CC BY
26
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 3 - P. 75-80
УДК: 611-018.2+611-013:616-003.93 DOI: 10.24411/1609-2163-2019-16424
УЛЬТРАСТРУКТУРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПОНЕНТОВ РЕГЕНЕРАЦИОННОГО ГИСТИОНА НА 12 СУТКИ ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ДЕРМАЛЬНОГО ЭКВИВАЛЕНТА В ИШЕМИЗИРОВАННУЮ РАНУ
КОЖИ
Е.Ю. ШАПОВАЛОВА, Т.А. БОЙКО, Ю.Г. БАРАНОВСКИЙ, И.А. ЛУГИН, Е.И. КУПША
ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского» Министерства образования и науки Российской Федерации, бул. Ленина, д. 5/7, г. Симферополь, 295051, Россия
Аннотация. Ультраструктурные особенности грануляционной ткани при репарации ишемизированных кожных ран на фоне трансплантации тканевых конструкций с ксеногенными фибробластами остаются мало изученными. Целью исследования было изучение ультраструктурной характеристики компонентов регенерационного гистиона на 12 сутки после трансплантации дермального эквивалента с ксеногенными фибробластами в ишемизированную рану кожи. Исследование выполнено на 14 мышах линии С57/В1 в возрасте 4-6 месяцев. В хирургическую модельную ишемизированную кожную рану в лопаточной области трансплантировали дермальный эквивалент с ксеногенными фибробластами. Биоптаты фиксировали глютаральдегидом на фосфатном буфере и заливали по стандартной методике. Ультратонкие срезы изготавливались на ультратоме УМТП-7, окрашивались толуидиновым синим, контрастировались цитратом свинца и уранилацетатом. Ультратонкие срезы изучались в электронном микроскопе «Selmi» (Украина) при ускоряющем напряжении 125 kV. Морфологическое исследование полутонких срезов проводили с помощью светооптического микроскопа OLIMPUS СХ-31 с цифровой камерой OLIMPUS З50502. На 12-е сутки репарации модельной ишемизированной раны всех групп грануляционная ткань периферических и центральных участков существенно отличается по своему ультрамикроскопическому строению. Обнаруживаются достоверные различия между количеством, размерами клеток регенеративного гистиона и занимаемой ими площадью. После трансплантации дермального эквивалента с ксеногенны-ми фибробластами количество клеток увеличивается, средняя площадь клетки и средняя площадь всех клеток уменьшается. В грануляционной ткани центральных и периферических участков, в отличие от контрольной группы, не имеется признаков отека, отмечается отсутствие нейтрофилов и активная деградация макрофагов, что свидетельствует о низком уровне воспалительной реакции. В центре заживающей раны обнаруживаются двуядерные миофибробласты с высоким уровнем синтетической активности. По периферии раны на фоне трансплантации ксеногенных фибробластов грануляционная ткань находится в начальной стадии ремоделирования, в ней преобладают миофибробласты, обеспечивающие контрактацию раны.
Ключевые слова: ишемизированная рана, кожа, грануляционная ткань, регенерационный гистион, дермальный эквивалент, фибробласт.
ULTRASTRUCTURAL CHARACTERISTIC OF REGENERATIVE HISTION COMPONENTS FOR 12 DAYS AFTER TRANSPLANTATION OF THE DERMAL EQUIVALENT IN THE ISHEMIZED CUTANEOUS WOUND
YE.YU. SHAPOVALOVA, T.A. BOYKO, YU.G. BARANOVSKIY, I.A. LUGIN, E.I. KUPSHA
V.I. Vernadsky Crimean Federal University of the Ministry of Science and Education of the Russian Federation, Lenin bul., 5/7,
Simferopol, Russia, 295051.
