CC BY
34
© Р. в. Павлов 1, С. А. Сельков 2
1 Кафедра акушерства и гинекологии Ставропольской государственной медицинской академии, Ставрополь
2 Лаборатория иммунологии ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, Санкт-Петербург, Россия
УРОВЕНЬ ЦИТОКИНОВ в ПЕРИТОНЕАЛЬНОМ ЖИДКОСТИ ЖЕНЩИН С НАРУЖНЫМ ГЕНИТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ
УДК 618.145-007.415-07
■ В статье представлены результаты определения уровня цитокинов в перитонеальной жидкости больных наружным генитальным эндометриозом в зависимости от степени распространения заболевания и пролиферативной активности клеток эндометриоидных гетеротопий. Доказано, что при возникновении и прогрессировании эндометриоза в перитонеальной жидкости больных увеличивается количество цитокинов, обладающих не только цитотоксическим действием, но и активизирующих процессы ангиогенеза (ИЛ1р, ИЛ6 и ИЛ8), а также стимулирующих адгезию клеток эндометрия к мезотелию брюшины (ФНОа). Уровень противоопухолевых цитокинов (ИЛ2
и ИФНу) в перитонеальной жидкости больных женщин достоверно снижается, и это снижение прогрессирует с распространением заболевания и увеличением пролиферативной активности клеток эн-дометриоидных гетеротопий.
■ Ключевые слова: эндометриоз; цитокины; иммунология.
Актуальность изучения патогенеза наружного генитального эндометриоза (НГЭ) связана с высокой частотой распространения этой патологии среди женщин репродуктивного возраста и ее существенным влиянием на репродуктивное здоровье и уровень жизни больных [2, 6].
В настоящее время установлено, что активный эндометриоз сопровождается пролиферацией клеток, повышенным сосу-дообразованием как внутри очага эндометриоза, так и вокруг него. Формирование и функционирование эндометриального трансплантата во многом определяется степенью васкуляриза-ции. Стимуляция процессов ангиогенеза в очагах эндометрио-за осуществляется на локальном уровне и контролируется ан-гиогенными факторами роста и цитокинами, секретируемыми перитонеальными макрофагами, клетками эндометриоидных гетеротопий и клетками эндотелия [4, 9, 11-13].
Изучение уровня цитокинов в перитонеальной жидкости (Пж) больных НГЭ с учетом степени распространения заболевания проводилось многими исследователями [3, 5, 7, 8, 10], однако в доступной литературе нами не было найдено данных, посвященных влиянию уровня цитокинов Пж на пролиферативную активность клеток эктопического эндометрия.
Целью настоящей работы было изучение уровня цитокинов в Пж больных НГЭ в зависимости от степени распространения заболевания и пролиферативной активности клеток эндо-метриоидных гетеротопий.
Материал и методы
Комплексное иммунологическое обследование было выполнено у 150 больных НГЭ, находившихся на лечении в гинекологическом отделении Ставропольского краевого клинического перинатального центра и Ставропольского краевого клинического центра оказания специализированных видов медицинской помощи в период с 2003 по 2007 год. В контрольную группу были включены 30 практически здоровых женщин, поступивших для проведения плановой хирургической стерилизации, после исключения тяжелой экстрагени-тальной патологии и при условии исключения гинекологической патологии по данным клинического обследования и лапароскопии.
Все больные основной группы были репродуктивного возраста (от 20 до 35 лет), ни одна из них до проведения оперативного лечения не получала гормонального лечения НГЭ, а на этапе операции ни одна из них не была беременной и не имела внутриматочной спирали. Основными жалобами больных являлись альгодисменорея (44,67 %), тазовые боли, не связанные с менструацией (31,33 %), и бесплодие (56,67 %).
