CC BY
40
© Р. В. Павлов ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ ЭПИТЕЛИЯ,
ОСОБЕННОСТИ ВАСКУЛЯРИЗАЦИИ Ставропольская государственная И ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ИНФИЛЬТРАЦИИ ОЧАГОВ
медицинская академия: кафедра акушерства ПЕРИТОНЕАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА
и гинекологии
■ В статье представлены результаты морфометрической оценки пролиферативной активности клеток эпителия, особенностей васкуляризации и лейкоцитарной инфильтрации 100 эндометриоидных гетеротопий брюшины малого таза. Доказано, что клетки эпителия эндометриоидных гетеротопий красного цвета обладают наибольшей пролиферативной активностью, клетки белых гетеротопий — наименьшей,
а клетки черных очагов занимают промежуточное положение. Установлено, что увеличение степени васкуляризации и превалирование в лейкоцитарных инфильтратах макрофагов, нейтрофилов и плазматических клеток ведет к увеличению пролиферативной активности эктопического эндометрия в очагах перитонеального эндометриоза.
■ Ключевые слова: эндометриоз; ангиогенез; иммунология; морфология
Наружный генитальный эндометриоз (НГЭ) занимает одно из ведущих мест в структуре гинекологической патологии, при этом, несмотря на большое количество работ, его этиология и патогенез остаются предметом споров и научных исследований до настоящего времени. Именно недостаточное понимание основных механизмов развития эндометриоза не позволяет добиться высокой эффективности его лечения [2, 7, 11, 12].
В настоящее время получено большое количество данных, указывающих на значение нарушений локального иммунного ответа и процессов ангиогенеза в возникновении и прогресси-ровании НГЭ. В частности, установлено, что у больных НГЭ увеличивается количество и функциональная активность макрофагов и факторов сосудистого роста в перитонеальной жидкости [2, 5, 8, 11, 12]. При этом высокая ангиогенная активность перитонеальной жидкости больных НГЭ ведет к увеличению степени васкуляризации и пролиферативной активности эндометриоидных гетеротопий и эутопического эндометрия [3, 4, 6, 9, 10]. В то же время в доступной литературе нами не было найдено данных, посвященных комплексной морфометричес-кой оценке клеток эктопического эндометрия в зависимости от макроскопических особенностей, степени васкуляризации и характера лейкоцитарной инфильтрации гетеротопий.
В связи с этим целью нашего исследования явилось изучение показателей пролиферативной активности клеток эктопического эндометрия у больных НГЭ в зависимости от макроскопических особенностей эндометриоидных гетерото-пий, степени их васкуляризации и характера лейкоцитарной инфильтрации.
Материал и методы исследования
Исследование ткани эндометриоидных гетеротопий было выполнено у 100 больных НГЭ. Все больные были репродуктивного возраста (от 20 до 35 лет), ни одна из них до проведения оперативного лечения не получала гормональную терапию, не использовала внутриматочные средства контрацепции и не была беременной. Основными жалобами больных являлись альгодисменорея (45 %), тазовые боли, не связанные с менструацией (31 %), и бесплодие (57 %).
Всем больным проводилось стандартное предоперационное обследование, включающее: общеклинические методы, ультразвуковое исследование органов малого таза, определение уровня СА125 в периферической крови.
Лапароскопия проводилась по общепринятой методике, с использованием оборудования фирмы Karl Storz (Германия). После осмотра брюшной полости исключалась другая патология, при наличии спаечного процесса производилось разъединение спаек, после которого оценивалась локализация и цвет эндометриоидных гетеротопий, а также степень распростра-
нения НГЭ. После этого эндометриоидные очаги иссекались в пределах здоровых тканей и направлялись на гистологическое исследование.
Распространенность заболевания оценивалась согласно классификации r-AFS (1985) и соответствовала во всех случаях II-III степени распространения.
При определении локализации эндометриоид-ных гетеротопий было установлено, что наиболее часто они локализовались на брюшине прямокишечно-маточного углубления (63 %), крестцово-маточных связках (52 %) и листках широких маточных связок (32 %). Сочетанная локализация гетеротопий наблюдалась в 72 % случаев, а в 28 % эндометриоидные гетеротопии на брюшине малого таза сочетались с эндометриозом яичников.