Abstract. Ultrastructural features of granulation tissue during repair of ischemic cutaneous wounds against the background of transplantation of tissue constructs with xenogenic fibroblasts remain poorly studied. The research purpose was to study the ultrastructural characteristics of the components of the regeneration histion on the 12th day after dermal equivalent transplantation with xenogenic fibroblasts in the ischemic wound of the skin. The study was performed on 14 mice of the C57 / B1 line aged 4-6 months. The dermal equivalent with xenogenic fibroblasts was transplanted in the surgical model ischemic skin wound in the scapular region. The biopsy was fixed with glutaraldehyde on phosphate buffer and was embedded by the standard procedure. Ultrathin sections were made on the UMTP-7 ultratome, stained with toluidine blue, contrasted with lead citrate and uranyl acetate. Ultrathin sections were studied in an electron microscope "Selmi" (Ukraine) at an accelerating voltage of 125 kV. Morphological examination of semithin sections was carried out with the OLIMPUS CX-31 light-optical microscope with the OLIMPUS digital camera Z5050Z. On the 12th day of repair of the model ischemic wound of all groups, the granulation tissue of the peripheral and central regions differs significantly in their ultramicroscopic structure. There are significant differences between the number, size of cells of the regenerative histion and the area occupied by them. After dermal equivalent transplantation with xenogenic fibroblasts, the number of cells increases, the average area of the cell and the average area of all cells decreases. In the granulation tissue of the central and peripheral regions, in contrast to the control group, occurs active degradation of macrophages, there are no signs of edema, there are no neutrophils, which indicates a low level of inflammatory reaction. In the center of the healing wound, there are two-nucleated myofibroblasts with a high level of synthetic activity. On the background of transplantation of xenogeneic fibroblasts on the periphery of the wound the granulation tissue is in the initial stage of remodeling. Here dominated myofibroblasts, which provide contracting of the wound.
Keywords: ischemic wound, skin, granulation tissue, regenerative histion, dermal equivalent, fibroblast.
Лечение ишемизированных длительно незаживающих кожных дефектов все еще остается важной медицинской проблемой [4]. С этой целью предложено и применяется с различной степенью успеха множество различных медикаментозных, физиоте-
рапевтических и хирургических методов как изолированно, так и в различных сочетаниях [2]. На сегодняшний день предложен принципиально новый путь оптимизации течения раневого процесса на основе разрабатываемого метода заместительной
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 3 - P. 75-80
клеточной терапии [5]. При этом введение дополнительных клеточных источников мезенхимного происхождения в область повреждения является методом выбора и не противоречит теоретическим положениям об эволюционно закрепленной тканевой детерминации [5,6,9]. В хронической ране первая фаза раневого процесса - фаза воспаления обычно затягивается и тогда одновременно могут присутствовать признаки всех трех фаз раневого процесса [8]. Поиск средств сокращения сроков воспаления выявил, что человеческие дермальные фибробласты являются источником адипонектина, который действует как активный противовоспалительный цито-кин и индуцирует продукцию противовоспалительных факторов, таких как К-10 и IL-1RA [1,12]. В дерме кожи обнаруживается так называемая обычная рыхлая неоформленная соединительная ткань, где коллаген 1-го типа является основным белковым компонентом, а фибробласты - главный клеточный пул, в основном ответственный за его биосинтез и ремоделирование. Создание на основе этих главных компонентов искусственного конструкта - дермаль-ного эквивалента явилось важным шагом в лечении длительно незаживающих ишемизированных ран, позволяющего выполнить дефект кожного покрова и создать оптимальные условия для пролиферации и функционирования основных клеточных элементов регенеративного гистиона кожи [7]. Однако сведения об ультраструктурных особенностях клеточных элементов этого гистиона на фоне трансплантации де-рмального эквивалента единичны и редки, что обусловливает актуальность проведенного исследования.
Цель исследования состояла в изучении ультраструктурной характеристики компонентов реге-нерационного гистиона на 12 сутки после трансплантации дермального эквивалента с ксеногенны-ми фибробластами в ишемизированную рану кожи.
Материалы и методы исследования. В исследовании приняли участие 14 четырех-шести месячных мышей линии С57/В1, которые содержались в виварии Медицинской академии имени С.И. Георгиевского. Животные были разделены на контрольную и экспериментальную группу по 7 особей в каждой. Эксперименты проводили со следованием всем принципам гуманности, содержащихся в директиве Европейского Сообщества (86/609/ЕС), и в соответствии с «Правилами выполнения работ с привлечением экспериментальных животных». Мышам в обеих группах стандартно операционным путем формировали кожную ишемизированную рану в лопаточной области [3]. Для экспериментальной группы дер-мальные фибробласты были получены ферментативным путем и культивированы в среде DMEM F12 (Lonza). Клетки второго пассажа использовали для формирования дермального эквивалента. Дермаль-ный эквивалент готовили на основе коллагена первого типа из крысиных хвостов. Стерильный 0,34М раствор NaOH объединяли с концентрированной (*10) питательной средой 199 в соотношении 1:1.
Полученную смесь соединяли с охлажденным раствором коллагена, после чего добавляли суспензию фибробластов в питательной среде DMEM F12, содержащей 10% эмбриональной сыворотки (HyClone). Полученную смесь инкубировали при 37°С в инкубаторе до полной полимеризации геля [11]. Готовый тканеинженерный конструкт трансплантировали в кожную ишемизированную рану мышей экспериментальной группы [11].