Таблица 1
Показатели пролиферативной активности эпителия очагов перитонеального эндометриоза (М ± т)
Показатели Больные НГЭ II-III степени Достоверность отличий между группами
Красные очаги (n = 30) 1 Черные и белые очаги (n = 70) 2
Высота клеток, мкм 14,4 і 1,2 9,5 ± 1,2 Р1-2 < 0,05
Площадь ядер, мкм2 15,S і 1,2 11,5 ± 1,2 Р1-2 < 0,05
Плоидность клеток, с 2,б і 0,2 2,3 ± 0,1
Количество ОЯОР в ядре 2,9 і 0,2 2,4 ± 0,1 Р1-2 < 0,05
Средняя площадь ОЯОР, мкм2 1,3 і 0,1 1,2 ± 0,1
Суммарная площадь ОЯОР, мкм2 3,9 і 0,2 2,8 ± 0,1 Р1-2 < 0,001
Всем больным НГЭ и женщинам контрольной группы проводилось стандартное предоперационное обследование, включающее: общеклинические методы, ультразвуковое исследование органов малого таза, определение уровня СА125 в периферической крови.
Лапароскопия проводилась по общепринятой методике, с использованием оборудования фирмы «Karl Storz» (Германия). После осмотра брюшной полости исключалась другая патология, после чего осуществлялся забор ПЖ. При наличии спаечного процесса производилось разъединение спаек, после которого оценивались локализация и цвет эн-дометриоидных гетеротопий, а также степень распространения НГЭ. После этого эндометриоидные очаги иссекались в пределах здоровых тканей и направлялись на гистологическое исследование.
Степень распространения НГЭ оценивалась согласно классификации r-AFS (1985). В зависимости от степени распространенности НГЭ все больные были разделены на две группы: I группа — 86 больных с I—II степенью распространения НГЭ, II группа — 64 больных с III-IV.
Для оценки пролиферативной активности клеток эпителия эндометриоидных гетерото-пий использовались критерии, рекомендованные Г. Г. Автандиловым (1996): площадь ядер, плоид-ность клеток и активность областей организаторов ядрышек. Системный морфометрический анализ выполняли с помощью микротелефотометрическо-го анализатора изображения (рационализаторское предложение № 1044 от 19.10.2000), состоящего из видеокамеры «ВКМ-380», полифункционального микроскопа «ЛЮМАМ Р-8», блока оцифровки изображения и компьютера PENTIUM III, с использованием программы «ВидеоТест-Морфо» производства ООО «ВидеоТест» (Россия) [1].
В зависимости от степени пролиферативной активности эктопического эндометрия гетерото-пий все больные II—III степени распространения НГЭ (100 женщин) были разделены на две группы: I группа — 30 больных с красными (активно
пролиферирующими) эндометриоидными гете-ротопиями на брюшине малого таза и II группа 70 женщин с черными и белыми гетеротопиями, с низкой пролиферативной активностью клеток. При подборе этих групп на основании морфометрической оценки учитывалось достоверное отличие в снижение показателей пролиферативной активности эктопического эндометрия (табл. 1).
Перед определением уровня цитокинов ПЖ центрифугировалась 10 мин при 3000 об/мин, после чего замораживалась при -40 ° С и хранилась не более 3 месяцев. Уровень ИЛ8 («ВекторБест», Россия), ИЛ1Р, ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6, ФНОа и ИФНу («Протеиновый контур», Россия) в ПЖ определяли методом твердофазового иммуноферментного анализа на планшетном фотометре «Labsystems iEMS Reader MF» (Финляндия), согласно прилагаемым к наборам методикам.
Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы «Primer Biostatistic 4.03. for Windows». Для всех показателей определяли средние значения (М), а также ошибку среднего (m). Для оценки степени достоверности различий между значениями использовался критерий Стьюдента (t). Различия между показателями считали достоверными при р < 0,05.
Результаты и их обсуждение
При морфометрическом исследовании клеток эктопического эндометрия было установлено, что эпителиальные клетки красных эндометрио-идных гетеротопий имели достоверно большую высоту (14,4 ± 1,2 и 9,5 ± 1,2 мкм) и площадь ядер (15,8 ± 1,2 и 11,5 ± 1,2 мкм2), чем у черных и белых очагов НГЭ (табл. 1).