При макроскопической оценке в 43 % случаев выявлялись изолированные красные гетеротопии или их сочетание с черными, а в 57 % случаев выявлялись черные гетеротопии или их сочетание с белыми. Для сравнительной оценки пролифе-ративной активности эктопического эндометрия, степени васкуляризации и характера лейкоцитарной инфильтрации эндометриоидных гетеротопий все они были разделены на три группы: I группа — 30 красных гетеротопий, II группа — 44 черные гетеротопии, III группа — 26 белых гетеротопий.
Для проведения гистологического и гистохимического исследования кусочки эндометриоидных гетеротопий фиксировались в 10%-м нейтральном формалине и 96%-м, охлажденном до 20 °С этаноле. На ротационном микротоме «МПС-2» после парафиновой заливки получали срезы толщиной 5-7 мкм.
Для оценки пролиферативной активности клеток эпителия эндометриоидных гетеротопий и эндотелия сосудов использовались критерии, рекомендованные Г. Г. Автандиловым (1996): площадь ядер, плоидность клеток и активность областей организаторов ядрышек (ОЯОР) [1]. Степень васкуляризации очагов НГЭ оценивалась по суммарной площади сосудов и среднему просвету капилляров, а активность ангиогенеза на основании морфологических критериев пролиферации эндо-телиальных клеток капилляров.
Для обзорных целей, оценки степени васкуляризации эндометриоидных гетеротопий, проведения кариометрии, подсчета основных популяций иммунокомпетентных клеток и оценки активности ОЯОР срезы, полученные из препаратов, фиксированных в 10%-м нейтральном формалине, окрашивали гематоксилином и эозином по Ван-Гизону, по Романовскому-Гимзе и импрегнировали азотнокислым серебром. Для цитофотометрического изучения закономерностей распределения ДНК в ядрах клеток срезы, полученные из препаратов,
фиксированных в 96%-м охлажденном этаноле, окрашивали акридиновым оранжевым при рН = 2,0.
Системный морфометрический анализ выполняли с помощью микротелефотометрического анализатора изображения (рационализаторское предложение № 1044 от 19.10.2000), состоящего из видеокамеры «ВКМ-380», полифункционального микроскопа «ЛЮМАМ Р-8», блока оцифровки изображения и компьютера PENTIUM III, с использованием программы «ВидеоТест-Морфо» производства ООО «Истра-ВидеоТест» (Россия).
Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы Primer Biostatistic 4.03. for Windows. Для всех показателей определяли средние значения (М), а также ошибку среднего (m). Для оценки степени достоверности различий между значениями использовался критерий Стьюдента (t). Различия между показателями считали достоверными при р < 0,05.
Результаты исследования
При микроскопическом исследовании красных эндометриоидных гетеротопий выявлялся эндометриоидный эпителий пролиферативного типа, выраженная цитогенная строма и высокая плотность микрососудистого русла. В черных ге-теротопиях эпителий сохранял признаки проли-феративной активности, однако в строме капилляры располагались неравномерно (плотность их увеличивалась по периферии очага), хотя строма сохраняла цитогенный характер. В белых гетеро-топиях эпителий претерпевал выраженные дистрофические изменения, местами отсутствовал, строма очагов была фиброзирована, практически лишена клеточных элементов и капилляров.
Эпителиальные клетки красных и черных эн-дометриоидных гетеротопий имели одинаковую высоту (14,4 ± 1,2 мкм и 13,4 ± 1,1 мкм) и площадь ядер (15,8 ± 1,2 мкм2 и 14,8 ± 1,3 мкм2), которые были достоверно выше, чем у клеток эпителия белых очагов (9,5 ± 1,2 мкм; p < 0,01 и 10,1 ± 1,9 мкм2; соответственно p < 0,05). При определении плоидности клеток эпителия эндо-метриоидных гетеротопий было установлено, что вне зависимости от их макро- и микроскопического строения, с некоторыми колебаниями, эндо-метриоидные клетки несут количество ДНК, соответствующее диплоидному набору хромосом (табл. 1).