На 12-й день после операции у мышей всех групп интраоперационно иссекали образовавшийся рубец и фиксировали глютаральдегидом на фосфатном буфере. Подготовка материала для ультрамикроскопического исследования проводилась по стандартной методике. Ультратонкие срезы изготавливались на ультратоме УМТП-7 (Украина), окрашивались толуидиновым синим, контрастировались цитратом свинца и уранилацетатом. Ультратонкие срезы изучались в электронном микроскопе "Selmi" (Украина) при ускоряющем напряжении 125 kV.
Морфологическое исследование полутонких срезов проводили с помощью светооптического микроскопа OLIMPUS СХ-31 с цифровой камерой OLIMPUS B5050Z. Площадь срезов, площадь клеток и их количество в дерме биоптатов измеряли с помощью программы "ImageJ" при увеличении объектива 40 и окуляра 10 по 50 замеров в каждой группе. Полученные цифровые данные (выраженные в пикселях) были переведены в мкм при помощи деления пикселей на коэффициенты, специально для этого выведенные: объективы *10 - 6379251, *40 -98911797. Статистическую обработку цифровых данных проводили с использованием лицензионного программного обеспечения MS Office Excel 2007, аналитического пакета приложения STATISTICA Enterprise (StatSoft Inc., США), с привлечением возможностей программы «STATGRAPH 5.1» («Microsoft», США). Рассчитывали среднюю арифметическую и стандартную ошибку средней. Для сравнения двух выборок использовали критерий Манна-Уитни с уровнем значимости р=0,05. Сравнения площади, занимаемой клетками, в биоптатах экспериментальной группы проводили по отношению к контрольной группе или внутри групп в процентах.
Результаты и их обсуждение. У мышей контрольной группы самопроизвольное отпадение силиконового кольца было зафиксировано в среднем на 12,4+0,10 сутки после операции по созданию модельной раны. В нашем предыдущем сообщении описана световая микроскопическая картина био-птата рубца без лечения и после трансплантации дермального эквивалента с ксеногенными фиброб-ластами после окраски срезов гематоксилином и эозином и по Вейгерту-Ван-Гизон [10]. Отмечено строение развивающегося эпидермиса, коллагеноо-бразование и ангиогенез в грануляционной ткани.
В настоящем исследовании изучена ультраструктурная организация регенеративного гистиона грануляционной ткани в центральных и периферичес-
10иВДА1 ОБ ОТШ МЕЭТСАЬ ТЕСНК0Ь001Е8 - 2019 - V. 26, № 3 - Р. 75-80
ких участках биоптата рубцов контрольной и зкспе-риментальной групп.
На периферии биоптатов контрольной группы на электроннограммах имеются признаки экстра-целлюлярного отёка, преимущественно локализованные вокруг активных фибробластов с множе-стенными отростками. Заметно активное взаимодействие фибробластов с макрофагами. В зоне клеточных контактов образуются ламелоподии. В межклеточном веществе заметны продольные и поперечные срезы протофибрилл коллагена. Присутствуют гемокапилляры соматического типа с отёком базальной мембраны и фибробластами, окружающими сосуды. Во всех клетках видны накопительные резидуальные тельца, и отёк ядра. Встречаются активные малые лимфоциты с хорошо выраженными ядерными порами и расширениями гранулярной ЭПС возле ядра, что свидетельствует об активном биосинтезе белков.
В центральных участках биоптата в грануляционной ткани рядом с активными фибробластами часто встречаются нейтрофильные сегментоядерные лейкоциты и макрофаги, что свидетельствует о не преодоленной полностью воспалительной реакции. Межклеточное вещество отечно и содержит прото-фибриллы коллагена. Ядра фибробластов имеют глубокие инвагинации и хорошо развитую гранулярную ЭПС, обеспечивающие высокую синтетическую активность этих клеток.
В полутонких срезах биоптатов контрольной группы отмечается существенная разница в размерах и количестве клеток регенеративного гистиона между центральным и периферическими участками. В центральной части клетка в среднем занимает на 10,53% большую площадь по сравнению с периферическими участками (табл.). Общая средняя площадь, занимаемая клетками в центре на 13,64% меньше, чем на периферии.
Таблица
Площадь клетки и средняя площадь всех клеток в биоптатах мышей контрольной и экспериментальной групп
Грануляционная ткань дермы
Контрольная группа
Экспериментальная группа
Периферические участки биоптата
Средняя площадь клетки в мкм
48,37+0,14
43,42+0,12
Средняя площадь всех клеток в %
12,41+0,05
10,88+0,02
Центральный участок биоптата
Средняя площадь клетки в мкм
54,06+0,12
49,77+0,15
Средняя площадь всех клеток в%
10,92+0,10
9,88+0,02
У мышей экспериментальной группы после трансплантации дермального эквивалента с гетеро-фибробластами силиконовое кольцо отделилось от заживающей раны на 11,2+0,10 сутки.