Плоидность эпителиальных клеток эндоме-триоидных гетеротопий не зависела от их цвета и соответствовала диплоидному набору хромосом. В то же время в ядрах эпителия красных очагов НГЭ количество ОЯОР (2,9 ± 0,2 и 2,4 ± 0,1) и их суммарная площадь (3,9 ± 0,2 и 2,8 ± 0,1 мкм2)
Таблица 2
Уровень цитокинов в ПЖ больных НГЭ с разной степенью распространения заболевания (М ± т)
Показатели Здоровые женщины (п=30) 1 Больные НГЭ Достоверность отличий между группами
1-11 степень (п = 86) 2 Ш-ГУ степень (п=64) 3
ИЛ1Р, пкг/мл 131,6 ± 7,2 501,7 ± 37,9 532,6 ± 75,2 Р1 2 < 0,001 Р13 < 0,001
ФНОа, пкг/мл 8,1 ± 1,3 44,0 ± 3,0 58,3 ± 3,9 Р1-2 < 0,001 Р1 3 < 0,001 Р-3 < 0,01
ИЛ2, пкг/мл 29,9 ± 1,6 21,1 ± 1,5 17,9 ± 1,9 Р1-2 < 0,001 Р13 < 0,001
ИЛ4, пкг/мл 60,1 ± 5,1 58,6 ± 2,9 63,3 ± 3,2
ИЛ6, пкг/мл 44,5 ± 2,8 60,8 ± 3,2 97,7 ± 3,8 Р1-2 < 0,01 Р1 3< 0,001 Р2-3 < 0,001
ИЛ8, пкг/мл 23,3 ± 2,7 224,0 ± 15,9 293,1 ± 12,4 Р1-2 < 0,001 Р13 < 0,001 Р2-3 < 0,001
ИФНу, пкг/мл 121,3 ± 10,8 66,0 ± 8,9 61,4 ± 7,8 Р1 2 < 0,001 Р13 < 0,001
были достоверно выше, чем в ядрах эпителия черных и белых гетеротопий (табл. 1).
Таким образом, согласно морфологическим критериям пролиферации клеток, предложенным Г. Г. Автандиловым, клетки эктопического эндометрия красных гетеротопий обладают большей пролиферативной активностью, чем клетки черных и белых очагов НГЭ. Эти данные позволили обосновать разделение всех больных с П-Ш степенью распространения НГЭ на две дополнительные группы с учетом пролиферативной активности клеток эктопического эндометрия.
При изучении уровня цитокинов в ПЖ больных НГЭ было установлено, что уровень ИЛф, ИЛ6, ИЛ8 и ФНОа был достоверно выше у больных НГЭ, чем у здоровых женщин, при этом степень повышения уровня ИЛ1Р не зависела от распространенности заболевания, но достоверно увеличивалась у больных с высокой пролиферативной активностью гетеротопий, а уровень ИЛ6, ИЛ8 и ФНОа возрастал как с распространением процесса, так и с увеличением пролиферативной активности гетеротопического эпителия. Подобное изменение уровня цитокинов в ПЖ может указывать на возрастание функциональной активности перитонеальных макрофагов больных НГЭ, прогрессирующее с увеличением активности клеток эндометриоидных гетеротопий. Кроме этого, все вышеперечисленные цитокины обладают выраженным проангиогенным действием, инициирующим неоангиогенез, а ФНОа способствует имплантации эндометриоидных клеток на мезо-телии брюшины (табл. 2-3).
Уровень ИЛ4 в ПЖ не зависел от степени распространения НГЭ и пролиферативной активности клеток эндометриоидных гетеротопий (табл. 2-3).
Уровень ИЛ2 и ИФНу в ПЖ больных НГЭ был достоверно ниже, чем у здоровых женщин вне зависимости от степени распространения заболевания. В то же время с увеличением пролиферативной активности клеток гетеротопий уровень ИЛ2 и ИФНу в ПЖ больных женщин достоверно уменьшался. Подобные изменения в продукции цитокинов указывают на снижение активности иммунокомпетентных клеток, принимающих участие в реализации неспецифической и специфической противоопухолевой цитотоксичности в Пж больных НГЭ.