В ядрах эпителия красных очагов количество ОЯОР достоверно не отличалось от черных (2,9 ± 0,2 и 2,8 ± 0,1), превышая таковое в белых гетеротопиях (2,1 ± 0,2; p < 0,001). В отличие от количества ОЯОР их суммарная площадь в красных гетеротопиях (3,9 ± 0,2 мкм2) была достовер-
Таблица 2
Степень васкуляризации и показатели пролиферативной активности эндотелия капилляров разных очагов перитонеального эндометриоза ^ ± m)
Таблица 1
Показатели пролиферативной активности эпителия разных очагов перитонеального эндометриоза (М ± m)
Показатели Красные очаги (п = 30) 1 Черные очаги (п = 44) 2 Белые очаги (п = 26) 3 Достоверность отличий между группами
Высота клеток, мкм 14,4 ± 1,2 13,4 ± 1,1 9,5 ± 1,2 р1-з < 0,01 р2-3 < 0,05
Площадь ядер, мкм2 15,8 ± 1,2 14,8 ± 1,3 10,1 ± 1,9 р1-з < 0,05 р2-3 < 0,05
Плоидность клеток, с 2,6 ± 0,2 2,4 ± 0,1 2,1 ± 0,1 -
Количество ОЯОР в ядре 2,9 ± 0,2 2,8 ± 0,1 2,1 ± 0,2 р1 3 < 0,001 р2-3 < 0,01
Суммарная площадь ОЯОР, мкм2 3,9 ± 0,2 3,3 ± 0,1 2,4 ± 0,1 рх_2 < 0,05 р1 3 < 0,001 р2 3 < 0,001
Показатели Красные очаги (п = 30) 1 Черные очаги (п = 44) 2 Белые очаги (п = 26) 3 Достоверность отличий между группами
Площадь сосудов, % 13,8 ± 1,1 10,9 ± 0,7 8,1 ± 0,7 р,-2 < 0,05 р, 3 < 0,001 р1-3 < 0,01
Средний диаметр капилляров, мкм 120,1 ± 6,8 98,1 ± 6,6 75,1 ± 7,3 р,-2 < 0,05 р. 3 < 0,001 р1-3 < 0,05
Площадь ядер эндотелия, мкм2 11,9 ± 0,8 10,6 ± 0,4 8,8 ± 0,7 р|-3 < 0,01 р2-3 < 0,05
Плоидность эндотелия, с 2,08 ± 0,12 2,03 ± 0,13 2,01 ± 0,05 -
Количество ОЯОР в ядрах эндотелия 2,05 ± 0,09 1,98 ± 0,07 1,91 ± 0,06 -
Суммарная площадь ОЯОР в ядрах эндотелия, мкм2 1,7 ± 0,1 1,2 ± 0,1 1,1 ± 0,1 р,-2 < 0,05 р1-3 < 0,01
но выше, чем в белых (2,4 ± 0,1 мкм2; р < 0,001) и в черных очагах эндометриоза (3,3 ± 0,1 мкм2; р < 0,05) (табл. 1).
При анализе плотности сосудистого русла и среднего диаметра капилляров в строме эндо-метриоидных гетеротопий нами было установлено их достоверное увеличение в красных очагах эндометриоза (13,8 ± 1,1 % и 120,1 ± 6,8 мкм) по сравнению с черными (10,9 ± 0,7 % и 98,1 ± 6,6 мкм; р < 0,05) и белыми (8,1 ± 0,7 % и 75,1 ± 7,3 мкм; р < 0,001). При этом площадь просвета сосудов и диаметр капилляров в черных гетеротопиях были достоверно выше, чем в белых (р < 0,05) (табл. 2).
При морфометрическом исследовании было установлено достоверное увеличение площади ядер эндотелия в красных (11,9 ± 0,8 мкм2) и черных гетеротопиях (10,6 ± 0,4 мкм2) по сравнению с бе-
лыми (8,8 ± 0,7 мкм2; р < 0,01). В отличие от площади ядер, суммарная площадь ОЯОР в ядрах клеток эндотелия черных гетеротопий (1,2 ± 0,1 мкм2) не отличалась от белых (1,1 ± 0,1 мкм2) и была достоверно меньше, чем в эндотелии красных очагов (1,7 ± 0,1 мкм2; р < 0,01), а количество ОЯОР не зависело от макроскопических особенностей гетеротопий (табл. 2).