В полутонких срезах биоптатов экспериментальной группы отмечается увеличение количества клеток как в центральном, так и периферических
участках (рис. 1А и рис. 1Б). При этом средняя площадь клетки уменьшается на 11,40% по сравнению с контрольной группой в периферических участках и на 8,61% в центре.
¡у.- "Я?/ " ^ '¡Ш
, • „ * / %
А
Б
Рис. 1. Биоптат кожи мыши после трансплантации дермального эквивалента с ксеногенными фибробластами (экспериментальная группа). Окраска толуидиновым синим (полутонкие срезы). Увеличение *1000. А - периферический участок биоптата. Б - центральный участок биоптата.
Средняя площадь всех клеток на периферии уменьшается на 10,46% и на 10,52% в центре по сравнению с нелеченной группой. Вместе с тем сохраняется дисбаланс по средней площади клетки и средней площади всех клеток между центром и периферии после трансплантации дермального эквивалента за счет большего количества клеток регенера-ционного гистиона в периферических участках, что можно объяснить естественной способностью заживления раны с периферии к центру. При этом активнее этот процесс течет после закрытия раны дерма-льным эквивалентом с ксеногенными фибробласта-ми, стимулирующим активное коллагенообразова-ние в грануляционной ткани.
В центральных участках биоптатов мышей экспериментальной группы на фоне трансплантации дермального эквивалента с ксеногенными фибробла-стами присутствует хорошо развитая грануляционная ткань с межклеточным веществом, характеризующимся преобладанием бесструктурного мелкодисперсного матрикса над оформленным фибриллярным компонентом. При этом, отмечается тенденция преимущественного расположения фибрилл в зоне прилежания к отросткам фибробластов. Отек отсутствует.
Имеются макрофаги с морфологическими признаками высокой функциональной активности: многочисленные длинные, изогнутые и тонкие псевдоподии, «червевидные» инвагинации в цитолемму, обилие сложных эндосом/гетеролизосом. В ядре эухроматин, гетерохроматин и ядерные поры, видно ядрышко.
Активные фибробласты составляют преимущественный пул клеток в центре биоптата и локализуются в том числе и рядом с гемокапиллярами. Их ядра вытянутые, с преобладанием эухроматина, много ядерных пор, активно развита гранулярная ЭПС, митохондрии и встречаются немногочисленные остаточные тельца. Заметно множество колла-геновых протофибрилл. Видны этапы фибриллоге-неза (внутриклеточный и внеклеточный) В эндоте-лиоцитах гемокапиляров заметны множественные пиноцитозные пузырьки и протрузии, что указывает
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 3 - P. 75-80
на соматический тип капилляра и высокий обмен веществ в зоне фибриллогенеза.
Рис. 2. Миофибробласт (1) с двумя ядрами (2) и плазмоцит (3) в центральном участке биоптата после трансплантации дермального эквивалента с ксеногенными фибробластами (экспериментальная группа). Электронная микрофотография. Ув. ><4000
Нами был обнаружен двуядерный миофибробласт, который тесно контактирует с плазмоцитом (рис. 2). В составе миофибробласта присутствуют интрацел-люлярные актиновые филаменты, снаружи — экстра-целлюлярные тонкие фибриллы. Профили гранулярной ЭПС - узкие, с локальными расширениями, заполненные однородным содержимым средней электронной плотности. В цитоплазме миофибробласта визуализированы объемные эндосомы. Плазмоцит содержит типично хорошо развитые гранулярной ЭПС и комплекс Гольджи. На поверхности плазмоцита, обращенной к мииофибробласту, отмечаются множественные мелкие выпячивания каплевидной формы не достигающие миофибробласта и длинные цитоплазматиче-ские выросты контактирующие с ним. Межклеточное вещество характеризуется локальными участками фибриллогенеза. Преобладание эухроматина указывают на высокий уровень биосинтетических процессов и в фибробластах и в плазмоците.
