CC BY
6Материалы и методы
В исследование были включены две когорты пациентов с АКР: пациенты из баз данных The Cancer Genome Atlas (TCGA) и НМИЦ эндокринологии Минздрава РФ. Анализ инфильтрирующих опухоль иммунных клеток в когорте пациентов TCGA проводили способами CIBERSORT [1], CIBERSORTx [2], ConsensusTME [3] и методом Bagaev et al.[4].
Результаты
В когорту пациентов из TCGA, вошло 28 случаев классического, 21 случай онкоцитарного, 3 случая миксоидного и 2 случая саркомоидного вариантов. Вторая когорта пациентов составила 22 случая: 11 случаев (50%) классического, 9 случаев (41%) он-коцитарного и 2 случая (9%) миксоидного вариантов АКР. Анализ связи выживаемости с изучаемыми факторами показал, что общая выживаемость и выживаемость без прогрессирования между гистологическими вариантами значительно различаются в обеих когортах. При оценке интенсивности иммунного инфильтрата когорты TCGA по Bagaev и соавт.
оказалось: фенотип D (immune depleted) имели 40%; фенотип IE (immune enriched) 24%, фенотип IE/F (immune enriched, fibrotic samples) 21%, фенотип F (fibrotic) 15%. В классическом варианте преобладал фенотип D (50%), а в онкоцитарном — фенотип IE (43%). Коэффициент корреляции Спирмена для таких показателей, как оценка иммунитета (CIBERSORTx, ConsensusTME), фракция лейкоцитов (из Thorsson et al., 2018) и гистологический тип опухоли, составил 0,525 (p = 0,000 108) и 0,496 (p = 0,000 292) соответственно.
Выводы
Интенсивная иммунная инфильтрация характерна для онкоцитарного гистологического варианта АКР, а не для классического, который характеризуется повышенной выживаемостью. Для более глубокого анализа роли различных субпопуляций инфильтрирующих опухоль иммунных клеток в прогрессировании опухоли необходимо рассматривать случаи классических и онкоцитарных вариантов АКР независимо друг от друга.
Список литературы
1. Newman A . M ., Liu C . L ., Green M . R . et al . Robust enumeration of cell subsets from tissue expression profiles // Nat Methods . 2015 . Vol . 12 (5) . Р 453-457. D0l:10 ,1038/nmeth .3337 .
2 . Newman A . M . , Steen C . B ., Liu C . L . et al . Determining cell type abundance and expression from bulk tissues with digital
cytometry // Nat Biotechnol . 2019 . Vol . 37 (7) . Р. 773-782 . D0l:10 ,1038/s41587-019-0114-2 .
3 . Jiménez-Sánchez A . , Cast O ., Miller M . L . Comprehensive Benchmarking and Integration of Tumor Microenvironment Cell
Estimation Methods // Cancer Res . 2019 . Vol . 79 (24) . Р. 6238 LP-6246. D0l:10 .1158/0008-5472 . CAN-18-3560 .
4 . Bagaev A . , Kotlov N ., Nomie K . et al . Conserved pan-cancer microenvironment subtypes predict response to immuno-
therapy // Cancer Cell . 2021. Vol . 39 (6) . Р. 845-865 . e7 . D0I:10 ,1016/j . ccell . 2021.04.014.
Универсальная клеточная модель для изучения устойчивости опухолевых клеток к цитотоксической активности макрофагов
Авторы
Подлесная Полина Алексеевна, polina.pod@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Ковалева Ольга Владимировна, ovkovaleva@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Грачев Алексей Николаевич, alexei.gratchev@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Ключевые слова:
макрофаг, иммунитет, цитотоксичность, толерантность, иммунологический надзор, противоопухолевый иммунитет, иммунотерапия.
Актуальность
Современные методы лечения злокачественных опухолей часто включают в себя различные подходы к стимуляции противоопухолевой активности иммунной системы. Макрофаги, ассоциированные с опухолью, играют важную роль в опухолевой прогрессии. Неудачи применения иммунотерапии обусловлены как развитием устойчивости опухо-
левых клеток к цитотоксической активности макрофагов, так и приобретением толерантного фенотипа последними. Понимание механизмов этих биологических процессов позволит добиться повышения эффективности существующих методов лечения онкологических заболеваний и разработать новые перспективные методы иммунотерапии опухолей.