В отличие от площади ядер и активности ОЯОР эндотелия капилляров эндометриоидных гетеротопий, количество ДНК, содержащееся в них, не зависело от макро- и микроскопических особенностей препаратов и соответствовало диплоидному набору хромосом (табл. 2).
При изучении интенсивности лейкоцитарной инфильтрации было установлено, что количество лейкоцитов в строме красных (2245,0 ± 115,4 в 1 мм2) и черных (2573,0 ± 138,0 в 1 мм2) эндомет-
Таблица 3
Особенности лейкоцитарной инфильтрации разных очагов перитонеального эндометриоза ^ ± m)
Показатели Красные очаги (п = 30) 1 Черные очаги (п = 44) 2 Белые очаги (п = 26) 3 Достоверность отличий между группами
Лейкоциты, в 1 мм2 2245,0 ± 115,4 2573,0 ± 138,0 1812,0 ± 185,3 Р1-3 < 0,05 Р2-3 < 0,01
Эозинофилы, % 0,9 ± 0,1 0,8 ± 0,1 1,1 ± 0,3 -
Тучные клетки, % 1,2 ± 0,4 0,9 ± 0,3 0,8 ± 0,5 -
Нейтрофилы, % 5,7 ± 0,5 4,5 ± 0,6 2,1 ± 0,5 Р13 < 0,001 Р2-3 < 0,01
Лимфоциты, % 80,5 ± 0,6 85,1 ± 0,9 90,6 ± 0,6 Р1-2 < 0,001 Р1 з < 0,001 Р2-3 < 0,01
Плазматические клетки, % 4,6 ± 0,7 3,5 ± 0,6 2,5 ± 0,3 Р1-3 < 0,05
Макрофаги, % 7,1 ± 0,4 5,2 ± 0,2 2,9 ± 0,31 Р12 < 0,001 Р12 < 0,001 Рм < 0,01
риоидных гетеротопий достоверно не отличалось между собой и превышало количество лейкоцитов в белых очагах эндометриоза (1812,0 ± 185,3 в 1 мм2; р < 0,01). При анализе популяционного состава лейкоцитарных инфильтратов было установлено, что в строме красных очагов по сравнению с черными достоверно возрастает количество макрофагов (7,1 ± 0,4 % и 5,2 ± 0,2 %; р < 0,001) и снижается количество лимфоцитов (80,5 ± 0,6 % и 85,1 ± 0,9 %; р < 0,001). В белых очагах по сравнению с красными и черными не только увеличивается количество лимфоцитов и снижается количество макрофагов (90,6 ± 0,6 % и 2,9 ± 0,3 %; р < 0,001), но и снижается количество плазматических клеток и нейтрофилов (табл. 3).
Заключение
Анализируя представленные данные, можно констатировать, что клетки эктопического эндометрия красных гетеротопий обладают наибольшей пролиферативной активностью, что позволяет расценивать их как прогрессирующую форму НГЭ. Существенное снижение пролиферативной активности эпителия белых гетеротопий позволяет расценивать их как вариант регресса НГЭ. Промежуточные показатели пролиферативной активности эпителия черных очагов позволяют расценивать их как вариант стабилизации НГЭ. С увеличением степени васкуляризации, пролиферативной активности клеток эндотелия капилляров, а также с увеличением доли макрофагов, нейтрофилов и плазматических клеток в лейкоцитарных инфильтратах эндометриоидных гетеро-топий наблюдается увеличение пролиферативной активности клеток эктопического эндометрия, что
указывает на роль этих факторов в прогрессиро-вании НГЭ. Увеличение доли лимфоцитов в лейкоцитарной инфильтрации очагов НГЭ, а также уменьшение степени их васкуляризации ведет к снижению пролиферативной активности клеток эпителия и как следствие к регрессу патологического процесса.