Изменчивость и молекулярное ремоделирование являются ключевыми механическими особенностями обычной соединительной ткани, в которой коллаген и другие молекулы межклеточного вещества могут растягиваться, скользить и подвергаться устойчивой реорганизации относительно друг друга [18]. Дермальный эквивалент, как коллагеновая матрица, отличается от монослоя коллагена во многих отношениях: жесткостью, топографической организацией потенциальных мест адгезии и плотностью адгезии. Когда фибробла-сты взаимодействуют с коллагеновой матрицей дер-мального эквивалента - в отличие от плоских поверхностей - клетки проникают в вещество матрицы и запутываются матричными фибриллами, ремоделируя матрицу как локально, так и глобально для достижения гомеостаза. Здесь преобладают фибробласты с ведущими дендритными расширениями, мигрирующие по всему объему дермального эквивалента. Они развивают дендритную сеть, связанную предположительно щелевыми переходами [13,14], аналогичную соединенной дендритной сети остеоцитов - других клеток соединительной ткани. В этом случае влияние трансплантированных ксеногенных фибробластов на процессы образования грануляционной ткани могут быть
самыми причудливыми и, как показывают исследования последних лет, очень эффективными в плане скорости и эффективности заживления ишемизирован-ных ран [7]. Появление двуядерных фибробластов у мышей, имеющих признаки высокой функциональной активности, является очень интересным фактом не описанным ранее. Возможно, двуядерность - иллюзия из-за глубокой инвагинации кариолеммы, которая является щелью, но в этом случае это также признак очень высокой функциональной активности клетки, спровоцированной трансплантацией дермального эквивалента с ксеногенными фибробластами. Ряд исследователей сходятся во мнении, что при повреждениях органов и тканей существует такое явление как пластичность, заключающаяся в слиянии мезенхимальных стволовых клеток с клетками органа-мишени [16]. Клеточная пластичность признана фундаментальной чертой биологии ткани и может иметь решающее значение для выживания организма. Недавние исследования выявили неоднородность и пластичность дер-мальных фибробластов внутри кожи, что важно для тканевой инженерии [17]. Вероятно также, что трансплантированные ксеногенные фибробласты не самостоятельно сливаются с аутологичными фибробласта-ми, так как известно, что для проявления пластичности in vivo необходимы определенные факторы, секрети-руемые поврежденным органом, которые мобилизуют стволовые клетки (т.е. вызывают высвобождение стволовых клеток из их естественных ниш в организме и попадание в кровоток) и способствуют их миграции по направлению к поврежденному органу и его последующей колонизации. Согласно такого рода представлениям, одним из таких факторов возможно является, выделяемый ксеногенными фибробластами, SDF-1 [17]. Двуядерные фибробласты в центральной зоне биоптата с неполно сформированным межклеточным веществом высоко активны скорее всего за счет тетрапло-идности. В многочисленных экспериментах доказано, что поддержание субстрата является основополагающим для завершения цитокинеза в нетрансформиро-ванных фибробластах. Нетрансформированные фиб-робласты, подвергающиеся митозу в суспензии, продуцируют двуядерные тетраплоидные клетки из-за дефектного сужения борозды, что приводит к неполному делению клеток [15]. Бинуклеарные клетки сохраняют неактивный статус р53 и способны усиленно секретировать компоненты межклеточного вещества в фазу G1 и S. Однако бинуклеарные клетки останавливаются в G2, накапливают р53 и не могут проникать в митоз, так как после одного периода клеточного цикла не регистрируются тетраплоидные метафазы [19]. Интересно, что после сохранения в фазе G2 клеточного цикла, большая часть бинуклеарных фибробластов становятся стареющими [19]. Ингибирование активного функционирования и вход в старение после цитокинеза может представлять собой важный механизм контроля роста грануляционной ткани и последующего рубцевания.
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 3 - P. 75-80
На периферии биоптатов также обнаруживается хорошо развитая грануляционная ткань, находящаяся в начальной стадии ремоделирования. Встречаются многочисленные миофибробласты, лежащие в зонах упорядоченного расположения фибрилл. В клетках множество вакуолей, фаголизосом и лизосом, есть окаймленные ямки на стадии формирования пузырька, гетерофаголизосомы на начальной стадии слияния содержимого гидролазного пузырька с субстратом, остаточные тельца, наличие ламеллоподий указывают на процесс резорбции межклеточного вещества рыхлой волокнистой соединительной ткани. В отростках миофибробластов хорошо видна гранулярная ЭПС, визуализируются полости включающие, в некоторых случаях, помимо бесструктурного матрикса - фибриллярный компонент. Также наблюдаются случаи разрыва и прямого контакта содержимого вакуолей с межклеточным веществом. Прослеживается деградация части клеток путём некроза.