Цель
Разработка универсальной клеточной модели для изучения механизмов устойчивости опухолевых клеток к цитотоксической активности макрофагов.
Материалы и методы
Клеточные линии рака предстательной железы (Du145, PC3), легкого (Н1975, Н1299, Н292), почки (А498). Цитотоксические макрофаги получали путем дифференцировки клеток миелоидного происхождения ТНР-1 в присутствии РМА, IFN-y, LPS или MDP. Устойчивые клоны опухолевых клеток получали путем сокультивирования опухолевых клеток с цито-токсическими макрофагами. Функциональный анализ полученных клонов включал анализ устойчивости к цитотоксической активности макрофагов, динамики роста и их миграционной способности.
Результаты
Разработана универсальная модель получения опухолевых клеток, устойчивых к цитотоксической актив-
Список литературы
1. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 22-15-00291.
ности макрофагов. Полученные клоны были в 6 раз устойчивее к цитотоксической активности макрофагов в случае рака предстательной железы и легкого и в 2 раза в случае рака почки по сравнению с исходными клеточными линиями. Кроме того, устойчивые опухолевые клетки демонстрировали повышенную скорость пролиферации, которая была повышена в 2 раза в случае РПЖ, в 7 раз в случае НМРЛ и в 1,5 раза в случае рака почки по сравнению с исходными клетками. Различия в миграционной способности между устойчивыми клонами и исходной клеточной линией наблюдались только для части клеточных линий. Так, например, в случае клеточных линий НМРЛ миграционная способность была повышена в среднем в 4 раза.
Выводы
Цитотоксическая активность макрофагов является фактором формирования устойчивости опухоли к противоопухолевому иммунному ответу и может способствовать опухолевой прогрессии посредством влияния на пролиферативную активность.
Фенотип и противоопухолевые эффекторные функции in vitro генерированных CAR-T-клеток, специфичных к ганглиозиду GD2
Авторы
Кузнецова Мария Сергеевна, maria.kuz17.03@gmail.com, ФГБНУ «НИИ фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск
Шевченко Юлия Александровна, shevja80@gmail.com, ФГБНУ «НИИ фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск
Терещенко Валерий Павлович, tervp91@gmail.com, ФГБНУ «НИИ фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск
Филиппова Юлия Григорьевна, airyuka@mail.ru, ФГБНУ «НИИ фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск
Акахори Ясуши, yakahori@med.mie-u.ac.jp, Высшая школа медицины Университета Миэ, Цу, Япония Шику Хироши, shiku@med.mie-u.ac.jp, ФГБНУ «НИИ фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск
Сенников Сергей Витальевич, sennikovsv@gmail.com, ФГБНУ «НИИ фундаментальной и клинической иммунологии», Новосибирск
Ключевые слова:
GD2, CAR-T-клетки, ретровирусный вектор, противоопухолевая цитотоксичность
Актуальность пользованием ретровирусного вектора, кодирующего
Технологии, основанные на использовании GD2-специфичный CAR, и исследование их феноти-
Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR), па и цитотоксической активности. показали высокую эффективность для лечения гемо-
бластозов и активно исследуются для терапии со- Материалы и мет°ды
лидных опухолей. Молекула GD2 представляет со- Объектом исследования были мононуклеарные
бой ганглиозид, широко представленный на клетках клетки периферической крови условно здоровых до-
глиом и других опухолей нервных тканей. норов. Эффективность ретровирусной трансдукции
и фенотип трансдуцированных клеток оценивали
Цель методом многоцветной проточной цитометрии с ис-
Целью настоящего исследования стало in vitro пользованием моноклональных антител к мышиному
получение GD2-специфичных CAR-T-клеток с ис- F(ab')2 фрагменту, входящему в состав кодируемого