Заключение
Полученные результаты позволяют утверждать, что при возникновении и прогрессировании эндометриоза в ПЖ больных увеличивается количество цитокинов, обладающих не только ци-тотоксическим действием, но и активизирующих процессы ангиогенеза (ИЛф, ИЛ6 и ИЛ8), а также стимулирующих адгезию клеток эндометрия к мезотелию брюшины (ФНОа).
В отличие от цитокинов, обладающих проан-гиогенной активностью, уровень противоопухолевых цитокинов (ИЛ2 и ИФНу) в ПЖ больных НГЭ достоверно снижается и это снижение прогрессирует с распространением заболевания и увеличением пролиферативной активности клеток эндометриоидных гетеротопий.
Таблица 3
Уровень цитокинов в ПЖ больных НГЭ с разной пролиферативной активностью клеток эктопического эндометрия (М ± т)
Показатели Здоровые женщины (n = 30) 2 Больные НГЭ II-III степени Достоверность отличий между группами
Красные очаги (n=30) 2 Черные и белые очаги (n=70) 3
ИЛ^, пкг/мл 131,6 ± 7,2 642,1 ± 61,0 392,2 ± 28,0 Р1-2 < 0,001 Р13 < 0,001 Р2-3 < 0,001
ФНОа, пкг/мл 8,1±1,3 74,2 ± 4,3 38,1 ± 3,1 Р1-2 < 0,001 Р13 < 0,001 Р2-3 < 0,001
ИЛЗ, пкг/мл 29,7 ± 1,6 13,9 ± 1,5 20,4 ± 1,5 Р1 2 < 0,001 Pj 3 < 0,001 Р2_3 < 0,01
ИЛ4, пкг/мл 60,1 ± 5,1 63,3 ± 3,3 58,6 ± 2,2
ИЛ6, пкг/мл 44,5 ± 2,8 118,1 ± 3,3 60,6 ± 3,3 Р1-2 < 0,001 Pj 3 < 0,01 P23 < 0,001
ИЛ8, пкг/мл 23,3 ± 2,7 310,6 ± 17,8 126,1 ± 8,7 Р1-2 < 0,001 Р13 < 0,001 Р2-3 < 0,001
ИФНу, пкг/мл 121,3 ± 10,8 55,5 ± 4,1 69,6 ± 4,2 Р1 2 < 0,001 Pj 3 < 0,001 P2-3 < 0,05
Таким образом, одним из механизмов возникновения и прогрессирования НГЭ может быть дисбаланс в противоопухолевой и ангиогенной активности клеток перитонеальной жидкости в сторону увеличения последней. Подтверждением этого предположения можно считать увеличение в перитонеальной жидкости больных НГЭ цитокинов, обладающих ангиогенным действием, и снижение уровня цитокинов, обладающих противоопухолевой активностью, причем с увеличением пролиферативной активности эпителия эндометриоидных гетеро-топий вышеописанные изменения прогрессируют.
Литература
1. Автандилов, Г. Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностической гистоцитопатологии / Г. Г. Автандилов. — М.: РМАПО, 1996. — 256 с.
2. Адамян, Л. В. Эндометриозы: руководство для врачей / Л. В. Адамян, В. И. Кулаков, Е. Н. Андреева. — 2-е изд. — М.: Медицина, 2006. — 416 с.
3. Анциферова, Ю. С. Роль цитокинов перитонеальной жидкости в развитии наружного генитального эндометрио-за и бесплодия, ассоциированного с эндометриозом / Ю. С. Анциферова, Л. В. Посисеева, А. Л. Шор // Акуш. и гин. — 2003. — № 1. — С. 41-44.