Происходит прогрессивное уменьшение количества макрофагов. На электронных микрофотографиях хорошо заметны макрофаги с признаками дисфункции: фрагментация гетерохроматина с при-мембранной локализацией - предапоптозная стадия, глубокие инвагинации кариолеммы, множественные элетронносветлые вакуоли различных размеров занимающие более половины площади клетки. Также имеются макрофаги в состоянии фагоцитоза при резорбции межклеточного вещества. Участки межклеточного вещества окружающего капилляры характеризуются преобладанием аморфного компонента и слабой организацией волокнистого компонента. Капилляры заполнены бесструктурным содержимым. Эндотелиоциты их стенки с признаками высокой резорбционной активности. Многочисленные выпячивания обращены в просвет сосуда (на поперечном сечении в толстой части клеток создают «мозаичность»), с базальной стороны имеются пиноцитозные пузырьки.
Заключение. На 12-е сутки репарации модельной ишемизированной раны всех групп грануляционная ткань периферических и центральных участков существенно отличается по своему ультрамикроскопическому строению. Обнаруживаются достоверные различия между количеством, размерами клеток регенеративного гистиона и занимаемой ими площадью. После трансплантации дермального эквивалента с ксеногенными фибробластами количество клеток увеличивается, средняя площадь клетки и средняя площадь всех клеток уменьшается. В грануляционной ткани центральных и периферических участков, в отличие от контрольной группы, не имеется признаков отека, отмечается отсутствие ней-трофилов и активная деградация макрофагов, что свидетельствует о низком уровне воспалительной реакции. В центре заживающей раны обнаруживаются двуядерные миофибробласты с высоким уровнем синтетической активности. По периферии раны на фоне трансплантации ксеногенных фибробластов
грануляционная ткань находится в начальной стадии ремоделирования, в ней преобладают миофибробласты, обеспечивающие контрактацию раны.
Работа поддержана проектом «Сеть академической мобильности «РНИЭМ»» ФГАОУВО «КФУ имени В.И. Вернадского» и выполнена с использованием инфраструктуры НУЗ «НКЦ ОАО «РЖД» (г. Москва) и ФГБУН «Институт цитологии РАН» (г. Санкт-Петербург)
Литература / References
1. Алексеева Н.Т., Глухов А.А., Остроушко А.П. Роль клеток фибробластического дифферона в процессе заживления ран // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. 2012. Т. 5, № 3. С. 601-608 / Alekseeva NT, Gluhov AA, Ostroushko AP. Rol' kletok fibroblasticheskogo differona v processe zazhivlenija ran [The role of fibroblast differon cells in the process of wound healing]. Vestnik jeksperimental'noj i klinicheskoj hirurgii. 2012;5(3):601-8. Russian.
2. Андреев Д.Ю., Абрамова Н.В., Блинова М.И., Пи-наев Г.П. Эффективность кожной пластики и дермального эквивалента в лечении обширных язв голени смешанного генеза // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2013. Т. 172, № 1. С. 104-107 / Andreev DYu, Abramova NV, Blinova MI, Pinaev GP. Jeffektivnost' kozhnoj plastiki i dermal'nogo jekvivalenta v lechenii obshirnyh jazv goleni smeshannogo geneza [Effect of treatment of extensive ulcers of the tibia of mixed origin by cutaneous plastic and dermal equivalent]. Vestnik hirurgii im. I.I. Grekova. 2013;72(1):104-7. Russian.
3. Барановский Ю.Г., Ильченко Ф.Н., Шаповалова Е.Ю. Способ моделирования трофической язвы у лабораторных мышей в опытной модели // Вестник неотложной и восстановительной хирургии. 2016. Т. 1, № 2. C. 259-261 / Baranovskiy YuG, Ilchenko FN, Shapovalova YeYu. Sposob modelirovanija troficheskoj jazvy u laboratornyh myshej v opytnoj modeli [Method of modeling trophic ulcers in laboratory mice in the experimental model]. Vestnik neotlozhnoj i vosstanovitel'noj hirurgii. 2016;1(2):259-61. Russian.
4. Глухов А.А., Аралова М.В. Патофизиология длительно незаживающих ран и современные методы стимуляции раневого процесса // Новости хирургии. 2015. Т. 23, № 6. C. 673-679 / Gluhov AA, Aralova MV. Patofiziologija dlitel'no nezazhivajushhih ran i sovremennye metody stimuljacii ranevogo processa [Pathophysiology of long-term non-healing wounds and modern methods of stimulation of the wound process]. Novosti hirurgii. 2015;23(6):673-79. Russian.
5. Данилов Р.К. Раневой процесс: гистогенетические основы. СПб.: ВМедА им. С.М. Кирова, 2008. 380 с. / Danilov RK. Раневой процесс: гистогенетические основы. [Wound process: histogenetic basis]. SPb.: WMEDA named after S.M. Kirov; 2008. Russian.
