 4 и более самцов, если ее поведение существенно не меняется. Критерием отказа от повторного использования самки является появление следующих реакций: реакции избегания или агрессии по отношению к самцу, признаков половой инверсии. Анализ полученных данных СА интактных животных показал значительный разброс по ряду показателей, что указывает на необходимость подбора экспериментальных животных. При подборе животных необходимо учитывать, что у нормальных крыс при тестирова-
нии с самкой за 60-минутный период наблюдений должны проявляться оба типа СА, за 5-минутный— минимум СА типа О. Отсутствие признаков СА может свидетельствовать о скрытой патологии в организме животного. Так, И. Ф. Тулин [4] показал снижение СА белых крыс в связи с простудными заболеваниями ЛОР-органов.
На втором этапе исследований- СА крыс-самцов изучалась при воздействии цитронеллола. В I серии опытов животные подвергались однократному 4-часовому воздействию цитронеллола в концентрации 1,3 мг/м3. В опыте использовано 10 подопытных и 10 контрольных животных. Во II серии изучено троекратное 4-часовое воздействие цитронеллола в концентрации 0,3— 0,4 мг/м3. Перерывы между затравками составляли 22—24 ч. В каждой группе на этом этапе было по 5 животных. Показатели СА изучали до и после затравки. Изучение СА каждого самца проводилось с одной и той же самкой.
Анализ результатов опыта с однократным воздействием цитронеллола позволил установить достоверное снижение у животных показателей, характеризующих состояние первого механизма СА: ЛПО, КО, ДО. При повторном воздействии меньших концентраций вещества также было обнаружено снижение СА, но если после 1-й затравки изменились только показатели СА типа
0. то после 2-й и 3-й — уже обоих типов СА. Так, после 1-й затравки отмечено снижение показателей КО и ЛПО, после 2-й — КО, ЛПО и ЛПС, после 3-й — КО, ДО, ЛПС и КС. У контрольных животных СА не имела достоверных отличий от фоновых величин. Таким образом, воздействие цитронеллола на уровне изученных концентраций вызывает изменение СА экспериментальных животных.
Полученные данные позволяют рекомендовать разработанный ускоренный метод изучения полового поведения крыс-самцов для применения в токсикологических исследованиях.
Литература
1. Киршекблат Я. Д. Телергоны — химические средства воздействия животных. М., 1968.
2. Костродымов Н. И. — Гиг. и сан., 1981, № 9, с. 20— 22.
3. Методические рекомендации по использованию поведенческих реакций животных в токсикологических исследованиях для целен гигиенического нормирования. Киев. 1980.
4. Тулин И. Ф. — Бюл. экспер. биол., 1941, № 1—2, с. 59—61.
5. Ходос X. Г. Нервные болезни М., 1974.
6. Beach F.— J. Psychosom. Med., 1942, vol. 10, p. 173—198.
7. Beach. F.. Halr-Facher A. — J. comp. Physiol. Psychol., 1949, vol. 42, p. 433—453.
8. Beach F., Jordan L. — J. exp. Psychol., 1956, vol. 8, p. 121 — 133.
9. Хайнд P. Поведение животных: Пер. с англ. М., 1975.
Поступила 05.10.84