4. Исследование цитокинового профиля и ангиогенного потенциала перитонеальной жидкости больных с наружным генитальным эндометриозом / Д. И. Соколов, Н. Г. Соло-довникова, О. В. Павлов [и др.] // Бюллетень эксперимен-
тальной биологии и медицины. — 2005. — Т. 140, № 11. — С. 552-555.
5. Махмудова, Г. М. Роль некоторых факторов перитонеальной жидкости в патогенезе эндометриоза / Г. М. Махмудова, А. В. Попов // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2004. — № 2. — С. 27-30.
6. Савицкий, Г. А. Перитонеальный эндометриоз и бесплодие (клинико-морфологические исследования) / Г. А. Савицкий, С. М. Горбушин. — СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002. — 170 с.
7. Сельков, С. А. Локальная продукция цитокинов у пациенток с наружным генитальным эндометриозом / С. А. Сельков, Н. Л. Крамарева, О. В. Павлов, М. И. Ярмолинская // Ж. акуш. и жен. болезн. — 2002. — Т. LI, № 3. — С. 57-62.
8. Сельков, С. А. Особенности локальной продукции интерлейкинов и ростовых факторов при наружном генитальном эндометриозе / С. А. Сельков, Н. Г. Солодовникова, О. В. Павлов, Д. А. Ниаури // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2005. — Т. 139, № 4. —
С. 439-442.
9. Системные и локальные уровни регуляции иммунопатоге-нетических процессов у пациенток с наружным генитальным эндометриозом / С. А. Сельков, М. И. Ярмолинская, О. В. Павлов [и др.] // Ж. акуш. и жен. болезн. — 2005. —
Т. LIV, № 1. — С. 20-28.
10. Different concentrations of interleukins in the peritoneal fluid of women with endometriosis: relationships with lymphocyte subsets / A. Gallinelli, G. Chiossi, L. Giannella [et al.] // Gynecol. Endocrinol. — 2004. — Vol. 18, N 3. — P. 144-151.
11. Dmowski, P. W. Immunology of endometriosis / P. W. Dmowski,
D. P. Braun // Best. Pract. Res. Clin. Obstet. Gynecol. — 2004. — Vol. 18, N 2. — P. 245-263.
12. Pathogenesis of endometriosis / A. W. Nap, P. G. Groothuis, A. Y. Demir [et al.] // Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynecol. — 2004. — Vol. 18, N 2. — P. 233-244.
13. Seli, E. Pathogenesis of endometriosis / E. Seli, M. Berkkanoglu, A. Arici // Obstet. Gynecol. Clin. North Am. — 2003. — Vol. 30, N 1. — P. 41-61.
Статья представлена М. И. Ярмолинской, НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН,
Санкт-Петербург
SCYTOKINE LEVEL IN THE PERITONEAL FLUID OF WOMEN WITH EXTERNAL GENITAL ENDOMETRIOSIS
Pavlov R. V., Selkov S. A.
■ Summary: In the article there are the results of evaluation of cytokine level in the peritoneal fluid of patients with external genital endometriosis, depending on the disease extension and proliferative activity of endometrioid heterotopia cells. It is proved that when endometriosis sets in and grows progressively worse the cytokine quantity in the peritoneal fluid of patients increases, the cytokine have cytotoxic action and activate angio-genesis process (ILip, IL6 and IL8) as well as stimulate endometrium cell adhesion to peritoneum mesothelium (TNFa). The antitumorial cytokine level (IL2 and IFNy) in the peritoneal fluid of sick women decreases and this decrease grows progressively as the disease extends and proliferative activity of endometrioid heterotopia cells increases.
■ Key words: endometriosis; cytokinins; immunology.
■ Адреса авторов для переписки---------------------------------------------------------------------------------------------------------
Павлов Роман Владимирович — к. м. н., ассистент кафедры акушерства и гинекологии Ставропольской государственной медицинской академии, кандидат медицинских наук.
Ставропольская государственная медицинская академия, г. Ставрополь, ул. Мира 310
Сельков Сергей Алексеевич — д. м. н., профессор.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, 199034 Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3