6. Иванов Д.В., Хадарцев А.А. Клеточные технологии в восстановительной медицине: Монография / Под ред. А.Н. Лищука. Тула: Тульский полиграфист, 2011. 180 с. / Ivanov DV, Khadartsev AA. Kletochnye tekhnologii v vosstanovitel'noy meditsine: Monografiya. Pod redaktsiey A.N. Lishchuka [Cellular technologies in regenerative medicine: Monograph. Edited by A. N. Lischuk]. Tula: Tul'skiy poligrafist; 2011. Russian.
7. Мелешина А.В., Быстрова А.С., Роговая О.С., Воро-теляк Е.А., Васильев А.В., Загайнова Е.В. Тканеинженерные конструкты кожи и использование стволовых клеток для создания кожных эквивалентов (обзор) // Современные технологии в медицине. 2017. Т. 9, №1. C. 198-218 / Meleshina AV, Bystrova AS, Rogovaya OS, Vorotelyak EA, Vasiliev AV, Zagaynova EV. Tkaneinzhenernye konstrukty kozhi i ispol'zovanie stvolovyh kletok dlja sozdanija kozhnyh jekvivalentov (obzor) [Tissue-engineered skin constructs and
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 3 - P. 75-80
application of stem cells for creation of skin equivalents (review)]. Sovremennye tehnologii v medicine. 2017;9(1):198-218. Russian.
8. Федоров Д.Н., Ивашкин А.Н., Васильев А.В. Морфологическая и иммуногистохимическая характеристика репа-ративных процессов в длительно незаживающих ранах // Арх. патол. 2002. № 1. C. 8-11 / Fedorov DN, Ivashkin AN, Vasil'ev AV. Morfologicheskaja i immunogistohimicheskaja harakteristika reparativnyh processov v dlitel'no nezazhivajushhih ranah [Morphological and immunohistochemical characteristics of reparative processes in long-term non-healing wounds]. Arh patol. 2002;1:8-11. Russian.
9. Хадарцев А.А., Субботина Т.И., Иванов Д.В., Гон-тарев С.Н., Яшин А.А., Луценко В.Д., Татьяненко Т.Н., Се-микопенко А.В., Савин Е.И., Митюшкина О.А. Медико-биологические аспекты клеточных технологий: Монография / Под ред. А.А. Хадарцева. Тула: Изд-во ТулГУ - Белгород: ЗАО «Белгородская областная типография», 2013. 288 с. / Khadartsev AA, Subbotina TI, Ivanov DV, Gontarev SN, Yashin AA, Lutsenko VD, Tat'yanenko TN, Semikopenko AV, Savin EI, Mityushkina OA. Mediko-biologicheskie aspekty kletochnykh tekhnologiy: Monografiya. Pod redaktsey A.A. Khadartseva [Medical and biological aspects of cellular technologies: Monograph. Edited by A. A. Khadartsev]. Tula: Izd-vo TulGU - Belgorod: ZAO «Belgorodskaya oblastnaya tipografiya»; 2013. Russian.
10. Шаповалова Е.Ю., Бойко Т. А., Барановский Ю.Г., Харченко С.В., Юнси Г.А. Морфологическая характеристика заживления ишемизированной экспериментальной раны на 12 сутки после применения ауто- и гетерофибробластов и дермального эквивалента // Международный научно-исследовательский журнал. 2017. Т. 62, № 8, Ч. 3. С. 51-55 / Shapovalova JeJu, Bojko TA, Baranovskij JuG, Harchenko SV, Junsi GA. Morfologicheskaja harakteristika zazhivlenija ishemizirovannoj jeksperimental'noj rany na 12 sutki posle primenenija auto- i geterofibroblastov i dermal'nogo jekvivalenta [Morphological characteristics of healing of an ischemic experimental wound on the 12th day after application of auto- and hetero-fibroblasts and dermal equivalent]. Mezhdunarodnyj nauchno-issledovatel'skij zhurnal. 2017;62(8, III):51-5. Russian.