Таким образом, полученные данные убедительно подтверждают важную роль процессов ангиогенеза в прогрессировании НГЭ и позволяют предполагать, что очаги перитонеального эн-дометриоза в процессе своего развития проходят ряд последовательных этапов, начиная от активной пролиферации и заканчивая регрессом.
Литература
1. Автандилов Г. Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностической гистоцитопатологии / Автандилов Г. Г. — М.: РМАПО, 1996. — 256 с.
2. АдамянЛ. В. Эндометриозы: руководство для врачей / Ада-мян Л. В., Кулаков В. И., Андреева Е. Н. — 2-е изд. — М.: Медицина, 2006. — 416 с.
3. Бурлев В. А. Ангиогенез эктопического эндометрия у больных с перитонеальной формой эндометриоза (обзор литературы) / Бурлев В. А., Ильясова Н. А., Дубинская Е. Д. // Проблемы репродукции. — 2005. — №1. — С. 7-13.
4. Бурлев В. А. Пролиферативная и ангиогенная активность эу-топического и эктопического эндометрия у больных с перитонеальной формой эндометриоза / Бурлев В. А. // Проблемы репродукции. — 2006. — Т. 12, № 1. — С. 78-87.
5. Махмудова Г. М. Роль некоторых факторов перитонеальной жидкости в патогенезе эндометриоза / Махмудова Г. М., Попов А. В. // Российский вестник акушера-гинеколога. — 2004. — № 2. — С. 27-30.
оригинальные исследования
69
6. Михалева Л. М. Эндометриоз яичника: характеристика ге-момикроциркуляторного русла / Михалева Л. М., Воробьева Н. Н., Самсонова М. В. // Архив патологии. — 2006. — № 4. — С. 20-22.
7. Савицкий Г. А. Перитонеальный эндометриоз и бесплодие (клинико-морфологические исследования) / Савицкий Г. А., Горбушин С. М. — СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002. — 170 с.
8. Сельков С. А. Особенности локальной продукции интер-лейкинов и ростовых факторов при наружном гениталь-ном эндометриозе / Сельков С. А., Солодовникова Н. Г., Павлов О. В., Ниаури Д. А. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2005. — Т.139, № 4. — С. 439-442.
9. Сидорова И. С. Клинико-морфологические особенности эндометриоза яичников / Сидорова И. С., Коган Е. А., Уна-нян А. Л., Гуриев Т. Д. // Акуш. и гин. — 2005. — № 6. — С.43-46.
10. Morphometric analyses of endometriotic tissues to determine their grade of activity / Regidor P. A., Wagner I., Ruwe M. [et al.] // Gynecol. Endocrinol. — 2002. — Vol. 16, N 3. — P. 235-243.
11. Pathogenesis of endometriosis / Nap A. W., Groothuis P. G., Demir A. Y. [et al.] // Best. Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. — 2004. — Vol. 18, N 2. — P. 233-244.
12. SeliE. Pathogenesis of endometriosis / Seli E., Berkkanoglu M., Arici A. // Obstet. Gynecol. Clin. North. Am. — 2003. — Vol. 30, N 1. — P. 41-61.
Статья представлена С. А. Сельковым НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН,
Санкт-Петербург
epithelium proliferative activity, the particular qualities of vascularization and leucocytic infiltration in peritoneum endometriosis centres
Pavlov R. V.
■ Summary: The article demonstrates the results of epitheliocytes' proliferative activity morphometric assessment, the peculiarities of vascularization and leucocytic infiltration in 100 endometrioid heterotopias in pelvis minor peritoneum. The study proves that epitheliocytes in red endometrioid heterotopias show the highest proliferative activity, while epitheliocytes in white endometrioid heterotopias show the lowest proliferative activity, and epitheliocytes in black endometrioid heterotopias demonstrate intermediate features. It was also revealed that increased vascularization degrees and prevalence of macrophages, neutrophils and plasmacytes in leucocytic infiltrates lead to the increased proliferative activity in ectopic endometrium of peritoneum endometriosis centres.
■ Key words: endometriosis; angiogenesis; immunology; morphology