11. Юдинцева Н.М., Самусенко И.А., Блинова М.И., Пинаев Г.П. Дермальный эквивалент на основе фибрина и восстановление соединительной ткани в результате его трансплантации на раны экспериментальных животных // Аутологичные стволовые клетки: экспериментальные исследования и перспективы клинического применения / Под редакцией В.А. Ткачука. М.: Литтерра, 2009. C. 209-221 / Judinceva NM, Samusenko IA, Blinova MI, Pinaev GP. Dermal'nyj jekvivalent na osnove fibrina i vosstanovlenie soedinitel'noj tkani v rezul'tate ego transplantacii na rany jeksperimental'nyh zhivotnyh [Dermal equivalent on the basis of fibrin and restoration of connective tissue as a result of its
transplantation on the wounds of experimental animals]. Autologichnye stvolovye kletki: jeksperimental'nye issledovanija i perspektivy klinicheskogo primenenija. Moscow: Litterra; 2009. Russian
12. Esfahani M., Movahedian A., Baranchi M. Adiponectin: An adipokine with protective features against metabolic syndrome // Iran. J. Basic Med. Sci. 2015. № 18. P. 430-442 / Esfahani M, Movahedian A, Baranchi M. Adiponectin: An adipokine with protective features against metabolic syndrome. Iran. J. Basic Med. Sci. 2015;18:430-42.
13. Grinnell F. Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices // Trends Cell Biol. 2003. № 13. P. 264-269 / Grinnell F. Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices. Trends Cell Biol. 2003;13:264-9.
14. Kuffer C., Kuznetsova A.Y., Storchova Z. Abnormal mitosis triggers p53-dependent cell cycle arrest in human tetraploid cells // Chromosoma. 2013. №122. P. 305-318 / Kuffer C, Kuznetsova AY, Storchova Z. Abnormal mitosis triggers p53-dependent cell cycle arrest in human tetraploid cells. Chromosoma. 2013;122:305-18.
15. Marco De Santis P., Gonzalez L., Ascenzi S., Cundari E., Degrassi F. Tetraploid cells produced by absence of substrate adhesion during cytokinesis are limited in their proliferation and enter senescence after DNA replication // Cell Cycle. 2016. Vol. 15, N 2. P. 274-282 / Marco De Santis P, Gonzalez L, Ascenzi S, Cundari E, Degrassi F. Tetraploid cells produced by absence of substrate adhesion during cytokinesis are limited in their proliferation and enter senescence after DNA replication. Cell Cycle. 2016;15(2):274-82.
16. Paksa A., Rajagopal J. The epigenetic basis of cellular plasticity // Curr Opin Cell Biol. 2017. N 49. P. 116-122. DOI: 10.1016/j.ceb.2018.01.003 / Paksa A, Rajagopal J. The epigenetic basis of cellular plasticity. Curr Opin Cell Biol. 2017;49:116-22. DOI: 10.1016/j.ceb.2018.01.003.
17. Roh J.L., Lee J., Kim E.H., Shin D. Plasticity of oral mucosal cell sheets for accelerated and scarless skin wound healing // Oral Oncol. 2017. N 75. P. 81-88. DOI: 10.1186/1476-4598-11-64 / Roh JL, Lee J, Kim EH, Shin D. Plasticity of oral mucosal cell sheets for accelerated and scarless skin wound healing. Oral Oncol. 2017;75:81-8. DOI: 10.1186/1476-4598-11-64.
18. Silver F.H., Siperko L.M., Seehra G.P. Mechanobiology of force transduction in dermal tissue // Skin Research and Technology. 2002. Vol. 8. P. 1-21 / Silver FH, Siperko LM, Seehra GP. Mechanobiology of force transduction in dermal tissue. Skin Research and Technology. 2002;8:1-21.
19. Thulabandu V., Chen D., Atit R.P. Dermal fibroblast in cutaneous development and healing // Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2018. N 7. P. 2. DOI: 10.1002/wdev.307 / Thulabandu V, Chen D, Atit RP. Dermal fibroblast in cutaneous development and healing. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2018;7:2. DOI: 10.1002/wdev.307.
Библиографическая ссылка:
Шаповалова Е.Ю., Бойко Т.А., Барановский Ю.Г., Лугин И.А., Купша Е.И. Ультраструктурная характеристика компонентов реге-нерационного гистиона на 12 сутки после трансплантации дермального эквивалента в ишемизированную рану кожи // Вестник новых медицинских технологий. 2019. №3. С. 75-80. DOI: 10.24411/1609-2163-2019-16424.
Bibliographic reference:
Shapovalova YeYu, Boyko TA, Baranovskiy YuG, Lugin IA, Kupsha EI. Ul'trastrukturnaya kharakteristika komponentov regeneratsionnogo gistiona na 12 sutki posle transplantatsii dermal'nogo ekvivalenta v ishemizirovannuyu ranu kozhi [Ultrastructural characteristic of regenerative histion components for 12 days after transplantation of the dermal equivalent in the ishemized cutaneous wound]. Journal of New Medical Technologies. 2019;3:75-80. DOI: 10.24411/1609-2163-2019-16424. Russian.
